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金沸草含量测定以及倍半萜内酯类成分的药动学研究认领

被引量： 6

作者：

杨茜

学位授予单位：

第二军医大学

摘要：

菊科旋覆花属植物在全世界约有100余种，我国有20余种和多种变种。该属植物中的特征性成分为倍半萜内酯类化合物。本属多种植物常供药用,如该属植物旋覆花干燥地上成分金沸草（Inulae Herba）具有降气、消痰、止水等功效。近年来，对倍半萜内酯类化合物的药理活性研究表明，该类化合物主要具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等作用。此外，还有一些倍半萜内酯类化合物具有抗氧化、抗糖尿病等作用。有文献对旋覆花属植物的指纹图谱进行了研究，但对其中倍半萜内酯类化合物的含量测定未有报道。因此，本课题采用HPLC-UV法同时测定了旋覆花属植物中5种倍半萜内酯的含量，并将该方法应用于不同产地、不同种的14个批次旋覆花属植物中这5种成分的含量测定，为其的质量评价提供可靠的依据。在此基础上，我们对2010版《中国药典》金沸草药材质量标准进行了修订，增加了“含量测定”项，制定了限度。从金沸草中提取得到的三种倍半萜内酯1-acetoxy-6α-hydroxyeriolanolide（1-乙酰氧基大花旋覆花内酯）,1β-hydroxyalantolactone（1β-羟基-土木香内酯）和ivangustin结构类似，具有抗炎抗菌等活性。到目前为止，未有文献对这三种化合物的体内药动学行为进行过研究。本课题采用LC-MS/MS液质联用的方法同时对大鼠血浆中的该三种倍半萜内酯类化合物进行含量测定，对这三种化合物的体内药动学进行了研究。为该倍半萜内酯类化合物的临床应用以及进一步的研究奠定了基础，提供了理论与实验依据。 1. HPLC法同时测定旋覆花属植物中5种倍半萜内酯类成分的含量目的建立同时测定旋覆花属植物中5种倍半萜内酯含量的方法，为其的质量评价提供依据。方法采用HPLC-UV法。色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）；流动相为乙腈（A）-水（B），A相的含量随时间变化为30%40%（0～20min）、40%55%（20～25min）、55%65%（25～40min）、55%95%（40～45min）、95%95%（45～55min）；流速1.2ml/min，检测波长205nm，柱温25℃。结果5种倍半萜内酯1-acetoxy-6α-hydroxyeriolanolide（1-乙酰氧基大花旋覆花内酯）、1β-hydroxyalantolactone（1β-羟基-土木香内酯）、 Ivangustin、 JaponiconeA及Inulanolide A，在55min内基线分离，其质量浓度分别在13.4～402μg/ml、6.53～196μg/ml、6.85～206μg/ml、10.4～312μg/ml、6.65～200μg/ml内与峰面积呈良好的线性关系，R2分别为0.9998、0.9998、0.9999、0.9998、0.9997。平均加样回收率分别为99.0％、97.6％、99.3％、97.9％、100.8%, RSD分别为1.0％、0.68％、2.1％、0.97％、1.9%。结论该方法可用于旋覆花属植物中5种倍半萜内酯的含量测定；不同种旋覆花属植物倍半萜内酯含量有显著差异。 2.金沸草药材的质量标准修订目的本实验建立了HPLC-UV法测定1-acetoxy-6α-hydroxyeriolanolide（1-乙酰氧基大花旋覆花内酯）的含量，修订2010版中国药典金沸草药材质量标准。方法采用HPLC-UV法。色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）；流动相为乙腈（A）-水（B）， A相的含量随时间变化为30%38%（0～16min）；流速1.2ml/min，检测波长205nm，柱温30℃。结果1-acetoxy-6α-hydroxyeriolanolide（1-乙酰氧基大花旋覆花内酯）的质量浓度在0.0615～2.460μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，R2为1.0000。平均加样回收率为96.8％, RSD为2.86％。结论该方法可用于金沸草药材的质量控制，完善了金沸草药材的质量标准。 3.三种倍半萜内酯化合物在大鼠体内的药动学研究目的本试验研究旨在建立同时测定三种倍半萜内酯口服以及静脉注射后在大鼠血浆中的药物浓度,并计算它们的绝对生物利用度，为非临床药代动力学研究提供测定方法。方法采用LC-MS-MS液质联用的方法。色谱柱：TOSOH TSKgel ODS column （15cm×4.6mm,3μm）；等度洗脱，流动相为甲醇:水（0.3%甲酸）比例为80:20（v/v），流速为0.6ml/min；柱温为30℃；6.2min内即完成这三种化合物的色谱分离分析。本实验采取甲醇沉淀蛋白的方法提取生物样品中的待测物以及内标地西泮。质谱离子源为电喷雾离子化源（ESI），检测方式为正离子检测，扫描方式采用多级反应监测（MRM）。三种倍半萜内酯的母子离子对分别为1-acetoxy-6α-hydroxyeriolanolide m/z为309.1/185.0,1β-hydroxy-alantolactone和ivangustin的m/z为249.0/231.1，内标化合物地西泮的m/z为285.0/193.0。结果3种倍半萜内酯1-acetoxy-6α-hydroxyeriolanolid（e1-乙酰氧基大花旋覆花内酯）,1β-hydroxyalantolactone（1β-羟基-土木香内酯）和Ivangustin在6.2min内实现基线分离，其质量浓度分别在4-800ng/ml、8-500ng/ml、8-500ng/ml内线性良好。最低定量限（LLOQ）分别为4ng、8ng和8ng。这三种倍半萜内酯类成分口服给药的绝对生物利用度分别为18.70%、20.69%和21.39%。结论通过验证，该方法简便、稳定、可行，适用于金沸草提取物中三种倍半萜内酯的药动力学研究。

摘要译文

关键词：

旋覆花属; 高效液相色谱法; 倍半萜内酯; 含量测定; 1-乙酰氧基大花旋覆花内酯; 高效液相色谱法; 含量测定; 倍半萜内酯; 含量测定; LC-MS-MS法; 药代动力学; 血浆

学位年度：

2012

学位类型：

硕士

学科专业：

药物化学

导师：

张卫东

中图分类号：

R284.1[化学分析与鉴定]

学科分类号：

1005[中医学];100803[中药鉴定学];100804[中药化学];100805[中药分析学]

D O I：

10.7666/d.y2110918