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摘要： 比较了不同偶合方法及裂解条件对ω 芋螺毒素及其衍生物线性肽合成效率的影响。结果表明 ,Boc Bzl策略、Fmoc But策略、手工及仪器对总偶合率影响较小 ,但裂解条件及保护策略对肽 树脂裂解影响很大 ,氟化氢体系裂解Boc Bzl法合成树脂副产物较多 ,且主链易发生断裂 ,以低高法裂解效率最高。三氟乙酸体系裂解Fmoc法合成树脂效率高 ,主要副产物是含Trt基的线性肽 ,增加1,2
关键词: ω-芋螺毒素 ；线性肽 ；合成
被引量
5
摘要： 为研究芋螺毒素Im I的杀虫活性,本研究采用化学方法合成芋螺毒素线性肽,经氧化折叠后质谱鉴定获得芋螺毒素Im I,采用MTT法和昆虫注射法研究其杀虫活性。结果表明采用化学合成法可以成功合成芋螺毒素线性肽,经氧化折叠后质谱鉴定形成2个二硫键;活性实验表明芋螺毒素Im I具有抑制昆虫细胞sf9生长的活性,半数有效量为0. 13 n M;对黄粉虫具有杀虫活性,半数致死剂量为0. 11μg/mg。通过化学合成法可以有效合成芋螺毒素Im I,其具有良好的杀虫活性,可为研发新型多肽类生物杀虫剂奠定基础。
关键词: 芋螺毒素 ；化学合成 ；氧化折叠 ；杀虫活性
被引量
9
摘要： 【目的】通过合成芋螺毒素线性肽G1.9并优化氧化折叠体系,测试其对昆虫细胞毒性,为新型多肽类杀虫剂的设计提供依据。【方法】采用固相多肽合成法(SPPS)制备含4个半胱氨酸的芋螺毒素线性肽G1.9并优化氧化折叠体系,采用一罐法氧化芋螺毒素G1.9并验证其生物活性。【结果与结论】采用SPPS法成功地合成了线性肽G1.9,优化获得芋螺毒素G1.9-G型异构体的最佳氧化折叠体系是在0.1 mol/L碳酸氢铵缓冲液(pH 8.0)中氧化36 h。MTT法实验表明G1.9-G能显著抑制昆虫细胞sf9的生长,为后续研究开发新型、安全和高效的多肽类生物杀虫剂奠定基础。
关键词: 芋螺毒素 ；固相多肽合成法 ；氧化折叠 ；活性
摘要： 目的:为探索α芋螺毒素MI的解毒方法,研究MI分支肽抗原的合成方法、免疫原性及抗血清对MI的解毒活性。方法:采用固相多肽合成法合成含炔基MI线性肽及含叠氮赖氨酸分支肽,空气氧化得含炔基MI,通过铜[Cu(I)]催化叠氮-炔杂环加成反应合成多分支肽。多分支肽4次免疫BALB/c小鼠制备抗血清,ELISA法测定血清抗体滴度,然后MI与抗血清混合注射KM小鼠,测定抗血清的保护效果。结果:合成了MI八分支肽,N端连接的MI八分支肽的免疫原性差,10、20μg/只剂量组第4次免疫后的血清抗体滴度分别为1∶400及1∶6400;C端连接的MI八分支肽的免疫原性较高,10、20μg/只剂量组第4次免疫后的血清抗体滴度分别为1∶3200及1∶25600。各组200μL抗血清与20μg/kg MI混合后注射小鼠,小鼠均死亡,且死亡时间与对照组相比无显著差异。结论:C端连接的MI八分支肽比N端连接的八分肽免疫抗原性高,但两者的抗血清对MI无显著解毒活性。
关键词: α芋螺毒素 ；八分支肽 ；铜[Cu(I)]催化叠氮-炔杂环加成反应 ；抗血清 ；中和活性
被引量
1
摘要： 目的阐明TxIB线性肽通过一部氧化法,在体外被氧化折叠形成含有两对二硫键活性肽的具体路径,为后续大量人工合成该活性肽的方法研究提供基础。方法采用N-9芴甲氧羰基(Fmoc)固相合成法人工合成TxIB线性肽,用高效液相和质谱分析法,监测研究TxIB一步氧化折叠过程中所经历的路径。结果 TxIB氧化路径经历了1对二硫键(1SS)、2对二硫键(X-2SS)折叠中间体后,最终形成稳定的含有2对二硫键(N-2SS)的氧化型TxIB。结论芋螺毒素TxIB折叠路径与前期研究的水蛭素氧化折叠路径一致。
关键词: α-芋螺毒素TxIB ；固相多肽合成 ；切割 ；氧化折叠路径
被引量
4
摘要： 目的对从蠕食性橡果螺Conus quercinus获得的全新的芋螺毒素序列Qc-VB-01进行合成和抗菌活性评价。方法利用固相肽合成方法合成线性肽,2,2-二硫二吡啶氧化法连接二硫键,以微量肉汤稀释法测试该多肽对5种致病好氧菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果成功合成芋螺毒素Qc-VB-01及其突变体M10A、M16A,利用质谱验证其相对分子质量,分析液相证明其纯度大于95%。发现Qc-VB-01具有一定抗菌活性,尤其对于金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003效果显著。甲硫氨酸替换为丙氨酸后,不影响活性结果。结论Qc-VB-01是一种具有一定抗菌活性的芋螺毒素,结构简单,抗菌效果明显。
关键词: 芋螺毒素 ；抗菌肽 ；固相肽合成 ；微量肉汤稀释法
摘要： 从海南产桶形芋螺中发现了一个新的T-超家族芋螺毒素B8.1T,其氨基酸序列为DCCPESPPCCH,具有两对二硫键,其连接方式为Cys2-Cys9,Cys3-Cys10。首先采用N-9-芴甲氧羰基(Fmoc)固相合成法合成了B8.1T线性肽,根据采用半胱氨酸保护基团的不同,探索了3种不同的氧化方法 :(1)两步氧化法;(2)One-pot方法 ;(3)自由氧化法。同时对提高芋螺毒素氧化折叠效率的条件进行了优化,对B8.1T的生物活性进行了初步的研究。结果表明,3种方法都可合成正确折叠的芋螺毒素B8.1T,其中两步氧化法和One-pot法合成效率高于自由氧化法,自由氧化折叠条件的优化表明,折叠反应添加物等能提高正确折叠产物的积累效率。B8.1T的动物活性试验显示,当对小鼠进行颅内给药时,对其行为活动产生抑制效应,而对肌肉给药的金鱼无明显影响。
关键词: T-超家族芋螺毒素 ；固相多肽合成 ；氧化折叠 ；二硫键形成
被引量
2
摘要： 目的从我国南海西沙附近海域的桶形芋螺(Conus betulinus)中克隆出新型A-超家族芋螺毒素Bt14.10,并利用化学方法合成该毒素,鉴定其二硫键连接方式。方法提取桶形芋螺毒腺管基因组DNA,基于非翻译区及内含子序列设计合成引物进行PCR,获得Bt14.10的序列。采用Fmoc-固相法合成线性肽Bt14.10,通过空气氧化折叠获得含二硫键的折叠产物,利用两步折叠法测定其二硫键连接方式。结果发现一种新的A超家族芋螺毒素DNA序列Bt14.10,其编码的成熟肽序列为CAHSVPGMHPCKCNNTC-NH2,二硫键连接方式为"C1-C3,C2-C4"。结论BT14.10是一种新型A超家族芋螺毒素,具有A超家族芋螺毒素较为少见的ⅪⅤ型半胱氨酸骨架结构。
关键词: A超家族芋螺毒素 ；克隆 ；内含子 ；合成 ；二硫键
被引量
4
摘要： 目的对前期从织锦芋螺毒液中发现的芋螺毒素Tx3h进行合成鉴定和活性研究。方法通过固相多肽合成法(SPPS)人工合成了Tx3h的线性肽,采用一步氧化法对线性肽进行氧化折叠,获得了Tx3h的2个二硫键连接不同的折叠肽异构体(Tx3h-a和Tx3h-b),并对其氧化折叠条件进行了优化。通过部分还原及烷基化反应,结合MALDI-TOF-MS/MS分析,鉴定了Tx3h-a和Tx3h-b的二硫键连接方式。采用双电极电压膜片钳技术测试了Tx3h-a和Tx3h-b对α4β2和α3β2 nAChRs的抑制作用。结果通过氧化折叠条件的优化,Tx3h-a和Tx3h-b的产率分别从7.5%和9.3%提高到23.7%和22.4%。Tx3h-a和Tx3h-b的二硫键连接方式分别鉴定为I-V、II-VI、III-IV和I-VI、II-IV、III-V。在10μmol/L终浓度下,Tx3h-a和Tx3h-b对α4β2 nAChR的阻断率分别为(35.06±4.90)%、(34.85±3.02)%,对α3β2 nAChR无阻断作用。结论通过对芋螺毒素Tx3h折叠肽的合成、二硫键连接鉴定以及乙酰胆碱受体活性检测,发现二硫键连接为I-V,II-VI,III-IV和I-VI,II-IV,III-V的Tx3h折叠肽对α4β2 nAChR有更好的选择性,为其后续研究开发奠定了基础。
关键词: 富含二硫键的芋螺毒素 ；二硫键连接 ；一步氧化 ；乙酰胆碱受体
摘要： 本研究通过固相合成法合成芋螺毒素Lv68线性肽,研究并优化了其主要异构体的一步氧化折叠条件,并通过电压膜片钳技术对主异构体产物进行了多种乙酰胆碱受体亚型(α3β4,α6β4,α4β2,α9α10,α1β1γδ,α1β1δεnAChRs)的活性测试,旨在为以烟碱型乙酰胆碱受体为靶点的先导药物分子的发现奠定基础,同时为该类其他芋螺毒素的氧化折叠方法、生物活性研究以及深入开发利用提供参考和借鉴。结果表明,芋螺毒素Lv68的一步法氧化折叠最优条件为反应体系组成为0.1 mol·L^−1 Tris-HCl,1 mmol·L^−1 EDTA,GSH/GSSG 1 mmol·L^−1/1 mmol·L^−1,线性肽浓度为50μmol·L^−1,反应时间为2 h,产率高达18.14%,Lv68折叠肽在1μmol·L^−1浓度下对α9α10 nAChR具有较好的阻断作用(阻断率约80%)。本研究明确了芋螺毒素Lv68的一步氧化折叠条件,证实了Lv68对α9α10乙酰胆碱受体亚型具有阻断活性,拓宽了含半胱氨酸框架Ⅲ的M超家族芋螺毒素的作用靶点范围。
关键词: 芋螺毒素 ；二硫键 ；氧化折叠 ；α9α10乙酰胆碱受体
摘要： 目的:利用诱导碰撞解离串联质谱技术,获得富含半胱氨酸毒素多肽α-芋螺毒素(α-CTx)LtIA的裂解规律,为分析未知天然α-芋螺毒素肽的氨基酸序列结构提供参比和方法借鉴。方法:通过Fmoc固相合成,色谱分离获得高纯度α-CTx LtIA还原型线性肽,然后利用离子阱-飞行时间质谱进行MS和MS/MS分析,同时优化碰撞条件,分析产生的碎片离子峰特点。结果:利用Fmoc固相合成法成功合成了α-CTx LtIA线性肽,通过串联质谱分析母离子峰,当碰撞能量和气体设置为50%时,气体毒素肽b离子碎片离子较多,且丰度最高。结论:利用IT-TOF-MSMS,设置好串联质谱分析条件,可以最大限度获得多肽序列结构信息,为新的芋螺毒素序列分析提供支持。
关键词: 芋螺毒素 ；串联质谱 ；多肽测序
被引量
1
摘要： 目的 合成新型ω-芋螺毒素,测定其作用靶标,获得新型镇痛分子并为N-型钙离子通道抑制剂设计提供依据。方法 采用固相法合成线性肽,然后进行折叠、富集和纯化得到纯肽;利用膜片钳技术,测定其对N、P/Q及L-型钙离子通道的抑制活性;利用金鱼测定毒副作用,采用热板法和醋酸扭体法测定活性高毒素的镇痛活性。结果 Ac6.4对N-型钙离子通道抑制活性高,IC50为0.42μmol/L;C6.4、Castu-c2及Di7.5的抑制活性较低,10μmol/L的C6.4、Castu-c2及Di7.5的抑制活性分别为(35.58±12.32)%、(31.09±12.24)%及(14.03±4.84)%。该4种ω-芋螺毒素对P/Q、L-型钙离子通道的抑制活性低。1.0~3.0μg/kg的Ac6.4显著增加小鼠对热板法的痛阈时间,1.0~10.0μg/kg的Ac6.4显著减少小鼠对醋酸扭体次数,但其镇痛活性均低于齐考诺肽(MVIIA)。Ac6.4对金鱼的毒性显著低于ω-芋螺毒素MVIIA。结论 Ac6.4选择性抑制CaV2.2,且具有较高的镇痛活性及较低毒副作用。
关键词: 芋螺毒素 ；合成 ；N-型钙通道 ；镇痛活性 ；毒性
摘要： 目的对芋螺毒素μ-CnIIIC的三种二硫键异构体进行合成工艺研究及表征鉴定。方法通过可溶性疏水载体辅助液相合成法(LPPS)和固相多肽合成法(SPPS)人工合成μ-CnIIIC的三种二硫键异构体的线性肽,采用三步氧化法对线性肽进行氧化折叠,获得三种折叠肽异构体(μ-CnIIIC-Ⅰ、μ-CnIIIC-Ⅱ和μ-CnIIIC-Ⅲ),并对两种合成工艺进行物料消耗量、“三废”产生量、收率进行对比。结果成功合成芋螺毒素异构体并进行了质谱表征;采用SPPS法和LPPS法合成μ-CnIIIC-Ⅰ、μ-CnIIIC-Ⅱ、μ-CnIIIC-Ⅲ平均收率为15.64%、13.27%、10.56%和18.45%、17.62%、15.37%;采用SPPS法和LPPS法合成1 gμ-CnIIIC-Ⅰ、μ-CnIIIC-Ⅱ、μ-CnIIIC-Ⅲ物料平均消耗量为20.65、21.62、24.78 g和61.19、72.17、90.75 g,平均废液产生量分别为1.49、1.57、1.78 L和12.72、15.00、19.16 L。SPPS法和LPPS法比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过对芋螺毒素μ-CnIIIC异构体的合成研究,表明LPPS法的总体收率比SPPS法收率高且物料消耗量及“三废”产生量少,因此LPPS法具有重大的研究意义和商业价值。
关键词: 多肽 ；可溶性疏水载体辅助液相合成法 ；固相多肽合成法 ；tag-OH
被引量
1
摘要： 目的:合成2个来自泡芋螺的新型ω-芋螺毒素Bu1、Bu13,测定其作用靶标,为研制新型镇痛药提供先导化合物。方法:固相合成线性肽,然后在折叠液(0.5 mol/L乙酸铵、1 mmol/L谷胱甘肽、0.1 mmol/L氧化谷胱甘肽)中于4℃折叠24～48 h,富集纯化得目标肽;利用膜片钳技术,测定其对N、P/Q及L型钙离子通道的抑制活性。结果:Bu1、Bu13对N型钙离子通道的半抑制浓度(IC50)分别为0.86、1.02μmol/L,抑制作用低于MⅦA(IC50=0.21μmol/L);10μmol/L Bu1、Bu13对P/Q型钙离子通道的抑制率分别为17.05%±1.34%、13.1%±2.69%,稍高于MⅦA(8.92%±2.12%);10μmol/L Bu1、Bu13对L型钙离子通道的抑制率分别为19.31%±6.22%、4.78%±0.77%,高于MⅦA(<5%)。结论:Bu1、Bu13选择性作用于N型钙离子通道,对P/Q、L型钙离子通道的抑制作用较低。
关键词: 泡芋螺 ；ω-芋螺毒素 ；膜片钳 ；钙离子通道
被引量
2
会议时间： 2019-08-16
摘要： 目的意义:α-芋螺毒素TxID是本实验室从织锦芋螺(Conus textile)中发现的,能选择性阻断大鼠α3β4乙酰胆碱受体(nAChR),其半阻断浓度仅为12.5 nM。而α-芋螺毒素[S9A]TxID是芋螺毒素TxID的第9位突变体,能够区分α3β4和α6/α3β4nAChRs这两个极其相似的亚型,其对α3β4nAChR的阻断活性比对α6/α3β4nAChR的强46倍,具有很好的应用前景。多肽类化合物在生物体内的稳定性较差,半衰期短,生物利用度低,这些缺点限制了多肽药物的开发利用,[S9A]TxID也不例外。因此,本研究通过环化的方式对[S9A]TxID进行结构改造与优化,期望获得能保持原活性、且在体内代谢稳定性提高的环化突变体。方法:利用酸敏感2-氯三苯甲基氯树脂设计合成一段N→C端氨基酸序列接头,通过Fmoc固相合成法合成[S9A]TxID的线性树脂肽。使用1%三氟乙酸(TFA)和二氯甲烷(DCM)溶剂切割树脂释放出线性肽。然后利用HATU和DIEA试剂使线性肽经脱水缩合反应形成首尾环化肽,并用切割液去除环肽的侧链保护基团。最后在碳酸氢铵缓冲液中自由氧化折叠,形成两对二硫键,并通过分析型和半制备型高效液相色谱进行分离纯化和鉴定。结果:经过环化合成反应后,通过高效液相色谱和质谱鉴定,成功获得了[S9A]TxID的环肽突变体。
关键词: α-芋螺毒素[S9A]TxID ；首尾环化 ；氧化折叠 ；多肽合成
摘要： 芋螺毒素能够选择性作用一系列离子通道和受体,使其作为一类重要工具广泛应用于神经系统研究。发现于旗帜芋螺的芋螺毒素αB-VxXXIVA能够作用于α9α10乙酰胆碱受体,具有重要的药用潜能。本研究通过化学手段合成αB-VxXXIVA重要序列片段,优化其线性肽合成后氧化折叠方法。同时通过电喷雾离子阱飞行时间串联质谱诱导碰撞解离分析线性肽和折叠肽的二级质谱碎片离子峰,根据y和b系列离子分布分析其二级质谱解离规律。实验结果显示铁氰化钾氧化体系能够显著提高氧化折叠产率。二级质谱离子峰显示线性肽中y离子占主要部分,同时线性肽产生y碎片离子明显多于氧化态,长链多肽也不适用串联质谱从头测序。
关键词: 化学合成 ；折叠 ；串联质谱
摘要： 目的:采用固相方法合成新型α4/7芋螺毒素Mr1.8(PECCTHPACHVSNPELC-NH2),并测定其折叠后的二硫键配对方式。方法:采用Fmoc-固相法合成线性肽Mr1.8,通过空气氧化折叠获得含二硫键的折叠产物,利用两步折叠法测定其二硫键连接方式。结果:Mr1.8线性肽经折叠生成2种产物Ⅰ和Ⅱ,质谱和二硫键分析结果显示Mr1.8-Ⅱ为正确折叠产物,其二硫键框架为(Cys1-Cys3,Cys2-Cys4)。结论:Mr1.8是一种新的α4/7型芋螺毒素,其一种主要折叠产物的二硫键框架为(Cys1-Cys3,Cys2-Cys4)。
关键词: 芋螺 ；芋螺毒素 ；合成 ；二硫键 ；烟碱型乙酰胆碱受体
被引量
1
摘要： 目的合成新型芋螺毒素B179,并对其氧化折叠进行研究。方法采用Fmoc固相合成法合成芋螺毒素多肽B179,研究了不同的氧化缓冲液、谷胱甘肽浓度、还原型与氧化型谷胱甘肽的比例、以及温度对氧化折叠的影响。结果采用Fmoc固相合成法可以成功合成线性肽,其氧化折叠产物中主要为含一对二硫键的产物,但还出现了其他副产物,可能是含有分子间二硫键的折叠产物;在高浓度还原型谷胱甘肽环境下,折叠副产物更易形成;随着氧化反应温度升高,折叠反应速率加快。结论固相合成法可以有效合成芋螺毒素B179,且不同因素对其二硫键的形成有着较大的影响,本研究结果可为新型芋螺毒素的合成及其氧化折叠提供借鉴。
关键词: 固相多肽合成 ；氧化折叠 ；芋螺毒素 ；二硫键
被引量
1
摘要： 目的:合成难溶的新4/3型α-芋螺毒素Eb1.3突变体Eb1.3[ΔR1,W13M],并初步测定其与烟碱型乙酰胆碱受体亚型的结合作用。方法:采用Fmoc-固相法合成线性肽Eb1.3[ΔR1,W13M],通过空气氧化折叠和磺化产物折叠获得含二硫键的折叠产物,利用两步折叠法测定其二硫键连接方式,双电极电压钳技术检测其药理活性。结果:Eb1.3[ΔR1,W13M]线性肽经折叠生成的主产物Ⅰ的二硫键排列方式为少见的C1-C4、C2-C3,而非典型的C1-C3、C2-C4,线性肽磺化后再经GSH交换可加速折叠,10μmol/L的产物Ⅰ对乙酰胆碱受体α3β2亚型的抑制率为28.97%±8.44%。结论:新4/3型α-芋螺毒素Eb1.3突变体Eb1.3[ΔR1,W13M]形成非典型的二硫键C1-C4、C2-C3,产物Ⅰ对乙酰胆碱受体α3β2亚型具有一定的结合活性。
关键词: α-芋螺毒素 ；合成 ；磺化 ；二硫键 ；烟碱型乙酰胆碱受体
被引量
1
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