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摘要： 本论文对中国南海来源真菌Penicillium sp.SCSIO 40438的次级代谢产物进行了研究。通过硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及高效液相色谱等多种分离方法对该菌株的发酵产物进行了分离纯化,并利用核磁共振和高分辨质谱等波谱学方法对分离得到的化合物进行了结构鉴定。从中共分离鉴定到9个化合物:1-(2-Methylbut-3-en-2-yl)-1H-indole-3-carbaldehyde(1)、1-methyl-2(1H)-quinazolinone(2)、fructigenine A(3)、fructigenine B(4)、2-[(s)-hydroxy(phenyl)methyl]-3-methylquinazolin-4(3H)-one(5)、3-methylviridicatin(6)、3-O-methylviridicatol(7)、viridicatol(8)和(+)-cyclopenol(9)。其中,化合物1和2为新天然产物。抑菌活性实验表明,化合物8具有中等强度的抑制金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性,最低抑菌浓度为8.0μg·mL^(-1)。
关键词: 真菌 ；Penicillium sp. ；次级代谢产物 ；抑菌活性
被引量
2
摘要： 目的研究中国南海西沙群岛来源真菌Pestalotiopsis sp.ZJ-2009-7-6中的活性次级代谢产物的化学结构及其生物活性。方法利用现代波谱方法,鉴定脑苷脂类化合物cerebroside A(1)和(4E,8E)-N-D-2′-hydroxypalmitoyl-1-O-β-D-glycopyranosyl-9-methyl-4,8-sphingadienine(2)的化学结构;利用抗菌和抗病毒活性模型对其进行生物活性评价。结果化合物1对痢疾志贺氏菌(Shigellad ysenteriae)显示一定的抗菌活性(MIC=50μmol/L);化合物2对单纯疱疹病毒(HSV-1)和肠道病毒71(EV71)有较好的抗病毒活性。结论从西沙群岛来源真菌Pestalotiopsis sp.7-6中分离获得2个具有抗菌和抗病毒活性的脑苷脂类化合物。
关键词: Cerebroside ；A ；(4E,8E)-N-D-2’-hydroxypalmitoyl-1-O-β-D-glycopyranosyl-9-methyl-4,8-sphingadienine ；抗菌活性 ；抗病毒活性
被引量
4
【期刊论文】 • 罗小卫 1,2林秀萍 1Limbadri Salendra 1,2庞小艳 1,2
+2位作者
• 《天然产物研究与开发》 北大核心
CSCD
• 2017年第6期 959 -
962， 共4页
摘要： 对中国南海500 m深海水来源真菌Exophiala sp.SCSIO 05791进行了次级代谢产物研究;综合运用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、中压反相柱层析以及半制备高效液相等色谱学方法对其大米发酵产物进行分离纯化,从中分离到8个单体化合物,利用核磁共振、质谱等波谱学手段并结合其理化性质及文献数据鉴定了其化学结构:stephacidin A(1)、吲哚-3-乙酸(2)、环(D)-脯氨酸-(D)-苯丙氨酸(3)、反式阿魏酸(4)、顺式阿魏酸(5)、2-(乙酰氨基)-苯酚(6)、氨基苯甲酸(7)、4-羟基苯酞(8)。化合物1~8均为首次从该属中分离得到。
关键词: 中国南海 ；海洋真菌 ；次级代谢产物 ；外瓶霉属
被引量
16
摘要： 目的对分离自中国南海500m深层海水来源真菌Penicillium brocae SCSIO 05793进行菌种鉴定及次级代谢产物研究。方法通过ITS序列分析并构建系统发育树来鉴定菌株,综合运用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、中压反相柱层析以及半制备高效液相等色谱学方法对其大米发酵产物进行分离纯化,利用核磁共振、质谱、旋光等波、光谱学手段并结合理化性质及文献数据鉴定其化学结构。结果从中分离到8个单体化合物:cyclo(L-Pro-L-Leu)(1),cyclo-(L-pro-L-Ile)(2),cyclo(L-Pro-L-Phe)(3),cyclo(L-Pro-L-Tyr)(4),3,4-二羟基苯甲酸甲酯(5),4-羟基苯甲醛(6),4-羟基苯乙酮(7),对羟基苯乙酸甲酯(8)。结论从该菌株Penicillium brocae中分离得到8个化合物。
关键词: 中国南海 ；海洋真菌 ；次级代谢产物 ；Penicillium ；brocae
被引量
22
会议名称： 2015中国植物学会第十三届全国药用植物及植物药学术研讨会暨2015年海峡两岸中医药科学交流会
会议时间： 2015-07-01
摘要： 海洋微生物,尤其是海洋真菌已成为结构新颖生物活性丰富的天然药物的重要来源.青霉属海洋内生真菌能产生结构多样并具有生物活性的次级代谢产物,比如细胞毒素citrinadin A、抗炎药terrestrols等.在寻找生物活性次级代谢产物中,一株来源于中国南海药用红树角果木内生真菌Penicillium sp.引起了注意,其土豆发酵物的乙酸乙酯提取物具有较好的抗菌活性,HPLC分析发现其具有丰富的次级代谢产物.通过生物活性追踪分离,从中分离得到了3个结构新颖的多烯类化合物,以及3个已知化合物,其中化合物1为较少见的含氯化合物.抗菌活性表明化合物1和2具有较好的抗菌活性.
关键词: 天然药物 ；海洋真菌 ；次级代谢产物 ；抗菌活性
会议时间： 2015-10-26
摘要： 海洋微生物,尤其是海洋真菌已成为结构新颖生物活性丰富的天然药物的重要来源。红树林作为海洋当中的一个独特的生态系统,拥有着丰富的、独特的以及新颖的微生物资源。青霉属海洋内生真菌能产生结构多样并具有生物活性的次级代谢产物,比如抗炎药terrestrols,细胞毒素citrinadin A等。在继续寻找生物活性次级代谢产物中,发现一株来源于中国南海药用红树角果木内生真菌Penicillium sp.具有丰富的且活性显著的次级代谢产物。该土豆发酵物的乙酸乙酯提取物显示较好的抗菌活性,HPLC分析发现其具有丰富的次级代谢产物。通过生物活性追踪分离,我们从中分离得到了3个结构新颖的生物碱化合物。抗菌活性表明所有化合物都具有较好的抗菌活性。
关键词: 角果木 ；内生真菌 ；青酶 ；生物碱
被引量
1
【会议论文】 • 林文翰
会议时间： 2012-06-21
摘要： 目的对一株深海来源真菌Aspergillus sp.F62中的次级代谢产物多样性及其生物活性进行了研究。方法以1H NMR和HPLC-DAD为指导,综合利用Silicagel,ODS,Sephadex LH-20,semi-PHPLC等多种色谱学分离手段和NMR,MS,IR,UV等波谱学鉴定技术,对一株中国南海深海来源真菌Aspergillus sp.F62中的次级代谢产物分进行了系统的研究,并根据结构特征,采用多种生物活性模型对这些次级代谢产物进行了活性评价。结果从该真菌中共分离鉴定出各类化合物29个,其中新化合物3个,这些结构包括9个联苯醚类化合物,5个Xanthenes类化合物,4个蒽醌类化合物,9个苯衍生物以及2个小分子生物碱。这些化合物分别表现出了一定的抗菌,抗氧化以及抗肿瘤等生物活性。结论深海微生物是寻找活性天然产物的重要来源,本课题的研究工作丰富了天然产物的结构多样性并为深海微生物中活性天然产物的深入研究提供了一定的基础。
关键词: 深海来源真菌 ；Aspergillus sp. ；次级代谢产物 ；生物活性
摘要： 海洋占地球表面积71%,作为一个大型资源宝库,微生物物种丰富。海洋真菌作为海洋微生物的重要组成部分,近年来受到了广泛的关注。由于高压、高盐的特殊生存环境,海洋真菌与陆地微生物相比具有不同的代谢途径,能够产生结构新颖,具有独特生物活性的次级代谢产物,是药物先导化合物的重要来源。本文对分离自南海样品中的两株真菌进行了次级代谢产物的分离及抑菌活性的评价。通过大规模发酵培养,从分离自南海寄居蟹中的青霉属真菌Penicillium sp.JJX-1中共分离得到13（P1–P13）个单体化合物,通过核磁共振（NMR）谱和高分辨质谱（HRESIMS）确定了每个单体的结构,分别为N-tert-Prenylindoles（P1）、diazinone 5（P2）、fructigenine A（P3）、fructigenine B（P4）、3-Methylviridicatin（P5）、3-O-methylviridicatol（P6）、viridicatol（P7）、2-[（s）-hydroxy（phenyl）methyl]-3-methylquinazolin-4（3H）-one（P8）、（+）-cyclopenol（P9）、verrucosidinol（P10）、verrucosidin（P11）、norverrucosidin（P12）、邻氨基苯甲酸（P13）。其中化合物P1为新的天然产物。抑菌活性表明,化合物P7具有中等的抑制金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA）的抑制活性,其最小抑菌浓度（MIC）均为8μg m L-1。从采集于中国南海的金口蝾螺中分离得到一株葡萄穗霉属真菌Stachybotrys sp.SCSIO 40434,综合运用正相硅胶柱层析、凝胶柱层析、半制备高效液相色谱等分离手段,从其固体发酵培养物中共分离鉴定了10（S1–S10）个单体化合物。通过NMR,HRESIMS以及X-ray单晶衍射确定了每个单体的结构,分别为stachybomycin A（S1）、stachybomycin B（S2）、stachybomycin C（S3）、stachybomycin D（S4）、stachybomycin E（S5）、stachybotrysin C（S6）、stachybotrylactam acetate（S7）、Mer-NF5003 B（S8）、2α-acetoxystachybotrylactam acetate（S9）、chartarutine G（S10）。其中化合物S1–S5为新化合物。化合物S5和S7作为一对C-8差向异构体表现出相同的抑菌活性,均具有中等的抑制藤黄微球菌（Micrococcus luteus）,金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性,MIC值分别为8,16和16μg m L-1。本文对采集于中国南海样本中分离得到的两株海洋真菌进行了次级代谢产物的分离,从中共分离得到单体化合物23个,包括5个新化合物,以及1个新的天然产物,并对得到的单体化合物进行了抑菌活性的评价。本文丰富了海洋真菌次级代谢产物的研究内容,为合理开发利用海洋微生物资源提供了一定的科学依据。
关键词: 海洋真菌 ；次级代谢产物 ；分离鉴定 ；抑菌活性
被引量
4
摘要： 近年来,在海洋天然产物研究中海洋动物共附生真菌提供了大量结构新颖的活性化合物,且越来越多的研究结果表明海洋动物来源的天然产物并非由动物本身产生,而是其共附生微生物的产物。海洋动物共附生真菌在寻找结构新颖的药物先导化合物中具有巨大潜力。本次研究在前期研究基础上,对两株中国南海红口螺（Strombus luhuanus Linnaeus）共附生真菌WP-26和WP-13的次级代谢产物及其生物活性进行研究,以期从中发现结构新颖的活性化合物。通过形态学和ITS序列分析的方法对菌株进行鉴定;利用多种柱色谱结合高效液相色谱等现代色谱技术,对菌株乙酸乙酯提取物进行分离纯化;通过现代波谱技术结合X-单晶衍射和ECD量子化学计算等方法对单体化合物进行结构鉴定;分别采用打孔法、MTT法、Ellman法对部分单体化合物进行抗菌、抗肿瘤、乙酰胆碱酯酶抑制等活性测试。菌株WP-26和WP-13分别被鉴定为拟暗球腔菌属真菌（Phaeosphaeriopsis sp.）和青霉菌属真菌（Penicillium sp.）。从Phaeosphaeriopsis sp.WP-26的乙酸乙酯提取物中共分离鉴定了18个单体化合物（1～18）,其结构分别为:phaeosol A（1）,phaeosol B（2）,phaeosol C（3）,phaeosol D（4）,phaeosol E（5）,phaeosol F（6）,phaeosol G（7）,phaeosol H（8）,phaeosol I（9）,phaeosol J（10）,phaeosol K（11）,phaeosol L（12）,6,8-dihydroxy-7-methoxy-3-methylisocoumarin（13）,（12）,diaportheins A（14）,diaportheins B（15）,苔色酸甲酯（16）,对羟基苯乙酸甲酯和N-acetylphenylalanine（18）。包括13个异香豆素类化合物（1～13）,2个萜类化合物（14、15）,2个酚类化合物（16、17）和1个氨基酸衍生物（18）。其中,化合物1～12为新化合物,化合物1～18首次分离自拟暗球腔菌属真菌。从Penicillium sp.WP-13的乙酸乙酯提取物中分离鉴定了5个单体化合物（19～23）,其结构分别为:1-hydroxy-3,10-dimethoxy-8-methyl-6,11-dioxo-6,11-dihydrodibenzo[b,e]oxepine-9-carboxylic acid（19）,1,8-dihydroxy-10-methoxy-3-methyl-dibenzo[b,e]oxepine-6,11-dione（20）,endocrocin methyl ester（21）,2-chloro-1,3,8-trihydroxy-6-methyl-9,10-anthracenedione（22）和emodin（23）。包括2个内酯类化合物（19、20）和3个蒽醌类化合物（21～23）。其中,化合物19为新化合物,首次报道化合物21的核磁数据和理化数据,化合物19～22均为首次分离自青霉属真菌。生物活性测试结果表明,化合物15对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus）和荔枝霜疫霉（Peronophythora litchii）具有一定的抑制活性,抑菌圈直径分别为14.17±0.58 mm、7.53±0.06 mm、12.15±0.69 mm;化合物15、21和23对人慢性髓原白血病细胞株K562、人肝癌细胞株BEL-7402、人胃癌细胞株SGC-7901及人宫颈癌细胞株Hela有一定的细胞毒活性,IC50值（半数抑制浓度）为8.46±0.14～96.09±1.52μM,化合物15还对人肺癌细胞株A549有细胞毒活性,IC50值12.58±0.16μM;化合物1～3、6、8、12～16、19～23均具有微弱的乙酰胆碱酯酶抑制活性,抑制率为10.88±0.03%～24.80±1.03%。上述研究结果为探索中国南海红口螺共附生真菌的开发利用提供了科学依据。
关键词: 海洋动物共附生真菌 ；次级代谢产物 ；拟暗球腔菌属 ；青霉属 ；异香豆素 ；抗菌活性 ；细胞毒活性 ；乙酰胆碱酯酶抑制活性
摘要： 红树林分布在热带、亚热带海岸或河口潮间带等区域,是大陆陆地和海洋交错带的特殊生态系统。受海水周期性冲击和浸淹,其生态环境非常复杂,具有高盐、低氧、潮汐渐变、高温强光等特点。长期生活于其中的微生物为了适应红树林特殊的生存环境,逐渐形成了独特的代谢途径,能够产生许多化学结构新颖同时具有多种生物活性的次级代谢产物。从红树林来源的真菌中发现结构新颖、生物活性显著的次级代谢产物成为海洋天然药物研究的热点领域,对于海洋药物先导化合物的发现具有重要意义。本论文工作分为两个部分:第一部分,采用化学筛选和活性筛选相结合的手段,对一批红树林根际土壤真菌进行筛选,确定了其中一株菌株Fusarium sp.J3-2为研究对象,进行抗菌等活性次级代谢产物研究;第二部分,采用化学表观遗传修饰策略结合卤盐(NaBr)调控方法,对一株红树林根际土壤真菌Penicillium janthinellum HK1-6进行代谢调控,进而对调控产物进行分离研究。对于两株真菌的发酵粗提物,综合运用正反相硅胶柱层析、凝胶(Sephadex LH-20)柱层析、高效液相色谱(HPLC)等现代色谱分离技术对真菌的次级代谢产物进行分离、纯化获得单体化合物;综合运用核磁共振波谱(1H NMR,13C NMR,HSQC,COSY和HMBC等),质谱(ESI-MS等),紫外光谱(UV),红外光谱(IR)、圆二色谱法(ECD)等方法对单体化合物进行结构表征;最后采用抗菌、细胞毒、抗藤壶幼虫附着等生物活性评价模型,对单体化合物进行生物活性评价。本论文主要研究结果如下:(1)综合采用抗菌活性筛选与化学筛选相结合的方法,从24株红树林根际土壤真菌中筛选获得1株目标真菌J3-2。该菌的粗提物显示出较强的抗菌活性,且代谢产物为醌类聚酮化合物。采用分子生物学结合形态学方法,鉴定真菌J3-2为镰刀属 Fusarium sp.真菌。(2)从真菌Fusarium sp.J3-2的PDB发酵产物中分离鉴定了 9个单体化合物,包 括 2 个 新 的 蒽 醌 类 化 合 物(11S)-1,4,7-trihydroxy-6-(1-hydroxyethyl)-2-methoxyanthracene-9,10-dione(1)和(11S)-1,6-dihydroxy-7-(1-hydroxyethyl)-3-methoxyanthracene-9,10-dione(2)、4 个萘醌类化合物(3～6)、1个噻吩类化合物(7)、1个烯酮类化合物(8)和1个苯并吡喃酮类化合物(9)。新化合物1对致病菌Staphylococcus aureus ATCC 33591、29213、Enterococcus faecalis ATCC 51299 和E.faecium ATCC 35667 有中等抑菌活性,MIC值为均为25μg/mL,对S.aureu sATCC 43300有弱抑菌活性,MIC值为50μg/mL。化合物5对E.faecalis ATCC 51299有中等抑菌活性,MIC值为25μg/mL。化合物3具有弱细胞毒活性,对人肝癌细胞株SMMC-7721和人胃癌细胞株SGC-7901的IC50值分别为48.87和41.23 μg/mL。化合物1～7均显示了一定的防藤壶Balanusamphtrite幼虫附着活性。(3)采用组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠和DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-azacytidine)对能够产生嗜氮酮及三环聚酮化合物的真菌P.janthinellum HK1-6进行化学表观遗传修饰研究,发现该真菌在两种化学表观遗传修饰剂影响下次级代谢产物的合成均发生了较大变化,尤其是当丁酸钠添加浓度为5 mmol/L时,该真菌代谢产物的变化最为显著。(4)采用丁酸钠添加浓度为5 mmol/L及NaBr浓度为30 g/L的PDB培养基对真菌P.janthinellum HK1-6进行大规模发酵,从中分离鉴定了 6个化合物(10～15),分别是1个嗜氮酮化合物(10)、1个三环聚酮化合物(11)、3个苯衍生物(12～14)以及青霉酸(15)。化合物10具有较强的抗菌活性,对致病菌S.aureus ATCC 43300、33591、25923、29213、E.faecalis ATCC 51299 及E.faecium ATCC 35667 均有抑制作用,MIC值均为3.13μg/mL。化合物10对人肝癌细胞株SMMC-7721有细胞毒活性,IC50 值为 15.29μg/mL。综上所述,本论文以两株中国南海红树林根际土壤真菌Fusarium sp.J3-2和P.janthinellum HK1-6为研究对象进行活性次级代谢产物研究,从中分离鉴定了 15个化合物,主要为聚酮类化合物,部分化合物具有抗菌、细胞毒及防藤壶幼虫附着活性。本研究为海洋药物先导化合物的发现及海洋活性物质的开发和利用提供了基础。
关键词: 红树林根际土壤真菌 ；Fusarium sp. ；Penicillium janthinellum ；聚酮 ；抗菌活性
被引量
4
摘要： 本文内容共分为五章,前四章分别讲述了植物内生菌拟盘多毛孢（Pestalotiopsis theae）、海洋珊瑚共附生真菌葡萄穗霉（Stachybotrys chatarum）,海洋来源青霉属真菌（Penicillium sp.TJ403-1和Penicillium citrinum）以及金丝桃属植物栽秧花（Hypericum beanii）次级代谢产物的研究结果。第五章综述了以chinesinⅠ及其类似物为生源前体化合物合成一系列的间苯三酚类衍生物的化学结构和生物活性的研究进展。拟盘多毛孢（Pestalotiopsis）属真菌作为内生真菌一个重要的类群,能产生多种具有生物活性的次级代谢产物。我们从恩施州的茶树叶上分离得到一株拟盘多毛孢属真菌Pestalotiopsis theae,通过大米固体发酵培养后,从乙酸乙酯提取物中共分离鉴定了20个化合物(1-4,（±）-5,6-19),包括7个新化合物(1-4,（±）-5,6),化合物的结构类型主要有丁烯酸内酯、二联苯及其衍生物等,它们的结构通过NMR,UV,IR,ECD计算,旋光值分析以及与已知化合物进行核磁数据对比等方法确定。在确定了绝对构型后,我们对部分化合物进行了细胞毒活性测试。测试细胞系包括人类肿瘤HL-60,U87MG,MDA-MB-231,A-549,HEP-3B和SW-480细胞系,以及一个非癌NCM460细胞系。其中化合物1对人肿瘤HL-60、U87MG、MDA-MB-231、HEP-3B细胞表现出了显著的细胞毒活性,其IC50值分别为1.42、5.90、5.90和4.29μM,化合物4对HL-60细胞株表现出明显的抑制作用,其IC50值为5.05μM。海洋来源微生物因其独特的生长环境（高盐度、高压等）和遗传代谢机制一直以来是新颖活性次级代谢产物发现的重要源泉,是新药研发的强大驱动力。我们对来源于中国南海珊瑚礁共附生真菌黑葡萄穗霉菌（Stachybotrys chartarum）的次级代谢产物及其生物活性进行了系统的研究,从大米固体培养基乙醇提取物中共分离鉴定了16个化合物（20-35）,包括8个新化合物（20-27）,而化合物20-25的绝对构型通过单晶X-ray衍射的方法确定。其中atranone Q（23）为首个通过碳碳键连接propan-2-one单元和dolabellane型二萜的C23杂萜;atranone R（24）为首个通过C-5–C-6键连接2-methyltetrahydrofuran-3-carboxylate单元和dolabellane型二萜的C24杂萜。我们随后评价了6个dolabellane型二萜衍生物（20-25）的药理活性,在体外对七株临床耐药菌进行了抑菌活性研究。结果表明21对鲍曼不动杆菌和粪肠球菌均有抑制作用,MIC值分别为16和32μg/m L;化合物23对白念珠菌有明显的抑制作用,MIC值分别为8、16和32μg/m L。通过进一步的电镜扫描实验可观察到化合物23在浓度为16μg/m L时对白色念珠菌耐药菌株的细胞壁和细胞膜有明显的破坏作用。另外我们对从中国三亚Alcyonium属软体珊瑚的组织中分离得到的Penicillium sp.TJ403-1（一个未被命名的青霉属真菌,我们依据其形态和DNA序列的分析将其定义为青霉属）以及来源于大西洋7000米海试区的桔青霉（Peniciliium citrinum）进行了大米固体发酵培养,共分离鉴定25个化合物（36-60）,包括2个新化合物:一个breviane型螺环二萜衍生物（36）和一个桔青素二聚体（47）,这两个新化合物的绝对构型通过与已知化合物的ECD曲线比较得已确定。对青霉属真菌Penicillium sp.TJ403-1次级代谢产物的细胞毒活性以及IDH1抑制活性的研究结果表明,化合物37对HL-60,A-549和HEP-3B肿瘤细胞株均表现出了较强的细胞毒活性,IC50值分别为4.92±0.65,8.60±1.36和5.50±0.67μM。本课题组一直致力于华中地区金丝桃属植物的化学和药理多样性研究,我们对采自湖北恩施的金丝桃属植物栽秧花（Hypericum beanii）的95%乙醇提取物总膏进行了深入的化学成分研究,共分离鉴定36个间苯三酚类衍生物和5个蒽酮类衍生物（61-101）,其中新化合物有17个（61-77）,包括隶属于三种新颖骨架类型的3个化合物（65-66和69）。结合生源途径考虑,可以将分离得到的间苯三酚类衍生物结构分为三大类:2,3-seco PPAPs（61-68）,5,6-seco PPAP（69）,以及含有octahydrospiro-[cyclohexan-1,5'-indene]母核的螺环PPAPs（70-76）。化合物61-64为首次分离得到的含有六元δ-内酯结构的2,3-seco型PPAPs,化合物61的绝对构型由X-ray单晶衍射和ECD计算的方法确定,化合物62-63的绝对构型通过基于碳谱计算的DP4+可能性分析,以及ECD计算的方法确定。化合物65-66是首次分离得到的含有γ-内酯结构的2,3-seco型PPAPs,其中化合物65的绝对构型通过X-ray单晶衍射得到了证实,并且化合物66的绝对构型通过与其进行ECD曲线的比较得已确定。化合物69是首次报道的5,6-seco PPAP,其含有一个独特的benz[f]indene-1,9（4H）-dione母核结构,其平面结构及绝对构型通过综合运用波谱分析,基于碳谱计算的DP4+可能性分析,以及ECD计算的方法进行了确定。化合物70是首次分离得到的分子内脱水形成6/6/6/5环系的螺环PPAP,分子内在C-3位和C-12位间形成了一个氧桥,其绝对构型通过X-ray单晶衍射得到了确定。化合物71是首次分离得到的2,27-seco螺环PPAP,其绝对构型通过ECD计算得到了确定。对部分间苯三酚类衍生物进行了体外细胞毒活性筛选,结果表明化合物69,70和82具有一定的细胞毒活性。本文对植物来源内生菌、海洋来源真菌,以及金丝桃属植物栽秧花的次级代谢产物进行了较为系统的研究,我们通过波谱数据分析,ECD计算,基于碳谱计算的DP4+可能性分析和单晶衍射等方法确定了包含聚酮,生物碱,二萜,杂萜,间苯三酚类衍生物等多种天然产物的绝对构型。
关键词: 拟盘多毛孢 ；葡萄穗霉 ；青霉 ；Hypericum beanii ；PPAPs ；细胞毒活性
摘要： 目的:为了探索和挖掘中国南海海洋真菌次级代谢产物中结构新颖和具有良好生物活性的化合物,对两株来源于南海海洋的共附生真菌Emericellopsis sp.SCSIO41202和Peniophora sp.SCSIO41203的次级代谢产物系统地进行化学成分和相关生物活性研究。方法:将来源于红树林底泥的真菌Emericellopsis sp.SCSIO41202利用液体培养基进行菌株大规模发酵,将来源于东门软珊瑚共附生真菌Peniophora sp.SCSIO41203菌株利用大米培养基进行菌株大规模发酵,通过丙酮,乙酸乙酯以及甲醇等化学试剂对获得的培养物进行成分提取,最后获得粗浸膏,再利用正相色谱柱,ODS反向色谱柱,TLC薄层色谱,凝胶柱以及半制备高效液相色谱等分离方法,对大规模发酵产物粗浸膏进行分离纯化,得到一系列单体化合物,然后通过核磁共振谱图,质谱,红外光谱,紫外光谱,旋光等波谱、光谱手段,并结合相关参考文献数据对其进行数据比对和解析,同时对相关化合物进行初步的酶抑制活性筛选。结果:从菌株Emericellopsis sp.SCSIO41202的液体培养基的次级代谢产物中共分离得到16个化合物（1～16）,包含3个异黄酮类（1～2,6）,2个异香豆素类（5,13）,4个细胞松弛素类（7～10）,2个青霉醇类（11～12）,1个庚酸类（14）,1个色酮类（15）,1个塑化剂（16）,1个单吲哚类生物碱（3）以及1个脂肪酸（4）,其中化合物8和9为新化合物,其余14个均为已知化合物;从菌株Peniophora sp.SCSIO41203的大米培养基的次级代谢产物中共分离得到27个化合物（17～43）,包括3个吡咯烷生物碱（17～19）,7个异香豆素类（23～24,27～29,31,39）,3个细胞松弛素类（32～34）,2个环己烯酮类似物（38,43）,1个青霉素类似物（37和42）,2个桔霉素类衍生物（21,30）以及青霉醇（20）,异喹啉类生物碱（22）,香豆素类（25）,联苯类（35）,单环聚酮（35）,酰胺型化合物（40）,含苯的衍生物（41）,黄原酰胺类（36）各1个,其中化合物18,20,21,24,25,29,30,33,34,35,41,42,43共13个为新化合物,其余14个均为已知化合物。并对部分单体化合物进行乙酰胆碱酯酶,胰脂肪酶抑制活性筛选。结果显示,在反应终浓度50μg/m L条件下,化合物1,3,8,11,14对乙酰胆碱酯酶有微弱的抑制活性,化合物7,9,10,12对乙酰胆碱酯酶显示中等抑制活性,其他化合物均未显示出抑制活性。化合物6对胰脂肪酶显示出微弱抑制活性,化合物14对胰脂肪酶显示出中等抑制活性,抑制率达到（41.70±0.22）%,化合物12对于胰脂肪酶显示出强抑制活性,抑制率高达（64.10±0.13）%,其他化合物均未显示出抑制活性。其中化合物32对PC-3细胞显示出最佳的抑制作用,IC50值为2.32±1.14μM,对乙酰胆碱酯酶抑制活性IC50为31.65±0.28μM。结论:研究发现两株分别来源于红树林底泥和东门软珊瑚共附生真菌的次级代谢产物类型丰富,包含了异黄酮类,异香豆素类,细胞松弛素类,青霉素类,桔霉素类以及黄原酰胺类等化合物,其中新化合物15个,已知化合物28个。本实验对部分分离的化合物进行了乙酰胆碱酯酶和胰脂肪酶的抑制活性测试,结果显示5个化合物对乙酰胆碱酯酶具有微弱的抑制活性,4个显示出中等抑制活性;对胰脂肪酶显示微弱、中等以及强抑制活性的化合物分别有1个。化合物32对PC-3细胞IC50值为2.32±1.14μM,对乙酰胆碱酯酶抑制活性IC50为31.65±0.28μM。
关键词: 南海海洋 ；真菌 ；次级代谢产物 ；生物活性
摘要： 海绵是一类多孔滤食性动物,其生物量只占海洋动物总数的1/15,但是目前世界上有多于1/3的海洋天然产物来源于海绵。海绵能够过滤70%以上的微生物,因而海绵体表与体内驻留大量的微生物,海绵与众多微生物形成了复杂的共附生防御体系,早在几亿年前海绵与其共附生微生物经过共同进化产生了具有生物活性的化合物,构建了复杂的化学防御体系。这些共附生的微生物涵盖了细菌、微藻、古生菌、蓝细菌和真菌等,相较于其它的海洋共附生菌,海洋真菌具有更复杂的基因组,所以具有合成更丰富的次级代谢产物的能力。由于海绵及海绵来源的真菌能够产生结构新颖和具有丰富生物活性的化合物,越来越受到海洋领域科学家的关注。为寻找具有潜在药用活性的化合物,林厚文教授课题组一直致力于多种海绵及其微生物的次级代谢产物和生物活性的研究,本论文的研究是在林厚文教授课题组多年研究的基础上做的进一步研究。文章中对一株海绵来源真菌Penicillium chrysogenum和一种南海海绵Mycale fibrexilis的次级代谢产物的化学成分及其生物活性进行了研究。从海绵来源真菌P.chrysogenum和南海海绵M.fibrexilis的次级代谢产物中共分离得到了22个化合物,化合物的结构类型包括二萜类、生物碱类、aplysinopsins类生物碱、聚酮类、甾醇类、脂肪酸类等多种类型,这些化合物中有2个新化合物以及1个自然界首次分离得到的化合物,并对其中的化合物A6进行了生物分子相互作用测试。对分离自中国南海西沙群岛的隋氏蒂壳海绵的共附生真菌P.chrysogenum进行了化学成分研究,运用正相硅胶柱色谱、ODS柱色谱以及高效液相色谱等分离技术,从真菌P.chrysogenum的菌丝体中分离鉴定了13个化合物A1A13。运用ESIMS和现代波谱技术如1D和2D NMR核磁技术并结合文献,确定了化合物A1A13的结构。分别为:Traumatic acid（A1）,conidiogenone（A2）,α-linolenic acid（A3）,linoleic acid（A4）,ergosta-4,6,8（14）,22-tetraen-3-one（A5）,2-(（2E,4E）-hexa-2,4-dienoyl)-5,6-dihydroxy-4,6-dimethylcyclohex-4-ene-1,3-dione（A6）,15β-hydroxyl-（22E,24R）-ergosta-3,5,8,22-tetraen-one（A7）,cyclo-（D-Pro-D-Leu）(A8),N-benzoylL-phenylalanino（A9）,Bis（2-ethyloctyl）phthalate（A10）,（22E,24S）-5α,8α-epidioxy-24-methyl-cholesta-6,9（11）,22-trien-3β-ol（A11）,（22E）-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol（A12）,5α,8α-epidioxy-23-methyl-（22E,24S）-ergosta-6,22-dien-3β-ol（A13）。其中化合物A1是从自然界中首次分离得到的,化合物A7和A12是从Penicillium属内首次分离得到,化合物A5是从真菌P.chrysogenum内首次分离得到。并通过PlexArray?HT生物分子相互作用分析系统检测化合物A6与糖尿病、肿瘤、血脂代谢以及病毒相关蛋白之间有相互作用。对采自中国南海西沙群岛附近海域的海绵M.fibrexilis的二氯甲烷层进行了化学成分的研究,运用正向硅胶柱色谱、ODS柱色谱以及高效液相色谱等分离技术,从海绵M.fibrexilis的二氯甲烷层中分离得到9个化合物B1B9。并采用现代波谱技术如1D NMR、2D NMR、UV、MS、ECD等,确定了化合物B1B9的结构。分别为:ethyl（R）-2-（6-bromo-3-hydroxy-2-oxoindolin-3-yl）acetate（B1）,ethyl（S）-2-（6-bromo-3-hydroxy-2-oxoindolin-3-yl）acetate（B2）,aaptamine（B3）,1H-indole-3-carboxaldehyde（B4）,6-bromo-1H-indole-3-hydroxyacetyl（B5）,Aplysinopsin（B6）,6-bromo-1H-indole-3-carboxylic acid（B7）,（6-Bromo-1H-indol-3-yl）oxoacetamide（B8）,6-bromo-1H-indole-3-carbaldehyde（B9）。其中化合物B1和B2为一对新的外消旋体。本论文运用现代色谱分离技术分别对一株海绵来源真菌P.chrysogenum和一种南海海绵M.fibrexilis进行了化学成分和生物活性的研究,并有了一些新的发现。这些发现不仅扩大了海洋天然化合物的种类,而且也为寻找潜在药物分子模板积累了研究资料。另外本研究中检测了化合物与糖尿病、肿瘤、血脂代谢以及病毒相关蛋白的结合能力,并提供结合动力学数据,为以后评价海洋天然产物的药理活性提供了一个新的方向。同时该研究也表明海洋生物具有多种多样的化学结构和丰富的生物活性,为进一步开发和利用海洋生物奠定了基础。
关键词: 海洋天然产物 ；真菌 ；海绵 ；次级代谢产物 ；生物分子相互作用
被引量
1
摘要： 目的:本文意在对三株南海珊瑚来源真菌Purpureocillium lilacinum SCSIO 41204、Aspergillus flavus SCSIO C3F31和Penicillium reticulisporum SCSIO 75进行大规模静置发酵,对发酵产物进行次生代谢产物的分离纯化和活性筛选等研究,从中寻找具有酶抑制、抗菌、抗炎和抗肿瘤等活性化合物,探索活性化合物的开发应用潜力。方法:本文首先将三株南海珊瑚来源的真菌用培养基进行大规模静置发酵,对发酵产物用等体积乙酸乙酯进行减压提取,然后分别采用硅胶柱层析、中压反相柱层析、薄层色谱以及半制备高效液相色谱等方法对发酵产物进行分离及纯化,得到单体化合物;最后利用核磁共振等波谱学方法并结合已知参考文献数据对本文分离的单体化合物进行结构鉴定,并对所有化合物进行乙酰胆碱酯酶抑制、抗菌、抗炎、抗肿瘤等活性筛选。结果:从来源于中国南海西沙群岛珊瑚共附生真菌Purpureocillium lilacinum SCSIO 41204的次级代谢产物中分离得到7个化合物:吩嗪-1-羧酸（A1）、（E）-12-hydroxyoctadec-10-enoic acid（A2）、3-苄基-6-甲基-2,5-哌嗪二酮（A3）、3β,5α,9α-三羟基-（22E,24R）-麦角甾烷-7,22-二烯-6-酮（A4）、AGE-1（A5）、AGE-2（A6）、volemolide（A7）;从来源于中国海南三亚珊瑚共附生真菌Aspergillus flavus SCSIO C3F31的次级代谢产物中分离得到30个化合物:（17S）-17-methylincisterol（B1）、dankasterones A（B2）、phomapyrone B（B3）、sydowione A（B4）、sydowione B（B5）、speradines G（B6）、methyl protocatechuate（B7）、原儿茶酸（B8）、对羟基苯甲醛（B9）、曲酸（B10）、4-met-hoxybenzeneace-tic acid（B11）、phomaligol A1（B12）、speradine H（B13）(1R,5S)-4,5-dihydroxy-1,3,5-trimethyl-2,6-dioxocyclo-hex-3-en-1-yl（S）-2-methylbutano-ate（B14）、phomapyrone C（B15）、speradine D（B16）、averufin（B17）、averufanin（B18）、penicillivinacine（B19）、1'-hydroxy versicolorin B（B21）、nidurufin（B21）、2-acetamidobenzoic acid（B22）、dibutyl Phalate（B23）、phomaligol I（B24）、phomaligadiones B（B25）、phomaligol A（B26）、油酸（B27）、7,9-dihy-droxy-3-（1H-indol-3-ylmethyl）-8-methoxy-2,3,11,11a-tetrahydro-6H-pyra-zino[1,2-b]isoquino-line-1,4-dione（B28）、speradines B（B29）、cyclopiamide H（B30）,包括肽类（4个）、聚酮类（9个）、蒽醌类（4个）、吲哚生物碱类（4个）和其他类;从来源于中国南海西沙群岛珊瑚共附生真菌Penicillium reticulisporum SCSIO 75的次级代谢产物中分离得到5个化合物,包括对羟基苯甲醇（C1）、（4-ethylphenyl）me-thanol（C2）、（4-methoxyphenyl）methanol（C3）、2-methylbenzene-1,3-diol（C4）、4-（4-Hydroxyphenoxy）-benze-neethanol（C5）。对分离得到的化合物进行了多种活性筛选,其中化合物B2显示对两种前列腺癌细胞显著的抑制活性,对人正常前列腺基质永生化细胞（WPMY-1）的IC50值为6.416μΜ时,对前列腺癌细胞PC-3的IC50值为（5.098±1.26）μΜ,对前列腺癌细胞22Rv1的IC50值为（3.411±1.88）μΜ;采用脂多糖（LPS）刺激RAW264.7细胞构建体外细胞炎症反应模型,以NF-B释放量为活性指标评价,进行抗炎活性作用筛选,化合物B2在20μM下有抗炎活性。在乙酰胆碱酯酶抑制活性实验中,化合物B6、B12、B13和B17对乙酰胆碱酯酶表现出强抑制活性,抑制率分别为81.7%、84.0%、83.9%、80.2%;化合物B4、B10、B11、B18、B19、B20、B21、B24、B25、B26、B27表现出中等抑制活性,抑制率分别为:76.9%、64.5%、71.9%、76.6%、72.4%、68.0%、55.8%、74.0%、72.0%、67.4%和61.4%。结论:本文通过对三株南海海域来源的真菌Purpureocillium lilacinum SCSIO 41204、Aspergillus flavus SCSIO C3F31和Penicillium reticulisporum SCSIO 75的次级代谢产物的研究,共分离得到42个单体化合物,并对所有化合物进行活性测试,1个化合物显示出较好的抗炎和抗肿瘤活性,17个化合物显示出较好的抗乙酰胆碱酯酶活性。其中,化合物B2展示出较强的抗炎和前列腺癌抑制作用,是潜在的抗炎、抗前列腺癌药物先导化合物;化合物B6、B12、B13和B17对乙酰胆碱酯酶表现出强抑制作用,是治疗阿尔兹海默症的潜在药物。本文对三株南海海域来源真菌的次级代谢产物的研究,进一步证实南海海域具有丰富的资源,蕴藏着丰富的结构独特、活性新颖的天然产物,是未来临床药物的重要来源,同时进一步丰富了海洋天然产物,为海洋新药的开发提供了一定的参考。
关键词: 南海 ；珊瑚共附生真菌 ；次级代谢产物 ；结构鉴定 ；生理活性
摘要： 红树林是地处热带和亚热带地区的独特潮间带生态系统,为水生以及陆生生物提供了大量的栖息地,具有巨大的生态价值。世界上有将近60-70%的热带与亚热带海岸线被红树林所覆盖。周期性的潮汐、低纬度地区强烈的紫外线照射、河口海岸线的淤泥质土壤等特殊生境的影响,使得红树林生态系统的盐度、温度、营养盐等各类环境因子不断发生变化,从而使得生态系统中的微生物群落为了适应特殊的环境产生了独特的代谢产物。这些代谢产物通常结构较为新颖,抗菌活性较为显著,是新药先导化合物的重要来源。因此,红树林来源微生物的次级代谢产物的研究对新药先导化合物的筛选具有重要的意义。本研究从采自中国南海红树林的海桑根际土壤样品中分离出28株真菌菌株,在人类致病菌(MRSA)活性模型和抗农业致病真菌活性模型的指导下,筛选得到2株抗菌活性较好的真菌为研究对象,分别为微紫青霉Penicillium janthinellum HK1-6和爪哇青霉Penicillium javanicum HK1-23,进而进行抗菌活性次级代谢产物研究。采用硅胶层析柱、凝胶层析柱与半制备型高效液相色谱相结合的分离手段,利用MS、NMR、CD、UV等多种现代波谱学技术,从两株真菌中分离鉴定了 8个化合物,其中新化合物4个,并结合化学反应方法获得2个新衍生物,共涉及3种类型化合物,分别为嗜氮酮类化合物(6个)、丁烯酸内酯类化合物(3个)以及大环内酯类化合物(1个)。为了激活真菌的沉默基因簇,刺激其产生新的代谢产物,本文还尝试采用了氨基酸添加实验和微生物共培养策略对青霉真菌P.janthinellum HK1-6进行代谢调控,使得该真菌的次级代谢产物发生了改变。采用MIC法、滤纸片法和带毒培养基法,对获得的化合物进行了抗细菌和抗真菌活性评价。结果表明,嗜氮酮类化合物2-4对2株耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus 43300,S.aureus ATCC 33591)显示出较强的活性,其MIC值范围为3.13-5.25μg·mL-1,而阳性对照药万古霉素的MIC值范围为0.39-0.78μg·mL-1。青霉酸(7)具有较为显著的抑菌活性,当其浓度为10μg·mL-1和25μg·mL-1时,对金黄色葡萄球菌S.aureus ATCC 25923 的抑菌圈分别为 28 mm 和 23 mm,对S.aureus&ATCC 43300的抑菌圈分别为15 mm和11 mm),而万古霉素为2μgμmL-1时的抑菌圈为10 mm。同时,青霉酸penicillic acid(7)以及大环内酯类化合物brefldin A(10)对水稻纹枯病菌(Rhizoctoni asoni)以及小麦纹枯病菌(R.cereali)具有较为明显的抑制活性。化合物7和10对水稻纹枯病菌生长抑制的EC50值分别为151.9μg·mL-1和14.5μg·mL-1,阳性药多菌灵的EC50值为1.71μg·mL-1。化合物7和10对小麦纹枯病菌生长抑制的EC50值分别为44.83μg·mL-1和24.06μg·mL-1和阳性药多菌灵的EC50值为2.05μg·mL-1。这些抗菌活性化合物活性较为显著,且产量较高,值得进一步研究。本研究在针对人类致病细菌以及农业致病真菌的抗菌活性模型指导下,从南海海桑根际土壤来源的一株活性真菌中,追踪分离到具有显著抗菌活性的天然产物,为抗菌药物先导化合物以及农用杀菌剂的研究提供了化合物基础。
关键词: 红树根际土壤真菌 ；嗜氮酮 ；抗菌活性 ；MRSA ；水稻纹枯病菌
被引量
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摘要： 海洋是人类重要的战略资源宝库，全球80％的生物资源量蕴藏在海洋，是迄今所知最大的生命栖息地。从海洋表层到深海沉积物，在每个海洋栖息地中几乎都发现了真菌的“身影”。截止目前，海洋真菌共发现693属1680种，存在于各种各样的海洋生境中。海洋来源真菌次级代谢产物具有独特的结构特征和显著的生物活性，已成为许多特殊药理活性成分的新来源。 基于国内外珊瑚来源和海洋沉积环境来源新天然产物研究现状和本课题组海洋微生物化学和活性方面研究的积累，本论文利用薄层层析色谱(TLC)、柱层析色谱(CC)、葡聚糖凝胶层析色谱(Sephadex LH-20)和高效液相色谱(HPLC)等现代分离技术，结合核磁共振(NMR)、质谱(MS)、紫外(UV)、红外(IR)等波谱学手段，并通过X-ray单晶衍射以及ECD量子化学计算等表征方法，对三株海洋来源真菌(Aspergillus hiratsukae SCSIO7S2001、Acrostalagmus luteoalbus SCSIO F457、Penicillium sp.SCSIO FZQ014)进行化学多样性和生物活性的初步研究。 本文使用大米培养基，对一株中国南海柳珊瑚来源曲霉属真菌Aspergillus hiratsukae SCSIO7S2001进行了次级代谢产物化学多样性和活性研究。目前已分离得到14个化合物，其中包括6个新的α-吡喃酮混源萜类化合物Chevalone G-L(1-6)，1个新的环肽类(7)，1个新天然产物苯乙酸类衍生物(12)，以及6个已知化合物(8-11、13-14)。对部分化合物(1-5、8、14)进行抗菌活性筛选，结果显示，化合物1-5、8对四种病原菌(ML、KP、MRSA、SF)表现出不同程度的抗菌活性，MIC值为6.25-100μg·mL-1。抗肿瘤活性测试显示化合物3、4对四种肿瘤细胞SF-268、MCF-7、HepG-2和A549均呈现出一定的抑制活性。化合物3的IC50值为54.78-58.54μM;化合物4的IC50值分别为65.64-107.31μM。化合物9对三种肿瘤细胞SF-268、MCF-7和A549均呈现显著的抑制活性，其IC50值分别为12.75、9.29、20.11μM。阳性对照均为阿霉素，其对四种肿瘤细胞抑制活性的IC50值分别为1.94、2.00、2.16、2.16μM。 采用单菌多次级代谢产物(OSMAC)策略对一株采自南海深海2801m沉积环境的白黄笋顶孢霉属真菌Acrostalagmus luteoalbus SCSIO F457进行化学多样性的初步研究。通过在不同培养基、不同pH与不同盐度条件下对菌株SCSIOF457进行培养调控并筛选改良的MYA培养基进行规模发酵，从中分离鉴定8个单体化合物，包括cyclo(L-Phe-L-Pro)(15)、cyclo(L-Tyr-L-Pro)(16)、cyclo(L-Val-L-Pro)(17)、cyclo(D-Ile-L-Pro)(18)、cyclo(D-Leu-L-Pro)(19)、1-methyoxy-4-(2-hydroxy)ethylbenzene(20)、2-(4-hydroxyphenyl)-ethanol(21)及3-methoxy-2-methyl-4H-pyran-4-one(22)，其中化合物22为首次从海洋真菌中分离得到。化合物20表现出较弱的DPPH自由基清除活性。 此外，通过在真菌2号培养基培养条件下对一株海洋沉积环境来源真菌Penicillium sp.SCSIO FZQ014进行小规模发酵，从中分离鉴定得到2个单体化合物:1个环醚类化合物(23)和1个蒽醌类化合物(24)。 综上，本论文对三株海洋来源活性真菌的次级代谢产物进行了研究，从中共分离鉴定24个化合物，包括7个新化合物，和1个新天然产物。抗肿瘤活性筛选发现1个具有较强抗肿瘤活性的化合物9，2个具有一定程度抗肿瘤活性的化合物3、4;抗菌活性筛选发现化合物1-5、8对四种病原菌呈现不同程度的抗菌活性，研究拓展了海洋真菌天然产物的化学多样性，为海洋真菌资源的可持续利用和海洋药物的研发提供了物质基础。
关键词: 海洋真菌 ；次级代谢产物 ；化学多样性 ；生物活性
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摘要： 近30年来,柳珊瑚、软珊瑚已成为海洋天然产物化学研究的热点资源领域,从中发现了大量的活性次级代谢产物,并发现了多个药物先导化合物。珊瑚体内和表面存在着大量的微生物,近年来从珊瑚来源微生物的发酵产物中分离获得了越来越多的具有抗菌活性、细胞毒活性及抗病毒活性的次级代谢产物,使得珊瑚来源微生物次级代谢产物的研究受到极大关注,已成为海洋天然产物化学研究的新热点。本研究对两株中国南海柳珊瑚来源真菌的次级代谢产物进行了分离鉴定,获得了抗病毒、细胞毒等活性化合物。运用化学筛选和活性筛选的方法,从本实验室柳珊瑚来源真菌库中筛选活性菌株；运用大米固体培养基对两株活性菌株：柳珊瑚来源枝孢属真菌Cladosporium sp (RA07-1)和黑曲霉Aspergillus niger (TA01-24)进行培养；对发酵产物综合运用各种色谱分离技术(正反相硅胶柱层析,凝胶柱层析以及半制备高效液相色谱等)分离纯化单体化合物；综合运用现代波谱分析技术(核磁共振,质谱,红外光谱,紫外光谱,圆二色谱等)对所获得的单体化合物进行了结构解析。采用抗菌、肿瘤细胞抑制、抗病毒及卤虫致死活性模型测试化合物的生物活性。从Cladosporium sp(RA07-1)发酵产物中分离鉴定了8个单体化合物(1-8),包括双环内酰胺类化合物1个(1)、大环内酯类化合物6个(2-7)及五元内酯化合物1个(8)。化合物1是一个结构非常特殊的二环内酰胺类化合物,结构确定时运用了NMR化学定量计算法验证了其平面结构,用实测的旋光值与其计算的旋光值进行比较确定了化合物1 C-8的绝对构型为8S化合物2的绝对构型的确定是通过改良的Mosher方法得到确定的其绝对构型为4R、5R、11R。从A. niger (TA01-24)发酵产物中分离鉴定了14个单体化合物(9-22),包括萘并吡喃酮类化合物7个(9一15)、香豆素二聚体化合物3个(16-18)、环肽等其他化合物4个(19-22)。化合物9-15为萘并吡喃酮类化合物,是真菌Aspergillus niger主要的次级代谢产物。其中化合物9、10为萘并吡喃酮类化合物的单体,11一15为二聚体,由萘并吡喃酮类化合物单体9、10以小同形式聚合而成。萘并吡喃酮二聚体虽然没有手性碳,但是由于其结构中存在一个手性轴,使得每个化合物都有两种可能的构型(R和S)。通过圆二色谱(CD)测试并与文献报道的该类化合物CD曲线相比较,确定了5个萘并吡喃酮二聚体手性轴的绝对构型均为S构型。运用卤虫致死活性、细胞毒活性、抗病毒活性及抗菌活性模型,对从柳珊瑚来源真菌Cladosporium sp (RA07-1)和Aspergillus niger (TA01-24)分离得到的22个化合物(1-22)进行了生物活性测试。抗菌活性结果显示化合物4和5对四联球细菌T. halophilus显示出了较强的活性,其最小抑制浓度MIC值均为3.13,μM。抗病毒活性结果显示,化合物9、10和12对手足口病病毒(EV71)有显著的抑制活性,IC50分别为43.9μuM、10.3μM和54.7,μM,活性明显高于阳性对照药(阳性药利巴韦林对EV71的IC50为256μM),化合物17、21对单纯疱疹病毒(HSV)有选择性抑制作用,IC50分别为42.3,μM和117.5,μM(阳性药利巴韦林对HSV的IC50为128μM)。细胞毒活性测试结果发现,化合物1对HeLa、P388、 HT-29、A549肿瘤细胞株均有较强的细胞毒活性IC50分别为,0.76μM、1.35μM 2.48μM、3.11μM,化合物19对所测肿瘤细胞株均有很强的细胞毒性,对HeLa、Hep-2、RD、A549和Vero的IC50分别为2.30μM、0.88μM、0.034μM、0.83μM和3.08μM,比阳性药阿霉素活性好很多(0.43μM、0.36μM、0.99μM、14.29μM、 2.03μM)。本研究从柳珊瑚来源枝孢属真菌及黑曲霉中获得二环内酰胺类、大环内酯类、萘并吡喃酮二聚体、香豆素二聚体等结构类型的化合物,测定了化合物的抗病毒和细胞毒活性,为相关活性海洋天然产物的开发应用提供了基础和数据资料。
关键词: 柳珊瑚来源真菌 ；枝孢属的真菌Cladosporium sp ；黑曲霉Aspergillusniger ；内酰胺 ；大环内脂 ；萘并吡喃酮 ；香豆素 ；抗病毒活性 ；细胞毒活性
摘要： 迄今为止,人们从自然界中发现的微生物种类在微生物总数中仅占到了5%左右,其中海洋及其他极端环境由于开采等困难,其微生物资源至今尚未得到充分的开发利用。此外,由于海洋、极端环境的特殊性,在该环境生存的微生物具有独特的与普通陆地微生物不同的代谢方式,从而能产生一些结构新颖、活性特异的次级代谢产物,这些新颖的次生代谢产物亦为天然产物研究及药物开发提供了前体。本文根据课题组早期关于中国南海来源的20株深海真菌活性实验筛选结果,选定了其中具有一定抗Aβ聚集活性的菌株W-20作为研究对象,对其进行了ITS r DNA序列分析及次生代谢产物的研究,确定其为Aspergillus sp.真菌。对Aspergillus sp.SCSIOW20进行了固体和液体发酵培养,通过正反相硅胶、Sephadex LH-20、HPLC等多种方法对其发酵液的乙酸乙酯萃取层进行分离纯化,得到6个化合物,经波谱数据分析分别鉴定为:diorcinol(1)、sydowic acid(2)、monodictyphenone(3)、麦角甾醇(4)、syodonic acid(5)、C15/C15’-epi-WIN 64821(6),其中化合物6为首次从天然界分离得到。利用Th T荧光模型测定各化合物抗Aβ多肽聚集活性,发现化合物6显示出与阳性对照EGCG相等程度的Aβ多肽聚集抑制活性(相对抑制率42.9士5.9%)。这是首次报导二酮哌嗪类化合物具有Aβ多肽聚集抑制活性。为进一步增加次生代谢产物的多样性,运用组蛋白去乙酰化酶抑制剂-辛二酸双异羟肟酸盐(suberic bishydroxamate,SBHA)诱导W-20,使之产生了化合物sydonol(7)。另外,对嗜热真菌进行了添加化学表观修饰剂的筛选中发现,嗜热毁丝霉Myceliophthora thermophila(ATCC 42464)在添加5-氮胞苷(5-azacytidine,5-AC)培养后,发酵液正丁醇萃取层及菌丝体丙酮萃取层的次生代谢产物较原始菌株发生了明显变化,而且不同浓度的修饰剂具有不同诱导效果。
关键词: 真菌 ；次生代谢产物 ；抗Aβ聚集 ；嗜热真菌 ；表观遗传修
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摘要： 海洋无脊椎动物珊瑚和海绵以及微生物是海洋天然产物三大主要来源。特别是近年来的研究热点之一珊瑚，由于缺乏有效的物理防御手段，激烈的生存竞争使其能够产生具有防御作用的化学物质，这些化学防御物质也可能是珊瑚的药理活性次级代谢产物。但是研究却发现，许多以前被认为是无脊椎动物如珊瑚本身产生的活性物质，真正生产者是与其共附生的微生物。文献调研发现，已报道的珊瑚来源的真菌次级代谢产物共有一百多个，包括新化合物和首次来源于珊瑚共附生真菌的化合物，主要类型有萜类，生物碱类，醌类，大环内酯类，苯衍生物等，这些化合物表现出抗菌、细胞毒、防附着等活性。本论文对一株来自于中国南海柳珊瑚的共附生真菌次级代谢产物，主要是生物碱类化合物，及其生物活性进行研究。
对2010年采自广西涠洲岛的柳珊瑚Carijoa sp.(GX-WZ-2010001)分离出的真菌进行抑菌活性初筛，其中一株真菌Scopulariopsis sp.的乙酸乙酯粗浸膏具有明显的抗菌活性。文献关于Scopulariopsis sp.次级代谢产物报道很少，柳珊瑚来源的Scopulariopsis sp.次级代谢产物尚未见报道，所以选择该菌进行大规模发酵和次级代谢产物研究。利用正、反相硅胶柱层析、凝胶柱层析、半制备高效液相色谱(prep-HPLC)等分离手段分离得到化合物16个，根据1D和2D核磁共振、质谱、红外光谱、紫外光谱、圆二色谱(CD)、X-单晶衍射等波谱学和光谱学方法鉴定结构11个(1–11)，分别为fumiquinazoline L (1), scopuquinolonesA–D (2–4,7), aflaquinolones A (5), D (6), F (8), G (9), cyclopenin (10), sterigmatocystin (11)，其中1–4和7为新化合物。这些化合物均首次从该属真菌中分离得到。
化合物1为少见的七环喹唑啉类生物碱，命名为fumiquinazoline L。其结构通过1D/2D NMR和NOE谱确定，绝对构型通过X-单晶衍射确定，并且对其在酸性条件下缬氨酸侧链的消旋进行了研究。通过文献调研，对两个同类物fumiquinazolines (FQs) C和H的C-3, C-14, C-17手性碳的绝对构型进行探讨，纠正了FQ H的绝对构型。对喹唑啉类生物碱化合物1以邻氨基苯甲酸、L-色氨酸、L-丙氨酸为原料的生源合成途径进行了推测。化合物2–9为一系列二氢喹啉酮类生物碱，结构通过核磁数据和CD谱确定，化合物2,5,7的结构通过X-单晶衍射确认。对喹啉酮类化合物2–10从邻氨基苯甲酸、蛋氨酸、苯丙氨酸为原料的生源合成途径进行了推测。
化合物1、4和5对肺癌细胞A549具有弱的生长抑制活性，IC50分别为18.4、29.6和30.0μM。化合物4和7具有显著的抗菌活性，其中化合物4对Vibrioparahemolyticus和Vibrio anguillarum的MIC值均为1.56μM，与阳性对照环丙沙星活性相当或更强，具有选择性的强抗菌活性。化合物7对Staphylococcusaureus, Bacillus cereus, Vibrio parahemolyticus, Vibrio parahemolyticus,Pseudomonas putida的MIC值分别为0.78,1.56,6.25,0.78和1.56μM,具有强抑菌活性。化合物1,6,7,8和11的卤虫致死活性都很强，LC50分别为2.22,1.16,0.79,7.85和0.56μM。对化合物7–9的抑菌活性进行构效关系分析，表明C-3的甲氧基对抑菌活性贡献明显，且C-3和C-4位两个手性碳的绝对构型对活性没有明显影响。
本文研究了一株南海柳珊瑚共附生真菌次级代谢产物，对生物碱类化合物的生源合成途径进行了探讨，对这些化合物进行了抑菌活性、细胞毒活性和卤虫致死活性评价，并对部分化合物的抑菌活性构效关系进行了分析，为活性海洋天然产物研究提供了物质基础。
关键词: 柳珊瑚 ；海洋真菌 ；Scopulariopsis sp. ；次级代谢产物 ；生物碱 ；生物活性
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