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摘要： 以华中五味子藤茎为材料,采用硅胶柱层析、MCI树脂柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析等方法,分离鉴定所得化合物的结构,采用ABTS方法评价其抗氧化活性,以全面了解华中五味子的化学成分,明确其藤茎中药效成分及活性作用。结果表明:1)从藤茎乙酸乙酯萃取部位中分离得到7个化合物,分别鉴定为胡萝卜苷(1)、pinobatol(2)、Matairesinol 4′-O-glucoside(3)、(-)-secoisolariciresinol-O-a-L-rhamnopyranoside(4)、(-)-secoisolariciresinol 9-O-α-L-arabinopyranoside(5)、(-)-儿茶素(6)和异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(7);2)化合物2~5为首次从该属植物中分离得到;3)化合物2~7清除ABTS自由基IC 50值分别为14.43、13.45、7.39、3.84、1.88、14.11μg·mL-1;化合物4~6抗氧化活性与阳性对照品相当。
关键词: 华中五味子 ；化学成分 ；抗氧化活性 ；ABTS自由基
被引量
15
摘要： 目的:研究木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.干燥茎叶的化学成分及其抗炎、抗氧化活性。方法:利用硅胶柱色谱、MCI、ODS柱色谱及半制备型HPLC等方法对五味子茎叶的醇提物进行分离纯化,并根据理化性质及核磁共振波谱数据鉴定化合物的结构。结果:从五味子干燥茎叶中分离得到9个化合物,分别鉴定为:schimonoterpene A(1)、4-(1,2-dihydroxy-isopropyl)cyclohexene carboxylic acid(2)、1β,6α-dihydroxyeudesm-4(15)-ene(3)、(7″S,8″R)-4″,5,5′-trihydroxy-3,3′,3′,4-tetramethoxy-4′,8′-oxy-8,8′-sesquineolignan-7′-ol(4)、chushizisin E(5)、2-phenylethyl-β-D-glucopyranoside(6)、trans-cinnamic acid(7)、4H-1-benzopyran-4-one, 3-(acetyloxy)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy(8)、3-羧基吲哚(9)。结论:化合物1为新的单萜类化合物。对上述9个化合物进行抗炎、抗氧化活性初筛,发现化合物4和8对LPS诱导的RAW264.7细胞释放炎症因子NO的抑制作用,其IC50分别为28.97、41.68μmol/L;化合物4和8对ABTS阳离子自由基具有较强的清除作用,其IC50分别为34.21、2.61μmol/L。
关键词: 五味子 ；化学成分 ；抗炎 ；抗氧化
被引量
3
摘要： 目的 对药食同源植物华中五味子Schisandra sphenanthera根部的化学成分进行研究。方法 利用薄层色谱、柱色谱、半制备高效液相色谱等现代色谱方法分离纯化,根据理化性质及波谱数据对化合物进行结构鉴定;利用ABTS+自由基清除的活性筛选技术对化合物进行抗氧化活性评价。结果 从华中五味子根部70%丙酮水提取物中分离鉴定了23个木脂素类化合物,分别鉴定为(-)-zuoninA (1)、 erythro-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-4-(3,4-methylenedioxyphenyl)-2,3-dimethylbutane(2)、奥斯楚拜脂素-5(3)、9,9′-二羟基-澳白木脂素-5(4)、(-)-8-羟基-α-铁杉脂素(5)、(-)-戈米辛M1(6)、五味子乙素(7)、五味子丙素(8)、戈米辛J(9)、(+)-戈米辛k3(10)、五味子甲素(11)、五味子醇甲(12)、rubrisandrin B(13)、marlignan A(14)、rubrisandrin A(15)、滨南五味子乙素(16)、异戈米辛O(17)、marphenol A(18)、(7′R,8′S)-3,4-dimethoxy-3′,4′-methylenedioxy-7,8-seco-7,7′-epoxylignan-7,8-dione(19)、(7′R,8′S)-3,4-methylenedioxy-3′,4′-dimethoxy-7,8-seco-7,7′-epoxylignan-7,8-dione(20)、machilolin-A(21)、marphenol B(22)、3′,4′-dimethoxy-benzoicacid-(3′′,4′′-dimethoxyphenyl)-3-oxobutyl ester(23)。结论 化合物6、7、18~20、22为首次从该植物中分离得到,化合物1~5、16、17为首次从五味子属植物中分离得到。化合物2~4、13显示了一定的抗氧化能力,半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)值分别为23.0、16.5、10.8、16.0μmol/L,其中化合物4的抗氧化活性较好,接近阳性对照维生素C。
关键词: 华中五味子 ；二芳基丁烷类木脂素 ；联苯环辛烯类木脂素 ；7 ；8-seco-木脂素 ；抗氧化活性 ；奥斯楚拜脂素-5 ；(-)-8-羟基-α-铁杉脂素
被引量
16
摘要： 五味子(Schisandra chinensis)为木兰科植物五味子的干燥成熟果实。近年来,国内外学者对五味子各个部位的活性成分及药理作用进行了大量的研究,表明五味子具有药用和食用的双重功能,被广泛用作保健品和药品。该文对五味子的活性成分及药理作用进行系统地整理,发现五味子果实、种子、根、藤茎、叶等药用部位主要包含木脂素类、挥发油类、三萜类、多糖类及黄酮类化合物,其中木脂素类为五味子中的主要特征性活性成分,三萜类、多糖类及挥发油的活性次之,黄酮类化合物活性鲜有报道。通过对五味子药理学研究发现,五味子木脂素类成分对中枢神经系统、心血管系统、肝脏、肾脏和生殖系统均有一定的影响,且还具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、抗人类免疫缺陷病毒(HIV)的作用。其他化学成分也均具有较好的药理活性,但相比木脂素类,研究深度仍有待挖掘。该研究为开发利用五味子,同时为今后深入开展五味子的药品和保健品提供了重要的参考和基础。
关键词: 五味子 ；活性成分 ；药理作用
被引量
203
摘要： 五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(习称"北五味子")或华中五味子S.shenanthera(习称"南五味子")的成熟果实。五味子中含有木脂素类、挥发油类、多糖类和有机酸类等多种化学成分,其中木脂素类化合物是其特征性活性成分。临床研究发现五味子及其制品对病毒性肝炎、药物性肝损伤、肝硬化、肝衰竭等多种肝脏疾病具有较好的防治作用。现代药理学研究表明五味子具有抗炎、抗氧化、抗癌、调控核受体、抗病毒、调节细胞色素P450酶、抑制肝细胞凋亡、促进肝再生等多种药理活性。该文对五味子在肝脏疾病防治中的应用及其作用机制进行了系统综述,以期为五味子相关保肝药物的开发及五味子制品的临床合理应用提供指导。
关键词: 五味子 ；木脂素类 ；保肝作用 ；临床应用 ；作用机制
被引量
43
摘要： 中泰南五味子(KadsuraananosmaKerr)为五味子科(Schisandraceae)南五味子属(KadsuraKaempf.exJuss.)攀缘植物[1]14,其根、藤茎、果实是珍贵的傣药,具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的作用。对中泰南五味子化学成分的研究结果表明:中泰南五味子体内含有较多的木脂素类和三萜类成分,其中20多个成分为其特有成分,这些成分具有抗氧化、抗HIV病毒等药理活性[2-5]。中泰南五味子果实具有果大、肉多、酸甜可口等特点,还可作为野生水果食用,但目前对中泰南五味子果实的相关研究尚未见报道;相关志书[1]15,[6]234对其果实的基本描述也不完整,甚至空缺。为此,作者对野生中泰南五味子果实的形态特征进行观察,并对其营养成分进行分析,以期完善中泰南五味子果实的基础研究数据,为其深入开发和利用提供依据。
关键词: 中泰南五味子 ；果实 ；形态 ；营养成分
被引量
10
摘要： 目的研究黑老虎Kadsuracoccinea的化学成分及其体外抗氧化活性。方法利用硅胶柱色谱等方法分离纯化，结合理化性质以及光谱数据鉴定化合物结构，DPPH法检测体外清除自由基能力。结果从黑老虎95％乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位分离得到14个化合物，分别鉴定为micrandilactoneC（1）、3，4-二甲氧基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（2）、红景天苷（3）、南五味子木脂素N（4）、原儿茶酸（5）、莽草酸乙酯（6）、莽草酸（7）、5-O-β-D-吡喃葡萄糖基龙胆酸（8）、丁香酸（9）、邻苯二甲酸二正丁基酯（10）、苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（11）、4-O-β-D-吡喃葡萄糖基香草酸（12）、丁香醛（13）和莽草酸甲酯（14）。化合物5、6和14具有一定的抗氧化作用。结论化合物2、3、6、8-14为首次从该植物中分离得到；化合物5、6和14在天然抗氧化剂研发中具有一定的开发前景。
关键词: 黑老虎 ；原儿茶酸 ；莽草酸甲酯 ；莽草酸乙酯 ；抗氧化
被引量
71
摘要： 目的建立基于Nrf2-ARE通路的报告基因筛选模型,筛选抗辐射复方四物汤加味方中的活性成分。方法将抗氧化反应元件插入萤火虫荧光素酶载体pGL4.26,构建重组质粒pGL4-ARE,与海肾荧光素酶载体pRL-TK共同转染HEK-293细胞,检测四物汤加味方中刺五加皂苷E、金丝桃苷、五味子乙素等12个主要的化学成分对Nrf2-ARE通路的激活作用。结果在四物汤加味方中,白藜芦醇(50μmol.L-1以上)和金丝桃苷(100μmol.L-1以上)的抗氧化活性最强,与空白对照组比较差异有显著性(P<0.01);红景天苷也有较好的效果,500μmol.L-1以上可提高诱导表达倍数(P<0.01)。结论白藜芦醇、金丝桃苷、红景天苷是四物汤加味方中的主要抗氧化活性成分。
关键词: 抗氧化反应元件 ；报告基因 ；白藜芦醇 ；金丝桃苷 ；红景天苷 ；抗辐射
被引量
14
摘要： 本文为五味子藤茎有效成分的提取纯化工艺条件优选,对其抗氧化活性及抗UVB照射人皮肤角质细胞(HaCat)损伤细胞的作用进行研究,本研究以清除DPPH自由基能力、羟自由基能力、总抗氧化能力以及HaCat细胞增殖情况为测定指标,优选五味子藤茎最佳提取溶媒及提取纯化工艺条件。结果表明,五味子藤茎以水为溶剂进行提取,在生产成本及抗氧化活性上具有较好的优势;水提取工艺条件通过单因素考察及正交试验,确定在料液比为1:25、提取温度100℃、提取时间60 min和提取3次的条件下,五味子藤茎提取率最高;在纯化工艺条件筛选中,50%乙醇洗脱的五味子藤茎提取物对UVB照射HaCat细胞形成的氧化损伤有明显的保护作用。五味子藤茎水提物经过纯化具有较好的抗氧化活性,并对UVB照射HaCat细胞具有保护作用。
关键词: 五味子藤茎 ；提取工艺 ；纯化 ；抗氧化 ；HaCat ；UVB
被引量
6
摘要： 五味子为木兰科五味子属植物,其成熟果实称北五味子,是东北道地药材。五味子藤茎资源较为丰富,因无本草著作记载其药用价值,一直作为“非药用部位”而废弃。近年来,国内外学者研究发现,五味子藤茎含有木脂素、挥发油、萜类、多糖及黄酮类化合物,具有抗氧化、抑菌、保护肝脏等多方面药理作用。本文以“五味子藤茎”、“化学成分”、“保肝”、“药理”等为关键词,在中国知网、万方数据库等平台组合查询2000~2021年发表的相关文献,归纳了五味子藤茎化学成分及其保肝作用的研究进展,并对其开发前景进行了展望,以期为五味子藤茎及其活性成分开发为具有保肝作用的新药提供参考。
关键词: 五味子藤茎 ；化学成分 ；保肝作用 ；研究进展
被引量
3
摘要： 五味子科Schisandraceae隶属于双子叶植物门木兰亚纲Magnoliidae八角目Illiciales,全球分布约60种,包括两个属:五味子属Schisandra和南五味子属Kadsura,间断分布于亚洲东南部和北美东南部。本文归纳了中国五味子科植物两大类活性成分——木脂素和三萜的分布规律、传统疗效和现代药理活性,并对中国五味子科的药用植物亲缘学进行了初探。联苯环辛烯类木脂素(I)集中分布于五味子科植物,可以被认为是五味子科植物的特征性化学成分,除了传统的保肝作用外,这类化合物中很多具有潜在的抗氧化、抗肿瘤和抗HIV活性,一些联苯环辛烯类的木脂素,尤其是在八元环C-6、C-9位上具有羟基或者酯化取代具有更好的抗HIV和抗肿瘤活性;而螺苯骈呋喃型联苯环辛烯类木脂素(II)绝大多数存在于南五味子属,其特殊的螺苯骈呋喃环及其钙拮抗、抗凝血和抑制血小板聚集的活性,不仅初步说明了民间南五味子属药用植物藤茎具有较强活血化瘀药理作用的活性物质基础,也提示在对南五味子属的药材质量标准研究中,可以考虑以此类成分作为定性定量指标。五味子科植物中木脂素成分的分布规律提示,在演化程度上五味子属植物较南五味子属植物更原始。环菠萝蜜烷类三萜在五味子属和南五味子属均有分布,尤其是A环开环的环菠萝蜜烷类三萜(II)在抗HIV和抗肿瘤活性方面具有很好的潜力,而结构更进化的7/7/5/6型三萜内酯(IV)显示了很强的细胞毒活性,目前只在南五味子属的长梗南五味子K.longipedunculata中发现。从五味子属的小花五味子S.micrantha和狭叶五味子S.lancifolia中分离得到的多个成环复杂且高度氧化的类三萜内酯中也发现具有抗肿瘤和抗HIV潜力。
关键词: 化学分类学 ；传统药物学 ；药用植物亲缘学 ；五味子科
被引量
78
【会议论文】 •
+2位作者
会议名称： 北京环境诱变剂学会第十二届学术交流大会
会议时间： 2012-09-01
摘要： 目的：建立基于Nrf2-ARE通路的报告基因筛选模型,筛选抗辐射复方四物汤加味方中的活性成分.
方法：将抗氧化反应元件插入萤火虫荧光素酶载体pGL4.26,构建重组质粒pGL4-ARE,与海肾荧光素酶载体pRL-TK共同转染HEK-293细胞,检测四物汤加味方中刺五加皂苷E、金丝桃苷、五味子乙素等12个主要的化学成分对Nrf2-ARE通路的激活作用。
结果：在四物汤加味方中,白藜芦醇(50μmol.L-1以上)和金丝桃苷(100μmol·L-1以上)的抗氧化活性最强,与空白对照组比较有显著差异(P＜0.01);红景天苷也有较好的效果,500μmol·L-1以上可显著提高诱导表达倍数(P＜0.01).
结论：白藜芦醇、金丝桃苷、红景天苷是四物汤加味方中的主要抗氧化活性成分.
方法：将抗氧化反应元件插入萤火虫荧光素酶载体pGL4.26,构建重组质粒pGL4-ARE,与海肾荧光素酶载体pRL-TK共同转染HEK-293细胞,检测四物汤加味方中刺五加皂苷E、金丝桃苷、五味子乙素等12个主要的化学成分对Nrf2-ARE通路的激活作用。
结果：在四物汤加味方中,白藜芦醇(50μmol.L-1以上)和金丝桃苷(100μmol·L-1以上)的抗氧化活性最强,与空白对照组比较有显著差异(P＜0.01);红景天苷也有较好的效果,500μmol·L-1以上可显著提高诱导表达倍数(P＜0.01).
结论：白藜芦醇、金丝桃苷、红景天苷是四物汤加味方中的主要抗氧化活性成分.
关键词: 抗氧化反应元件 ；报告基因 ；白藜芦醇 ；金丝桃苷 ；红景天苷 ；抗辐射活性
【会议论文】 •
会议时间： 2013-10-17
摘要： 五味子属植物分布于美国东南部和亚洲东南部,我国约有19种,生长于陕西、甘肃、山东、河南、江苏、浙江、云南等地;因产地不同,名称有南五味子、北五味子、五味子、云南五味子及川五味子等.五味子属植物的果实是一类民间广泛应用的中草药资源,具有敛肺、滋肾、生津、收汗、涩精等功效,治肺虚喘咳、口干作渴、自汗、盗汗、劳伤羸瘦、梦遗滑精、久泻久痢.五味子大量应用于医药、食品、化妆品等领域,其主要活性成分为木脂素.我国学者已对五味子属植物的果实以及茎叶做了大量研究,发现了一些抗癌、抗菌、抗氧化、抗HIV活性较强的木脂素和高含氧三萜类化合物,但对五味子属植物根部的研究较少.本文对华中五味子根部(the Roots of Schisandra sphenanthera)进行了化学成分研究,分离得到了5个木脂素,并通过现代波谱方法确定了它们的结构.其中化合物1为7,8-位被三元氧环所取代的四氢呋喃类木脂素,首次从华中五味子根部分离得到,同时该类型的木脂素到目前为止仅有4篇文献报道.
关键词: 五味子属 ；华中五味子 ；木脂素
摘要： 为了更好地开发利用五味子藤茎多糖成分,拟对五味子藤茎多糖进行提取分离纯化,通过细胞实验,探索五味子藤茎多糖抗氧化活性的机理,为五味子藤茎多糖对氧化应激相关疾病的治疗药物的开发提供一定的理论支撑。本论文在课题组前期的研究基础上,对五味子藤茎多糖的提取纯化、结构表征、抗热应激活性及潜在作用机制进行研究,主要研究内容及结果如下:
1、五味子藤茎多糖的提取纯化及结构鉴定
本研究采用热水浸提乙醇沉淀法获得五味子藤茎粗多糖（SSP）,通过离子交换层析（DEAE-52）和凝胶层析（Sephadex G-100）纯化得到SSP-Ⅰ,对SSP-Ⅰ的化学成分、分子量、官能团、单糖组成、糖苷键构型和糖苷键连接顺序进行了表征和分析。SSP-Ⅰ中葡萄糖含量为60.59%,具有典型的多糖结构,分子量为882k Da。高效液相色谱（HPLC）分析表明,SSP-Ⅰ是一种由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、N-乙酰-D氨基葡萄糖和甘露糖组成的葡萄糖半乳糖聚糖。核磁共振（NMR）分析表明,SSP-I的主链为{α→1,3-Glc-（1→}→3）-α→1,3-Glc-（1→{→3）-α-1,3-Gal-(1→},其中α→t-Glc-（1→6）等残基位于侧链,并通过Glc与主链连接。电镜扫描（SEM）分析表明,SSP-Ⅰ为无定型结构。
2、五味子藤茎多糖对H2O2致TM3细胞损伤的保护作用
本部分测定了SSP-Ⅰ对ABTS自由基、DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除活性以及铁离子总还原能力,结果显示SSP-Ⅰ在1-10 mg/m L的浓度范围内均具有一定的抗氧化活性,IC50值分别为4.726±0.675 mg/m L,5.582±0.747 mg/m L,4.110±0.614 mg/m L和3.422±0.534 mg/m L。建立H2O2诱导小鼠睾丸间质TM3细胞损伤模型,探究SSP-Ⅰ对H2O2诱导TM3细胞损伤的保护作用。结果表明,H2O2在200μM浓度处理TM3细胞3h后,细胞活力降低到87.55%,SSP-Ⅰ在1～256μg/m L的浓度范围对TM3细胞无明显细胞毒性。与H2O2组相比,SSP-Ⅰ组均可显著减轻H2O2诱导TM3细胞损伤,并且抑制睾酮（TTE）含量降低,热休克蛋白70（HSP70）水平升高。同时,SSP-Ⅰ还能抑制丙二醛（MDA）的水平升高、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽转移酶（GSH）的水平降低。通过活性氧（ROS）染色和线粒体膜电位（JC-1）染色分析可知,SSP-Ⅰ可明显抑制ROS自由基产生和线粒体低电势数量增加,证明了SSP-Ⅰ的保护作用。通过蛋白质免疫印迹法分析可知,SSP-Ⅰ具有抑制H2O2诱导细胞凋亡的作用。
3、五味子藤茎多糖对阴囊热应激致小鼠睾丸损伤的保护作用
建立阴囊热应激（Heat stres,HS）小鼠生精障碍损伤模型,探究SSP-Ⅰ的改善作用。在适应性饲养7天后,分为五组:对照组,HS组,Ⅰ组（HS+SSP-Ⅰ组）,Ⅱ组（HS+SSP-Ⅰ组）,Ⅲ组（HS+SSP-Ⅰ组）,每组8只。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠分别口服50 mg/kg、100 mg/kg和200 mg/kg SSP-Ⅰ（0.9%无菌生理盐水溶解）连续14天。第15天,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠身体的下三分之一,包括阴囊、尾巴和后腿,被浸泡在43℃水浴中18 min后放置在温暖的垫子上,以保持体温至体温恢复。再继续灌胃14天。与HS组相比,SSP-Ⅰ给药可明显抑制HS小鼠血清中TTE含量降低,HSP70水平升高,MDA水平升高及SOD的水平降低。H&E染色也表明了SSP-Ⅰ的保护作用。此外,通过免疫荧光染色、免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹法分析可知,SSP-Ⅰ具有抑制细胞凋亡的作用。
综上所述,本论文通过对五味子藤茎多糖SSP-Ⅰ的提取纯化和结构鉴定为后期的药理学实验提供了必要的物质保证。同时,对SSP-Ⅰ改善TM3细胞氧化应激损伤进行探究,较为深入的阐明了SSP-Ⅰ对阴囊热应激所致的小鼠睾丸损伤的保护作用及可能的分子机制,为开发五味子藤茎多糖提供了新的研究思路,也为治疗睾丸热应激损伤理论提供参考。
关键词: 五味子藤茎 ；多糖 ；结构鉴定 ；热应激
被引量
1
摘要： 随着水产品污染日益严重，食用受污染的水产品所带来的食源性疾病也日益增多，其中最严重的是副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus）感染，这种疾病可能会导致严重的胃肠炎，甚至危及生命安全。常见的物理及化学抑菌剂虽然能对水产品起到很好的抑菌作用，但使用不当依旧会对食品造成食品安全问题，也会影响人类健康。因此寻找绿色、无毒害且高效的天然抑菌剂显得尤为重要。本实验基于此背景下，对中草药五味子（WuWeiZi）进行抗副溶血弧菌活性物质（WWZE）的提取工艺优化、鉴定其活性成分、探究其抗生物膜的活性和作用机理以及测定其抗氧化活性，最后通过壳聚糖/WWZE制成的保鲜剂研究其对冷藏海鲈鱼片品质的影响。研究结果如下： （1）采用单因素实验、Box-Behnken（BBD）试验设计以及响应面分析法，确定了WWZE的最佳优化提取工艺：乙醇浓度69%，提取温度91℃，提取时间143min，料液比20mL/g;最优条件下WWZE对副溶血弧菌的抑菌圈平均值为15.67±0.13mm(n=3)，与预测值无显著性差异，得率为24.53±0.67%(n=3)。 （2）采用高效液相色谱法（HPLC）鉴定出WWZE样品含有多种木脂类化学成分，例如五味子醇甲、醇乙、酯甲、酚、甲素、乙素以及丙素，保留时间（tR）分别为：20.253、24.063、28.348、30.792、35.679、41.913和44.459min，其含量分别为2.59、0.746、1.55、0.129、1.157、2.34和0.614mg/g。采用微量肉汤稀释法测定五味子酯甲、五味子醇乙和WWZE对副溶血弧菌的最小抑菌浓度（MIC）分别为1.25、0.625和1.25mg/mL，而其他五个化合物的MIC均大于2.5mg/mL，表明五味子酯甲和五味子醇乙是五味子提取物的主要抗菌活性成分。 （3）采用结晶紫染色、考马斯亮蓝染色、刚果红平板、分光光度和CCK-8等方法探究了WWZE对副溶血性弧菌生物被膜的活性和作用机理，结果表明WWZE能够通过显著破坏副溶血性弧菌细胞膜完整性、抑制细胞间多糖黏附素（PIA）的合成和胞外DNA的分泌以及降低生物膜的代谢活性，从而发挥其剂量依赖型的有效抑制副溶血弧菌生物被膜的形成和清除成熟生物被膜的潜能，MIC的WWZE对副溶血弧菌生物被膜形成的抑制率和成熟生物被膜的清除率分别为67.69%和34.17%。 （4）通过对WWZE的DPPH自由基清除活性、羟基自由基清除率、还原能力以及总抗氧化力的测定来探究WWZE的抗氧化活性。结果表明，WWZE在不同浓度下都可以清除DPPH自由基和羟基自由基，并且在提供足够的水平时，它的还原能力会更强。这说明WWZE在抵御自由基方面的作用非常强，特别是在MIC的情况下对DPPH和羟基自由基清除率分别为56.26%、92.02%。 （5）通过在冷藏条件下壳聚糖/WWZE制成的保鲜剂对海鲈鱼片的pH值、总挥发性盐基氮（TVB-N）、菌落总数（TVC）、脂肪氧化（TBA）和感官评价进行定期分析。结果表明，与对照组处理相比，壳聚糖/WWZE制成的保鲜剂处理的海鲈鱼片在pH值、TVB-N含量、TVC、TBA值和感官评价的升高速率下降，在（4±1）℃下完好保存11天，货架期延长了4~5天，说明五味子提取物在食品保鲜领域具有一定的应用价值。
关键词: 五味子 ；副溶血弧菌 ；抗菌活性 ；提取优化 ；保鲜剂 ；化学成分
摘要： 南五味子为木兰科植物华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.的干燥成熟果实,收录于2020版《中华人民共和国药典》。秦巴山区南五味子还被用作水果大量食用。目前秦巴山区等南五味子主产区采青现象严重,加之采收后加工方法差别较大,导致生产出的南五味子质量不一,严重降低了经济效益的同时,也影响到了产业的健康发展。科学、规范的最佳采收期和优选的加工工艺对于提升南五味子药材质量、规范南五味子生产具有重要的指导意义。但目前尚缺乏这方面系统、科学的研究与报道。加之目前也缺乏科学、准确的南五味子药材质量分级方法。基于此,本研究不同成熟度的南五味子为材料,优化、建立南五味子最佳采收期和优选加工工艺,构建一种南五味子药材质量分级综合评价方法。以期为南五味子的规范化生产提供科学的数据支撑。主要研究结论如下:1.南五味子果实最佳采收期研究对南五味子青果、半熟果和红果的质量分析结果表明,与青果和红果相比,半熟果加工所得药材中挥发油的化学成分种类多且含量高;五味子醇甲、五味子酯甲、五味子酯乙和五味子甲素等木脂素类成分和多糖含量高。药材醇提液对DPPH自由基清除率试验结果表明半成熟果实的清除率高,主要分布在78%-82%之间,且变化趋势相对比较稳定。综合分析结果表明,半熟果实为最佳采收。2.南五味子果实加工工艺研究系统考察蒸、煮时间与干燥方式处理对南五味子质量的影响。结果表明,晒干和烘干处理后南五味子中挥发油有效成分数量和含量差异明显,其中烘干样品的挥发油化学物质种类多、含量高,尤其50℃烘干样品挥发油得率最高。特别是烘干样品的9种木脂素类成分中,五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子酯乙这4种木脂素类成分含量显著高于其他5种成分,晒干和烘干样品的总木脂素含量差异明显。不同加工工艺所得样品的多糖含量分布在5-12 mg/g之间。随着烘干温度增加,南五味子醇提液对DPPH自由基的清除率也随之增大,50℃烘干的样品达到最大值。综合分析结果得出,半熟南五味子果实蒸5min、再50℃烘干后,药材表观性状良好,主要有效活性成分含量高,药材质量好。3.南五味子药材质量分级综合评价方法在充分测定南五味子表观性状、有效活性成分检测和药理药效活性等多指标的基础上,对数据标准化、主成分分析和逐步回归后,建立了南五味子质量分级综合评价方程。具体有如下方面:(1)表观性状依据干品直径4～6mm,果肉气微,味微酸,无枝梗、杂质、虫蛀、霉变的标准,在此基础上根据表观颜色和破损情况将所有南五味子药材划分为6个得分等级;检测木脂素类成分、多糖、挥发油成分含量;检测评价南五味子醇提物的体外抗氧化活性。(2)运用R软件将所有待测指标数据进行降维分析并优化结果,最终选择表观性状评分、五味子酯甲质量百分含量、总木脂素质量含量、总多糖质量含量、挥发油有效成分质量百分含量和自由基清除率6个指标作为评价参数。得到以评价分值Y为因变量,所述各指标标准化数据自变量南五味子药材质量分级综合评价方程:Y=-0.061×标准化表观性状评分+0.375×标准化总木脂素质量含量-0.290×标准化五味子酯甲质量百分含量+0.117×标准化总多糖质量含量-0.061×标准化挥发油主要有效成分质量百分含量+0.379×标准化自由基清除率。
关键词: 南五味子 ；采收时间 ；加工工艺 ；商品等级 ；品质评价
被引量
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摘要： 五味子为木兰科植物五味子[Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.]的干燥成熟果实,习称“北五味子”,具有敛肺、滋肾、生津、收汗等功效,是我国传统中药材。目前,五味子果实作为药用部位常应用于营养和功能性食品中,而五味子藤茎作为非药用部位,同样含有大量活性成分,因此,开发利用五味子藤茎对于扩大五味子药用资源有重要意义。木脂素是五味子藤茎中主要的化学成分,具有肝肾保护、抗肿瘤、治疗糖尿病等多种药理功效,五味子乙素是五味子中含量极高的联苯环辛烯类木脂素,具有广泛的药理活性,因此常被作为研究重点。顺铂是目前临床上应用比较广泛的抗肿瘤药物,对于多器官恶性肿瘤的治疗有良好效果,但该药物在临床应用的同时,也会产生一些毒副作用,如肠道毒性,这是影响患者生活质量的重要因素之一。因此,寻求有效的肠保护方案以减少顺铂对肠道的损伤一直是其应用的研究重点。本研究结合体内外试验,分别从氧化应激、凋亡、炎症和肠道屏障多角度论证了五味子藤茎提取物及五味子乙素对顺铂致肠损伤的改善作用。此外,还分析了五味子乙素对顺铂致肠道菌群紊乱的调控作用,旨在为开发化疗性肠道损伤保护临床用药奠定理论基础。主要研究内容如下:1.HPLC法对比分析五味子藤茎和果实中的主要化学成分含量经HPLC法测定五味子果实和藤茎中均含有五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素等木脂素类成分,其含量分别为0.461%、0.346%、0.134%、0.067%、0.188%、0.305%、0.065%和0.326%、0.235%、0.030%、0.034%、0.116%、0.214%、0.037%。其中,五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素等主要木脂素在藤茎与果实中含量差异不大,因此在一定程度上藤茎可代替果实使用。此外,五味子果实和藤茎中单糖组分及多糖含量对比分析结果表明,五味子藤茎和果实中均含有甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖,其中果实部位还含有鼠李糖和半乳糖醛酸单糖组分,且果实中总多糖含量(11.5%)明显高于藤茎(1.42%)。因此,相比于其他成分,五味子藤茎中木脂素成分更为突出,该结论可为后续研究提供理论依据。2.五味子藤茎提取物可有效改善顺铂致小鼠肠道损伤通过小鼠体内试验比较五味子果实提取物及五味子藤茎提取物对顺铂致肠道损伤的改善作用。结果表明,在剂量为300 mg/kg下,五味子果实提取物和五味子藤茎提取物均能发挥良好的肠道保护功效。可通过增加过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)并降低丙二醛(MDA)水平来减少顺铂导致的氧化应激性肠损伤。同时降低肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平以及核转录因子(NF-κB)蛋白表达,从而抑制顺铂诱发的炎性损伤。此外,五味子果实提取物和五味子藤茎提取物还可通过调控PI3K/AKT信号通路及其下游蛋白caspase 3的表达抑制凋亡的发生。通过降低二胺氧化酶(DAO)水平并增加紧密连接蛋白(ZO-1)及闭合蛋白(occludin)表达量来增强肠道屏障功能。因此,五味子藤茎提取物与五味子果实提取物相比,同样对顺铂致肠道损伤有显著改善作用。3.五味子乙素改善顺铂致IEC-6细胞损伤建立顺铂致大鼠小肠隐窝上皮(IEC-6)细胞损伤体外模型,通过MTT试验从7种木脂素单体中筛选出五味子乙素在剂量为2.5μM、5μM和10μM时对顺铂致IEC-6细胞损伤有良好的保护作用。五味子乙素可明显减少顺铂对超氧化物歧化酶(SOD)和CAT的消耗,同时降低MDA水平,证明五味子乙素可有效降低顺铂诱导的IEC-6细胞氧化性损伤。此外,还可通过调控ROS介导的PI3K/AKT及caspase信号通路来缓解顺铂诱导的细胞凋亡,TUNEL和免疫荧光染色同样证明该理论。Western blot结果还进一步阐明了五味子乙素可通过降低NF-κB和TNF-α/IL-1β通路的表达来减少炎症的发生。而Wnt/β-catenin作为驱动肠道自我恢复能力的功能型信号通路,同样受到五味子乙素的调控。以上结果表明五味子乙素可通过减少氧化应激、炎症和凋亡缓解顺铂诱导的IEC-6细胞损伤,同时在维护肠道完整性中也起着重要作用。4.五味子乙素可通过调控ZO-1/occludin和Wnt/β-catenin信号通路缓解顺铂致小鼠肠道损伤基于五味子乙素对顺铂诱导IEC-6细胞损伤改善作用结果,进一步探究了其在小鼠体内试验中对肠道的保护作用及分子机制。结果表明:五味子乙素可通过增加ZO-1/occludin蛋白表达并调节Wnt/β-catenin信号通路提高肠道黏膜屏障功能,从而进一步抑制由肠屏障功能障碍引起的NF-κB炎性通路的表达,同时还能促进肠道干细胞再生。AB-PAS染色结果表明,五味子乙素可有效提高小肠杯状细胞分泌黏蛋白的能力,从而保护肠道免受外界毒性因子的侵扰。5.五味子乙素可调控顺铂致小鼠肠道菌群紊乱通过对各组小鼠肠道菌群进行测定,探究五味子乙素对顺铂致肠道菌群紊乱是否有调控作用。结果表明,五味子乙素可明显上调顺铂导致的小鼠肠道中厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度的降低。此外,乳杆菌属(Lactobacillus)和norank＿f＿＿Muribaculaceae菌属在顺铂刺激后,相对丰度会被显著抑制,而经过五味子乙素给药处理后,二者的丰度均可明显上升。此外,Lactobacillus作为与肠道通透性相关的菌属,其水平的上调间接证明了五味子乙素可通过提高该菌属水平降低顺铂导致肠道通透性的增加。
关键词: 五味子 ；五味子乙素 ；顺铂 ；肠损伤 ；Wnt/β-catenin ；肠道菌群
被引量
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摘要： 三萜是植物天然产物中规模最大、结构最多样的家族之一,具有抗菌、植物防御和信号传导等多种重要生理功能,在调节植物和微生物相互作用中发挥了重要作用。与其它植物来源的三萜相比,五味子三萜与降三萜结构复杂多变、氧化度高、多环,为五味子科植物所特有,并具有多种药理活性,自发现后就一直备受关注。然而,多数五味子三萜和降三萜在植物中含量极低,且因结构复杂从而导致化学合成困难,至今仍缺乏对五味子三萜与降三萜系统的生理及药理活性的研究。研究表明内生微生物与中药活性成分和药用植物的生长发育息息相关,深入研究药用植物内生微生物组的菌群结构和功能及其与宿主特征次级代谢物间的相互作用对于挖掘内生菌的潜力,持续提高药用植物的产量与品质具有重大意义。前期研究中我们发现狭叶南五味子某些内生菌经调控能特异性修饰宿主主要三萜或能促进宿主生长,与宿主之间隐含着值得深究的关联性。其次,目前关于五味子科药用植物的内生及根际微生物组的组成、装配规律的研究鲜有报道,对五味子科植物内生菌与三萜代谢的互作机制还未得到深入研究。据此,本研究以云南省西畴县境内同一地理环境下采集的狭叶南五味子(Kadsura angustifolia)和华中五味子(Schisandra sphenanthera)为研究对象,探讨了五味子内生菌与宿主三萜类次级代谢物的相互作用。主要研究结果如下:(1)采用高通量16Sr RNA和ITS扩增子测序解析了华中五味子和狭叶南五味子内生(根、茎、叶和果实)及根际微生物的组成。不同样本之间共有、特有的真菌与细菌OTUs分析结果表明,两种五味子根际共有的OTUs数量显著性高于根际与内生共有的OTUs数量,说明同一地理环境下狭叶南和华中两种五味子根际微生物与内生微生物的组成具有显著性差异。两种五味子相同生态位共有的内生菌的OTUs数量显著性高于同一个植物不同生态位共有内生菌OTUs数量,表明生态位对两种五味子内生菌的种群分布的影响大于植物基因型的影响。OTUs注释及相对丰度分析结果表明,两种五味子的根际细菌主要由变形菌门(Proteobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)和放线菌门(Actinomycetes)的细菌组成,优势属是假单胞菌属(Pseudomonas)、酸热菌属(Acidothermus)、酸杆菌属(Acidibacter)、泛菌属(Pantoea)、Candidatus＿Solibacter、Bradyhizobium和未被鉴定的伯克氏菌(unidentified＿Burkholderiaceae);根际真菌主要由子囊菌门和担子菌门的真菌组成,优势属是unidentified＿Trimorphomycetaceae、Archaeorhizomyces和unidentified＿Archaeorhizomycetes＿sp。与根际微生物相比,两种五味子的内生细菌则主要由蓝细菌门(Cyanobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)组成,主要属于假单胞菌属(Pseudomonas)、拟杆菌属(Bacteroides)、鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)、泛菌属(Pantoea)、芽孢杆菌属(Bacillus)以及未被鉴定的蓝细菌(unidentified＿Cyanobacteria)、伯克氏菌(unidentified＿Burkholderiaceae)和unidentified＿Rickettsiales。此外,两种五味子内生真菌也主要由子囊菌门(Ascomycota)和担子菌门(Basidiomycota)的真菌组成。然而,在属的水平上,两种五味子内生真菌在根、茎、叶和果实等四种不同组织的优势属则有显著差异。其中两种五味子共有的优势属内生真菌为木霉属(Trichoderma)和拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)。因此,与根际微生物相比,狭叶南五味子和华中五味子的内生微生物具有独特的组成类群。Alpha多样性分析结果表明,从根际土壤到植物组织,细菌和真菌的多样性逐渐降低,说明了两种五味子植物对根际土壤中的细菌和真菌发生了选择性富集。Beta多样性的PCo A分析结果表明,两种五味子的根际微生物和内生微生物分别各自高度聚集,表明两种五味子的根际微生物、内生微生物分别高度相似。为了深入开展对两种五味子中内生菌的相关研究,基于高通量的测序结果,采用多种培养策略,对两种五味子不同组织部位的内生细菌和内生真菌进行了分离和鉴定,其中从两种五味子中共分离获得内生细菌119和127株,获得内生真菌98和99株,它们分别属于不同的分类群。特别的是,体外分离培养获得的这些内生菌均在高通量测序结果中检测到,为后续相关研究提供了菌株材料。(2)为了探究三萜类次级代谢物是否在五味子内生菌的调控中发挥了作用,本文采用体外敏感性实验测定不同浓度的五味子三萜化合物对上述研究中分离获得的内生菌生长的影响。分别对华中五味子和狭叶南五味子植物化学成分进行了研究,从狭叶南五味子中分离获得一个主要的三萜nigranoic acid(K-1);从华中五味子中分离获得4个主要的三萜iso-anwuweizicacid(S-1)、nigranoic acid(S-2)、micrandilactone C(S-3)和lancifodilactone D(S-4)。体外测定不同浓度的nigranoic acid和Mix(化合物S1-S4的混合物)分别对2种五味子共有的27株代表性内生细菌(隶属于4个门,27个属)和26株代表性内生真菌(隶属于3个门,26个属)生长的影响。结果表明nigranoic acid和Mix均能够显著促进厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门、子囊菌门、担子菌门和接合菌门等不同门类的优势属的内生细菌和内生真菌的生长,但对这些门类的非优势属的内生细菌和内生真菌的生长则有抑制作用。特别的是,不管是优势属还是非优势属的放线菌门内生细菌,nigranoic acid和Mix均显著抑制其生长。由此可见,在门的分类水平上,两种五味子的主要三萜类化合物对其共有的内生细菌和内生真菌的生长呈现了相似的选择性调控作用。(3)不同微生物类群在生长过程中存在种间的竞争或协同关系,研究微生物间的相互作用模式是解析植物微生物组成以及构建合理微生物群落的重要策略。两种五味子共有的27株代表性内生细菌和26株代表性内生真菌体外一对一相互作用研究结果表明,多数内生细菌间、多数内生真菌间都存在相互促进作用,但多数内生细菌与内生真菌之间却表现出相互抑制。内生菌的相互作用与三萜化合物对内生菌的选择性调控结果的关联分析表明,所有测试细菌对生长被三萜促进的内生细菌(TPB)具有明显的促生作用,并且这种促进作用显著高于生长被三萜抑制的内生细菌(TNB),表明被三萜促进的细菌在整个内生细菌类群的相互作用中占据了更明显的生长优势。与细菌间相互作用不同,只有Trichoderma hamatum、Lasiodiplodia theobromae、Clitopilus prunulus和Ceratobasidium sp.等几种被三萜促进生长的内生真菌(TPF)显著抑制其他内生真菌的生长,占据绝对生长优势。但与生长被三萜抑制的内生真菌(TNF)相比,Pestalotiopsis microspore、Fusarium decemcellulare、Phlebiopsis sp.和Bipolaris setariae等其它更多的被三萜促进生长的真菌却在真菌间相互作用中并未表现出明显的生长优势。此外,还发现所有测试细菌对生长被三萜促进真菌的抑制作用显著低于生长被三萜抑制的真菌。以上研究表明五味子三萜对其内生菌的生长调控与内生菌之间的相互作用存在显著的相关性,五味子三萜化合物可能通过影响不同类群内生菌的生长进而调控宿主内生菌的互作强度,维持内生群落的稳定和平衡。(4)次生代谢物在调控植物微生物组成的同时也影响了微生物生态功能的组装。为进一步探究三萜化合物选择性调控内生菌对应的生态功能,我们对27株代表性内生细菌和26株代表性内生真菌的多种促生能力(包括溶磷、产IAA、分泌铁载体、DPPH清除抗氧化)以及体外合成三萜类物质的能力进行了评估,发现所有测试的内生细菌和内生真菌均具有一定的三萜合成能力和至少一种促生能力。其中,有趣的是,生长被三萜促进的内生细菌和真菌(TPB、TPF)的促生能力以及三萜类物质的合成能力均显著高于生长被三萜抑制的内生细菌和真菌(TNB、TNF)。进一步,我们构建了5组不同的合成内生菌群(TPB&TNB、TPF&TNF、TPB&TNB&TPF&TNF、TNB&TNF和TPB&TPF)与无菌华中五味子植物的共培养体系,比较分析了这些合成内生菌群对华中五味子生长及代谢的影响。结果表明,与无微生物处理的对照组相比,5组合成内生菌群均能够不同程度的促进华中五味子的须根和植株的生长、生物量的增加以及多种代谢成分(包括可溶性糖、三萜、黄酮和多酚)积累。其中,TPB&TPF处理组对华中五味子的生长和多种代谢积累的促进效果最显著,该处理组华中五味子的须根根长、株高、可溶性糖、黄酮、多酚和三萜的含量分别比对照增加了318.98%、104.53%、103.96%、102.21%、56.66%和240.54%。此外,与TNB&TPB和TPF&TNF处理组相比,TPB&TNB&TPF&TNF、TNB&TNF和TPB&TPF等内生细菌与真菌的联合处理组对华中五味子须根和株高伸长的促进作用更显著,表明内生细菌和内生真菌对宿主生长促进作用具有协同效应。特别的是,在5组合成内生菌群的处理中,只有TPF&TNF处理组在植物生长后期出现了叶片黄萎症状,叶绿素含量显著降低,说明大量单独存在的内生真菌对宿主植物具有一定的毒害作用,但内生细菌与内生真菌的共同存在则有助于减弱内生真菌对植物的毒害作用,维持宿主内生菌微生态平衡和植物健康。因此,被三萜促进的内生细菌和内生真菌具有显著促进宿主植物生长和次级代谢物积累的生态功能,表明五味子三萜类次级代谢物可能是宿主植物有益内生菌群组装和优化的选择性调控物质。(5)植物次生代谢物在调控微生物组成的同时,微生物反过来也能够影响植物次生代谢。为解析内生菌对宿主三萜类次级代谢的影响,本文还比较研究了一株代表性内生真菌赭绿青霉(Penicillium ochrochloron SWUKD4.1850)的纯固体发酵以及与宿主狭叶南五味子植物材料共发酵产物的化学成分,发现宿主的存在能明显改变赭绿青霉的次生代谢途径。从共发酵产物中分离获得24个具有多环内酯、多个手性中心和高度氧化为特征的罕见五味子三萜和降三萜,且这些三萜和降三萜化合物从未在赭绿青霉以及狭叶南五味子植物的次生代谢物研究中被分离和报道。根据化合物的生源途径推导以及内生真菌与宿主特征活性成分生成的相关性分析,揭示这些代谢物极有可能源于宿主主要化学成分nigranoic acid,表明五味子内生菌对宿主三萜类次级代谢物具有极强的特异性转化和修饰能力。综上所述,本文从内生菌和植物次生代谢物的角度出发,阐明了华中五味子和狭叶南五味子微生物组的群落结构和装配规律,初步揭示了五味子内生菌与三萜类次级代谢物相互作用的规律,为定向利用内生菌调控五味子科药用植物,促进其生长和提高药材品质打下了坚实的理论基础。
关键词: 五味子三萜 ；次级代谢物 ；内生菌 ；合成微生物群落 ；相互作用
被引量
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摘要： 华中五味子(Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.)属于五味子科(Schisandraceae)五味子属(Schisandra)—种重要的野生中药材,木脂素作为其主要活性成分,具有抗病毒、抗氧化等药理作用。而木质素作为植物体内含量仅次于纤维素的大分子有机物质,在疏导水分、增强植物机械强度和抵御外界不良环境等方面发挥重要作用。目前,对于华中五味子木脂素研究主要集中在生理和药理方面,而对华中五味子木质素和木脂代谢通路的研究未见报道。本研究以陕西省柞水县华中五味子野生抚育基地不同时期(萌芽期、展叶期、花期、青果期、果熟期)的华中五味子为材料,利用Klason法和高效液相色谱检测法分别测定了不同时期华中五味子藤茎和叶中木质素、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、总木脂素等含量;运用同源克隆的技术获得华中五味子肉桂酰辅酶A还原酶基因(SsCCR)和内参基因(SsACTIN)的保守片段,并利用3'RACE技术得到SsCCR基因的3'末端;通过分析不同时期华中五味子叶中SsCCR基因的表达量与木质素和木脂素含量,初步揭示华中五味子叶中SsCCR基因与木质素和木脂素的关系。主要结论如下:1.测定不同时期华中五味子藤茎和叶中木质素含量,结果显示:(1)藤茎中的木质素含量均高于同时期的叶;(2)藤茎和叶中的木质素含量变化均呈现“降低-增加-降低”的趋势;(3)在展叶期,木质素含量达到最小值,藤茎47.51%,叶32.5%,青果期达到最大值,藤茎52.27%,叶46.34%。2.测定不同时期华中五味子藤茎和叶中木脂素的含量,结果显示:(1)除花期至果熟期阶段,藤茎中五味子醇甲含量显著低于叶中含量外,不同时期华中五味子藤茎中五味子醇甲、酯甲、甲素、乙素及总木脂素含量均高于叶中含量;(2)不同时期华中五味子藤茎和叶中五味子甲素含量变化趋势相反,而藤茎中五味子乙素和总木脂素含量变化趋势与叶完全一致,此外,叶中五味子甲素与五味子乙素含量变化趋势完全一致,且五味子甲素和乙素含量变化趋势与酯甲完全相反;(3)华中五味子藤茎和叶中木脂素的积累具有一定的时效性,其最大值和最小值出现的时期不完全相同。3.利用RT-PCR技术,克隆得到华中五味子一个CCR基因和两个内参基因的保守片段,其中,CCR基因保守片段为588 bp,命名SsCCR;两个内参基因的保守片段分别为1078 bp和397 bp,命名SsACTIN1和SsACTIN2;此外,通过cDNA末端快速克隆(RACE)技术成功克隆出华中五味子SsCCR基因的3'末端。4.利用实时荧光定量PCR测定华中五味子叶片中SsCCR基因的表达量,结果表明:萌芽期表达量最低,随着植株的生长,青果期达到最大值,果熟期表达量略有降低;结合叶片木质素和木脂素含量,初步揭示SsCCR基因表达量与木质素含量呈不显著正相关关系(r=0.403,P>0.05),与五味子酯甲含量呈显著负相关关系(r=-0.972,P<0.05),与五味子乙素含量呈显著正相关关系(r=0.921,P<0.05)。本研究初步揭示了不同时期华中五味子藤茎与叶中木质素和木脂素含量差异,通过分析华中五味子木质素和木脂素含量与其合成代谢途径关键酶基因SsCCR表达量之间的关系,为揭示五味子科植物木质素和木脂素的合成及调控机制提供理论基础。
关键词: 华中五味子 ；木质素 ；木脂素 ；SsCCR基因
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摘要： 黑老虎是五味子科南五味子属植物冷饭团Kadsura coccinea(Lem.)A.C.Smith的根和藤茎,别名冷饭团、大钻,布福娜等;气香味辛、微苦,性温。在民间常用于治疗胃、十二指肠溃疡、风湿性关节炎、跌打肿痛等。黑老虎作为民间习用药材,临床药效明确,但成分及作用机制仍需进一步研究,并建立稳定的质量标准体系,目前只有根及藤茎入药,果实也有丰富的药用价值,因此,本文在综述黑老虎近年的研究基础上,主要对黑老虎药材的化学成分分析、质量控制及果实的体外抗氧化活性进行研究。本实验利用硅胶柱色谱法、凝胶柱色谱法和制备薄层色谱法等分离方法,在黑老虎药材95%乙醇提取物中分离得到8个化合物,并通过核磁、质谱、红外等现代波谱分析方法鉴定其结构分别是:南五味子素(1)、Ananolignan J(2)、Ananolignan K(3)、Ananolignan L(4),(24Z)-3-Oxolanosta-8,24-dien-26-oic acid(5)、Manwuweizic acid(6)、二氢愈创木酸(7)和β-谷甾醇(8),其中Ananolignan J(2)、Ananolignan K(3)和Ananolignan L(4)是首次在黑老虎药材中分离得到。除此以外,通过GC-MS对黑老虎药材石油醚部分进行分析,总共检测出39个成分,通过数据库比对结果,相似度达到90%以上的有6个成分,15个成分相似度低于90%,其余的化合物结构待进一步鉴定确认;在分析出的化学成分中主要有:1-石竹烯(24.93%)、(1S,8a R)-1-异丙基-4,7-二甲基-1,2,3,5,6,8a-六氢萘(12.75%)和α-律草烯(10.78%)三种成分含量较高。以化合物Manwuweizic acid为对照品,采用薄层色谱法对10批次不同产地的黑老虎药材进行定性分析,结果显示各产地药材成分分离度较好,不同产地的药材均有相同是色谱带,各产地因成分含量的不同,斑点大小各有区别,供试品与对照品在同一色谱位置上显示相同颜色的斑点。通过HPLC法测定黑老虎药材中Ananolignan L的含量,发现恭城西岭的含量最高,为0.136 mg/g,河池东兴的含量最低,为0.021 mg/g,百色田林的未检测出。可为药材的质量标准提供一定的科学依据。分别测定黑老虎果实中的皮、肉组织总多酚和花色苷的含量,通过评估样品的DPPH,ABTS清除自由基能力,并对比不同果皮颜色之间体外抗氧化能力区别。在鲜果皮中,1号果实的总多酚含量较高69.96±1.31 mg/100g,5号果花色苷含量最高29.47±0.83 mg/100g;在鲜果肉中,5号果的总多酚含量最高为49.90±1.63 mg/100g,5号果花色苷含量最高12.89±0.16 mg/100g。总体评价,5号果的总多酚和花色苷含量最高。DPPH,ABTS清除自由基能力评估中:果皮>果肉,总多酚>花色苷,可推测,黑老虎果实中主要抗氧化活性物质可能来源于总多酚。在果实提取物的清除自由基能力整体评价中,1号果、5号果和6号果的DPPH、ABTS自由基清除能力较强些,但与其他相比总体相差也不大。黑老虎果实总多酚和花色苷的具体成分及其他功能作用仍进一步研究。
关键词: 黑老虎 ；化学成分 ；质量分析 ；抗氧化
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