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1

1.

认领

【期刊论文】 • 康武 ¹王卫国 ²

智晓霞 ¹张波 ¹ +2位作者 • 《化学试剂》 • 2012年第7期 659 - 661，共3页

机构： [1] 南京工业大学生物与制药工程学院[2] 中国科学院上海有机化学研究所

摘要：采用新的链接剂二乙醇胺与氨基醛形成稳定的唑形式,将Fmoc-丙氨醛固定到二氯三苯甲基树脂上,经固相多肽合成后,用AcOH/DCM/H2O(8∶1∶1)将标题化合物从树脂上释放出来,纯化后纯度达98.2%,产品通过MS、1HNMR鉴定确证,且无消旋发生。

摘要译文

关键词: 二乙醇胺；氨基醛；唑；肽醛

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引用

被引量 1

2

2. 授权

【专利/发明】 • CN201611095162.3 • 徐峰谷海涛王小涛苏军 +1位作者 • 申请日：2016-12-02, 公开日：2020-08-18

申请人：江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司

公开（公告）号： CN106749613B

摘要：本发明涉及一种索玛鲁肽的合成方法，该方法采用固液相相结合的方法合成索玛鲁肽产品，采用16+6+9片段的合成方式，同时开展3个片段的合成，大大缩短了产品的合成时间，同时通过对His‑Ala‑Glu‑Gly‑Thr‑Phe‑Thr‑Ser‑Asp‑Val‑Ser‑Ser‑Tyr‑Leu‑Glu‑Gly、Gln‑Ala‑Ala‑N6‑[N‑(17‑carboxy‑1‑oxoheptadecyl‑L‑γ‑glutamyl[2‑(2‑aminoethoxy)ethoxy]acetyl[2‑(2‑aminoethoxy)ethoxy]acetyl]‑Lys‑Glu‑Phe、Ile‑Ala‑Trp‑Leu‑Val‑Arg‑Gly‑Arg‑Gly‑OH等合成因子的分步解析，降低了固相合成中困难肽序的合成、解决了固相合成中批量放大的困难、提高了合成效率、由于采用液相片段合成使的纯化难度有效的降低、同时大大降低了生产成本。本发明方法可以实现缩短40%的合成时间、降低物料成本、减少缺失肽、杂肽的产生数量，适合工业化大生产。

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引用

3

3. 实质审查的生效

【专利/发明】 • CN202210297659.2 • 蒿海军张丹于洋于航 • 申请日：2022-03-24, 公开日：2023-10-03

申请人：辽宁药联制药有限公司

公开（公告）号： CN116836258A

摘要：本发明公开了一种利拉鲁肽的固相合成方法，属于多肽药物制备方法及纯化技术领域。该方法包括如下步骤：先将利拉鲁肽主链31个肽拆分为5个片段，在活化剂系统的存在下，由Wang‑树脂为起始，逐个采用固相合成法合成这5个片段，这5个片段序列分别为：His‑Ala‑Glu‑Gly，Thr‑Phe‑Thr‑Ser‑Asp‑Val‑Ser，Ser‑Tyr‑Leu‑Glu‑Gly，Gln‑Ala‑Ala‑Lys‑Glu，Phe‑Ile‑Ala‑Trp‑Leu‑Val‑Arg‑Gly‑Arg‑Gly；之后，5个片段依次相接构成利拉鲁肽主体肽链结构。其中第4片段Lys侧链需修饰，依次偶联Fmoc‑Glu‑OtBu、棕榈酰氯、羧基活化，按照液相方法合成。本发明具有杂质少、易纯化、产品收率高、合成时间短及生产成本低的优点。

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引用

4

4. 发明专利申请公布后的驳回

【专利/发明】 • CN202010638347.4 • 张丹蒿海军毕洪书于航 • 申请日：2020-07-06, 公开日：2020-11-06

申请人：辽宁药联制药有限公司

公开（公告）号： CN111892650A

摘要：本发明公开了一种利拉鲁肽固相合成方法，属于多肽药物制备方法及纯化技术领域，该方法包括如下步骤：在活化剂系统的存在下，由王树脂为起始，通过固相合成法，按照利拉鲁肽主链肽的顺序一一合成，共31个氨基酸组成，序列为：His‑Ala‑Glu‑Gly‑Thr‑Phe‑Thr‑Ser‑Asp‑Val‑Ser‑Ser‑Tyr‑Leu‑Glu‑Gly‑Gln‑Ala‑Ala‑Lys‑Glu‑Phe‑Ile‑Ala‑Trp‑Leu‑Val‑Arg‑Gly‑Arg‑Gly。其中Lys侧链修饰，依次偶联Fmoc‑Glu‑OtBu、棕榈酰氯、羧基活化。本发明具有杂质少、易纯化、产品收率高、降低工作量及生产成本的优点。

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5

5. 授权

【专利/发明】 • CN202210837964.6 • 陈新华张向阳程洁谢锐遥 +1位作者 • 申请日：2022-07-16, 公开日：2023-04-07

申请人：福建农林大学

公开（公告）号： CN115925814A

摘要：本发明公开了一种抗菌肽RMR26及其制备方法和应用，其氨基酸序列为Arg‑Ser‑Thr‑Lys‑Ala‑Gly‑Val‑Ile‑Phe‑Pro‑Val‑Gly‑Arg‑Met‑Leu‑Arg‑Tyr‑Ile‑Lys‑Arg‑Gly‑Leu‑Pro‑Lys‑Tyr‑Arg。抗菌肽RMR26可以用固相化学法合成。本发明所得到的抗菌肽RMR26具有较强的抑菌活性、较弱的溶血活性和较低的细胞毒性，可作为抗生素替代品使用，应用于药品抗菌制剂、食品防腐剂、养殖业饲料添加剂和化妆品防腐剂等。

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6

6. 授权

【专利/发明】 • CN202410329732.9 • 田茂奎何志泉黄伟铭叶智铭 +9位作者 • 申请日：2024-03-21, 公开日：2024-05-07

申请人：福建基诺厚普生物科技有限公司

公开（公告）号： CN117986349A

摘要：本发明提供了一种司美格鲁肽的制备方法，以树脂为固相载体，按照司美格鲁肽的一级序列，通过固相合成方法，从C端到N端依次偶联氨基酸和二肽片段，得到司美格鲁肽全保护树脂，经裂解、纯化得到司美格鲁肽；所述二肽片段包括7~8二肽片段、9~10二肽片段、12~13二肽片段、17~18二肽片段、21~22二肽片段、24~25二肽片段以及34~35二肽片段，其中7~8二肽片段为Boc‑His(Trt)‑Aib‑OH、9~10二肽片段为Fmoc‑Glu(OtBu)‑G1y‑OH、12~13二肽片段为Fmoc‑Phe‑Thr(tBu)‑OH、17~18二肽片段为Fmoc‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑OH、21~22二肽片段为Fmoc‑Glu(OtBu)‑G1y‑OH、24~25二肽片段为Fmoc‑Ala‑Ala‑OH、34~35二肽片段为Fmoc‑Arg(Pbf)‑Gly‑OH。通过本发明方法制备的司美格鲁肽收率高、纯度高。

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7

7. 实质审查的生效

【专利/发明】 • CN202411746036.4 • 何志泉侯志东陈程云许金行 +2位作者 • 申请日：2024-11-29, 公开日：2025-02-28

申请人：福建基诺厚普生物科技有限公司

公开（公告）号： CN119529056A

摘要：本发明涉及多肽药物制备方法技术领域，提供了一种替尔泊肽的固相制备方法，以氨基树脂为起始树脂，用固相合成法按照所述替尔泊肽的氨基酸序列依次偶联氨基酸和小片段肽合成替尔泊肽树脂，所述替尔泊肽树脂经裂解、纯化得到替尔泊肽纯品。其中，所述小片段肽为1~4四肽片段Boc‑Tyr(tBu)‑Aib‑Glu(OtBu)‑G1y‑OH、5~6二肽片段Fmoc‑Thr(tBu)‑Phe‑OH、7~8二肽片段Fmoc‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑OH、10~11二肽片段Fmoc‑Tyr(tBu)‑Ser(tBu)‑OH、12~13二肽片段Fmoc‑Ile‑Aib‑OH、17~18二肽片段Fmoc‑Ile‑Ala‑OH、20侧链肽Fmoc‑Lys(AEEA‑AEEA‑γ‑Glu(α‑OtBu)‑Eicosanedioic acid(mon‑tBu))‑OH、28~30三肽片段Fmoc‑Ala‑Gly‑G1y‑OH、32~34三肽片段Fmoc‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑OH和36~38三肽片段Fmoc‑Pro‑Pro‑Pro‑OH；偶联所述氨基酸和所述小片段肽的偶联剂选自Oxyma和DIC、TPTU和TMP或COMU和DIEA。通过本发明方法制备的替尔泊肽粗品的收率高、纯度高。

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8

8. 实质审查的生效

【专利/发明】 • CN202411044016.2 • 彼得·简·伦纳德·马里奥·夸德弗莱格安娜·托普拉克蒂莫·努詹斯 • 申请日：2019-03-11, 公开日：2024-12-03

申请人：费森尤斯卡比有限公司

公开（公告）号： CN119060201A

摘要：本发明涉及用于合成肽的方法，所述方法包括将以下(a)和(b)酶促偶联：(a)包含第一肽片段的肽C末端酯或硫酯，所述第一肽片段包含序列His‑X‑Glu‑Gly‑Thr‑Phe‑Thr‑Ser‑Asp‑Val‑Ser‑(硫)酯，和(b)具有包含第二肽片段的N‑末端未保护的胺的肽亲核试剂，所述第二肽片段包含序列H‑Ser‑Tyr‑Leu‑Glu‑Gly‑Gln‑Ala‑Ala‑Y‑Glu‑Phe‑Ile‑Ala‑Trp‑Leu‑Val‑Z‑Gly‑Arg‑Gly。

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9

9. 实质审查的生效

【专利/发明】 • CN202311330112.9 • 张传亮杨献敏公丽艳董国振 +2位作者 • 申请日：2023-10-13, 公开日：2024-01-05

申请人：青岛科技大学

公开（公告）号： CN117343145A

摘要：本发明公开了一类新型靶向PTP1B的长效化降糖BimBH3模拟肽及其制备方法与应用。所述的Bim BH3模拟肽类似物的结构通式如式I所示：其中，n＝14，Raa为Gly、Aib、Ser、Asp、Lys、Val、Thr、Phe、Pro、Hyp、Leu、Ile、Trp、Tyr、Cys、Met、Glu、Arg、D‑Ala、β‑Ala、D‑Ser、D‑Leu、D‑Pro、D‑His和N‑CH3‑Ala。该类模拟肽化合物衍生自Bim‑BH3结构域的核心区域，第2位氨基酸采用天然或非天然氨基酸定点替换修饰，N端缀合小分子脂肪酸修饰，得到具有更长药理作用时间、通过抑制PTP1B靶标发挥一周一次长效降糖作用的BimBH3类似物。所述的化合物均采用多肽固相合成方法进行制备，粗品经纯化，冻干得到目标化合物。

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10

10. 发明专利申请公布后的撤回

【专利/发明】 • CN202310611480.4 • 王杰 • 申请日：2023-05-29, 公开日：2023-08-11

申请人：广西杨森生物药业有限公司

公开（公告）号： CN116574156A

摘要：本发明涉及化妆品技术领域。本发明提供了一种芋螺肽及其制备方法和应用，所述制备方法包括如下步骤：(1)采用固相合成法，用Fmoc脱保护试剂对Fmoc氨基树脂进行脱保护处理，在偶联体系作用下于偶联溶剂中从C端到N端依次连接Fmoc氨基酸，合成序列为：X‑Gly‑Cys(R1)‑Cys(R2)‑Ser‑Tyr‑Pro‑Pro‑Cys(R2)‑Phe‑Ala‑Thr‑Asn‑Pro‑Asp‑Cys(R1)的十五肽氨基树脂；(2)将十五肽氨基树脂裂解后氧化得到芋螺肽。本发明采用固相合成法进行芋螺肽的制备，不仅不受芋螺原料数量的限制，和直接分离法、生物法合成相比还提高了产品的纯度。

摘要译文

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11

11. 授权

【专利/发明】 • CN201611247180.9 • 王慧王惠嘉郭添张忠旗 +7位作者 • 申请日：2016-12-29, 公开日：2021-02-02

申请人：陕西慧康生物科技有限责任公司

公开（公告）号： CN106632655B

摘要：本发明公开一种艾塞那肽的制备方法，通过Phe‑Ile‑Glu‑Trp‑Leu‑Lys‑Asn‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser‑Ser‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser‑CONH2的全保护片段与如下三个片段的全保护片段制备得到：Met‑Glu‑Glu‑Glu‑Ala‑Val‑Arg‑Leu‑COOH，Thr‑Ser‑Asp‑Leu‑Ser‑Lys‑Gln‑COOH，His‑Gly‑Glu‑Gly‑Thr‑Phe‑COOH。本发明克服了现有固相合成艾塞那肽纯化困难、规模化困难的问题，提高了合成效率，减少杂质累积，降低了纯化难度。

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12

12. 发明专利申请公布后的撤回

【专利/发明】 • CN202210680593.5 • 陈罡赵龙马钰吴泳江 +1位作者 • 申请日：2022-06-16, 公开日：2022-08-09

申请人：南通大学

公开（公告）号： CN114874292A

摘要：本发明属于生物医疗技术领域，本发明公开了一类多靶点嵌合肽化合物，所述一类多靶点嵌合肽能够同时作用于阿片受体和PD‑1受体，其中，一类多靶点嵌合肽的氨基酸序列如下所示：Tyr‑Pro‑Xaa3‑Phe‑Ile‑Ser‑Tyr‑Gly‑Gly‑Ala‑Asp‑Tyr‑Lys‑R；其中，Xaa3为侧链为吲哚环的Trp或苯环的Phe；R为‑NH2基团或‑OH基团。本发明还公开了阿片和PD‑1受体多靶点化合物的制备方法，包括以下过程：（1）利用固相合成的方法，由肽链的羧基端第一个赖氨酸开始依次偶联在树脂上，（2）通过裂解液裂解获得目的肽。本发明为设计新的阿片/PD‑1受体多靶点嵌合肽的后期工作提供新的思路及理论依据。

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被引量 1

13

13. 发明专利申请公布后的视为撤回

【专利/发明】 • CN201910212251.9 • 徐红岩彭瑞涛周国峰林崔健 • 申请日：2019-03-20, 公开日：2019-06-04

申请人：吉尔生化(上海)有限公司

公开（公告）号： CN109836476A

摘要：本发明涉及一种半胱氨酸假脯氨酸二肽的合成方法。主要解决现有合成方法存在二肽的收率较低，纯度不易提高，后处理步骤非常繁琐，生产周期冗长等技术问题。本发明的技术方案为：一种半胱氨酸假脯氨酸二肽的合成方法，包括以下步骤：第一步：H‑Cys‑OH.Hcl在丙酮中，加入2,2‑二甲氧基丙烷，回流制得公用中间体Cys[Psi(Me,Me)Pro]‑OH；第二步：Fmoc‑X‑OH和DAST在THF的溶液中反应制得Fmoc‑X‑F；第三步：将Cys[Psi(Me,Me)Pro]‑OH和Fmoc‑X‑F在DMF中加入有机碱进行缩合，处理得到最终产品Fmoc‑X‑Cys[Psi(Me,Me)Pro]‑OH；X选自Gly、Phe、Val、Ile、Leu、Pro、Ala或Met中的一种。

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14

14. 授权

【专利/发明】 • CN202010769665.4 • 向双春高峰刘聪翀李云平 • 申请日：2020-08-04, 公开日：2020-10-02

申请人：苏州金顶生物有限公司;大连阿拉宁生物技术有限公司

公开（公告）号： CN111732649A

摘要：本发明公开了一种结合连续流固相合成系统制备利拉鲁肽的方法，主链构造采用Boc‑His(x)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Gly，Fmoc‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Val‑Ser(Psi(me.me)Pro)‑OH,H‑Ser(tBu)‑Tyr(tBu)‑Leu‑Glu(OtBu)‑Gly‑Gln(Trt)‑Ala‑Ala‑Lys(Palm‑Glu‑OtBu)‑Glu(OtBu)‑Phe‑Ile‑Ala‑Trp(Boc)‑Leu‑Val‑Arg(y)‑Gly‑Arg(y)‑Gly‑树脂片段，同时采用连续流固相合成增长肽链。

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引用

15

15. 授权

【专利/发明】 • CN202210837964.6 • 陈新华张向阳程洁谢锐遥 +1位作者 • 申请日：2022-07-16, 公开日：2024-07-05

申请人：福建农林大学

公开（公告）号： CN115925814B

摘要：本发明公开了一种抗菌肽RMR26及其制备方法和应用，其氨基酸序列为Arg‑Ser‑Thr‑Lys‑Ala‑Gly‑Val‑Ile‑Phe‑Pro‑Val‑Gly‑Arg‑Met‑Leu‑Arg‑Tyr‑Ile‑Lys‑Arg‑Gly‑Leu‑Pro‑Lys‑Tyr‑Arg。抗菌肽RMR26可以用固相化学法合成。本发明所得到的抗菌肽RMR26具有较强的抑菌活性、较弱的溶血活性和较低的细胞毒性，可作为抗生素替代品使用，应用于药品抗菌制剂、食品防腐剂、养殖业饲料添加剂和化妆品防腐剂等。

摘要译文

引用

16

16. 授权

【专利/发明】 • CN202410329732.9 • 田茂奎何志泉黄伟铭叶智铭 +9位作者 • 申请日：2024-03-21, 公开日：2024-10-01

申请人：福建基诺厚普生物科技有限公司

公开（公告）号： CN117986349B

摘要：本发明提供了一种司美格鲁肽的制备方法，以树脂为固相载体，按照司美格鲁肽的一级序列，通过固相合成方法，从C端到N端依次偶联氨基酸和二肽片段，得到司美格鲁肽全保护树脂，经裂解、纯化得到司美格鲁肽；所述二肽片段包括7~8二肽片段、9~10二肽片段、12~13二肽片段、17~18二肽片段、21~22二肽片段、24~25二肽片段以及34~35二肽片段，其中7~8二肽片段为Boc‑His(Trt)‑Aib‑OH、9~10二肽片段为Fmoc‑Glu(OtBu)‑G1y‑OH、12~13二肽片段为Fmoc‑Phe‑Thr(tBu)‑OH、17~18二肽片段为Fmoc‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑OH、21~22二肽片段为Fmoc‑Glu(OtBu)‑G1y‑OH、24~25二肽片段为Fmoc‑Ala‑Ala‑OH、34~35二肽片段为Fmoc‑Arg(Pbf)‑Gly‑OH。通过本发明方法制备的司美格鲁肽收率高、纯度高。

摘要译文

引用

17

17. 专利权的终止

【专利/发明】 • CN201310585416.X • 张文治刘建马亚平袁建成 • 申请日：2013-11-19, 公开日：2018-04-06

申请人：深圳翰宇药业股份有限公司

公开（公告）号： CN104650209B

摘要：本发明涉及DiaPep277的片段固相合成方法：构建肽树脂A:H‑Val‑Ala‑Leu‑Leu‑Arg(pbf)‑Val‑Ile‑Pro‑Ala‑Leu‑Asp(OtBu)‑Ser(tBu)‑Leu‑Thr(tBu)‑Pro‑Ala‑Asn(Trt)‑Glu(OtBu)‑Asp(OtBu)‑树脂和肽树脂B:Fmoc‑Val‑Leu‑Gly‑Gly‑Gly‑2‑CTC树脂，然后将两个片段偶联。所述方法收率高且纯度好，为DiaPep277的工业规模生产提供了一种新的思路。

摘要译文

引用

18

18. 授权

【专利/发明】 • CN202010769665.4 • 向双春高峰刘聪翀李云平 • 申请日：2020-08-04, 公开日：2020-12-08

申请人：苏州金顶生物有限公司;大连阿拉宁生物技术有限公司

公开（公告）号： CN111732649B

摘要：本发明公开了一种结合连续流固相合成系统制备利拉鲁肽的方法，主链构造采用Boc‑His(x)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Gly，Fmoc‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Val‑Ser(Psi(me.me)Pro)‑OH,H‑Ser(tBu)‑Tyr(tBu)‑Leu‑Glu(OtBu)‑Gly‑Gln(Trt)‑Ala‑Ala‑Lys(Palm‑Glu‑OtBu)‑Glu(OtBu)‑Phe‑Ile‑Ala‑Trp(Boc)‑Leu‑Val‑Arg(y)‑Gly‑Arg(y)‑Gly‑树脂片段，同时采用连续流固相合成增长肽链。

摘要译文

引用

19

19. 授权

【专利/发明】 • CN201510735332.9 • 谷海涛徐峰刘标王良友 +2位作者 • 申请日：2015-11-03, 公开日：2018-10-02

申请人：江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司

公开（公告）号： CN105732798B

摘要：本发明涉及医药领域产品，是一种利拉鲁肽的合成方法，包括如下步骤：片段缩合成各类利拉鲁肽中间体；全保护利拉鲁肽的去保护，裂解；利拉鲁肽的纯化和冻干。该方法采用4+5+7+6+9的合成方式，同时开展5个片段的合成，大大缩短了产品的合成时间，同时通过对His‑Ala‑Glu‑Gly、Thr‑Phe‑Thr‑Ser‑Asp、Val‑Ser‑Ser‑Tyr‑Leu‑Glu‑Gly、Gln‑Ala‑Ala‑N6‑[N‑(1‑oxohexadecyl)‑Glu]‑Lys‑Glu‑Phe、Ile‑Ala‑Trp‑Leu‑Val‑Arg‑Gly‑Arg‑Gly‑OH等合成因子的分步解析，降低了固相合成中困难肽序的合成、解决了固相合成中批量放大的困难、提高了合成效率、由于片段合成是纯化难度有效的降低、同时大大降低了生产成本。

摘要译文

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20

20. 认领

【学位/硕士】 • 曾晨 • 浙江海洋大学 • 导师：周勇 • 2022年

摘要：本文以东海大黄鱼鲞的背脊鱼肉作为原料,通过单因素实验确定了提取大黄鱼鲞鲜味肽的最佳酶解条件,用超滤方法对酶解产物进行预分离,然后用葡聚糖凝胶G-15色谱柱、反相高效液相法对预分离产物进一步分离纯化,并用N端测序技术鉴定分离组分中多肽的氨基酸序列,根据理化性质预测结果对肽段进行筛选并合成,最后对鲜味强度较高的鲜味肽与鲜味受体T1R1/T1R3进行分子对接,探究其呈味机理。(1)首先优化东海大黄鱼鲞制备鲜味肽的工艺,以蛋白质含量、多肽的含量、酶解液多肽的相对分子质量的分布、滋味轮廓作为参考指标,对大黄鱼鲞原料和工具酶进行筛选,研究不同酶解方式、酶解时间、温度、p H值、料液比、酶的比例和酶的添加总量对大黄鱼鲞蛋白水解度和酶解液鲜味强度的影响,并通过响应面试验对酶解制备鲜味肽的工艺进行优化。结果表明:舟山市场销售的两种大黄鱼鲞中,水分含量低的大黄鱼鲞,其蛋白质含量更高,达到26.78%,水煮液的鲜味更高,且小分子多肽(<5 ku)的比例为11.09%,能够作为制备鲜味肽合适的酶解原料。用风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶4种蛋白酶分别酶解大黄鱼鲞,选取木瓜蛋白酶和风味蛋白酶作为最适水解酶,两者水解液鲜味值最高,且水解液多肽(<3 ku)的占比高,分别为70.24%和40.49%,木瓜蛋白酶和风味蛋白酶分别属于内切酶和外切酶,酶解作为位点也不同,通过进一步探究酶解方式对水解度和鲜味值的影响,以验证两酶水解的协同作用。第一步用木瓜蛋白酶进行水解,灭酶后加入第二步的风味蛋白酶,即双酶分步酶解法,通过二者结合使酶解产物的呈鲜效果提高,水解度和鲜味值分别为14.08%和7.33。并且,在酶解温度50℃,在料液比1:3.5,酶添加总量7400 U/g,双酶添加量之比为1:1时,酶解时间为5 h、反应p H值为6.8的条件下,酶解产物水解度和鲜味值达到最高,分别为35.05%和7.67。(2)其次为进一步鉴定鲜味肽的序列,对大黄鱼鲞酶解产物进行分离纯化。经过超滤膜、凝胶层析柱和反相高效液相色谱的逐级分离纯化,将各级分离得到的鲜味最佳的组分采取N末端测序法鉴定其多肽序列,共鉴定出12条多肽,筛除鉴定过程中有杂质干扰、可信度低的4条多肽序列,并以大黄鱼的同源性、溶水性和毒性为参考因素,成功筛选出Asp-Leu-Tyr-Glu(DLYE)、Glu-Pro-Arg-His-Thr(EPRH T)、Leu-Glu-Asn-Ser(LENS)、Leu-Pro-Ile-Glu-Asp(LPIED)和Ser-Phe-Arg-Ala-Asn(SFRAN)5条多肽序列。(3)最后验证和鉴定的多肽的呈鲜性和探究鲜味肽的呈鲜机理,采用固相合成法合成鉴定得到的小分子多肽序列,利用感官评价分析合成肽的滋味特征,并对鲜味受体进行同源建模,完成其余鉴定出的多肽的分子对接。结果显示,合成的5条多肽DLYE、EPRHT、LENS、LPIED和SFRAN均具有鲜味,且能够达到增鲜效果,其中,LPIED的鲜味值最高、增鲜效果最好。利用Modeller 10.2对受体T1R1/T1R3的晶体模型进行模拟构建,借助ZDock将两个亚基进行对接,选择与模板蛋白代谢型谷氨酸受体最接近的模型并优化。通过Discovery Studio 2019软件以鲜味肽作为配体,构建模型作为鲜味受体进行分子对接,结果显示,通过Modeller10.2构建同源性模型,模拟得到的晶体结构97.7%的氨基酸残基在允许区域内,是合理可靠的受体模型。将绘制并通过能量优化的多肽配体与优化的受体进行对接,5条鲜味肽均能与T1R1亚基的空腔捕蝇草区域的结合域进行对接,其受体T1R1/T1R3结合的关键氨基酸残基是Glu65、Arg393、Gly389,对接过程中受体与配体之间主要形成的相互作用力是离子键、氢键和范德华力,Glu65、Arg393、Gly389这三个氨基酸残基可能在制造鲜味中起关键作用,为大黄鱼鲞鲜味肽的呈鲜特性提供一定的参考,为大黄鱼鲞加工产业提供一定的理论依据。

摘要译文

关键词: 鲜味肽；大黄鱼鲞；同源建模；分子对接

引用

被引量 12