- 首页
- 产品推荐个人精选服务科研辅助服务教育大数据服务行业精选服务学科系列服务产品服务
- 期刊大全
- 充值
- 会员
- 职称材料
- 首页
- 产品服务
- 知识脉络
- 期刊大全
- 充值
- 会员
- 职称材料
智能检索
二次检索
任意字段
在结果中检索
在结果中去除
暂无数据
共
10
条结果 ，以下是1
-
10条
1 / 1
已选:0 清除
批量下载
批量引用
相关度
摘要： 为探讨发酵是否能提高麦麸多糖的抗氧化活性,本实验首先挑选受精后7~9 hpf(hours post fertilization, hpf)的斑马鱼受精卵,将其暴露在不同质量浓度(0、25、50、100、200、300μg/mL)的未发酵麦麸多糖(WBP)和发酵麦麸多糖(FWBP)溶液中,统计初孵仔鱼心率、测量其体长及卵黄囊大小,统计96 hpf时斑马鱼胚胎孵化率,评估WBP和FWBP对斑马鱼胚胎的安全性。在上述试验的基础上,将7~9 hpf的斑马鱼胚胎在不同质量浓度(0、50、100、200μg/mL)的WBP和FWBP溶液中预暴露到24 hpf,在72 hpf时通过荧光染色检测斑马鱼仔鱼活性氧(ROS)产生率、脂质过氧化率和细胞死亡率,分析过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果表明:高质量浓度(>300μg/mL)WBP和FWBP导致斑马鱼胚胎死亡率提高、心率和孵化率降低,体长变短,对斑马鱼胚胎的发育具有毒性作用;50、100、200μg/mL的WBP和FWBP均能降低了斑马鱼体内的ROS产生率、脂质过氧化率和细胞死亡率,提高斑马鱼胚胎抗氧化酶活性,且FWBP的作用效果优于WBP。研究结果表明,发酵可以提高麦麸多糖的抗氧化功能,为开发麦麸多糖作为一种抗氧化剂提供了参考。
关键词: 发酵 ；麦麸多糖 ；斑马鱼胚胎 ；抗氧化活性
被引量
4
摘要： 本研究利用红外光谱、紫外光谱、高效液相色谱、凝胶渗透色谱等手段对发酵麦麸阿魏酰低聚糖(FOs-FWB)的结构进行初步表征,再进一步利用体内法和体外法相结合,探讨FOs-FWB的抗氧化活性,并从Nrf2/Keap1信号通路解析其作用机制。主要研究内容及结果如下:试验一:FOs-FWB的结构表征研究本试验利用红外光谱、紫外光谱、高效液相色谱、凝胶渗透色谱等手段,对经Amberlite XAD-2型大孔吸附树脂和Sephadex LH-20型葡聚糖凝胶纯化的FOs-FWB进行结构表征。结果表明:FOs-FWB的重均分子量(Mw)为11.81 k Da,由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖组成,摩尔比为1.69:0.38:1.02:0.53:0.05:29.79:3.19:33.42:29.81:0.12。试验二:基于IPEC-J2细胞模型评价FOs-FWB的抗氧化活性本试验利用IPEC-J2细胞模型进行FOs-FWB体外抗氧化活性评价。通过不同浓度(25、50、100、200、400、800μg/m L)FOs-FWB对IPEC-J2细胞增殖率的影响,确定FOs-FWB的安全剂量,并检测IPEC-J2细胞内抗氧化相关指标和基因表达;在此基础上,利用LPS(10μg/m L,24 h)建立IPEC-J2细胞氧化损伤模型,测定氧化应激条件下FOs-FWB对IPEC-J2细胞增殖、抗氧相关指标和基因表达的影响,沿着Nrf2/Keap1途径探讨FOs-FWB对IPEC-J2细胞的保护机制。结果表明:(1)当FOs-FWB作用24 h后,50、100、200、400μg/m L FOs-FWB组的细胞增殖率分别提高到107.76%、109.68%、116.69%及105.94%,与此同时,FOs-FWB显著降低了细胞内ROS产量和MDA水平(P<0.05),并提高了IPEC-J2细胞内SOD、CAT、GSH-Px活性以及GSH含量(P<0.05),上调了GCLC、GCLM、NQO1、HO-1、Nrf2的m RNA表达量(P<0.05)。(2)10μg/m L LPS攻毒24 h后细胞增殖率降为75.63%(P<0.05),同时显著升高了细胞内ROS的生成量和MDA、PC、8-OHd G的水平(P<0.05),故利用LPS(10μg/m L,24 h)建立IPEC-J2细胞的氧化应激模型。(3)经过FOs-FWB(200μg/m L)预保护的细胞增殖率显著恢复至103.35%(P<0.05),并显著抑制了由LPS诱导的IPEC-J2细胞氧化应激模型中的ROS和MDA的产生(P<0.05),提高了CAT、SOD、GSH-Px活性和GSH的含量(P<0.05),上调了细胞内GCLC、GCLM、NQO1、HO-1、Nrf2的m RNA表达(P<0.05)。结果说明添加FOs-FWB可通过激活Nrf2/Keap1信号通路降低LPS诱导的IPEC-J2细胞中ROS和MDA水平,缓解LPS诱导的抗氧化酶活性的降低,从而缓解细胞的氧化损伤。试验三:基于斑马鱼胚胎模型评价FOs-FWB的抗氧化活性本试验利用斑马鱼胚胎模型进行FOs-FWB体内抗氧化活性评价。通过添加不同浓度(50、100、200、400、800μg/m L)FOs-FWB对斑马鱼胚胎存活率的影响,确定FOs-FWB的安全剂量,并在安全剂量下检测斑马鱼胚胎抗氧化相关指标;在此基础上,利用AAPH(15 mmol/m L)建立斑马鱼胚胎氧化损伤模型,测定氧化应激条件下FOs-FWB对斑马鱼胚胎抗氧化相关指标的影响。结果表明:(1)FOs-FWB在斑马鱼胚胎中的安全剂量为50～400μg/m L;同时添加50～400μg/m L FOs-FWB可显著降低斑马鱼胚胎ROS生成、细胞死亡及脂质过氧化水平(P<0.05);提高抗氧化酶SOD和的GSH-Px的活性(P<0.05)。(2)经过AAPH诱导的斑马鱼胚胎细胞死亡、ROS生成、脂质过氧化水平较对照组分别显著增加至121.88%、128.26%、131.75%(P<0.05),添加50～400μg/m L FOs-FWB可抑制由AAPH引起的斑马鱼细胞死亡和脂质过氧化水平(P<0.05),100～400μg/m L FOs-FWB则显著抑制了斑马鱼胚胎的ROS生成(P<0.05);同时,与AAPH组相比,50～400μg/m L FOs-FWB显著提高了斑马鱼胚胎CAT、SOD及GSH-Px活性。说明FOs-FWB可通过提高CAT、SOD及GSH-Px活性,有效抑制由AAPH引起的斑马鱼胚胎细胞死亡、ROS生成及脂质过氧化水平,从而缓解斑马鱼胚胎的氧化损伤。综上所述,本研究对FOs-FWB的结构进行初步表征,并进一步利用体内法和体外法相结合的方式,探讨了FOs-FWB的抗氧化作用及机制。即FOs-FWB主要由葡萄糖(29.79%)、木糖(33.42%)、阿拉伯糖(29.81%)构成,并可通过激活Nrf2/Keap1信号途径来促进下游II相解毒/抗氧化酶的表达与分泌,以此提高机体的抗氧化能力。
关键词: 发酵麦麸 ；阿魏酰低聚糖 ；IPEC-J2细胞 ；斑马鱼 ；抗氧化
被引量
2
摘要： 益生菌是定植于人体肠道、生殖系统内,可改善宿主微生态平衡、对宿主健康发挥有益作用的活性微生物的总称。戊糖片球菌,革兰氏阳性,隶属链球菌科片球菌属,已被批准为可食用菌种,广泛应用于动物生产、食品发酵等生产领域中,受到学者的高度重视,被认为是一种具有潜力的益生菌。多项研究证明戊糖片球菌具有抗氧化、抗菌、抑炎和提高宿主免疫力的生物活性。结核病是一种由结核分枝杆菌感染引起的重大人畜共患传染病,影响人类健康和畜牧业发展,对全球的国计民生影响巨大。耐药结核在全球的出现、扩散与流行,使结核病防控与治疗形势更加严峻,引入新的策略来控制结核病和提高治疗效果尤为重要。戊糖片球菌的益生功能为防控和治疗结核病提供了新思路,由于其抗结核分枝杆菌活性与结核分枝杆菌感染宿主过程中对免疫应答的调节作用尚不明确,因此本课题以实验室前期分离得到的九株戊糖片球菌为研究对象,体外评估戊糖片球菌的抗耻垢分枝杆菌活性,应用斑马鱼模型,分析戊糖片球菌对脂多糖(LPS)诱导的炎症反应的调节作用,应用体外巨噬细胞模型,明确戊糖片球菌在耻垢分枝杆菌侵染巨噬细胞过程中调节免疫应答和巨噬细胞吞噬能力的作用,为阐明戊糖片球菌益生性提供科学理论依据,推动其在结核病防控和治疗的应用。第一部分,体外评估戊糖片球菌的抗耻垢分枝杆菌活性。分别收集九株戊糖片球菌发酵上清液,冷冻干燥后,使用琼脂扩散法,通过检测抑菌圈直径大小评估戊糖片球菌代谢产物对耻垢分枝杆菌的抑菌活性。通过调节发酵上清液pH值分析其抑菌活性是否与有机酸相关,并通过酶处理发酵上清液进一步确定具有抑菌活性的戊糖片球菌代谢产物。实验结果显示,LY-8菌株和LY-9菌株的代谢产物在浓度为120mg/m L时抑菌作用最强,LY-8菌株的代谢产物在浓度为240 mg/m L时抑菌作用最强。LY-6菌株和LY-7菌株上清液中起抑菌作用的物质可能是不饱和酸和细菌素,其余菌株上清液中起抑菌作用的物质可能是细菌素。第二部分,应用斑马鱼模型,探究戊糖片球菌对LPS诱导的炎症反应的调节作用。使用不同浓度的戊糖片球菌代谢物处理斑马鱼胚胎,根据绘制的斑马鱼生存曲线,确定适宜的戊糖片球菌代谢物浓度为1.5μg/L、1μg/L、0.5μg/L。LPS诱导斑马鱼炎症模型,使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎症因子m RNA的表达,探讨戊糖片球菌代谢物的抑炎活性。实验结果显示,九株戊糖片球菌代谢物可显著降低促炎因子il6,il1β的表达,提高抑炎因子il10的表达,其中LY-8菌株的抑炎活性和剂量呈负相关,抑炎效果优于其他菌株。第三部分,体外细胞模型明确戊糖片球菌的抑炎活性及其在耻垢分枝杆菌侵染巨噬细胞过程中调节免疫应答和巨噬细胞吞噬能力的作用。使用Cell Counting Kit-8(cck-8)和台盼蓝计数法确定了九株戊糖片球菌的实验浓度为25μg/mL、12.5μg/mL、6.25μg/mL,通过LPS体外诱导小鼠单核巨噬细胞Raw264.7构建炎症模型,并建立耻垢分枝杆菌感染巨噬细胞模型,q RT-PCR检测炎症因子m RNA的表达,评价不同剂量的戊糖片球菌代谢产物对巨噬细胞免疫应答能力的调节作用。实验结果显示,九株戊糖片球菌可以显著下调促炎因子IL-6和IL-1β的表达,上调抑炎因子IL-10的表达,耻垢分枝杆菌感染巨噬细胞过程中,九株戊糖片球菌对细胞免疫应答起到调节作用,LY-8菌株抑炎作用最强,抑炎活性和剂量呈负相关,调节免疫应答能力最强。第四部分,利用耻垢分枝杆菌侵染巨噬细胞,通过在蛋白水平检测戊糖片球菌代谢物对细胞骨架的影响,同时采用激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞内细菌荧光强度,探讨戊糖片球菌代谢物对巨噬细胞吞噬能力的影响。实验结果显示,九株戊糖片球菌可以促进肌动蛋白细胞骨架发生重塑,显著增强巨噬细胞内细菌荧光强度,LY-8菌株促进巨噬细胞吞噬耻垢分枝杆菌能力最强。以上实验结果说明戊糖片球菌具有抗耻垢分枝杆菌活性和抑炎作用,可调节耻垢分枝杆菌侵染巨噬细胞过程中的免疫应答,通过影响细胞骨架提高巨噬细胞吞噬能力,九株戊糖片球菌中LY-8菌株抗菌性、抑炎性、调节免疫应答的能力优于其他菌株,但具体的作用机制还需要进一步探究。
关键词: 戊糖片球菌 ；抗耻垢分枝杆菌活性 ；免疫应答 ；巨噬细胞 ；吞噬能力
被引量
2
摘要： 枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBPs)作为枸杞子中主要的活性成分,具有抗氧化、抗衰老、免疫调节等多种生物活性。以往枸杞多糖的研究多以提取方法和生物活性为主,其次是对单一分子量多糖的结构表征和活性进行研究,对于分子量-结构表征-生物活性之间关系的探索还很缺乏。另外,对于枸杞多糖的消化特性尚不明确。因此本文对枸杞多糖的提取方法优化、分离和结构表征、抗氧化和免疫调节活性,以及消化特性进行系统研究。主要研究结果如下:1.水提醇沉法制备枸杞多糖的工艺优化采用宁夏枸杞为原料,以多糖提取率为响应值,通过单因素和响应面实验结合优化水提醇沉法提取枸杞多糖工艺参数,最终得到枸杞多糖水提醇沉法的最优工艺条件:提取温度100℃;提取时间75 min,液料比17 mL/g。在该工艺条件下,枸杞多糖的提取率为15.58±0.19%,多糖含量为42.05±1.24%,多糖得率为6.55±0.19%。2.枸杞多糖的分离和结构鉴定采用超滤膜分离技术对多糖进行分离,得到了两个多糖LBPs-2(7.481 kDa)和LBPs-3(46.239 kDa),以及一个寡糖LBPs-1(1.912 kDa)。然后通过化学分析法、高效阴离子交换色谱脉冲安培检测(HPAEC-PAD)法、红外光谱(Fouriertransform infrared spectroscopy,FI-IR)扫描、刚果红实验、原子力显微镜(Atomic force microscopy,AFM)扫描和核磁共振分析对其结构进行解析。发现它们都具有相似的化学成分,单糖类型和FI-IR光谱。但是不同的分子量会显著改变它们的化学组成比和单糖比。其中,LBPs-1和LBPs-2主要由葡萄糖组成,而LBPs-3主要由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖组成。另外,刚果红实验显示仅LBPs-2和LBPs-3中存在三螺旋结构,并通过AFM验证了它们的存在。此外,通过NMR分析,LBPs-2的糖残基有→4)-β-Galp-(1→,α-Glcp-(1→,→3)-α-Glcp-(1→,β-Glcp-(1→,→3,4)-β-Arap-(1→,→3)-α-Arap-(1→and→4)-α-D-GlcpA-(1→,而 LBPs-3 的糖残基有→3,4)-α-Arap-(1→,→3,4)-α-Galp-(1→,→3)-α-Galp-(1→,→4)-β-Arap-(1→,β-Arap-(1→,→3,4)-α-Galp-(1→and→3)-α-GlcpA-(1→.3.枸杞多糖的体外抗氧化和体内免疫调节活性以氧自由基吸收能力(Oxygen radical absorbance capacity,ORAC)、ABTS+自由基清除能力和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性为手段评价了它们的体外抗氧化活性。结果表明,LBPs-3的ORAC和SOD活性最高,但LBPs-2对ABTS+自由基清除能力最好,导致这种结果的原因是由于多糖抗氧化活性不是由单一因素决定的,其生物活性取决于化学反应机理、化学组成、单糖组成比和分子量等因素的协同作用。此外,还探究了 LBPs-2和LBPs-3在基于酒石酸长春瑞滨注射液(Vinorelbine tartrate injection,VTI)诱导的斑马鱼免疫损伤模型下对T细胞和巨噬细胞的促进增值效果。结果表明,LBPs-2和LBPs-3可以通过促进T细胞和巨噬细胞的增殖,在斑马鱼模型中发挥免疫调节作用。4.枸杞多糖的体外模拟消化及其对抗氧化活性的影响通过建立枸杞多糖体外模拟消化模型评价了枸杞多糖的消化特性以及消化前后抗氧化活性的变化。结果显示,在消化过程中,低分子量的多糖更易降解,而高分子量的多糖则相对稳定,且消化过程中主要消耗是葡萄糖。此外,在消化后,枸杞多糖的抗氧化活性显著提升,可能与蛋白质和总酚相对含量的增加有关。
关键词: 枸杞多糖 ；结构表征 ；抗氧化活性 ；免疫调节活性 ；体外模拟消化
被引量
2
摘要： 随着发酵技术的不断完善和发展，利用微生物发酵药用植物制备天然化妆品原料已成为国内外研究热点。藤茶是一种具有多重药理作用和保健功能的药食同源类植物，在我国已有上千年的应用历史，但少有其作为化妆品原料的开发应用。 目的：以藤茶为研究对象，利用微生物发酵技术，制备一种具有抗氧化、祛黑色素、抗炎、抑菌功效的天然化妆品原料。 方法：通过筛选藤茶发酵的优势菌株、优化发酵体系、评价藤茶发酵液的安全性及其作用功效，挖掘其在化妆品领域的应用潜力。第一，选取包括酵母菌、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌等在内的19种菌株，通过对比不同菌株发酵的藤茶发酵液自由基清除率及活性物质含量的变化，筛选优势菌株。第二，利用单因素法和响应面优化法，得到最佳的藤茶发酵体系。第三，利用H2O2诱导的人皮肤成纤维细胞（HSF）作为细胞氧化模型、AAPH诱导的斑马鱼胚胎作为动物氧化模型，利用α-MSH诱导的小鼠黑色素瘤细胞B16-F10作为黑色素细胞模型、斑马鱼幼鱼作为黑色素动物模型，利用LPS诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7作为细胞炎症模型、经50%断尾处理的斑马鱼幼鱼作为动物炎症模型，利用大肠杆菌、乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）、白色念珠菌和表皮葡萄球菌作为受试菌，分别探究藤茶发酵液作为抗氧化、祛黑色素、抗炎、抑菌等功能性化妆品原料的潜力;第四，利用鸡胚绒毛尿囊膜进行体外眼刺激性实验，探究藤茶发酵液的刺激性/腐蚀性，评价其安全性能。 结果：首先，筛选出了藤茶发酵的优势菌株。利用受试的19种菌株进行发酵，发现它们对藤茶发酵液的自由基清除率和活性物质的含量有不同程度的影响，其中酵母菌Y-401是作用最为明显的菌株，它使藤茶发酵液抗氧化活性提高了4.1868%、总黄酮含量提高了7.7181 mg/mL、总多酚含量提高了0.2969 mg/mL，因此，将酵母菌Y-401作为藤茶发酵的优势菌株。随后，利用单因素优化法得到七个因素的最优值后，结合响应面优化法得到了最佳发酵体系，即发酵时间为94.60 h，加料浓度为115.21 g/L，发酵温度为34.97℃，在此条件下的藤茶发酵液的DPPH清除率达到85.4861%，总黄酮提取率高达42.7879%，总多酚提取率为11.8981%，总多糖提取率为7.1639%。接着，将此温和发酵条件下制备得到的新型、有效成分提取率较高的藤茶发酵液作为研究对象，挖掘其在功效化妆品方面的应用潜力，发现随着藤茶发酵液浓度的升高，氧化模型中的丙二醛（MDA）含量逐渐降低，总抗氧化能力（T-AOC）、超歧过氧化物酶活力（SOD）及过氧化氢酶活力（CAT）逐渐升高;黑色素模型中酪氨酸酶活力逐渐降低，黑色素生成的抑制率逐渐升高;细胞炎症模型中TNF-α和NO含量逐渐降低， RAW 264.7细胞逐渐恢复至正常形态，斑马鱼断尾部位的炎症细胞募集减少;常见腐败菌的生长受到抑制。最后，通过鸡胚绒毛尿囊膜的体外眼刺激性实验发现，在上述功效性实验的有效作用浓度范围内，藤茶发酵液是安全、无刺激性/腐蚀性的。 结论：综上所述，本研究利用微生物发酵技术制备了一种绿色、安全的天然化妆品原料，其具备抗氧化、抗炎、美白等功效化妆品或防腐剂的应用潜力。
关键词: 化妆品 ；藤茶发酵液 ；制备工艺 ；生物学活性
摘要： 本试验以米糠为研究对象,麸皮为辅料,进行复合菌(酵母菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌)固态发酵,研究固态发酵对米糠抗氧化能力的影响,分析发酵米糠提取物(FRBE)的活性成分,并基于斑马鱼氧化应激模型探究了 FRBE抗氧化活性。为米糠的高附加值开发提供参考。论文主要包括以下三个部分。(1)固态发酵对米糠抗氧化活性影响以DPPH自由基清除率为指标,研究了发酵时间、含水率、腐植酸钠添加量、酶种类及酶添加量对米糠抗氧化活性的影响。结果表明,发酵时间为72 h,含水率为50%,腐植酸钠添加量0.5%,葡聚糖酶添加量为500 U时,复合菌发酵米糠的抗氧化活性最高,DPPH自由基清除率达85.55%。(2)发酵前后米糠提取物活性成分分析采用传统的水提法提取发酵米糠产物中的活性成分,以发酵米糠提取物的DPPH自由基清除率为指标,依次研究了提取时间,提取温度,料水比对其影响。结果发现提取时间为60 min,提取温度为85℃,料水比为1:20(g/mL)显著提高发酵米糠提取物的DPPH自由基清除率。水提物活性成分结果表明,与米糠提取物(RBE)相比较,FRBE中多酚、黄酮和蛋白含量显著提高(P<0.05),分别提高了 68.17%、80.29%和28.93%;多糖含量有明显下降(P<0.05),但FRBE的甘露糖比例显著提高。米糠酚酸主要由阿魏酸、咖啡酸和儿茶素组成,FRBE中含量阿魏酸、咖啡酸和儿茶素分别达718.75mg/kg、6.42 mg/kg和9.96 mg/kg,显著高于RBE。由此可见,发酵可以提高米糠多酚、黄酮等抗氧活性成分的可溶性,改变其单糖组成以及释放出更多游离酚酸。(3)发酵前后米糠提取物体内抗氧化活性评价研究不同浓度FRBE和RBE对偶氮二异丁脒盐酸盐(AAPH)诱导的斑马鱼活性氧(ROS)含量、脂质过氧化程度和细胞死亡率的影响,并测定斑马鱼胚胎过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果表明,FRBE对AAPH诱导产生的ROS、脂质过氧化和细胞死亡均有降低作用,且均高于RBE组。此外,FRBE可提高斑马鱼胚胎的抗氧化酶活性。说明米糠水提物对AAPH诱导的斑马鱼氧化应激具有缓解作用,且发酵提高了米糠的抗氧化活性。综上,菌酶协同发酵可以提高米糠的抗氧化能力,释放出更多游离的多酚、黄酮等活性成分,可以有效缓解AAPH诱导的斑马鱼氧化应激。
关键词: 米糠 ；固态发酵 ；抗氧化活性 ；斑马鱼氧化应激模型
被引量
8
摘要： 甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)是一种药食同源的草本植物,广泛用于中药处方与食品工业中。现今使用的甘草主要为其根与根状茎,而地上部分却则弃之不用或燃料低值化处理。目前关于甘草根及根状茎的成分及生理活性研究已相当充分,而对甘草地上部分却研究较少。本论文通过以斑马鱼胚胎为模型,对比分析甘草根、茎、叶提取物对孵化率的影响,确定甘草叶的研究价值;优化甘草叶多糖、多酚的固态发酵制备工艺,并对发酵甘草叶多糖、多酚进行结构表征、组成分析及抗氧化活性分析,以期为甘草叶的高值利用提供理论指导。具体研究内容如下:
(1)甘草不同部位提取物对斑马鱼胚胎存活率和孵化率的影响
以斑马鱼胚胎为模型,对比甘草不同部位提取物对斑马鱼胚胎孵化率的影响,及其对LPS处理斑马鱼胚胎存活率和孵化率的影响。结果表明:10μg/m L甘草根提取物组提高了48和60 hpf斑马鱼胚胎孵化率,200μg/m L甘草茎提取物提高了60 hpf斑马鱼胚胎孵化率,40μg/m L甘草叶提取物组提高了60 hpf斑马鱼胚胎孵化率。10、200和40μg/m L的甘草根、茎和叶提取物提高了48和60 hpf LPS处理斑马鱼胚胎孵化率,且48 hpf时40μg/m L甘草叶提取物组孵化率高于10μg/m L甘草根提取物和200μg/m L甘草茎提取物。结合甘草根、茎、叶三个部位提取率结果(甘草根>甘草叶>甘草茎),相较于甘草茎,甘草叶更具有开发利用潜力。
(2)甘草叶的发酵工艺优化
以甘草叶为研究对象,采用菌酶协同固态发酵技术,分别以多糖含量(mg/g)及多酚含量(mg/g)为指标,应用单因素试验设计优化发酵工艺,结果表明:选用果胶酶且添加量为4%,菌添加量为3‰,发酵时间36 h,发酵温度27℃,料液比1:0.7,在此发酵条件下得到的甘草叶多糖含量为106.5 mg/g,与未发酵甘草叶相比提高了154%。选用果胶酶且添加量为2.5%,菌添加量为2.5‰,发酵时间36 h,发酵温度27℃,料液比1:0.7,在此发酵条件下得到的甘草叶多酚含量为490.3 mg/g,与未发酵甘草叶相比提高了20.2%。
(3)发酵甘草叶多糖的理化特性及抗氧化活性分析
通过傅里叶变换红外光谱特征、多糖含量、单糖组成、分子量对甘草叶多糖(GLPS)和发酵甘草叶多糖(FGLPS)进行理化特性分析,以DPPH、羟基自由基的清除能力及还原力为指标,评价GLPS和FGLPS的体外抗氧化活性。结果表明:GLPS和FGLPS为酸性多糖,同时存在α-糖苷键和β-糖苷键的吡喃糖环结构;相较于GLPS,FGLPS多糖含量更高,新增了古罗糖醛酸,葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、古罗糖醛酸、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸单糖摩尔比增加。GLPS和FGLPS均具有一定的DPPH、羟基自由基清除能力及还原力,且FGLPS的抗氧化能力强于GLPS。
(4)发酵甘草叶多酚的组成及抗氧化活性分析
采用超高效液相色谱串联质谱检测法对甘草叶多酚(GLP)和发酵甘草叶多酚(FGLP)进行酚类物质组成分析,通过测定DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率和还原力来评价GLP和FGLP的体外抗氧化活性。结果表明:GLP和FGLP组成差异显著,共检测出259种差异代谢物,主要上调的包括黄酮41种,酚酸类23种,生物碱22种,萜类12种,木脂素和香豆素6种,醌类3种,鞣质1种和其他类13种。发酵前后甘草叶多酚均展现出一定的抗氧化能力,且呈剂量依赖型,FGLP的DPPH自由基清除力和还原力均高于GLP,羟基自由基清除力高于BHA和GLP。
关键词: 发酵甘草叶 ；斑马鱼 ；多糖 ；多酚 ；抗氧化活性
摘要： 糖蛋白是一种糖类与蛋白质通过共价键结合在一起的生物大分子,广泛分布于动物、植物和某些微生物中,具有增强免疫调节、抑制肿瘤、降低血糖、抗氧化等作用。如今在许多植物中,如大豆、甘薯、山药、裸燕麦等提取出的糖蛋白生物活性已被研究证明。发酵麸皮是通过微生物发酵法所制备的小麦麸皮,菌酶协同发酵可以使小麦麸皮的纤维结构发生变化,从而提高营养物质含量,增强其抗氧化能力。目前对麸皮的研究多集中在多糖,多酚,阿魏酸等活性物质上,国内外对发酵麸皮糖蛋白的研究尚未见报道。因此,从发酵麸皮中提取出糖蛋白,并进一步研究它的性质、功能活性及结构组成有重要的理论和现实意义。本文通过菌酶协同发酵麸皮,采用单因素试验确定了最佳发酵条件,提取分离得到发酵麸皮糖蛋白并对其体内外抗氧化活性进行研究,最后经柱层析法对糖蛋白进一步的纯化,并对纯化后的样品进行结构表征。论文主要包括以下四个部分:1.发酵麸皮糖蛋白的制备本试验采用呼吸袋发酵技术,菌酶协同发酵麸皮,单因素法设置不同的复合菌添加量、纤维素酶添加量、发酵温度、发酵时间、含水量,以蛋白含量和多糖含量为指标,得到最佳发酵工艺参数为:复合菌添加量0.1%,纤维素酶添加量2g,发酵温度28。C,发酵时间3天,含水量40%。通过热水浸提法得到发酵麸皮提取物,醇沉并筛选得出最佳乙醇浓度100%、Sevage法去游离蛋白、透析分离得到发酵麸皮糖蛋白(FWBG)。2.发酵麸皮糖蛋白的验证通过一系列颜色反应检测该糖蛋白含蛋白质和酸性多糖、不含鞣质和淀粉。SDS-PAGE电泳检测表明FWBG为单一条带,且考马斯亮蓝染色和糖染条带位置一致,分子量大致在40 kDa,验证其为糖蛋白。3.发酵麸皮糖蛋白抗氧化活性评价利用DPPH、羟基自由基的清除能力以及其还原力评价FWBG的体外抗氧化活性。结果表明,FWBG有较强的抗氧化能力,且随着浓度的增加,对DPPH、羟基自由基的清除能力以及其还原力越强,呈现一定的量效关系。以斑马鱼胚胎为模型对FWBG进行体内抗氧化活性分析,选取FWBG的实验安全浓度:0.05mg/mL、0.1mg/mL及0.2mg/mL。验证FWBG在AAPH诱导的氧化应激中对斑马鱼胚胎存活率的影响,结果表明通过不同浓度的FWBG(0.05mg/mL,0.1mg/mL,0.2mg/mL)协同处理后,较AAPH组斑马鱼胚胎的存活率显著提高,FWBG可以保护斑马鱼免受AAPH的伤害。采用DCFH-DA、DPPP、AO荧光染料处理后再用荧光显微镜拍照并分析荧光强度发现FWBG在斑马鱼体内还具有清除ROS,降低脂质过氧化以及细胞死亡率的作用,有较好的抗氧化效果且与其浓度有较好的相关性。4.发酵麸皮糖蛋白的分离及结构表征采用DEAE-52纤维素柱纯化FWBG,以上样浓度(5mg/mL、10mg/mL)、洗脱剂(蒸馏水、0.1、0.2mol/LNaCl)及流速(0.5mL/min、1mL/min)为单因素,蛋白质和多糖的吸收峰为检测指标,对最终的洗脱条件进行确定。最终确定上样浓度为10 mg/mL,洗脱剂为蒸馏水和0.1mol/LNaCl,洗脱速度0.5 mL/min,经过DEAE-52纤维素柱洗脱纯化后得到一个主组分FWBG-1。分析FWBG-1的红外图谱、氨基酸组成、单糖组成及扫描电镜。结果显示:在4000-400 cm-1范围内的红外吸收光谱中FWBG-1表现出多个典型的多糖和蛋白质的吸收峰,并且得出FWBG-1糖蛋白糖链是吡喃糖的β-型糖苷键结构;该糖蛋白包含有17种不同类型的氨基酸,其中谷氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、精氨酸的含量较高;通过高效液相色谱法测得FWBG-1含有10种单糖,各单糖组成的摩尔百分比为:甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖=4.18:0.57:0.28:0.21:0.07:33.33:4.59:31.29:25.31:0.16,其中葡萄糖含量最高,达到33.33%;在扫描电子显微镜观察FWBG-1的形貌,其表现出凝集比较分散的片状结构,且表观呈现大小不均、表面光滑的圆形球体。
关键词: 发酵麸皮糖蛋白 ；提取分离 ；斑马鱼 ；抗氧化活性 ；纯化 ；结构表征
被引量
11
摘要： 本研究分别从益生菌发酵前后麦麸中提取水溶性多糖,经分离纯化得到麦麸多糖（Wheat bran polysaccharides,WBP）和发酵麦麸多糖（Fermented wheat bran polysaccharides,FWBP）,对发酵前后麦麸多糖的结构特征和体内外活性及功能进行初步对比研究。主要研究内容及结论归纳如下:（1）益生菌发酵前后麦麸多糖结构特征的差异研究通过DEAE-52色谱柱对益生菌发酵前后麦麸粗多糖进行分离纯化得到四个组分,分别标记为:WBP-1、WBP-2、FWBP-1和FWBP-2,收集组分得率最高的WBP-1和FWBP-1进行对比研究。通过红外光谱（FT-IR）、高效液相色谱（HPLC）和凝胶渗透色谱（GPC）等技术,对发酵前后麦麸多糖的结构特征进行分析。经红外光谱图分析发现,WBP-1和FWBP-1均具有典型的多糖特征吸收峰,且FWBP-1在3400、1600、1400和1040 cm-1处具有更宽、更强的吸收峰。单糖组成结果显示WBP-1和FWBP-1主要由阿拉伯糖,木糖和葡萄糖组成,但其比例存在差异,且FWBP-1中还含有岩藻糖。凝胶渗透色谱分析得出,FWBP-1的相对分子质量（Mw）低于WBP-1。（2）益生菌发酵前后麦麸多糖对斑马鱼胚胎抗氧化功能影响的对比研究以还原力、DPPH（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）和羟基自由基的清除能力为指标,评价发酵前后麦麸多糖的体外抗氧化活性。分别以正常斑马鱼胚胎和AAPH(2,2′-azobis（2-methylpropionamidine）dihydrochloride)诱导的斑马鱼胚胎氧化应激模型,对比WBP-1和FWBP-1对斑马鱼胚胎抗氧化功能影响。结果发现,FWBP-1的还原力和自由基清除能力显著高于WBP-1（P<0.05）。在浓度为200μg/m L时,FWBP-1组斑马鱼胚胎ROS产生量、脂质过氧化率和细胞死亡率显著低于WBP-1组（P<0.05）,而FWBP-1组斑马鱼胚胎CAT、SOD和GSH-Px活性均显著高于WBP-1组（P<0.05）。在浓度为50μg/m L时,FWBP-1对氧化应激下斑马鱼胚胎ROS产生量的缓解作用显著高于WBP-1（P<0.05）。（3）益生菌发酵前后麦麸多糖对斑马鱼仔鱼肠道蠕动促进作用影响的对比研究分别以斑马鱼仔鱼和盐酸洛哌丁胺诱导的斑马鱼肠道蠕动抑制模型,对比WBP-1和FWBP-1对斑马鱼仔鱼肠道蠕动影响。结果显示,在浓度为10和20μg/m L时,FWBP-1对斑马鱼仔鱼肠道蠕动的促进作用显著强于WBP-1（P<0.05）;在浓度为20μg/m L时,FWBP-1对盐酸洛哌丁胺诱导的斑马鱼仔鱼肠道蠕动抑制的缓解作用强于WBP-1（P<0.05）。（4）饲料中添加益生菌发酵前后麦麸多糖对斑马鱼幼鱼生长性能和肠道健康的影响以斑马鱼幼鱼为动物模型,研究益生菌发酵前后麦麸多糖对其生长性能和肠道健康的影响。试验选取健康、体重相近的35日龄斑马鱼幼鱼,随机分成5组:基础饲料（对照组）、基础饲料+500 mg/kg WBP-1组、基础饲料+1000 mg/kg WBP-1组、基础饲料+500 mg/kg FWBP-1组和基础饲料+1000 mg/kg FWBP-1组,每个组6个重复,每个重复10尾鱼。试验期56天。结果发现,添加量为500 mg/kg时,FWBP-1组的斑马鱼肠道绒毛高度显著高于WBP-1（P<0.05）;FWBP-1组变形菌门相对丰度显著低于WBP-1组（P<0.05）,拟杆菌门、放线菌门和厚壁菌门的相对丰度显著高于WBP-1组（P<0.05）。添加量为1000 mg/kg时,FWBP-1组斑马鱼的WG和SGR显著高于WBP-1组,FCR显著低于WBP-1组（P<0.05）;FWBP-1组斑马鱼肠道的p38、Nrf2、CAT和GST、TJP1α、Mucin2.1、Mucin5.1、MMP9和defensin1的m RNA表达量显著高于WBP-1组（P<0.05）;FWBP-1组变形菌门和气单胞菌属的相对丰度显著低于WBP-1（P<0.05）,放线菌门和厚壁菌门的相对丰度显著高于WBP-1组（P<0.05）。综上所述,益生菌发酵在一定程度上改变了麦麸多糖的基本结构特征,提高了其体外抗氧化活性,对斑马鱼的抗氧化功能和肠道健康有更强的改善作用。
关键词: 益生菌 ；发酵 ；麦麸多糖 ；结构特征 ；抗氧化功能 ；肠道健康 ；斑马鱼
被引量
7
摘要： 本研究通过制备金露梅绿茶水提物,采用体外抗氧化法研究了金露梅绿茶水提物的抗氧化活性,并通过建立由脂多糖诱导的Wistar大鼠氧化应激模型进行体内抗氧化活性评价;进一步通过构建斑马鱼眼细胞凋亡模型,研究金露梅绿茶水提物对眼组织中视网膜细胞的影响。并利用网络药理学的研究方法综合分析金露梅绿茶水提物抑制视网膜细胞凋亡的作用机制,主要研究结果如下:1、通过测定金露梅绿茶水提物的DPPH、ABTS、FRAP清除率,结果显示,在金露梅绿茶水提物浓度1.00 mg/m L时,其DPPH自由基清除率达93.50%,ABTS自由基清除率86.72%。金露梅绿茶水提物浓度为0.0016～1.00 mg/m L时,总抗氧化能力(ABTS、FRAP法)逐渐增强,呈剂量依赖性。2、利用脂多糖诱导的氧化损伤模型检测金露梅绿茶水提物的体内抗氧化性。结果显示,与模型组相比,金露梅绿茶水提物干预后,SOD、GSH-Px及CAT活力上升(P<0.01),而MDA含量显著降低(P<0.01)。3、利用霉酚酸吗啉乙酯诱导的斑马鱼眼凋亡模型,研究金露梅绿茶水提物对眼组织视网膜细胞凋亡的抑制作用。结果显示,金露梅绿茶水提物对眼细胞凋亡抑制功效的MTC为125μg/m L;荧光强度表型图结果显示,金露梅绿茶水提物在低(13.9μg/m L)、中(41.7μg/m L)、高(125μg/m L)剂量,眼细胞凋亡抑制功效分别为81%、108%和137%;眼组织病理学结果显示,金露梅绿茶水提物干预后,视网膜各层结构边界清楚,视杆、视锥等凋亡细胞数量明显减少,晶状体结构较为完整,大部分细胞形态趋近正常。说明金露梅绿茶水提物对斑马鱼模型的眼组织(主要为视网膜)细胞凋亡有明显的抑制功效。4、基于前期从金露梅中分离得到的41种化合物,分别对其进行靶点预测,与收集的青光眼、视网膜色素变性的相关靶点做交集,潜在靶点分别有35、14个,分别对潜在靶点进行蛋白质间相互作用分析,将数据导入Cytoscape3.6.1软件进行可视化分析。将潜在靶点进行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析,GO结果显示,主要通过ATP binding、protein serine/threonine kinase activity、Hsp90 protein binding等的生物过程,而参与调控能量代谢及内质网稳态。KEGG结果显示,主要通过HIF-1 signaling pathway、TNF signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathwa y、m TOR signaling pathway、Protein processing in endoplasmic reticulum等通路的调节发挥作用,提示金露梅绿茶可能通过参与炎症反应、线粒体中细胞凋亡信号通路发挥抑制视网膜细胞凋亡的作用;并采用Cytoscape3.6.1软件,构建金露梅活性成分-靶点-通路网络图,筛选出主要活性化合物(+)-catechin-7-O-glucoside、querceti n、naringenin、gallic acid、1,6-di-O-galloyl-β-D-glucose、1-O-galloyl-β-D-glucose、3-methoxysalicylic acid、1-[2,3-dihydro-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(hydroxy-met hyl)-7-methoxy-5-benzofuranyl]-1,2,3-propanetriol等与相关靶点通路间的关系;分子对接结果显示上述活性化合物与关键靶点蛋白对接均可自发结合,且活性化合物与TNF、VCP及MMP9受体蛋白结合最紧密,结合能最低。表明金露梅绿茶中的8种活性化合物可能通过作用于TNF、VCP、MMP9等多种关键靶点调控细胞凋亡、肿瘤坏死因子、PI3K-Akt及内质网蛋白加工等多条信号通路,发挥改善视网膜细胞凋亡相关疾病的作用。
关键词: 金露梅绿茶 ；抗氧化 ；斑马鱼 ；视网膜细胞 ；网络药理学 ；分子对接
被引量
8