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摘要： 为了解宁前胡内生真菌Fusarium tricinctum固体发酵代谢产物的化学成分,采用硅胶色谱、中压以及制备液相等方法对其进行分离鉴定和抗肿瘤活性研究。结果表明,从其中分离得到14个化合物,结构鉴定分别为fungerin (1)、fusagerins F (2)、6-[(3R)-3-hydroxybutan-2-yl]-5-(hydroxymethyl)-4-methoxy-2H-pyran-2-one (3)、6-[(3S)-3-hydroxybutan-2-yl]-5-(hydroxymethyl)-4-methoxy-2H-pyran-2-one(4)、6α-chlamydosporol(5)、6β-chlamydosporol(6)、(3R,4R)-(–)-4-hydroxymellein(7)、(3R)-(–)-8-hydroxymellein (8)、enniatin B (9)、enniatin B1 (10)、enniatin A1 (11)、enniatin A (12)、enniatin B3 (13)和enniatin B2 (14)。所有化合物均为首次从宁前胡内生真菌中分离得到。体外抗肿瘤活性试验表明化合物均无显著的细胞毒活性。
关键词: 宁前胡 ；内生真菌 ；代谢产物 ；抗肿瘤活性
被引量
8
摘要： 为研究猕猴桃内生真菌Fusarium tricinctum的固体发酵次级代谢产物及其抗菌活性,采用正/反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及HPLC制备等方法,从Fusarium tricinctum的大米发酵提取物中分离得到15个化合物.通过核磁共振、高分辨质谱以及文献调查等方法将化合物结构鉴定为:1H-indole-3-carboxaldehyde(1)、indole-3-acetic acid(2)、indole-3-acetic acid methyl ester(3)、nicotinic acid(4)、N-acetylanthranilic acid(5)、4-hydroxybenzaldehyde(6)、methyl 4-hydroxybenzeneacetate(7)、methyl p-hydroxyphenyl acetate(8)、methyl 4-hydroxy3-methoxyphenylacetate(9)、α-hydroxy-β-phenylpropionic acid(10)、methyl 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzeneacet ate(11)、3,4,5-trimethoxyphenylacetic acid methyl ester(12)、3,7,9-trihydroxy-1-methyl-6H-dibenzo[b,d]pyran-6-one(13)、enniatin B1(14)和enniatin A1(15).化合物14对丁香假单胞杆菌猕猴桃变种(Pseudomonas syringae pv.Actinidiae,Psa)有一定的抑制作用(MIC为25µg/mL).
关键词: 猕猴桃内生真菌 ；Fusarium tricinctum ；化学成分 ；抗菌活性
被引量
1
摘要： 目的研究分离白木香内生真菌镰刀菌Fusarium sp.A2的次级代谢产物。方法采用硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱等方法进行分离纯化,并通过NMR、MS等波谱方法进行结构鉴定。结果从固体发酵提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为5,4＇-二羟基-7-甲氧基黄酮（1）、木犀草素-7,4＇-二甲醚（2）、5-羟基-7,4＇-二甲氧基黄酮（3）、5-羟基-7,3＇,4＇-三甲氧基黄酮（4）、6-甲氧基-2-（2-苯乙基）色酮（5）、6-甲氧基-2-[2-（3＇-甲氧基苯乙基）]色酮（6）、β-谷甾醇（7）。结论化合物1~6均为首次从该属真菌中分离得到,其中化合物5~6为沉香的特征性成分。
关键词: 白木香 ；内生真菌 ；镰刀菌 ；化学成分
被引量
6
摘要： 天然产物的化学结构独特,一般有特定的靶点,往往表现出较好的生物活性。天然产物及其结构衍生物一直是新药开发的重要来源,是小分子药物的重要组成部分。植物种类多样,分布广泛,是天然产物的重要来源之一。内生真菌普遍存在于植物组织内部,不对宿主植物造成负面影响,属于特殊生境的微生物。内生真菌因其所处的特殊生态环境而备受关注,其次级代谢产物具有结构新颖、生物合成途径特殊和活性多样等特点。十大功劳Mahonia fortunei是中国传统药用植物,属于小檗科十大功劳属,其根、茎、叶皆可入药,有清热解毒的功效,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等有抑制作用。本课题选用药用植物十大功劳M.fortunei为研究对象,采用组织分离的方法从其根、茎、叶、嫩枝等分离内生菌。本文对其中三株内生真菌(Diaporthe sp.F29、Fusarium sp.F20和Acremonium pilosum F47)进行了化学成分分析,以期获得结构新颖且具有较好抗菌或者细胞毒活性的化合物。采用固体发酵的方法,使用大米培养基对三株内生真菌进行大批量发酵。发酵产物用乙酸乙酯提取后,分别用正相硅胶,葡聚糖凝胶Sephadex LH-20,反相硅胶等柱层析技术进行分离,高压制备和半制备高效液相等色谱技术进行纯化。得到的单体化合物通过红外光谱、紫外光谱、核磁共振和质谱等手段进行结构鉴定。最后采用药敏片扩散法对部分化合物进行抗菌(金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、大肠杆菌Escherichia coli和铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa)活性测试,采用MTT法对部分化合物进行细胞毒活性测试。从狭叶十大功劳和阔叶十大功劳的根、茎、叶、花等组织中分离得到56株内生真菌,分别编号为F1-F56。通过对内生真菌大米培养基发酵产物的薄层色谱分析(TLC)、高效液相色谱分析(HPLC)和活性评价,发现其发酵产物的化学种类多样且大都具有抗菌和细胞毒活性。对从狭叶十大功劳嫩枝中分离得到的内生真菌Diaporthe sp.F29的化学成分进行分析。用大米培养基发酵后,乙酸乙酯提取其发酵产物,从粗提物中共分离鉴定了5个化合物,分别为:丁二酸succinic acid(1),甘油单乙酸酯monoacetin(2),尿嘧啶uracil(3),腺苷adenosine(4)和尿苷uridine(5)。从狭叶十大功劳茎中分离得到的内生真菌Fusarium sp.F20的次级代谢产物,共分离得到10个化合物。其中包括2个新化合物:fupyrones A和B(6和7)和8个已知化合物,包括4-methyl-5,6-dihydro-2H-pyran-2-one(8),glycero-1-undecanoate(9)和6个取代苯类:4-hydroxybenzoic acid(10),p-hydroxy-benzeneacetic acid(11),2-hydroxy phenyl acetic acid(12),4-hydroxyphenylethanol(13),4-methoxyphenylacetic acid(14),3,4-dihydroxy-benzeneacetic acid(15)。细胞毒活性测试结果显示,化合物6表现较强的细胞毒活性。内生真菌Acremonium pilosum F47是从阔叶十大功劳花轴里分离得到的,前期活性测试发现该菌株的次级代谢产物对金黄色葡萄球菌有较强的抑制活性。对其大米发酵产物进行研究,分离鉴定了8个化合物,包括4个三萜类:fusidic acid(16),acremonidiol A(17),acremonidiolic acid A(18)和16-desacetylfusidic acid(19),3个甾体类:ergosterol peroxide(20),(3β,5α,22E,24R)-dihydroxy-ergosta-7,22-dien-6-one(21)和(3β,5α,6β,22E)-ergosta-7,22-diene-3,5,6-triol(22);1个三联苯:microperfuranone(23)。其中化合物17和18是新化合物。抑菌活性测试结果显示,化合物16对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌S.aureus和枯草芽孢杆菌B.subtilis)表现较强的抑制作用。
关键词: 天然产物 ；内生真菌 ；十大功劳 ；生物活性
被引量
4
摘要： 棉花是重要的纤维作物之一,具有很高的经济价值,棉花黄萎病、枯萎病、立枯病和红腐病等土传病害严重影响了棉花的优质高产,近年来,筛选有效的生防微生物已成为防治棉花土传病害的重要途径之一。本研究以棉花内生真菌简青霉(Penicillium simplicissimum)CEF-818为生防菌,以棉花强致病力菌株大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、立枯病菌(Rhizoctonia solani)、红腐病菌(Fusarium verticilliodesin)为病原菌,采用对峙培养法、对扣培养法和圆盘滤膜培养法检测CEF-818对病原菌的抑菌率,在温室和田间试验中,主要采用基质接种法、灌根接种法、浸种接种法进一步检测CEF-818对棉花主要土传病害的防治效果。通过测定棉花叶片活性氧爆发和胼胝质沉积、RT-PCR法检测棉花叶片中防御相关基因的表达及采用q-PCR检测棉苗根中V.dahliae的定殖量来初步探究菌株CEF-818诱导抗病能力。采用单因素试验法和正交试验法对CEF-818固体发酵培养基的组成以及发酵条件进行了优化,主要得出以下结果:(1)对峙培养法测定了菌株CEF-818整体代谢产物对V.dahliae、F.oxysporum、R.solani、F.verticilliodesin的菌丝的生长有显著的影响,抑制率分别为67.63%、78.87%、71.31%、74.65%;对扣培养法测定了菌株CEF-818的挥发性代谢产物对V.dahliae菌丝的生长有较显著的影响,抑制率为58.09%,对F.oxysporum、R.solani和F.verticilliodesin的抑制效果不显著;圆盘滤膜培养法测定了菌株CEF-818非挥发性代谢产物对V.dahliae、F.oxysporum、R.solani、F.verticilliodesin的菌丝的生长有极显著的影响,抑制率均为100%。(2)温室试验结果表明,灌根接种法和基质接种法处理过的棉花,其黄萎病的病情指数均有显著的降低,对棉花黄萎病的温室防治效果最高达到69.77%;利用灌根接种法和浸种接种法,检测CEF-818对棉花枯萎病的温室防治效果,结果表明,其防治效果为33.75%和13.44%;利用基质接种法和浸种接种法检测CEF-818对棉花立枯病温室的防治效果,结果表明,其防治效果为分别为54.82%和25.29%。(3)利用基质接种法和浸种接种法检测CEF-818对棉花黄萎病的田间防治效果,结果表明,对棉花黄萎病的田间防治效最高达63.73%。(4)菌株CEF-818可诱导棉花叶片中活性氧的爆发和胼胝质的沉积,RT-PCR法检测棉花叶片中防御相关基因的表达,结果表明,菌株CEF-818诱导棉花叶片中过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和病程相关基因PR10的上调表达。(5)q-PCR法检测棉苗根中V.dahliae的定值量,结果表明,对照组中V.dahliae的定殖量是处理组中的3.61倍,表明,菌株CEF-818能够抑制大丽轮枝菌对棉苗的入侵。(6)简青霉CEF-818固体发酵最适培养物为麦麸,其他添加物为葡萄糖、尿素和氯化钾,添加量按麦麸的质量比分别为2.5%、0.6%和0.6%,料水比为1:0.5,固体发酵最佳的培养条件为液体接种量为5%、初始p H为7、物料厚度为2 cm、培养温度为28℃、培养时间为7 d。在此条件下,简青霉CEF-818的产孢量为8.28×10～9 CFU/g。综上所述,本研究明确了菌株CEF-818对棉花黄、枯萎病、立枯病、红腐病的防治效果,为评估生防菌CEF-818的生防潜力及其应用范围提供参考依据,并为其菌剂的规模化生产提供了技术支持,为防治棉花病害提供帮助。
关键词: 内生真菌 ；棉花土传病害 ；诱导抗性 ；发酵工艺
摘要： 植物内生真菌是生活在健康植物组织或器官内,不会引起疾病,与植物宿主建立了互惠共生关系的一个重要微生物类群。其生物多样性以及以代谢产物为载体和宿主的沟通机制,致使植物内生真菌次生代谢产物具有丰富多样的种类,且含有良好广泛的生物活性。本文由五章组成,前四章主要包括对白及内生真菌Ilyonectria robusta的发酵液,白及内生真菌Ilyonectria sp.固体发酵产物,金沙江石斛内生真菌Tullasnella sp.的发酵液以及黄连内生真菌Fusarium tricinctum的发酵液的化学成分以及生物活性的系统研究,第五章综述了从真菌中分离得到海松烷型二萜以及其生物活性。本文通过多种分离纯化手段来获取化合物单体,包括正相硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、中压制备液相色谱以及高效液相色谱;通过多种现代波谱方法对化合物进行鉴定,包括1H NMR、13C NMR、HMQC、HMBC、COSY、ROESY、CD、IR、UV、比旋光度以及X射线晶体衍射等。从上述四株植物内生真菌中分离鉴定56个化合物,其中16个新化合物。化合物类型包括二萜,生物碱,吡咯环衍生物,Harzianic acid衍生物,色原酮,蒽醌,萘醌以及其他类型化合物。检测了化合物的免疫抑制活性以及抗炎活性,测定了化合物对病原真菌白色念珠菌Candida Albicans的抑制作用。白及（Bletilla striata）是兰科白及属地生草本植物,其干燥块茎为常用中药。Ilyonectria robusta为土赤壳属真菌,该属为2011年独立的新属。从该菌的发酵液中分离得到化合物18个,其中新化合物9个,新化合物类型主要为异海松烷型二萜以及吡咯环衍生物。对新化合物和部分已知化合物检测了免疫抑制活性和抗炎活性,发现新化合物robustaditerpene C和E有免疫抑制活性,已知化合物tryhistatin有良好抗炎活性。另一株白及内生真菌也为土赤壳属真菌Ilyonectria sp.,从该内生真菌的固体发酵产物中分离得到16个化合物,其中新化合物6个,已知化合物10个。新化合物的主要类型为Harzianic acid衍生物和色原酮类化合物。金沙江石斛（Dendrobium wangliangii）是我国兰科特有种类,是金沙江干热河谷云南段特有类群,在药用及观赏方面有着潜在价值。胶膜属真菌Tullasnella sp.能够促进该宿主植物种子的萌发。从该内生真菌的发酵液中分离得到12个化合物,其中1个新化合物。对这些化合物的抗人类病原菌菌的活性进行了检测,发现新化合物Tullasnellachromone对大肠肝菌和白色念珠菌有较好抑制作用。黄连（Coptis chinensis）是毛茛科植物。其干燥根状茎为常用中药黄连。从镰刀属内生真菌Fusarium tricinctum的发酵液中分离得到10个已知化合物,主要类型为环二肽和甾体。真菌是活性天然产物的重要来源之一,真菌来源的二萜类化合物具有丰富多样的骨架和活性。海松烷型二萜主要存在于植物与真菌中,真菌来源的海松烷型二萜没有被系统性的整理过。本文第五章对从真菌中分离的海松烷型二萜的结构、其所检测的生物活性以及生物合成途径进行了系统的综述。
关键词: 植物内生真菌 ；Ilyonectria robusta ；Ilyonectria sp. ；Tullasnella sp. ；Fusarium tricinctum ；化学成分 ；生物活性
摘要： 背景:海洋真菌种类繁多、形态各异,是活性天然产物的重要来源之一。曲霉属真菌能够产生复杂多样的次级代谢产物,其中许多次级代谢产物具有优良的生物活性,因此,海洋来源的曲霉真菌是广大研究者们热衷的研究对象。本论文以红树林内生曲霉真菌及海水来源曲霉真菌为研究对象,对其次级代谢产物及活性进行研究。
目的:1.对广州海鸥岛来源的红树林植物老鼠簕Acanthus ilicifolius.L内生真菌进行研究,从其茎与根茎部位分离纯化内生真菌,通过菌株发酵、代谢产物HPLC分析及抑菌活性检测等手段,筛选出代谢产物丰富、且抑菌活性良好的菌株。2.以红树林内生真菌烟曲霉Aspergillus fumigatus BF-18和南海神狐海域海水来源真菌聚多曲霉Aspergillus sydowii 8402为研究对象,采用大米培养基发酵,对其次级代谢产物进行分离、结构鉴定和活性筛选,发现具有抗肺癌细胞增殖活性的先导化合物。
方法:1.采用平板划线法纯化红树林植物老鼠簕的内生真菌,获得单克隆菌株。采用大米培养基对纯化后的菌株进行固体静态发酵,发酵产物经甲醇提取后获得浸膏,采用配备ODS色谱柱及PDA检测器的HPLC对浸膏进行检测分析。采用抑菌圈法,测试发酵产物的抑菌活性。通过ITS DNA测序以及菌株形态观察的方法,对菌株进行鉴定。2.采用大米培养基固体发酵的方法对真菌Aspergillus fumigatus BF-18进行静态摇瓶发酵,发酵物经甲醇提取后,再经乙酸乙酯萃取获得浸膏。采用GYP液体发酵方式对真菌Aspergillus sydowii 8402进行摇瓶静置发酵,发酵物经固液分离后,其发酵液（水相）经乙酸乙酯萃取获得产物浸膏。3.采用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶色谱和半制备高效液相色谱等多种手段,对两株真菌的发酵产物浸膏进行分离纯化,获得单体化合物,通过测试和解析化合物的MS、NMR等波谱数据,鉴定化合物结构。4.采用MTT法测试化合物的对肺癌细胞增殖的抑制活性。
结果:1.从海鸥岛红树林植物老鼠簕Acanthus ilicifolius.L分离获得了68株真菌,通过发酵和活性筛选,发现了11株代谢产物丰富且抗菌活性较好的菌株,经鉴定为Diaporthe sp.AIS3、Phyllosticta sp.AIS6、Medicopsis romeroi AIS7、Fusarium sp.AIS30、Schizophyllum commune AIS34、Fusarium verticillioides AIS40、Penicillium sclerotiorum AIS43、Neofusicoccum parvum AIS65、Fusarium solani AIS57、Phaeosphaeriopsis musae AIS67、Talaromyces helice S2。2.累计从两株曲霉真菌的发酵产物中分离了36个化合物,鉴定了29个化合物。其中,从Aspergillus fumigatus BF-18中分离鉴定了20个化合物,包括了生物碱类化合物9个（1-9）、1个萜类化合物（10）、聚酮类化合物6个（11-16）、脂肪酸类化合物4个（17-20）。化合物1为新化合物,命名为chaetominine C,属于吲哚喹唑啉类生物碱类。3.从Aspergillus sydowii 8402中共分离鉴定了9个化合物,其中聚酮类化合物5个（27-31）、生物碱类化合物3个（32-34）及1个萜类化合物（35）。4.抑制肺癌细胞增殖活性试验结果显示,部分化合物对人肺癌细胞PC-9、A549、H1299具有选择性的活性。Pseurotin G（8）和（+）-12-hydroxysydonic acid（29）能显著抑制H1299细胞的增殖,其IC50值分别为1.14±0.16μM和0.87±0.03μM;sulochrin（13）抑制PC-9细胞增殖的IC50值为1.97±0.17μM;该三个化合物的体外细胞毒活性均强于阳性对照药物盐酸阿霉素。
结论:海鸥岛红树林植物老鼠簕内生真菌种类较为丰富多样,其中部分菌株具有生产丰富活性次级代谢产物的能力,可作为天然药物开发的重要候选菌株。海洋真菌烟曲霉Aspergillus fumigatus BF-18和聚多曲霉Aspergillus sydowii 8402能够产生结构多样的生物碱及聚酮类次级代谢产物,能为抗肺癌药物的研发提供先导化合物。
关键词: 海洋真菌 ；曲霉 ；次级代谢产物 ；生物碱 ；抗肺癌活性
摘要： 棉花黄萎病由大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb.）侵染引起,严重制约着棉花产业的发展。化学防治易造成环境污染,病原菌产生抗药性,而生物防治能够特异性抑制病原菌,分泌天然产物,符合可持续发展要求,具有较好的应用前景。球毛壳菌CEF-082是棉花健康植株分离出的内生真菌,能产生孢子,前期的研究表明该菌株对棉花黄萎病具有良好的生防性能。本文在此基础上对球毛壳菌CEF-082菌剂的发酵条件、碳源、氮源和无机盐进行优化,并探究球毛壳菌CEF-082的抗逆性及其菌剂对棉花黄萎病的防治效果,为球毛壳菌CEF-082的工业化生产和实际应用提供理论和实践基础。本文所设计的试验方法及主要研究成果如下: 1.球毛壳菌CEF-082菌株以及代谢产物对棉花黄萎病菌（V.dahliae）、枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、叶斑病菌（Mycosphaerella gossypina）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、角斑病菌（Xanthomonas campestris）等六种常见的病原菌均具有抑菌活性。 2.为提高球毛壳菌CEF-082的产孢能力,通过单因素试验、正交试验优化培养基条件和基质组成。结果表明,固体发酵的最优条件为:菌种接种量2.5%、初始含水量50%、温度28℃、p H=7、料层厚度2 cm、发酵时间13 d。在最佳培养条件下,正交优化最佳碳源、氮源、无机盐配比为:淀粉2%、蛋白胨3%、硫酸锌1%,在此优化条件下产孢量最高为13.8×10～8cfu/g。 3.球毛壳菌CEF-082具有较强的抗逆性。探究了球毛壳菌CEF-082菌丝和孢子对盐碱环境、高温、重金属以及紫外等逆境因子的耐受性。结果表明:菌丝生长和孢子萌发可耐受0.5 mol/L Na Cl、0.5 mol/L Na2SO4、0.1mol/L Na2CO3、0.024 mol/L Na HCO3,随盐碱浓度增加,菌株生长和产孢能力逐渐减弱;高温对菌丝生长有显著抑制作用,在34℃下不再生长,孢子的半致死时间Lt50值随温度升高而缩短;重金属对菌丝生长的最小抑制浓度MICs:Mn（II）、Zn（II）、Cu（II）、Cr（VI）、Cd（II）分别为30 mmol/L、3.5 mmol/L、2 mmol/L、0.1 mmol/L、2 mmol/L;孢子萌发耐受Mn（II）、Zn（II）、Cu（II）、Cr（VI）、Cd（II）的浓度分别为15 mmol/L、2 mmol/L、1.5 mmol/L、0.03 mmol/L、0.5 mmol/L。60 W紫外灯30 cm处照射10 min,孢子的存活率为37.04%;CEF-082菌剂在4℃和室温环境下贮藏6个月,孢子的活性分别降低4.46%和5.09%。 4.确定了菌剂的施用方式和最佳施用剂量。盆栽试验结果表明:底肥法施用5‰时防效最高,对中植棉2号和冀棉11防效分别为68.30%和43.08%。灌根法适宜施用浓度为稀释10～100倍,防效最高为86.23%。包衣量为50～300 g/kg棉种时均有良好防效,考虑成本选用50 g/kg种子用量。进一步验证菌剂在田间环境下对棉花黄萎病的防效,大田试验结果表明,菌剂灌根法1 kg/亩、包衣法300 g/kg种子和底肥法2 kg/亩在播种80 d后对棉花黄萎病的防效分别为49.41%、46.74%和47.63%,且灌根法处理防效最高。 5.球毛壳菌CEF-082菌剂对棉花生长有显著促进作用。底肥法和包衣法对棉花出苗率较对照最高增幅分别为46.52%和43.23%。适宜接种量下,底肥法、灌根法和包衣法均能较明显的增加植株高度、根长、根鲜重、地上部鲜重以及总生物量。田间试验表明三种施用方式均能提高棉花的产量,籽棉产量比对照相比分别增加10.01%、6.19%和4.89%。
关键词: 棉花黄萎病 ；球毛壳菌CEF-082 ；固体发酵 ；生物防治 ；抗逆性
摘要： 目的:对安徽道地药材宁前胡内生真菌进行分离鉴定,对其分布多样性和生物多样性进行探讨,进一步探讨不同的发酵方式对内生真菌次生代谢产物的影响,寻找结构新颖,活性多样的化合物。方法:采用经典组织块法对宁前胡内生真菌进行培养分离,运用形态学和分子生物学相结合的技术对内生真菌进行鉴定,运用统计学方法分析宁前胡中内生真菌的多样性以及群落分布;运用现代色谱以及波谱技术对2株宁前胡内生真菌次生代谢产物进行研究,并进行细胞毒活性测定。结果:从宁前胡中分离得到361株内生真菌并鉴定为31属62种。通过Sorenson相似性指数以及聚类分析可得出3个不同地区的宁前胡内生真菌种类相似度较低,具有较明显的差异性。Fusarium tricinctum和Aspergillus udagawa为其优势菌种。2株内生真菌A.udagawae和F.tricinctum用两种不同的发酵方式发酵后得到次生代谢产物乙酸乙酯萃取部位,共分离得到40个化合物,其中A.udagawae菌固体发酵产物的乙酸乙酯部位中分离得到13个化合物,其中新化合物4个。F.tricinctum菌的固体发酵产物和液体发酵产物乙酸乙酯部位中分别分离得到14个和13个化合物。对5株口腔癌细胞活性测试结果表明cyclo(D-pro-L-leu)(28)、cyclo(S-pro-S-leu)(29)、cyclo-(D-pro-L-phe)(37)、cyclo-(trans-4-hydroxy-Lprolyl-L-phenylalanine)(40)等化合物具有良好活性。结论:3个不同地区的宁前胡内生真菌优势种群没有明显的差异性,相似度较低,表现出一定的地域专属性;从2株内生真菌的发酵产物中分离得到40个单体化合物,化合物1-4为新化合物,化合物28、29、37、40具有良好活性。
关键词: 宁前胡 ；内生真菌 ；培养分离与鉴定 ；次生代谢产物 ；生物活性
摘要： 内生真菌是获得天然产物的重要途径。药食同源植物内生真菌可能具有高效代谢植物有效成分的潜力。本文以药食同源植物普洱茶和花椒为实验材料,以其植物内生真菌为研究对象,对内生真菌的次级代谢产物进行分离分析,并对分离得到的化合物的抑菌和拒食活性进行评估。 本文共分为三章。第一章主要介绍了药食同源植物内生真菌次级代谢产物的研究进展,和两株植物内生真菌拟茎点霉Phomopsis sp.和扩展青霉Penicillium expansum次级代谢产物的研究进展。确定了本文的选题背景和研究目标。 第二章主要介绍了普洱茶植物内生真菌拟茎点霉Phomopsis sp.(PEZ-22')菌株的筛选和确定,以及其次级代谢产物和活性发掘。本章对PEZ-22'利用半固体培养基发酵培养获得粗提物,并从中分离得到8个已知化合物,化合物结构分别确定为 RKS-1778(1),phomopchalasin N(2),细胞松弛素 H(3),hexacosa-(6Z,10Z)-dienoic acid(4),9-Octadecenoic acid-2',3'-dihydroxy propyl ester(5),亚油酸(6),4-萜烯醇(7),α-terpinene(8)。对化合物进行抑菌活性与拒食活性试验。抗菌实验显示,化合物3,4对链格孢(Alternaria alternata)表现出明显的抑制活性,MICs值为16μg/mL。化合物1,2对镰孢菌(Fusarium oxysporum)表现出明显的抑制活性,MICs为16μg/mL。化合物6对镰孢菌表现出显著的抑制活性,MIC为2μg/mL。拒食实验显示,在浓度为50μg/cm2时,化合物1,2表现出中等的拒食活性,拒食率(FDI)分别为48%和58%。化合物3表现出显著的拒食活性,FDI值为94%。以上实验结果表明,普洱茶植物内生真菌拟茎点霉Phomopsis sp.(PEZ-22’)能够产生具有抗菌活性和防治昆虫的化合物,表明其在生物防治和农业等领域的潜在应用。 第三章主要介绍了花椒植物内生真菌扩展青霉Penicillium expansum(HJR-8)菌株的筛选和确定,以及其次级代谢产物和活性发掘。本章对扩展青霉HJR-8利用PDB培养基宿主发酵培养获得粗提物,并从中分离得到14个已知化合物,化合物结构分别确定为,p-hydroxy-benzaldehyde(1),methyl hydroxyphenylacetate(2),对苯二酚(3),4-羟基苯乙基乙酸酯(4),对羟基苯乙醇(5),methyl-4-methyl-5(2H)-oxo-2-pentyl-furan-3-carboxylate(6),4-羟基香豆素(7),2-(2'S-Hydroxypropyl) -5-methyl-7-hydroxychromone(8),2,3-dihydroxy-benzoic acid(9),striatisporolide A(10),tubingenoic anhydride A(11),(2R,3S)-butane-2,3-diol(12),桉脂素(13),provitamin D(14)。对HJR-8利用大米培养基固体发酵培养获得粗提物,并从中分离得到 14个已知化合物,methyl-4-methyl-5(21H)-oxo-2-pentyl-furan-3-carboxylate(6),4-羟基香豆素(7),striatisporolide A(10),tubingenoic anhydride A(11),provitamin D(14),4-甲氧基苯乙酸(15),胡萝卜苷亚油酸酯(16),邻羟基苯乙酸(17),对羟基苯乙酸(18),solerole(19),5,7-二羟基香豆素(20),7-hydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one(21),4-甲氧基香豆素(22),coumarin(23)。对化合物进行抑菌活性与拒食活性试验。抗菌实验显示,化合物7,20,21和23对链格孢(Alternaria alternata)显示出微弱的抑制活性,MICs值为128 μg/mL。化合物1,2,3,6和15对链格孢表现出中等的抑制活性,MICs值为64 μg/mL。化合物16对链格孢表现出明显的抑制活性,MIC值为16μg/mL。化合物7对镰孢菌(Fusarium oxysporum)表现出微弱的抑制活性,MICs值为128μg/mL。化合物20和6对镰孢菌表现出中等的抑制活性,MIC值分别为为64和32μg/mL。化合物4,5,10,11,13和22对镰孢菌表现出显著的抑制活性,MICs值为2-4 μg/mL。拒食实验显示,在浓度为50 μg/cm2时,化合物2,11和17表现出中等的拒食活性,拒食率(FDI)分别为45%和47%。化合物5,6显示出显著的拒食活性,FDI值分别为90%和97%。化合物20的致死率为33%,且FDI值为-10%,显示出中等的胃毒与诱食活性。以上实验结果表明,花椒植物内生真菌扩展青霉Penicillium expansum(HJR-8)能够产生具有抗菌活性和防治昆虫的化合物,表明其在生物防治和农业等领域的潜在应用。
关键词: 内生真菌 ；次级代谢产物 ；药食同源 ；抗菌活性 ；拒食活性
摘要： 内生真菌广泛分布于植物组织中,可与寄主植物建立互惠共生关系。它们能够产生结构独特的生物碱、萜类、聚酮、醌类、酯类等多种类型的次级代谢产物,并具有广泛的生物活性,如抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒等多种活性。近年来,植物内生真菌已逐渐成为发现活性先导化合物的重要源泉,同时它也是替代植物次级代谢产物有潜力的新资源。本论文采用LC-MS分析与抗肿瘤活性测试相结合的方法,从80株内生真菌中选出3株活性较好且次级代谢产物丰富的内生真菌Xylaria arbuscula（Cuiluo）、Fusarium solani（MBMTL）和Bipolaris sp.（YJH-29）作为研究对象。并选用大米培养基进行固体发酵培养;发酵物经乙酸乙酯提取后,得到乙酸乙酯粗提物。利用正、反相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱及高效液相色谱等多种色谱技术,将粗提物进行分离纯化获得31个单体化合物。运用波谱学方法（UV,1D和2D NMR,HR-ESI-MS）鉴定了上述化合物结构,并对所有分离到的化合物进行了细胞毒性测试。研究结果如下:1.对内生真菌X.arbuscula（Cuiluo）次级代谢产物进行分离与鉴定,得到17个单体化合物,分别为:xylarialoid A（1*）,cytochalasin C（2）,cytochalasin D（3）,zygosporin G（4）,cytochalasin N（5）,cytochalasin O（6）,cytochalasin R（7）,dodecahydro-cytochalasinen D（8）,6,7-dihydro-7-oxo-cytochalasin C（9）,7-oxo-cytochalasin C（10）,7-O-acetylcytochalasin P（11）,halorosellinic acid（12）,17-dehydroxyhalorosellinic acid（13）,10,11-epoxyguaian-13-ol（14）,5-carboxylmellein（15）,rickitin A（16）,piliformic acid（17）。其中化合物1为未见文献报道的新化合物;化合物2-11为细胞松弛素类化合物。2.对内生真菌F.solani（MBMTL）次级代谢产物进行分离与鉴定,得到6个单体化合物,分别为fusaridioic acid E（18*）,fusaridioic acid C（19）,fusaridioic acid A（20）,L660282（21）,hymeglusin（22）,hymeglnone（23）。其中化合物18为未见文献报道的新化合物。3.对内生真菌B.sp.（YJH-29）次级代谢产物进行分离与鉴定,得到8个化合物,分别为:helminthosporol（24）,9-hydroxyhelminthosporol（25）,helminthosporic acid（26）,helminthosporal acid（27）,cochliobolins A（28）,prehelminthosporol（29）,fusaproliferin（30）,cochlioquinone D（31）。其中化合物24-29为倍半萜类化合物。4.运用MTT法对所有单体化合物进行肿瘤细胞系非小细胞肺癌细胞（A549）和人肝癌细胞（Hep G2）的细胞毒性测试。与阳性对照ADM相比,化合物4和22对A549和Hep G2细胞表现出显著的细胞毒性,IC50值为3.63-13.57μM;化合物1,3和10均对两种细胞表现出强的细胞毒性,IC50值为14.6-19.6μM;化合物2,6,9,18,23,25,27,28,30和31对两种细胞表现出中等的细胞毒性,IC50值为21.87-49.20μM。
关键词: 植物内生真菌 ；次级代谢产物 ；结构鉴定 ；抗肿瘤活性
被引量
2
摘要： 植物内生真菌种类多样且能产生多种具有生物活性的代谢产物,是天然活性物质的重要来源之一。为了获得新的具有抗菌活性的菌株及其代谢产物成分,本研究对毛泡桐内生真菌进行了分离、筛选及活性菌株种属鉴定,并对高活性菌株KLBMP-Pt686代谢产物进行了分离及鉴定。主要取得了以下结果:1、选用5种真菌培养基对河南毛泡桐进行内生真菌的分离,共分得内生真菌92株。以7种植物病原真菌和4种病原细菌为指示菌,利用平板对峙法和琼脂块法对毛泡桐内生真菌进行抗菌活性初筛,共有10株内生真菌对至少一种植物病原真菌具有拮抗效果,有9株内生真菌对至少一种病原细菌具有抑制作用。选取甘薯黑斑病菌为指示菌,利用牛津杯法进行发酵液的抑制真菌活性复筛,共得到7株对甘薯黑斑病菌有拮抗作用的内生真菌,其中菌株KLBMP-Pt630、KLBMP-Pt675和KLBMP-Pt686的抑菌圈直径大于25 mm。利用滤纸片扩散法对这3株内生真菌的乙酸乙酯相粗提物进行拮抗病原细菌的复筛,菌株KLBMP-Pt675和KLBMP-Pt686对4种病原细菌都有抑制作用。2、选择抑菌活性较好的内生真菌KLBMP-Pt630,KLBMP-Pt675和KLBMP-Pt686进行种属鉴定。通过形态学观察和ITS分子序列分析相结合的方法鉴定出菌株KLBMP-Pt630属于三线镰刀菌(Fusarium tricinctum)、菌株KLBMP-Pt675为棒曲霉(Aspergillus clavatus)、菌株KLBMP-Pt686为肉座菌目真菌(Hypocreales sp.)。综合菌株的活性和种属关系,最终选择KLBMP-Pt686为目标菌株进行代谢产物的分离。3、利用单一因素方法对KLBMP-Pt686进行拮抗甘薯黑斑病菌的培养基碳氮源和发酵条件优化。结果显示:培养基最佳碳氮源为葡萄糖,菌株的最佳发酵条件是培养时间为9 d,培养温度26℃,培养转速为160 r/min,接种量4%。优化后的拮抗甘薯黑斑病菌的抑菌圈直径达到37.67 mm,比未优化时的抑菌活性提高了15.3%。4、利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和高效液相色谱等分离方法对菌株KLBMP-Pt686乙酸乙酯相进行次级代谢产物的分离纯化,共分离出6种化合物,分别为:2-(1-羟基-2-乙酰氧基)丙基-7-氧杂二环[4.1.0]-2,4-庚二烯、2-乙酰氧基-4-羟基-5-丙烯基-7-氧杂二环[4.1.0]庚烷、16-二十碳烯酸、11-羟基-24-氢化毛蜂窝菌素C、邻苯二甲酸二丁酯和9,12-十八碳二烯酸甲酯。其中,化合物2-(1-羟基-2-乙酰氧基)丙基-7-氧杂二环[4.1.0]-2,4-庚二烯和2-乙酰氧基-4-羟基-5-丙烯基-7-氧杂二环[4,1,0]庚烷在与Sci-Finder数据库比对时没有发现相同结构的化合物,化合物2-(1-羟基-2-乙酰氧基)丙基-7-氧杂二环[4.1.0]-2,4-庚二烯对甘薯黑斑病菌具有抑制活性。5、采用醇沉法对菌株KLBMP-Pt686的胞外多糖进行提取,并利用凝胶柱层析法进行分离纯化,得到两种胞外多糖,其中胞外多糖1为浅棕色絮状固体,胞外多糖2为白色絮状固体。对两种多糖的糖含量、分子量和单糖构成进行测定,结果显示:胞外多糖1糖含量为94.12%,分子量为53.0 kDa,单糖组分构成及摩尔比为:鼠李糖:D-阿拉伯糖:葡萄糖=7:12:427;胞外多糖2的糖含量为92.17%,分子量为9.4 kDa,单糖组分为单一的葡萄糖。通过Alamar Blue法测定多糖对过氧化氢造成的细胞损伤的保护作用,结果显示:胞外多糖1能较好地保护过氧化氢造成的细胞损伤。
关键词: 毛泡桐 ；内生真菌 ；分离鉴定 ；代谢产物
被引量
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摘要： 天然产物是新药开发的重要资源,很多的临床药物在天然产物的基础进行合成或半合成。至今为止,微生物还是药物先导化合物发现的重要来源之一。真菌是微生物的重要类群之一,种类繁多,形态千差万别,从淡水到海水,从植物的体表到植物组织内部,从陆生到海生,都有真菌的存在。来源于真菌的抗生素、免疫抑制剂、抗病原真菌制剂以及降胆固醇制剂在临床上为人类抵抗疾病做出了巨大的贡献。真菌是生物活性独特、结构新颖的代谢产物制造工厂。
本文选取了4株真菌——2株植物内生真菌及2株海洋真菌为材料,对它们固体发酵的粗提物进行系统的分离,分离手段有凝胶柱,正相柱,反相柱等,利用核磁共振波谱、紫外光谱、红外光谱、质谱等手段对其结构进行了鉴定,共分离鉴定的化合物有35个,其中9个为新的化合物,并对新的化合物及其他一些化合物抗肿瘤及抗菌活性进行了初步研究。
从菌株Fusarium oxysporum F01820尖孢镰刀属的PDA固体发酵产物中,共分离到3个化合物,包括1个镰孢菌酸(ZHQ-01-065-03)、1个苯基丙氨酸类化合物(ZHQ-01-058-04)、1个甾体类化合物(ZHQ-01-059-01)。
从菌株Pycnidiophora dispersa F01510的发酵产物中,共分离到25个化合物,其中9个为新化合物,ZHQ-01-100-01, ZHQ-01-103-01, ZHQ-01-105-01, ZHQ-01-118-01, ZHQ-01-119-01, ZHQ-01-122-01, ZHQ-01-122-02ZHQ-01-125-01, ZHQ-01-128-01.主要包含了3大系列化合物,分别是4个硫赭曲菌素类化合物sulochrin、4个曲地酸类化合物asterric acid和9个缩酚酸环醚类化合物depsidone。此外,还有2个甾醇类化合物、1个鞘脂类化合物、1个苯二羧酸类化合物、1个硫赭曲霉素与曲地酸结合的新化合物、1个5-羟基-3-甲氧基苯甲酸、1个hamavellone B、1个curvulapyrone。对新化合物的活性测定,未见明显的抗肿瘤及抗菌活性。
从菌株Neosartorya stramenia MCCC3A00273的小量发酵产物中,共分离到2个化合物,ZHQ-02-009-04, ZHQ-02-009-05均为旧化合物。ZHQ-02-009-04是细胞松弛素类化合物,ZHQ-02-009-05是一个已知的甾体类化合物。从菌株Tritirachium sp. MCCC3A00152的发酵产物中,共分离到5个化合物,ZHQ-02-024-02, ZHQ-02-030-01, ZHQ-02-030-02, ZHQ-02-033-03ZHQ-02-039-01,均为旧的化合物。ZHQ-02-033-03, ZHQ-02-039-01结构类似,是xanthoquinodin-like化合物,对人宫颈癌Hela细胞和人恶性胸膜间皮瘤ACC-MESO-1细胞表现出弱细胞毒活性。
本论文研究表明,通过发酵的4株真菌,可以产生结构类型及生物活性多样的天然产物,可以作为新药开发和生理功能研究的可用资源。对于一些特殊生境真菌的次级代谢产物的研究探索有待进一步开发。
关键词: 真菌 ；次级代谢产物 ；结构鉴定
被引量
2
摘要： 植物内生真菌(Endophyte)是指那些在其生活史的一定或全部阶段生活于健康植物组织内部而不引起宿主植物明显症状改变的真菌。它的存在十分广泛,并具有促进宿主植物生长、增强宿主植物对各种生物胁迫和非生物胁迫抵抗的能力。
本研究通过固体发酵、薄层层析、硅胶柱层析、凝胶柱层析和高效液相色谱层析(HPLC)技术,从云南元江干热河谷优势植物孔颖草(Bothriochloa pertusa)的暗色有隔内生真菌K28中分离得到四个化合物,即化合物LX-1、LX-2、LX-3和LX-4,经过核磁共振C谱(13CNMR)、H谱(1HNMR)、质谱(MS)等数据分析,确定了其中三个化合物的结构,它们分别为对羟基苯乙醇(p-hydroxy phenylethanol)(化合物LX-1),2-甲基-3-乙醇-4-甲氧基环戊酯(2-methyl-3-ethanol-4-methoxy cyclopentyl ester)(化合物LX-2)、山嵛酸甲二醇酯(Behenic acid methyl glycol ester)(化合物LX-4),三个化合物都是是首次从暗色有隔内生真菌中分离得到。
以大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、三七镰刀菌(Fusarium solani)、棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)、小麦根腐病菌禾旋孢腔菌(Cochliobolus sathus)和烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)作为病原指示菌,对化合物LX-1、LX-2和LX-3进行抗菌活性检测,结果发现这三个化合物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和小麦根腐病菌均没有抑菌活性,而化合物LX-1(对羟基苯乙醇)对三七镰刀菌,棉花黄萎病菌和烟草疫霉有很好的抑菌效果,化合物LX-2(2-甲基-3-乙醇-4-甲氧基环戊酯)对棉花黄萎病菌和烟草疫霉也有很好的抑菌效果,而化合物LX-3则只对棉花黄萎病菌具有抑菌作用。回归方程显示,随着化合物浓度的降低,其抑菌效果呈现减弱的线性关系。
内生真菌K28的代谢产物对三七镰刀菌,棉花黄萎病菌和烟草疫霉等病原菌的抑菌活性表明,植物内生真菌可能在宿主植物抵抗病原菌等生物胁迫中发挥了重要作用,而化合物LX-4(山嵛酸甲二醇酯)具有抗旱和保湿作用,目前已广泛用于化妆品领域,它在植物抗旱保水中是否发挥一定作用,值得进一步深入研究。
关键词: 植物内生真菌 ；暗色有隔 ；代谢产物 ；抑菌活性 ；线性回归方程
摘要： 内生真菌是一类生活于健康植物细胞内或细胞间，并且不会造成植物明显疾病症状的真菌。在与宿主长期共生的过程中，内生真菌会产生种类多样的代谢产物。这些代谢产物有着广泛的生物活性，如抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、免疫抑制等，为寻找新药及新药先导化合物提供了宝贵的资源。
单胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）对体内神经递质的代谢有着重要的作用。体内MAO异常升高与抑郁症及神经退行性疾病如帕金森病和阿尔兹海默症的发生有关。选择性MAO抑制剂是治疗抑郁症和神经退行性疾病的重要药物。研究者们已经从天然产物中发现了多种选择性MAO抑制剂，这些天然产物具有成为新一代治疗抑郁症、帕金森病、阿尔兹海默症药物的潜力。目前，天然产物MAO抑制剂的来源主要为植物，有关从微生物代谢产物获得MAO抑制剂的报道极少。因此，从内生真菌代谢产物中寻找MAO抑制剂有着广阔的前景。
本研究从17种药用植物中分离得到147株内生真菌，分属于14个属，其中数量最多的3个属分别为曲霉属（Aspergillus）、镰刀菌属（Fusarium）和链格孢霉属（Alternaria）。
以147株内生真菌发酵液的乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物为样本，筛选具有MAO抑制活性的发酵产物。有5株真菌的发酵产物有着较强的MAO抑制作用，抑制率大于50%，其中3株真菌发酵产物的IC50值在200μg/ml左右。选择1株分离自长柱金丝桃的内生真菌E160作为进一步研究对象，利用形态学和分子生物学方法鉴定菌株E160为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）。
菌株E160经固体发酵后得到8.7g乙酸乙酯提取物。抑制MAO的IC50值为195.1μg/ml。利用硅胶柱层析、反相ODS柱层析分离，薄层色谱检测，高效液相色谱分析，并通过对MAO抑制活性的追踪，初步建立了MAO抑制活性物质的分离纯化体系。获得一个具有MAO抑制活性的组分EM10-2，抑制MAO的IC50值为51.1μg/ml。对组分EM10-2的MAO选择性进行检测，发现抑制MAO A的IC50值为101.0μg/ml，抑制MAO B的IC50值为22.7μg/ml，显示化合物EM10-2对MAO B有一定的选择性，具有成为MAO选择性抑制剂的潜力。
对烟曲霉E160的发酵条件进行优化，探讨了液体发酵中培养基碳源、氮源、初始pH值，接种量、装液量、培养温度以及培养时间对发酵产物干重和MAO的抑制率的影响。确定最佳发酵条件为葡萄糖为碳源、酵母浸粉为氮源，初始pH为6，锥形瓶内装40%的培养基，接种2%（v/v）的1×107CFU/ml的孢子悬液，25℃震荡培养11d。此时发酵产物干重为25.9mg，对MAO的抑制率为72.8%，与初始条件相比分别提高了49.7%和25.7%。
本研究为新型天然MAO抑制剂的研究提供了资源菌株，并为从内生真菌代谢产物寻找MAO抑制剂奠定了理论依据和实验基础。
关键词: 次级代谢产物 ；MAO ；抑制活性 ；烟曲霉 ；条件优化
摘要： 植物内生真菌是存活在健康植物组织内部并且能使宿主植物不表现出明显感染症状的菌群。从近年来的研究发现,植物内生真菌与宿主植株为互惠互利的关系,并且能生成与宿主相同或者相似的具有生物活性的物质。越来越多的研究证明,许多具有显著生物活性的物质的来源均是植物内生真菌,因而人们以植物内生真菌为重要来源来筛选新的生物活性物质。白木香Aquilaria sinensis(Lour).Gilg为瑞香科常绿乔木,当受到外界刺激如物理、化学伤害或真菌刺激的时候,会分泌出一种气味芬芳的黑色树脂,即为沉香。本文在前期研究中从白木香中分离得到两株内生真菌,分别是镰刀菌(Fusarium solani A2)、Fimetariella rabenhorstii A20,经人工诱导实验证明,镰刀菌(Fusarium solani A2)可诱导健康白木香产生沉香,Fimetariella rabenhorstii A20可产生与沉香结构相似的物质。为了研究真菌对白木香形成沉香组分的影响,建立一种离体实验方法,采用GC-MS对白木香内生真菌A2、A20的乙酸乙酯提取物分别接种于离体白木香树枝后产生的化学成分进行分析,结果显示,A2、A20的乙酸乙酯提取物能诱导离体白木香树枝产生沉香倍半萜类组分。为此,我们选择对分离自白木香内生真菌Fusarium solani A2和Fimetariella rabenhorstii A20的发酵代谢产物进行研究。本文以Fusarium solani.A2为研究对象,对其进行了以白木香木屑为培养基的固体发酵,将发酵产物分别经过石油醚、乙酸乙酯的萃取得不同极性部位的提取物,利用硅胶色谱柱、凝胶柱、重结晶、结合制备高效液相色谱等多种分离方式来分离石油醚部分与乙酸乙酯部分,根据波谱数据分析鉴定出7个化合物,分别是:5,4'-二羟基-7-甲氧基黄酮(芫花素)(1),木犀草素-7,4'-二甲醚(2),5-羟基-7,4'-二甲氧基黄酮(3),5-羟基-7,3',4'-三甲氧基黄酮(4),6-甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮(5),6-甲氧基-2-[2-(3'-甲氧基苯乙基)]色酮(6),β-谷甾醇(7)。以麦芽汁培养基对菌株Fimetariella rabenhorstii A20进行液体发酵,经上述一致的分离方式得8个单体化合物,分别是吲唑(8)、对甲基苯酚(9)、globosumones C(10)、环(4-羟基-L-脯氨酸-亮氨酸)(11)、环(脯氨酸-酪氨酸)(12)、5α,8α-表二氧-(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(13)、3β,5α-dihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-6-one(14)、(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol(15)。化合物1-6均为首次从Fusarium属中分离得到,其中化合物5～6为沉香的特征性成分。化合物8-12,14-15均为首次从Fimetariella rabenhorstii属中分离得到。利用SRB法研究化合物对SF-268、MCF-7、NCI-H460和HePG-2的细胞毒活性,结果表明,化合物2、3、4、7、10、15对SF-268、MCF-7、NCI-H460和HePG-2都表现出一定的抑制效果。本文通过离体模型实验对真菌诱导白木香形成沉香组分进行研究,并对白木香内生真菌A2、A20的次级代谢产物进行研究,为真菌刺激白木香形成沉香成分提供了理论依据,为研究高效人工促香技术,加快沉香生产速度,提高沉香品质具有指导意义,也为内生真菌开发和利用奠定基础。
关键词: 白木香 ；内生真菌 ；Fusarium solani. ；Fimetariella rabenhorstii ；次级代谢产物
被引量
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摘要： 近年来由于真菌感染呈上升趋势，以及真菌对目前使用药物产生耐药性等问题，所以寻找新的抗真菌剂刻不容缓。本论文以从植物和植物共生微生物天然产物中寻找具有抗真菌活性的化合物为主线，在初步活性筛选的基础上，选定以藏药甘青铁线莲（Clematis tangutica）以及热带植物滑桃树（Trewia nudiflora）作为研究对象，从植物体、植物愈伤组织培养、植物共生微生物三个方面开展了相关研究，取得了以下研究结果：
从甘青铁线莲地上部分的乙醇提取物中，通过活性追踪分离得到两个新的抗真菌三萜皂苷。根据光谱数据结合化学反应，将它们的结构分别鉴定为3-O-a-L-arabinopyranosyl hederagenin 28-O- a-L-rhamnopyranosyl ester (1)和3-O-b-D-glucopyranosyl-(1→4) -a-L-arabinopyranosyl hederagenin 28-O- a-L-rhamnopyranosyl ester (2)。这两个化合物对7株真菌的抗菌活性试验表明，它们对Saccharomyces cerevisiae有较好的抑制活性(MIA ≈ 2.5mg/disc)，与阳性对照两性霉素B的活性相当;对Penicillium avellaneum UC-4376, Cadidan glabrata, Trichosporon beigelii的抑菌活性一般 (MIA ≈ 10mg/disc)。对于筛选的大多数菌株，化合物2比化合物1的活性更强。关于该属植物的三萜皂苷已有较多的研究和文献报道，但这是首次报道从该属植物发现具有抗真菌活性的三萜皂苷。
活性追踪分离结合传统的植物化学成分分离方法，对滑桃树果皮不同材料（新鲜、风干、发霉、机械损伤等）的抗真菌等化学成分进行了对照研究，从中共分离并鉴定了25个不同化合物，其中有3个为新的阿替烷型二萜（BP3，BP7，AC2），1个为新的闭花烷型二萜（TC7）。闭花烷型二萜与分离到的其它二萜有显著差异，对其来源进行了初步的探讨，实验结果表明只有发霉的滑桃树果皮中含有该化合物，因此推断TC7可能为滑桃树果皮受真菌胁迫所产生的应激代谢产物（stress metabolite）。活性追踪分离实验结果表明，滑桃树果皮中抗真菌活性最强的成分为美登木素类化合物，并且以特利回生（trewiasine）为主，因此认为美登木素类化合物是滑桃树植物的组成型抗真菌次生代谢产物，它可能在植物对外界有害微生物的化学防御中起重要作用。
从滑桃树种子萌发的无菌苗成功地诱导出愈伤组织，并进行了继代培养;对愈伤组织的化学成分进行了研究，分离鉴定了15个化合物，包括5个新的阿替烷型二萜（TnC 1,10,12,13,14）（其中2个同时在滑桃树果皮中分离得到）;实验结果表明：滑桃树愈伤组织在目前使用的培养条件下不能产生美登木素类化合物。
从温室栽培滑桃树的不同部位、滑桃树无菌苗、愈伤组织进行内生菌的分离，共分离纯化了未鉴定的内生真菌57株 (isolates)、内生放线菌10株、内生细菌2株。采用共培养拮抗实验 (antagonistic test)与小规模发酵产物的活性测试相结合，对分离到的菌株进行抗真菌活性筛选，发现具有抗真菌活性的菌株10株，其中真菌8株、放线菌2株。对活性较好的4株真菌进行了分类学鉴定，从中挑选了2株 (1TnR2-4和2TnP1-2)进行了化学成分研究。
活性追踪从菌株1TnR2-4 （Cylindrocarpon sp.）琼脂固体发酵（7L）产物中，分离到抗真菌活性成分——化合物CSE1 (brefeldin A)及其衍生物CSE3 (7-acetylbrefeldin A)、CSE4 (7-dehydrobrefeldin A)，其中CSE3为一新天然产物。初步的抗癌活性测试表明：化合物CSE1及CSE3具有抗癌活性。这是首次从柱孢属（Cylindrocarpon）真菌中分离到这类化合物。从中分离到的其它次生代谢产物还包括鞘糖脂（CSE5）、甾体和脂肪酸等。
活性追踪结合常规的化学成分分离方法，对菌株2TnP1-2 （Fusarium sp.）的次生代谢产物进行了研究，从2L琼脂固体发酵的产物中分离并鉴定了3个化合物FS1、FS2、FS3，其中FS3为一新化合物。初步的抗癌活性测试结果表明：FS1具有抗癌活性。
最后在论文的综述部分，介绍了植物利用次生代谢产物作为防御外界病原菌、植食性动物等侵害的武器，这些化学防御涉及3种不同类型：组成型化学防御、诱导型化学防御以及共生化学防御。
关键词: 药用植物 ；铁线莲 ；滑桃树 ；抗真菌成分 ；美登木素类化合物 ；内生菌 ；化学防御 ；抗癌活性
摘要： 共生真菌（symbiotic fungi），作为一种新的特境微生物资源，逐渐成为人们寻找新天然产物的热点。其种类众多、分布广泛，并且为适应其独特的生存环境而产生的次生代谢产物结构新颖、功能奇特，已成为新活性物质研究的重要来源。 本文对一株昆虫肠道共生真菌Daldinia eschscholzii TL-01和一株植物内生真菌Fusarium sp.IFB-121的次生代谢产物进行了研究。分别将两菌株小规模发酵，利用现代色谱技术（硅胶、ODS、Sephadex LH-20以及HPLC），对发酵好的菌体进行提取分离，共得到了24个化合物，综合运用各种波谱技术（IR，MS，1H-NMR，13C-NMR，HMQC，HMBC，COSY, NOESY和CD等）以及X-ray单晶衍射技术鉴定了22个化合物的结构，其中3个足新化合物，并对部分化合物进行了免疫抑制活性和抗菌活性的初步研究。具体分述如下: 1.从肉食性昆虫大刀螳螂(Tenodera aridifolia)肠道共生真菌Daldiniaeschscholzii TL-01的液体发酵物中分离得到17个化合物，鉴定了其中15个化合物的结构(1-15)，其中有13个聚酮类化合物(polyketides)，包括两个未见报道的新骨架化合物（2和3），1个新的细胞松弛素类化合物(1)。聚酮类化合物4和5有显著的免疫抑制活性(IC50:0.16-0.58μg ml-1)，与阳性对照环孢菌素A(CsA，IC50:0.06μ g ml-1)相近。凶此这类化合物有望作为新型免疫抑制剂的先导化合物。化合物1属细胞松弛素类化合物，文献报道该类物质具有较强的离体细胞毒活性。 2.用传统的分离方法，从栓皮栎(Quercus wariabilis BL.)内生真菌Fusarium sp.IFB121的固体发酵物中分离得到7个化合物，并鉴定了他们的结构。其中3个为脑苷脂类化合物(18，19，20)，2个是甾醇类化合物(21，22)。通过体外抗菌活性和免疫抑制实验表明:化合物18、19、20这3个脑苷脂类化合物，对细菌有一定的抑制活性，并且Fusaruside(18)具有改善Concanavalin A所致肝损伤的作用，能显著降低血清中ALT，AST以及LDH的水平，且作用具有剂量依赖性关系。能显著降低血清中TNF-α，IFN-γ等细胞因子的水平。 本论文的结果表明，共生真菌作为特境微生物的一个重要组成部分，其次级代谢产物具有结构新颖性和多样的生物活性，是寻找药物先导化合物的重要资源。
关键词: 共生真菌 ；次生代谢产物 ；免疫抑制 ；抗菌活性 ；结构分析