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摘要： 目前，肿瘤化疗进入平台期,寻找有效的肿瘤血管生成抑制剂（TAI）已成为抗肿瘤新药研究的一个热点。
为了探讨木贼（Equisetum hiemale L.）是否具有抗血管生成活性，采用鸡胚绒毛尿囊膜法（Chorio Allantioc Membrane CAM）对木贼乙酸乙酯萃取部分进行了抗血管生成活性实验。实验结果表明，木贼乙酸乙酯萃取部分具有一定的抗血管生成活性。
在此药理实验基础上，对木贼进行了化学成分研究。
木贼（Equisetum hiemale L.）干燥地上部分，利用溶剂法、硅胶柱层析等分离手段，分离得到3种化合物。根据这些化合物的理化性质、光谱分析与标准品共正等方法鉴定了3种化合物的结构。它们分别为：十九烷酸(Nonadecanoic acid)、山柰素(Kaempferol)、槲皮素(Quercetin)。其中十九烷酸(Nonadecanoic acid)是首次从木贼中分离得到的已知化合物。
目前所发现的血管生成抑制剂主要包括生物制剂、内源性血管生成抑制因子、化学药物及中药等，其中对中药的研究甚少。本实验结果对开发、利用天然药物资源及寻找更有效的血管生成抑制作用的药材提供了科学依据。
关键词: 木贼 ；化学成分 ；肿瘤 ；抗血管生成
被引量
5
摘要： 骨肉瘤是临床常见的原发性骨恶性肿瘤,具有高致死率和高致残率的特点,发病机制尚不明确,但各方面研究均表明其发生与发展是一个由多基因参与、多信号通路交叉作用的复杂过程。中医药治疗本病具有多生物活性成分、多靶点和多通路协同作用的优势,中药单体或提取物可以通过调控多条信号通路促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞自噬以及抑制肿瘤新生血管生成等发挥抗肿瘤作用。因此,本研究查阅整理了相关文献,重点对中医药调控分泌型糖蛋白(Wnt)、神经源性位点缺口同源蛋白(Notch)、核转录因子(nuclear factor,NF)-κB、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB别名Akt)、有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedprotein kinase,MAPK)、Janus激酶(janus kinase,JAK)/信号转导及转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)等信号通路治疗骨肉瘤的相关研究进行述评,以期为中医药治疗骨肉瘤提供参考和依据。
关键词: 骨肉瘤 ；中医药 ；信号通路 ；肿瘤细胞
被引量
2
摘要： 目的提取壁虎中抗肿瘤的有效成分,并对其抗肿瘤机制进行初步探讨。方法新鲜壁虎经过酒精浸泡,粉碎、过滤、旋蒸、抽滤,有机溶剂萃取。在细胞实验的指导下,利用高效液相色谱法分离后,最终提取分离到具有抗肿瘤作用的活性成分。通过大鼠角膜袋实验对其抗肿瘤的作用机制进行初步研究。结果实验提取的壁虎抗肿瘤活性成分有较强的抗肿瘤作用,并可以抑制由VEGF诱导的角膜新生血管的生成。结论该方法可以提取到壁虎中的抗肿瘤活性成分。该抗肿瘤成分能够通过抑制新生血管的生成达到抗肿瘤的作用。
关键词: 壁虎 ；肿瘤 ；角膜袋 ；血管生成
被引量
2
摘要： 山慈菇,味甘、微辛,归肝、脾经。研究表明,山慈菇的主要化学成分包括菲类化合物、联苄类化合物、芳香化合物及其苷类、糖及糖苷类化合物、萜类及甾体类化合物、黄酮类化合物等,具有抗菌、降压、治疗痛风、抗肿瘤以及阻断乙酰胆碱受体M3等作用。近年来,山慈菇由于良好的抗肿瘤活性,而在临床上被广泛应用。其抗癌机制涉及抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新生血管生成、抑制肿瘤细胞的侵袭和转移、增强机体免疫力等。本文将对山慈菇的化学成分及其抗肿瘤作用机制作一综述,以期为山慈菇的抗肿瘤机制及深入开发研究提供理论支持。
关键词: 山慈菇 ；化学成分 ；抗肿瘤活性 ；作用机制
被引量
24
摘要： 桑黄是一种可食用真菌,含有多种药理活性成分,具有广泛的抗肿瘤活性。研究表明,桑黄对肺癌、胃癌、乳腺癌、肠癌、食管癌、脑胶质瘤、肝癌、宫颈癌等多种癌病具有防治作用,在抑制肿瘤细胞生长、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期、抑制肿瘤侵袭转移、抑制肿瘤新生血管生成、增效减毒、抗氧化及提高机体免疫力等方面也有显著作用。该文对近年来桑黄防治肿瘤作用及机制的相关研究进行综述,以期对桑黄这一具有巨大潜力的新兴品种进一步充分开发,也为防治肿瘤探索新前景。
关键词: 桑黄 ；肿瘤 ；作用机制 ；实验研究
被引量
3
摘要： 人参中主要活性成分是人参皂甙,目前发现有40多种单体,人参皂甙Rg3是研究较多的单体,对于人体各个系统如神经系统、内分泌系统、血液系统、免疫系统等均有很好的效果。近年研究发现人参皂甙Rg3具有很好的抗肿瘤作用,可抑制肿瘤新生血管形成,在肿瘤的生长、侵袭、转移过程中,起着重要作用,其作用机制与抑制血管生成因子,抑制血管内皮细胞增殖及迁移,干扰内皮细胞与细胞外基质的相互作用有关。
关键词: 人参皂甙Rg3 ；抗肿瘤 ；作用机制
被引量
6
摘要： 人参作为传统中药家喻户晓,其提纯的重要活性成分之一──人参皂苷Rg3,在科研中发现,具有多方向、多"靶点"抗肿瘤作用,并在临床治疗中不断被证实和推广。目前发现:人参皂苷Rg3具有抑制肿瘤细胞增殖作用;通过激活凋亡基因活性或抑制凋亡抑制蛋白等,从而促进肿瘤细胞凋亡;抑制肿瘤细胞的侵袭和转移;抑制肿瘤血管生成因子的信号传导途径,促进肿瘤血管生成抑制因子的表达,从而抑制肿瘤新生血管形成;与部分化学药物联合,可明显提高效果,同时对临床患者无明显血液系统毒性,并提高生活质量等作用。近年临床及体外实验证明,人参皂苷Rg3对多个系统并以不同机制发挥抗肿瘤作用,而对其研究仍在不断探索新的方向。作为祖国传统中药中提纯的单体抗肿瘤药物,在现今综合抗肿瘤治疗中意义深刻。
关键词: 人参皂苷Rg3 ；增值 ；凋亡 ；转移
被引量
26
摘要： 迄今为止,癌症在全球范围内仍然是一个突出的健康挑战。肿瘤的形成和发展不仅取决于其内在特性,还受到肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)的显著影响。复杂的TME为肿瘤的生长、侵袭和迁移提供了土壤,同时也给传统的癌症治疗方法带来了挑战。光动力学治疗(Photodynamic therapy,PDT)是一种光触发、微创、高时空选择性和低全身毒性的先进治疗策略。然而,传统意义上的PDT存在一定局限性,比如静脉注射后血液循环时间短而导致药物在肿瘤组织中积累不足。基于多肽的纳米药物因其生物相容性和多功能性可克服传统PDT在癌症治疗中的缺点,增强肿瘤的特异性靶向治疗,并可结合其他疗法实现肿瘤的联合治疗。因此,本文利用多功能嵌合肽构建不同纳米药物,通过改善TME、增强PDT实现高效的肿瘤治疗。本文工作内容如下:
第一章主要介绍了本文相关的研究背景。首先,介绍了癌症治疗的现状和趋势,以及PDT的概念、作用机制和在肿瘤领域的相关应用。其次,介绍了TME及其成分在癌症进展中的作用。最后,概述了具有自组装性能的多肽及其优势,以及在药物递送中的应用。
第二章介绍了一种神经纤毛蛋白-1(Neuropilin-1,NRP-1)靶向纳米药物FPPT@Axi,通过将PDT与抗血管生成相结合治疗肿瘤。FPPT@Axi通过NRP-1靶向嵌合肽(Fmoc-K(PpIX)-PEG8-TKPRR,FPPT)封装抗血管生成药物阿昔替尼(Axitinib,Axi)制备而成。NRP-1介导的靶向特性使FPPT@Axi能够选择性地聚集在血管内皮细胞和肿瘤细胞,在光照下通过原位产生活性氧(Reactive oxygen species,ROS)破坏血管并促进细胞凋亡。此外,共递送的Axi可以进一步抑制血管内皮生长因子受体(Vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR),从而抑制PDT引起的肿瘤新生血管生成,增强肿瘤治疗效果。最终,FPPT@Axi通过阻断血管生成、破坏肿瘤血管和诱导肿瘤凋亡有效抑制了肿瘤生长。
第三章介绍了一种靶向细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)的纳米药物FPC@S,FPC@S的目的是调控肿瘤ECM和癌症相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts,CAFs)改善 TME,增强光动力免疫治疗。具体而言,FPC@S由ECM靶向嵌合肽FPC(Fmoc-K(PpIX)-CREKA)与抗纤维化药物SIS3组装而成。通过实验验证了 FPC@S的良好的粒径分布、水稳定性和酸响应特性,为后续的细胞和动物实验提供了可行性。
关键词: 肿瘤微环境 ；血管生成 ；细胞外基质 ；靶向肽 ；光动力学治疗
摘要： 目前化疗仍然是治疗癌症的主要手段,但是由于癌症是一种复杂多变的疾病,所以靶点单一的化疗药物很难根除所有的癌细胞。金属基药物由于其独特的氧化还原性质,以及多变的配位模式,使其成为广谱的抗癌药物,不仅具有疗效确切等优点,同时还具有多样的抗肿瘤机制。但是,创新性发展金属抗癌药物仍然面临以下几大挑战:1)如何避免金属化合物在血液循环过程中被破坏;2)如何提高金属化合物的体内生物利用度使其更多的聚集到肿瘤组织中;3)如何提高金属化合物的成药性,特别是治疗效果、靶向能力和降低其体内毒副作用。天然内源性蛋白质(如人血清白蛋白,铁蛋白)是人体内固有的蛋白质,具有无毒、无免疫原性、高度生物相容性等特点。由于肿瘤细胞表面高表达的SPARC蛋白和转铁蛋白受体Transferrin receptor 1(Tf R1)可以分别和白蛋白或铁蛋白特异性结合,使这两个蛋白能够成为转运载体靶向肿瘤细胞递送药物,有望解决金属化合物毒性高、生物利用度低、靶向性差等难题。综上所述,本文主要从以下几个方面进行了研究:1)利用脱铁铁蛋白(Apoferritin,AFt)的血脑屏障穿透能力和Au化合物对脑胶质瘤细胞的杀伤能力,构建了脱铁铁蛋白-金化合物的纳米系统,并研究了其通过诱导致死性自噬和凋亡来杀伤胶质瘤细胞的机制;2)构建了人血清白蛋白-金化合物的纳米系统,研究和讨论了其体内外抗癌效果、体内外引起免疫反应及诱导癌细胞凋亡的机制;3)构建了能够抑制肿瘤新生血管生成的人血清白蛋白-铂化合物载药体系,并评估了其体内外抑制肿瘤新生血管及抑瘤效果。具体的研究结果分为以下几个部分:一、设计合成了系列脑胶质瘤敏感的缩氨基硫脲类金化合物,利用核磁共振氢谱、高分辨质谱、单晶衍射对化合物进行了结构表征。通过构效关系研究发现了对脑胶质瘤细胞活性最好的C6,并成功构建了脱铁铁白蛋白-C6纳米粒(AFt-C6 NPs)。Luc-U87MG模型小鼠体内实验表明,AFt-C6 NPs对脑胶质瘤生长的抑制率为69.2%,是单独C6(IRT=22.8%)的3倍。此外,我们证实了C6通过诱导致死性自噬和凋亡来杀伤胶质瘤细胞。更重要的是,我们的研究结果显示成功构建的AFt-C6 NPs能够有效地穿过血脑屏障(BBB),抑制胶质瘤生长,并选择性地在肿瘤组织中聚集。二、为了有效地靶向治疗胃癌,我们提出了以人血清白蛋白(HSA)纳米粒(NPs)的氨基酸残基为基础,通过对肿瘤微环境(TME)中细胞成分的双重靶向作用,开发一种集免疫治疗和化疗于一体的金属药物。我们获得了对胃癌细胞具有显著细胞毒性的Au化合物(C11);我们还成功构建了一个新型的HSA-C11复合物纳米粒(HSA-C11 NPs)递送系统。更重要的是,体内实验结果表明,HSA-C11 NPs在体内的治疗效果明显优于单独的C11,其抑瘤率(75.3%)是C11的1.5倍(51.1%),并且与C11单独使用相比,HSA-C11 NPs能显著提高生物利用度和靶向性。此外,体内外实验结果表明,C11/HSA-C11 NPs通过极化肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和诱导胃癌细胞凋亡,从而实现化疗和免疫治疗的一体化协同作用。三、为了发展新型抗癌铂化合物,克服现有铂类药物的不足,全面协同治疗癌症,我们提出了基于肿瘤微环境而非DNA靶点发展新型抗肿瘤铂化合物,并成功构建了人血清白蛋白(HSA)-Pt复合物给药体系,以提高其成药性。在此,我们根据缩氨基硫脲配体的体外构效关系,设计合成了一种具有显著细胞毒性的Pt化合物(C13)。体内实验结果表明,C13通过抑制肿瘤血管生成和诱导铁死亡来抑制肿瘤生长。更重要的是,我们成功构建了新型的HSA-C13复合物(HSA-C13 complex)给药体系,有效地保护了C13在血液循环中的完整性,延长了C13的滞留时间,提高了其体内靶向性,减少了体内副作用。
关键词: 药物载体 ；脱铁铁蛋白 ；人血清白蛋白 ；金属化合物 ；抗肿瘤
被引量
1
摘要： 蒲公英（TaraxacummongolicumHand.-Mazz,TMHM）为多年生的菊科植物，具有显著的抗炎抗肿瘤功能。蒲公英含有多种生物活性成分，包括多糖、三萜类、黄酮类、有机酸类化合物，其中有机酸类成分种类丰富，具有抗肿瘤的功效，蒲公英有机酸成分主要包括：菊苣酸、原儿茶酸、咖啡酸、阿魏酸、绿原酸、单咖啡酰酒石酸等。2020版药典中将菊苣酸作为测定蒲公英的指标物，目前针对菊苣酸成分对食管癌进程的影响尚无报道。 食管癌是一种高度致命的癌症，其中食管鳞癌（Esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC）是我国主要流行的组织亚型，其肿瘤块形成迅速，且在接受治疗后仍会产生局部复发以及远端转移等不利现象，5年生存率低于25％。在实体瘤的发展进程中，癌组织会出现缺氧的微环境，通过调节缺氧诱导因子1α（hoypoxiainducedfactor-1α，HIF-1α），诱导与转移相关的基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase，MMP-9）以及血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)以促进肿瘤新生血管的发生，对于维持肿瘤的生长、侵袭、转移和复发至关重要。其中作为最常见的与增殖相关致病信号途径的PI3K通路以及MAPK信号通路在食管鳞癌的发生发展过程中发挥着重要的作用。 本研究旨在研究蒲公英提取物中有机酸成分对食管鳞癌细胞生长的影响以及探寻其主要成分菊苣酸（Chicoryacid，CA）在缺氧环境中抵抗食管鳞癌血管生成的潜在机制，以发掘治疗食管鳞癌的潜在药物。 首先对蒲公英进行有机酸类成分的提取，采用回流醇提法对蒲公英全草进行提取，并利用其化学结构中存在的酚羟基发生显色反应，使用紫外分光光度法对提取物进行总有机酸类成分的含量测定并对该检测方法进行验证。结果显示，蒲公英提取物中的有机酸类成分的含量为140μg/g，该显色方法在测定波长为743.5nm时专属性良好，菊苣酸成分在0.522~2.610μg/ml范围内与吸光度呈线性正比（r=0.9995），该检测方法具有较好的重复性和准确性。 在蒲公英有机酸提取物（OrganicacidcomponentsofTMHM,TMHM-OAC）对两种食管鳞癌细胞TE1和TE13进程影响的研究中，采用缺氧模拟剂氯化钴（COCL2）建立食管鳞癌细胞的体外缺氧环境，使用WesternBlot检测出能够有效刺激缺氧诱导因子HIF-1α表达的氯化钴的使用浓度，结果为TE1和TE13细胞的最适氯化钴使用浓度分别为200μM和150μM;采用CCK8增殖实验来反映细胞的增殖性和毒性，方法为使用CCK8试剂盒对不同浓度的TMHM-OAC作用下的ESCC细胞进行反应并测定OD值，结果为TMHM-OAC具有浓度依赖性的降低两种ESCC细胞的增殖能力;采用细胞划痕实验来判断细胞迁移运动和伤口愈合修复的情况，方法为将TMHM-OAC在缺氧环境下作用已划过等距宽度的单层ESCC细胞并进行时间与划痕宽距的测定，结果为TMHM-OAC可降低两种ESCC细胞的迁移能力;采用Transwell侵袭实验来反映细胞的侵袭性，方法为用TMHM-OAC在缺氧环境下作用铺在基质胶覆盖后的小室内的ESCC细胞，并对进入下室的细胞进行计数，结果为TMHM-OAC可降低两种ESCC细胞的侵袭能力;采用小管形成实验来反映在肿瘤细胞分泌物影响下的内皮细胞的形成血管生成的能力，方法为将TMHM-OAC在缺氧环境下作用ESCC细胞后的上清作为条件培养基收集，然后使用条件培养基作用到铺在基质胶覆盖后的内皮细胞上，并对形成的管状交叉点及主干长度进行定量化测定，结果为TMHM-OAC可降低受两种ESCC细胞条件培养基影响的内皮细胞的小管生成的能力。 采用网络药理学的分析方法，以探究蒲公英有机酸类物质作用食管鳞癌的关键作用靶点及相关密切的通路。方法为从公共数据库PubChem及SwissTargetPrediction中将蒲公英主含的几种有机酸类物质包括咖啡酸、菊苣酸、阿魏酸、单咖啡酰酒石酸、原儿茶酸和绿原酸中起作用的活性成分筛选出来，与从GeneCards、OMIM及NCBI数据库中筛选出的与食管鳞癌相关的4971个作用靶点进行合并取交集，得到“成分-疾病”的交集靶点共70个。将交集靶点进行PPI可视化展示以及GO和KEGG富集分析。采用计算机辅助药物设计（CADD）方法将蒲公英有机酸成分与靶点蛋白MAPK1使用分子对接技术对两者的结合能力进行预测。结果为筛选出蒲公英有机酸类物质活性成分与ESCC交集靶点共70个，包括ALB、EGFR、PTGS2、MMP9、STAT3、MAPK1等;KEGG富集分析气泡图结果显示，HIF-1信号通路、PI3K-Akt信号通路可能在有机酸治疗食管鳞癌中发挥作用;分子对接结果显示两者之间的DockingScore值为-5.36，结合活性较好。 为深入探索蒲公英有机酸成分中的重要组分-菊苣酸在缺氧环境中抵抗食管鳞癌血管生成的潜在机制，本研究采用CCK8增殖实验及集落形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验以及小管形成的体外实验来测定菊苣酸成分对两种食管鳞癌细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力以及血管形成能力的影响，结果显示菊苣酸均可降低对两种ESCC细胞在缺氧环境中的上述过程。此外，采用免疫荧光技术来评估HIF-1α的入核能力，结果显示CA可在缺氧的环境下可减少HIF-1α核转录情况;使用WesternBlot的应用来检测食管鳞癌细胞中的HIF-1α、VEGF、MMP-9、P-AKT、P-ERK、PHD3的表达水平，结果显示菊苣酸可能是通过ERK/PHD3/HIF/VEGF途径在缺氧造成的肿瘤微环境下发挥抑制食管鳞癌的发展进程。 结果表明，蒲公英提取物中的有机酸成分可以有效抑制食管鳞癌TE13和TE1细胞的生长、增殖、迁移和侵袭能力，同时，菊苣酸成分可能通过ERK/PHD3/HIF/VEGF途径来抑制食管鳞癌的发展进程。本研究为探索蒲公英抗食管鳞癌的作用机制奠定理论基础。
关键词: 食管鳞癌 ；蒲公英 ；菊苣酸 ；血管生成 ；迁移侵袭
摘要： 背景卵巢癌死亡率居于妇科恶性肿瘤首位,由于其发病隐匿,75%患者确诊时已处于晚期,手术联合化疗是标准治疗,但近30年晚期卵巢癌的生存未见明显提高,晚期患者5年生存率仍不足30%。维持治疗可提高晚期患者生存期和生活质量,标准治疗后采用何种方法进行维持治疗是医学工作者面临的挑战,随着现代分子生物学技术及人类基因组学的发展,精准治疗成为肿瘤治疗的趋势,目前精准靶向治疗药物血管生成抑制剂和PARP抑制剂已用于卵巢癌维持治疗,并显示出一定疗效,但因价格昂贵和伴随副作用等原因限制了其在临床中的使用。探究卵巢癌新的维持治疗方法是临床迫切需要解决的问题。中医维持治疗卵巢癌在临床中应用广泛,疗效确切。益气活血解毒方(YHJD)是在近代名医张锡纯“理冲汤”基础上加减而成维持治疗晚期卵巢癌的有效处方,前期临床试验显示,与安慰剂组相比,YHJD维持治疗能够延长晚期卵巢癌患者中位无进展生存期,改善患者生活质量及中医症状;能下调外周血调节性T细胞,上调细胞毒T细胞。动物实验表明,YHJD可抑制与Tregs相关的免疫抑制因子TGF-β1、IL-10的表达;细胞实验表明YHJD能抑制血管生成,与本方影响Tregs促进肿瘤新生血管相关。综合分析临床和基础的研究,表明YHJD维持治疗可延长晚期卵巢癌患者生存,可能是通过多个靶点共同发挥抗肿瘤作用。YHJD活性成分众多,而卵巢癌又是多基因多通路异常的异质性复杂疾病,故有必要通过全面研究YHJD有效成分与疾病多靶点多通路的相互作用,明确有效机制;并通过对该方作用后疗效差异最显著两组人群的分析,从分子生物学角度,探究该方差异疗效的机制,明确YHJD治疗优势人群的基因特点。网络药理学强调用网络的方法研究多靶点药物作用于人体的整体性动态性,在研究中药复方治疗复杂疾病的核心有效成分、内在机制、干预靶标,及中药的系统性作用机制等方面广泛应用。卵巢癌具有不同的分子亚型和基因组特征,研究患者血液中基因特征,可能发现治疗疗效相关的预测因子。因此,本研究拟使用网络药理学和基因组学研究方法;从网络药理学层面研究YHJD治疗卵巢癌的核心中药、核心活性成分、靶点、通路及作用机制;体内动物实验验证网络药理学分析得到的核心中药对卵巢癌荷瘤小鼠的抑瘤作用;从mRNA芯片联合网络药理学层面,对服用YHJD后无进展生存时间最长和最短的两组患者行mRNA芯片,将得到差异疗效相关的差异基因联合网络药理学,进一步研究YHJD差异疗效的靶点、通路及分子机制,为YHJD临床精准治疗提供一定参考。目的(1)从网络药理学层面探讨YHJD17味中药治疗卵巢癌的核心中药、核心活性成分、靶点、通路及作用机制;(2)构建卵巢癌小鼠模型,通过观察YHJD核心中药治疗荷瘤小鼠移植瘤的抑瘤实验,验证网络药理学结果的可靠性;(3)从临床mRNA芯片联合网络药理学层面,探讨YHJD临床治疗后差异疗效相关的靶点、通路及分子机制,为YHJD临床精准治疗提供一定参考。方法研究分三个部分:一、YHJD治疗卵巢癌作用机制的网络药理学研究;二、YHJD核心中药对ID8荷瘤小鼠移植瘤抑瘤作用的实验研究;三、YHJD治疗卵巢癌差异疗效机制的mRNA芯片联合网络药理学研究。具体如下:一、YHJD治疗卵巢癌作用机制的网络药理学研究1.数据获取:使用TCMSP、ETCM、BATMAN-TCM和TCMID数据库输入关键词“黄芪”、“女贞子”、“枸杞子”、“白术”、“山药”、“海藻”、“三棱”、“莪术”、“青皮”、“乌药”、“肉桂”、“白花蛇舌草”、“青嵩”、“半枝莲”、“鸡内金”、“水蛭”、“全虫”。以口服生物利用度(oralbioavailability,OB)≥30%、类药性(Drug-likeness,DL)≥0.18 或类药性等级(Druglikeness Grading)≥0.49为活性成分的ADME(机体对外源化学物的吸收、分布、代谢及排泄过程)筛选条件,构建活性成分数据库。以候选基因评分(Candidate Target Genes)>0.8为靶蛋白筛选条件,构建成分对应靶蛋白数据库。使用DisgeNET、GeneCards和DrugBank数据库,输入关键词“ovarian cancer”检索卵巢癌相关基因,构建疾病相关基因数据库。2.网络分析:将成分对应靶蛋白和卵巢癌相关基因进行匹配取交集基因得到重点基因。将重点基因导入string得到蛋白相互作用网络关系,将网络关系导入Cytoscape,使用 Network Interpretation 工具进行网络分析,筛选 Degree>60的节点,为核心基因。使用R语言中的“Bioconductor”、“clusterProfiler”包,进行核心基因的GO功能富集与KEGG通路富集。通过核心基因映射,建立中药、活性成分、核心基因、通路间的对应关系,建立“中药-成分-核心靶点-通路”网络;以Degree≥10为卡值筛选网络中核心中药和核心成分。二、YHJD核心中药对ID8荷瘤小鼠移植瘤抑瘤作用的实验研究1.构建卵巢癌小鼠模型将雌性C57BL/6小鼠右上肢腋下接种1×107个ID8小鼠卵巢癌细胞,共30只,造模成功后随机分为5组:化疗组(顺铂),核心中药组(YHJD核心中药),中西医组(顺铂+YH.JD核心中药),中药组(YHJD),单纯荷瘤组(生理盐水),每组6只;2.观察YHJD核心中药对ID8荷瘤小鼠的抑瘤作用每日观察小鼠一般情况,每周测量一次小鼠日均摄入量、体重、瘤体长短径;当单纯荷瘤组瘤体长径>1cm时结束抑瘤实验,取材后称瘤重,计算各治疗组抑瘤率[抑瘤率=(单纯荷瘤组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/单纯荷瘤组平均瘤重X 100%]。三、YHJD治疗卵巢癌差异疗效机制的mRNA芯片联合网络药理学研究1.数据获取:纳入服用YHJD治疗的Ⅲc-Ⅳ期晚期卵巢癌患者300例,服药半年后抽取外周血,提取RNA并保存。随访后筛选无进展生存最长的8例和最短的7例患者行mRNA芯片检测,筛选P<0.05且差异倍数>1.2的基因为YHJD治疗卵巢癌的疗效相关差异表达基因。2.将疗效相关差异表达基因与研究一中获得的YHJD活性成分对应靶蛋白、卵巢癌疾病相关基因取交集得到差异疗效的核心基因。核心基因导入String构建蛋白相互作用网络,并使用R语言,得到核心基因的Degree排名。核心基因使用R语言进行GO功能富集和KEGG通路富集。通过差异疗效相关核心基因与中药、活性成分、通路的映射,构建差异疗效相关的“中药-成分-核心靶点-通路”网络。结果一、YHJD治疗卵巢癌作用机制的网络药理学研究1.数据获取:YHJD在TCMSP、ETCM、BATMAN-TCM、TCMID数据库中筛选出符合ADME条件的活性成分193种。YHJD在TCMSP、ETCM、BATMAN-TCM数据库中筛选出符合条件的活性成分对应靶蛋白877个。DisGeNET、GeneCards、DrugBank数据库中收集卵巢癌相关基因18483个。2.网络分析:YHJD活性成分对应靶蛋白和卵巢癌相关基因取交集得到YHJD治疗卵巢癌的重点靶基因676个。重要靶基因导入String、Cytoscape,以Degree>60为卡值,得到IL6、VEGFA、TNF、MMP9、FN1免疫、血管生成等肿瘤相关核心基因123个。对核心基因GO功能富集显示,YHJD治疗卵巢癌的核心基因参与核受体功能,转录因子活性、聚合酶Ⅱ近RNA端启动子等生物学过程。核心基因KEGG通路富集显示,YHJD治疗卵巢癌的核心基因涉及TNF信号通路、HIF-1信号通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、IL-17信号通路等免疫、血管生成等肿瘤相关通路。对“中药-成分-核心靶点-通路”网络中的中药进行Degree评价,以Degree≥10为卡值,得到YHJD核心中药枸杞子、半枝莲、青蒿、黄芪、山药,槲皮素、山柰酚、黄芩素、木犀草素等10个活性成分是YHJD治疗卵巢癌的核心活性成分。二、YHJD核心中药对ID8荷瘤小鼠移植瘤抑瘤作用的实验研究1.构建ID8卵巢癌细胞接种量为1×107个/只的C57BL/6小鼠移植瘤模型,接种一周后小鼠全部造模成功,开始给药并观察生长状态。2.荷瘤小鼠给药11周后,单纯荷瘤组各小鼠肿瘤最短长径为1cm,终止抑瘤实验,测量计算抑瘤率[抑瘤率=(单纯荷瘤组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/单纯荷瘤组平均瘤重X 100%],结果显示:(1)核心中药组、中西医结合组、中药组、单纯荷瘤组小鼠摄入量多于化疗组,差异有统计学意义[(2.86±0.49)、(2.46±0.32)克、(2.76±0.38)克、(2.65±0.35)克vs(2.14±0.31)克,均P<0.05]。核心中药组多于中西医结合组,差异有统计学意义[(2.86±0.49)克vs(2.46±0.32)克,P<0.05]。(2)核心中药组、中西医结合组、中药组、单纯荷瘤组小鼠体重高于化疗组,差异有统计学意义[(22.49±0.85)克、(20.45±0.53)克、(21.48±0.86)克、(20.86±0.62)克vs(19.14±1.56)克,均P<0.05]。核心中药组高于中西医结合组、单纯荷瘤组,差异有统计学意义[(22.49±0.85)克vs(20.45±0.53)克、(20.86±0.62)克,均 P<0.05]。(3)各组小鼠肿瘤体积随时间逐渐增大,实验结束时,化疗组、中西医结合组肿瘤体积皆小于单纯荷瘤组,差异有统计学意义[(271 ±67)mm3、(218±128)mm3 vs(510±226)mm3,均 P<0.05]。(4)各组抑瘤率为:核心中药组32.01%,化疗组43.14%,中西医组51.09%,中药组24.45%。三、YHJD治疗卵巢癌差异疗效机制的mRNA芯片联合网络药理学研究1.数据获取:以P<0.05,差异倍数>1.2为卡值,获得YHJD差异疗效相关基因1157个。2.网络分析:1157个差异表达基因与研究一中数据库检索得到的卵巢癌相关基因、YHJD对应的靶蛋白取交集,得到YHJD治疗卵巢癌差异疗效相关核心基因42个。通过R语言工具对Degree进行排序并展示,显示AHR,TIMP1,NFE2L2,CCNB1,PARP1,MCL1,MDM2等基因在核心基因中较重要。核心基因的GO功能富集显示差异疗效相关核心基因GO功能富集在:钠离子跨膜转运蛋白活性、MAP激酶活性、核受体转录辅活化活性、核苷酸酶的活动、MAP激酶活性、激素受体结合、核受体结合等生物学过程。核心基因KEGG通路富集显示卵巢癌差异疗效相关基因主要涉及的通路为:铂耐药、p53信号通路、细胞色素P450对外源性药物代谢的影响、细胞凋亡等信号通路。构建差异疗效相关的“中药-成分-核心靶点-通路”网络。结论1.YHJD治疗卵巢癌的核心活性成分可能是槲皮素、山柰酚、黄芩素、木犀草素等,核心中药可能是黄苗、山药、枸杞子、半枝莲、青蒿。2.YHJD可能通过调控IL6、VEGFA、TNF等与免疫、血管生成有关的基因抑制卵巢癌;其中AHR等耐药相关基因可能是优势人群被调控的基因。3.YHJD可能通过调节TNF信号通路、HIF-1信号通路、MAPK信号通路等,与免疫、血管生成有关的通路抑制卵巢癌;其中调控铂耐药通路、细胞色素P450等,影响药物代谢及疗效的信号通路可能是治疗优势人群被调控的通路。4.网络药理学分析得到的YHJD核心中药对荷瘤小鼠肿瘤生长有抑制作用,并能增强化疗的抗肿瘤作用,改善荷瘤及化疗引起的生活质量下降。网络药理学分析结果具有可靠性。
关键词: YHJD ；网络药理学 ；晚期卵巢癌 ；mRNA芯片 ；靶基因
被引量
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摘要： 目的:本文以消癥散结止痛贴膏为研究对象,探索其有效成分及作用机制。采用UPLC-Q-Exactive静电场轨道阱高分辨质谱联用技术,对消癥散结止痛贴膏的化学成分进行全面分析和表征,筛选有效成分;复制相关动物模型,系统评价消癥散结止痛贴膏的药效学;体内实验观察消癥散结止痛贴膏对裸鼠乳腺癌动物模型的一般状态,异体瘤体体积,抑瘤率影响,检测VEGF,Bcl,Caspase-3基因和蛋白表达,体外实验培养乳腺癌细胞系MCF-7细胞,通过检测观察本制剂体外对目的细胞系的存活率、凋亡率、VEGF,Bcl,Bax,Caspase-3基因及蛋白的改变,阐明消癥散结止痛贴膏治疗乳腺癌的机制。方法:1.采用UPLC-Q-Exactive静电场轨道阱高分辨质谱联用技术,对消癥散结止痛贴膏的化学成分进行全面分析和表征,进一步筛选出含量占比高、生物活性强的成分,应用UPLC MS/MS对其化学成分进行含量测定。2.选取4-6周雌性BALB/C-nu纯系裸鼠,在小鼠左侧第2个乳房脂肪层内接种MCF-7细胞悬液胞,建立裸鼠乳腺癌荷瘤模型,成模后随机分为模型组（A组）,阳性对照组（氟尿嘧啶溶液）(B组),消癥散结止痛贴膏低剂量组（C组）,消癥散结止痛贴膏中剂量组（D组）及消癥散结止痛贴膏高剂量组（E组）共五组,每组12只,模型组给予蜂蜡麻油等容积混合物,在小鼠细胞接种处皮肤局部外敷,阳性对照药组给予5-FU(腹腔注射,20mg·kg-1·3d-1),其余三组给予消癥散结止痛贴膏低中高剂量局部外敷,其中给药周期除阳性对照组外的四组每日一次,连续给药21天,阳性对照组每周一次,连续给药三周,定期观测小鼠体重,记录一般情况变化,游标卡尺测量肿瘤的长度（a）及宽度（b）,计算肿瘤近似体积（V）V=1/2ab2（单位cm3）;计算各组中抑瘤率;光镜下观察荷瘤组织及肿瘤组织密度;免疫组织化学方法检测荷瘤组织汇总CD34阳性表达,并观察血管新生情况,Real Time PCR及Westernblot方法检测荷瘤组织中VEGF,Bcl-2及Caspase-3基因及蛋白表达。3.药效学研究中,分别以建立雌二醇致大鼠及家兔乳腺增生模型,大鼠琼脂肉芽肿,电、热刺激致痛模型,血瘀型模型等,评价消癥散结止痛贴膏抑制乳腺增生,对肉芽肿重量,抗炎镇痛及对血液粘稠度影响等药效学改变。4.体外培养乳腺癌细胞系MCF-7细胞,复苏,传代稳定后,MTT方法检测MCF-7细胞活性,检测消癥散结止痛贴膏溶液乳腺癌细胞的存活率、凋亡率,确定消癥散结止痛贴膏溶液最佳干预浓度及干预时间,以备后续实验应用。5.将稳定传代乳腺癌细胞系MCF-7细胞分为两组,对照组和实验组,对照组不予干预,实验组给予消癥散结止痛贴膏溶液进行干预,应用Real Time PCR方法检测MCF-7细胞中VEGF,Bcl-2及Caspase-3 m RNA表达。6.将稳定的MCF-7细胞分为两组,对照组和实验组,对照组不予干预,实验组给予消癥散结止痛贴膏溶液进行干预,Westernblot方法检测VEGF,Bcl,Bax,Caspase-3,cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:1.消癥散结止痛贴膏具有针对性状、含膏量、黏附力、重量差异、含量测定研究结果表明,自制贴膏为黄棕色半固体制剂;含膏量暂定为每贴不低于24.994g/100 cm2。初黏力为不低于17号钢球;10片消癥散结止痛贴膏重量的RSD为1.41%。2.消癥散结止痛贴膏中的姜黄、藤黄、莪术、白芷、天葵子薄层鉴别方法学研究,研究结果表明莪术等药材的鉴别方法,重复性好,耐用性强,方法科学可靠。3.在动物体内实验中,空白对照组小鼠肿瘤生长迅速,余治疗组均对肿瘤有抑制作用,其中阳性对照组及消癥散结止痛贴膏中、高剂量抑制最强,三组间无明显差异（P>0.05）,而低剂量组则不及其他三组治疗组（P<0.05）;各治疗组中小鼠一般状态较空白组相比,未出现行为和进食,对外界刺激的反应,皮毛光泽情况和精神状态的方面的异常。HE染色后,光镜下观察,模型组组癌细胞排列非常紧密,细胞核完整,大小均一,且无结缔组织,各治疗组中肿瘤细胞均出现不同程度的细胞皱缩,伴不同程度结缔组织,其中高剂量和阳性对照药物组别中结缔组织较其他治疗组比较,表达更多;免疫组化中各组中均有CD34阳性表达,表明荷瘤组织中新生血管,而经治疗后,均可减少肿瘤新生血管生成,其中以中、高剂量和阳性对照药物组血管新生较模型组减少,优于低剂量组（P<0.05）。4.在抗炎镇痛实验结果表明,消癥散结止痛贴膏可明显减轻大鼠皮下棉球肉芽肿及皮下琼脂肉芽肿重量,与基质对照组相比,具有统计学意义（P<0.05）,同时,消癥散结止痛贴膏可有效减低电刺激及热刺激致小鼠疼痛反应,优于基质对照组（P<0.05）。5.在活血化瘀药效学实验中,消癥散结止痛贴膏可有效降低血瘀大鼠（皮下注射肾上腺素+冰水浸泡）全血粘度（包括高切和低切变率）、血浆粘度、还原粘度、血沉、纤维蛋白原含量、体外血栓指数、体外血栓长度及湿重;增加正常小鼠耳部微血管血液流速、管径及固定区域有血细胞流动的毛细血管数目,上述结果与血瘀模型基质组比较,均优于该组（P<0.05）。6.在对乳腺增生药效学实验中,经与乳腺增生模型基质对照组对比,消癥散结止痛贴膏高中低三个剂量均可可有效降低雌二醇所致大鼠及家兔乳腺增生（P<0.05）,表现为降低雌二醇所致乳腺增生动物乳房重量、乳头高度、乳房外观病变程度及乳腺组织病理变化程度、降低家兔血清雌二醇水平及乳腺组织病理变化程度（P<0.05）。7.在动物实验基因检测部分,结果表明,模型组中荷瘤组织中VEGF,Bcl-2均显著增高,明显高于其他治疗四组（P<0.05）,Caspase-3则明显低于其余四组Caspase-3;治疗组中比较,阳性对照组中VEGF,Bcl-2和Caspase-3基因表达,与高剂量组中比较无差异经（P>0.05）,而中、低剂量组则表现为VEGF,Bcl-2高于高剂量和阳性对照组（P<0.05）,Caspase-3表达低于次两组（P<0.05）。8.在动物实验基蛋白检测部分,结果与基因表达呈一致性,表现为模型组VEGF,Bcl-2蛋白均显著增高,明显高于其他治疗四组（P<0.05）,Caspase-3蛋白则明显低于其余四组;与阳性对照组对比,高剂量表现为效果相当（P>0.05）,中低剂量则不及阳性对照组（P<0.05）。9.取人乳腺癌MCF-7常规培养,经传代,复苏稳定后,以消癥散结止痛贴膏提取物溶液制备后7个浓度,分别在24h和48h干预MCF-7细胞,经MTT法检测,最佳浓度为0.32mg/m L,干预最佳时间为24h。10.光镜下观察细胞生长,对照组:随时间增加,细胞死亡,在48h时,细胞大量死亡。培养初期6h时癌细胞呈典型的腺体样排列,随时间增长,细胞呈锥形,核位于细胞一侧,呈扭曲、折叠、凹陷等畸形改变,粗颗粒状,分布不均;实验组:培养初期6h,与对照组对比,有少量细胞死亡,随时间增加,细胞死亡加速,排列稀疏,核仁多而形态不规则,胞质减少,胞质及核内可见多量弥散的小空泡,在同等时间下,死亡较对照组增多。11.细胞基因学检测部分:消癥散结止痛贴膏提取物可有效降低MCF-7细胞中VEGF及Bcl-2 m RNA表达,优于对照组（P<0.05）,而两组间Caspease-3m RNA表达则表现为无差异（P>0.05）。12.细胞蛋白学检测部分:消癥散结止痛贴膏提取物可有效降低MCF-7细胞中VEGF及Bcl-2 m RNA表达,优于对照组（P<0.05）,可显著升高Caspase-3,cleaved caspase-3蛋白表达,优于对照组（P<0.05）。结论:1.消癥散结止痛贴膏中姜黄的主要活性成分姜黄素,其含量为2.85mg/g。藤黄酸不多于15.15mg/g。2.消癥散结止痛贴膏可以显著降低荷瘤裸鼠一般情况,抑瘤率,破坏荷瘤组织癌细胞形态,增加荷瘤中结缔组织,减少荷瘤组织中微血管新生。3.消癥散结止痛贴膏具有抑制乳腺增生、活血化瘀、抗慢性炎症镇痛及抗乳腺癌作用。4.消癥散结止痛贴膏可显著减少荷瘤裸鼠荷瘤组织中VEGF,Bcl-2中m RNA和蛋白表达,升高Caspase-3 m RNA和蛋白表达,阻断血管生成信号的传导,达到治疗乳腺癌的目的。5.消癥散结止痛贴膏提取物可显著可抑制MCF-7细胞中VEGF及Bcl-2的表达,促进Caspase-3,cleaved caspase-3表达,并可能是通过激活Caspase-3,诱导MCF-7细胞凋亡,防治乳腺癌。
关键词: 消癥散结止痛贴膏 ；透皮吸收 ；乳腺癌 ；有效成分
被引量
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摘要： 研究目的:
(1)系统总结目前应用于乳腺癌辅助治疗的口服类中成药及其临床证据现状。对口服类中成药辅助治疗乳腺癌的疗效和安全性进行循证评价,遴选出不同结局指标下具有疗效优势的中成药信息。
(2)采用网络药理学方法对西黄丸治疗乳腺癌癌因性疲乏的可能作用机制进行系统预测和总结;同时构建移植瘤诱导的乳腺癌癌性疲乏小鼠模型,观察西黄丸防治乳腺癌癌性疲乏的作用,探讨可能的相关作用机制。
研究方法:
(一)口服类中成药辅助治疗乳腺癌临床研究的循证评价
系统总结目前辅助治疗恶性肿瘤疾病的口服类中成药品种、药物组成、功效分类等。以近3年《国家医保药品目录》中抗肿瘤/辅助治疗肿瘤的口服类中成药为研究对象,检索常用中文数据库(包含中国知网、万方、维普和中国生物医学文献服务系统)和常用英文数据库(包含 PubMed、Embase、Web of Science 及 Cochrane Library),检索时间更新至2022年3月1日。对口服类中成药干预乳腺癌各类临床研究文献的发表时间、文献类型、研究证据类型、干预类型等文献特征进行总结。采用RevMan5.3、Stata14.0、Gemtc14.3软件进行数据分析,评价国家医保药品目录中口服类中成药联合化疗干预乳腺癌的有效性和安全性,遴选出不同结局指标下具有疗效优势的中成药信息,对疗效概率进行排序,明确不同药物临床疗效特点。
(二)基于网络药理学探讨西黄丸治疗乳腺癌癌因性疲乏的作用机制
通过TCMSP、中药与化学成分数据库及本草组鉴数据库,检索西黄丸的相关成分及靶点,并筛选各个中药的有效活性成分。检索Gene Cards、OMIM数据库,获取乳腺癌癌因性疲乏的疾病靶点。采用Cytoscape 3.7.1软件构建药物-化合物-治疗靶点网络图,基于String数据库绘制蛋白互作网络(PPI)图,采用R3.6.1软件对治疗靶点信息进行基因本体(Gene ontology,GO)分析;对相关信号通路信息,进行基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。
(三)西黄丸防治乳腺癌癌因性疲乏作用的实验研究
构建移植瘤诱导乳腺癌癌因性疲乏小鼠模型,分为空白组、西黄丸高、中、低剂量组、模型组和卡培他滨片组,每组10只,采取灌胃给药,每日1次,共干预3周,共饲养2批。第一批60只小鼠,主要用于探讨西黄丸对乳腺癌癌因性疲乏的作用机制研究,观察时点为干预的第0天、第14天、第20天。第二批60只小鼠主要用于观察西黄丸对移植瘤小鼠生存时间的影响,记录各组小鼠死亡时间及一般情况。
(1)西黄丸对乳腺癌癌因性疲乏防治作用的研究:①记录各组小鼠不同时点的体重、悬尾实验摇摆不动时间、转棒实验首次停留时间,评估移植瘤小鼠不同时点的癌因性疲乏样行为及疲乏程度。②比较各组小鼠生存时间情况。③取材后,检测骨骼肌中ATP含量、糖原含量及血常规指标。④计算各组小鼠脾脏指数和胸腺指数,通过流式细胞技术检测肿瘤组织中髓系抑制细胞(Myeloid derived suppressor cell,MDSC)及其亚群的含量,评价药物对免疫功能的影响;⑤通过免疫组化和ELISA分别检测肿瘤组织和外周血中炎性因子IL-6和TNF-α的表达水平。⑥采用PCR和Western blot检测TNF-α介导的NF-κB信号通路上TNF-α、NF-κBP65和IκB-α的mRNA和蛋白表达水平。
(2)西黄丸对乳腺癌移植瘤抑制作用的研究:①记录和比较各组小鼠瘤体体积变化;②对肿瘤组织进行HE染色,评价药物对肿瘤瘤体的作用,并采用免疫荧光方法观察CD31标志后的肿瘤血管生成情况;③免疫组化检测Bcl2、Bax、Caspase8等凋亡相关蛋白的表达。
研究结果:
(一)口服类中成药辅助治疗乳腺癌临床研究的循证评价
口服中成药辅助治疗乳腺癌临床证据中多数研究类型为随机对照试验(Randomized controlled trial,RCT)(约65.69%),文献发表时间跨度为1998年-2021年,纳入文献发表数量整体呈现峰峦式增长趋势,临床文献刊载在102种期刊上,其中发文最多是《现代肿瘤医学》和《现代药物与临床》杂志。《国家医保药品目录》中有35个相关口服类中成药用于恶性肿瘤的治疗,其中有19个中成药在辅助治疗乳腺癌方面具有临床证据支持,文献证据发表数量排名前5位中成药依次为:槐耳颗粒、西黄丸/胶囊、平消胶囊、参一胶囊、华蟾素胶囊。网状Meta分析纳入68项相关RCTs,共计患者6082例,发表年份为2004-2021年,涉及13种口服中成药。结果显示以化疗为共同干预措施,口服中成药改善乳腺癌Ⅰ～Ⅲ期患者ORR的疗效排序为参一胶囊>金龙胶囊>西黄丸/胶囊>平消胶囊>复方斑蝥胶囊>槐耳颗粒>华蟾素胶囊>复方红豆杉胶囊;改善Ⅰ～Ⅲ期患者DCR的疗效排序为金龙胶囊>复方红豆杉胶囊>西黄丸/胶囊>复方斑蝥胶囊>平消胶囊>华蟾素胶囊>槐耳颗粒。改善Ⅲ～Ⅳ期患者ORR的疗效排序为槐耳颗粒>平消胶囊>西黄丸/胶囊>参一胶囊>华蟾素胶囊;改善Ⅲ～Ⅳ期患者DCR的疗效排序为平消胶囊>参一胶囊>西黄丸/胶囊>华蟾素胶囊>槐耳颗粒;QOL改善率的疗效排序为西黄丸/胶囊>槐耳颗粒>参一胶囊>华蟾素胶囊>金龙胶囊>复方斑蝥胶囊>平消胶囊;同时西黄丸有益于提高乳腺癌患者的PFS和OS:缓解白细胞减少发生率的疗效排序为艾愈胶囊>贞芪扶正颗粒>参一胶囊>槐耳颗粒>华蟾素胶囊>西黄丸/胶囊>芪珍胶囊>平消胶囊>复方斑蝥胶囊;减少消化道反应发生率的疗效排序为贞芪扶正颗粒>芪珍胶囊>华蟾素胶囊>西黄丸/胶囊>槐耳颗粒>参一胶囊>平消胶囊>化疗>复方斑蝥胶囊;改善患者血液中CD4+/CD8+值的疗效排序依次为:平消胶囊>芪珍胶囊>养正消积胶囊>槐耳颗粒>金龙胶囊>西黄丸/胶囊>复方斑蝥胶囊。敏感性分析和发表偏倚提示目前结果基本稳定。
(二)基于网络药理学探讨西黄丸治疗乳腺癌癌因性疲乏的作用机制
共筛选出相关化合物106个,西黄丸的有效成分47个,药物疾病交集靶点77个。西黄丸治疗乳腺癌癌因性疲乏的重要成分包括:槲皮素、牵牛花色素、桑色素、β-谷甾醇和鞣花酸等。PPI网络显示度值排名前20位的靶基因为CASP3、ESR1、MYC、EGFR、HIF1A、IL6、VEGFA、CCND1、PPARG 及 NFκBIA 等。GO 富集分析得到 1241 个生物学过程相关条目、81个分子功能相关条目及39个细胞组分相关条目。KEGG通路富集分析得到117条相关信号通路,KEGG富集分析预测出西黄丸治疗乳腺癌癌因性疲乏可能是通过PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、细胞凋亡相关信号通路、HIF-1信号通路、TNF信号通路等关键信号通路发挥治疗作用。异常靶点-通路网络结果提示EGFR、BCL2、CASP3、VEGFA、CASP8、MYC、IL6、NFκB 等为相对重要的靶点信息。
(三)西黄丸防治乳腺癌癌因性疲乏作用的实验研究
1.西黄丸对乳腺癌癌因性疲乏防治作用的研究:(1)药物对CRF行为的影响:与空白组比较,各组移植瘤小鼠均出现不同程度消瘦,毛发稀疏,行动迟缓,进食减少,抓取反抗降低,背部成弓状等。与空白组相比,模型组小鼠悬尾实验摇摆不动时间逐渐延长,转棒实验首次停留时间逐渐缩短,差异有统计学意义(P<0.05),表明模型小鼠已经具有CRF特征。与模型组相比,西黄丸高、中、低剂量组小鼠的摇摆不动时间明显缩短(P<0.05),转棒实验首次停留时间长于模型组(P<0.05),而卡培他滨组小鼠的摇摆不动时间和转棒实验首次停留时间则无统计学差异。(2)生存时间影响:与模型组比较,各用药组具有延长小鼠的平均生存时间的趋势,但延长时间差异均无显著统计学意义。在中位生存时间方面,各用药组未显示出对中位生存时间的延长作用。(3)肌糖原含量和ATP含量:与空白组相比,模型组小鼠骨骼肌ATP含量下降,而肌糖原含量增加(P<0.05);与模型组相比,各用药组小鼠呈现骨骼肌ATP含量上升、糖原含量下降的趋势,但差异无统计学意义。各组的肝脏ATP和糖原含量无明显差异。(4)MDSC含量:模型组MDSC的含量明显升高;与模型组比较,西黄丸高、中剂量组肿瘤组织中MDSC的含量的明显降低(P<0.05);与模型组比较,西黄丸高、中、低组粒细胞样表型MDSC表达的含量以及iNOS和Arg-1表达量均有所降低,但差异无统计学意义。(5)药物对TNF-α、IL-6炎性因子的影响:①ELISA检测结果:与空白组比较,模型组小鼠外周血中TNF-α、IL-6的表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,西黄丸各剂量组和卡培他滨组小鼠外周血中TNF-α和IL-6的表达降低(P<0.05)。②免疫组化结果:模型组TNF-α的表达量最低,与模型组相比,卡培他滨组及西黄丸高、中剂量组TNF-α表达值均升高(P<0.05);模型组IL-6的表达量最高,与模型组相比,卡培他滨组及西黄丸高、中剂量组IL-6表达值均有所降低(P<0.05)。(6)对TNF-α介导的NF-κB信号通路的作用:①PCR和Western blot检测结果:与模型组相比,西黄丸各剂量组和卡培他滨片组中TNF-α和NF-κBp65的表达水平明显下降,lκBα的表达水平明显增加,卡培他滨片较西黄丸组效果更明显(P<0.05)。
2.西黄丸对乳腺癌移植瘤抑制作用的研究:(1)实验过程中,模型组和各用药组肿瘤体积变化与时间呈正相关性,各用药组的肿瘤体积增长趋势低于模型组。抑瘤率结果为:卡培他滨片>西黄丸中剂量组>西黄丸高剂量组>西黄丸低剂量组(P<0.05)。(2)HE染色提示,与模型组比较,西黄丸各剂量组肿瘤组织均出现不同程度的坏死。(3)免疫组化结果:相较于模型组,西黄丸各剂量组和卡培他滨组可上调Bax、Caspase8表达,下调Bcl2表达(P<0.05)。(4)免疫荧光染色的CD31标记结果:与模型组相比,卡培他滨组和西黄丸药物干预后瘤体组织中新生血管数量减少。
研究结论:
(1)《国家医保药品目录》中有19个口服类中成药辅助治疗乳腺癌具有一定临床文献证据支持,临床证据发表数量排名前5位中成药品种依次为:槐耳颗粒、西黄丸/胶囊、平消胶囊、参一胶囊、华蟾素胶囊。相关口服中成药联合化疗治疗乳腺癌的疗效一般优于单纯化疗。西黄丸在改善患者生活质量和生存时间方面具有明显疗效优势。艾愈胶囊和贞芪扶正颗粒有助于降低乳腺癌化疗患者白细胞减少的发生率。考虑纳入研究质量不高,相关结论有待大样本、高质量研究进一步验证。
(2)网络药理学结果显示西黄丸治疗乳腺癌癌因性疲乏的重要成分包括槲皮素、牵牛花色素、桑色素、β-谷甾醇和鞣花酸等。西黄丸可能通过调节炎症、免疫、细胞凋亡等相关的多靶点、多通路发挥治疗作用。
(3)乳腺癌移植瘤小鼠模型具有一定CRF特征,西黄丸对乳腺癌移植瘤具有一定抑制作用。西黄丸可缓解乳腺癌移植瘤诱导的癌因性疲乏,其作用机制可能与西黄丸调节小鼠外周血和肿瘤组织中相关炎细胞因子水平、降低肿瘤组织MDSC的含量有关,炎症环境的调节与调控TNF-α介导的NF-κB信号通路中TNF-α、NF-κB p65蛋白的表达等生物学过程有关。
关键词: 乳腺癌 ；中成药 ；网状Meta分析 ；西黄丸 ；乳腺癌癌因性疲乏 ；网络药理学
被引量
1
摘要： 第一部分:背景:恶性肿瘤是严重影响人类健康、威胁人类生命的主要疾病之一,其治疗难度较大。血管生成是肿瘤生长和转移的关键过程,因此,通过阻断肿瘤新生血管生成来抑制肿瘤生长是一种新的治疗策略。吴茱萸次碱是吴茱萸的主要成分之一,在传统医学中广泛应用于多种疾病的治疗。吴茱萸次碱可以通过多种分子机制抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。然而,吴茱萸次碱的抗血管生成机制尚未见报道。因此研究吴茱萸次碱对血管生成的抑制对开发抗肿瘤药物是十分有价值的。目的:本研究旨在探讨吴茱萸次碱(Ru)对血管生成的影响及相关信号转导的潜在调控机制。方法:通过MTT实验、粘附抑制实验、迁移抑制实验和鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型实验研究吴茱萸次碱对血管生成的影响。通过计算机模拟寻找潜在靶点、通过表面等离子体共振(SPR)、酶活性实验和Western blot检测化合物与靶蛋白的相互作用。结果:实验结果证实,吴茱萸次碱表现出对人类脐静脉内皮细胞(HUVECs)有着适度的抑制活性,其对HUVECs的迁移和粘附有着显著抑制的效应,以及在CAM实验中表现出显著的抗血管生成活性。通过计算机模拟确定了血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)为可能靶点,SPR分析也证实了这种关系。此外,酶活性实验和免疫印迹试验显示出吴茱萸次碱明显抑制VEGFR2的活性,阻断了VEGFR2介导的Akt/(mTOR)/p70s6k信号通路。吴茱萸次碱是一种潜在的癌症预防和治疗药物。结论:综上所述,实验结果清楚地表明吴茱萸次碱作为一种抗癌药物可以阻断HUVECs中促使新血管生长的VEGF信号通路。吴茱萸次碱可以通过靶向VEGFR2介导的Akt/mTOR/p70S6K信号通路来抑制血管的生成。因此,吴茱萸次碱是一种潜在的癌症预防和治疗药物。第二部分:背景:细菌感染在生活中普遍存在,而抗生素在社会上的大量使用却让耐药菌不断产生,这就迫切需要我们不断开发新型的抗菌药物来解决细菌耐药性问题。寻找低毒有效的抗菌药物是医药研究关注的焦点。目前,由于许多中草药成分具有低毒且高效的抗菌效果,同时还能够逆转耐药菌的耐药性,因此从中草药中寻找抗菌药物成为了热点。白叶藤碱是药用植物白叶藤中主要的生物碱,白叶藤碱具有广泛的生物活性。迄今为止,从白叶藤属植物中分离得到的天然化合物主要有生物碱和强心苷。虽然已经证实白叶藤碱有很好的药理活性,但对其的相关研究多数集中在抗肿瘤和抗疟疾方向,关于白叶藤碱的抗菌活性及其抗菌机制研究较少。目的:本研究对白叶藤碱的抗菌活性及其可能的相关抗菌机制进行了探讨。方法:通过药敏试验和MIC实验测定白叶藤碱的抗菌活性和最小抑菌浓度。运用计算机辅助模拟技术反向找靶部分尝试寻找可能潜在靶标,基于反向找靶结果,通过基因和氨基酸序列比对及文献查阅等确定研究的抗菌靶标,大肠杆菌被用作研究原核生物MetAP-1的模型,并利用软件中分子对接部分将白叶藤碱和选定的潜在靶标进行对接测定分子与配体的结合状况,利用分子动力学部分动态的描述白叶藤碱与靶标结合后的运动状况。体外进行酶活性测定检测白叶藤碱对靶点蛋白的活性影响。结果:研究结果表明白叶藤碱对部分革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌有很强的抑制作用;对革兰氏阴性菌中的大肠杆菌有很强的抑制活性,对铜绿假单胞菌则没有抑制活性。通过计算机辅助模拟,基因和氨基酸序列比对及文献查阅等寻找到了可能的靶标MetAP1,然后通过计算机分子对接和动力学模拟分析药物与靶标结合状况,模拟结果显示结合效果好且结合后比较稳定。酶活性测定的结果分别显示出白叶藤碱和MetAP1的结合稳定性随浓度升高而增强及白叶藤碱对MetAP1的活性随着浓度的变化有明显梯度变化。结论:通过实验我们显示出白叶藤碱有很好的抗菌活性,其对细菌的抑制作用机制可通过MetAP1靶点产生作用,是很好的潜在抗菌药物。
关键词: 吴茱萸次碱 ；白叶藤碱 ；血管生成 ；抗菌 ；活性评价 ；VEGFR2 ；计算机辅助模拟 ；MetAP1
被引量
1
【专利/发明】 • CN201110110951.0 •
+2位作者
•
申请日：2011-04-29,
公开日：2013-02-27
申请人： 苏州中药研究所;周泉生
公开（公告）号： CN102178796B
摘要： 本发明公开了一种灯芯草有效组份在制备抗肿瘤和抑制肿瘤血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用。该发明首次发现灯芯草有效组份具有抑制肿瘤及肿瘤血管生成的活性，利用该发现制备抑制肿瘤及肿瘤血管生成的药物可用于治疗或预防和恶性肿瘤以及与肿瘤血管生成相关的疾病，还可用于肿瘤化疗和 / 或辅助化疗方面的治疗。本发明巧妙地以肿瘤干细胞、肿瘤细胞和肿瘤新生血管生成作为治疗疾病的靶点，研究并阐明灯芯草有效组份的药用疗效和作用机制，为灯芯草有效组份和有效成分的抗肿瘤创新中药研发奠定了基础，也为恶性肿瘤的中药治疗提供科学依据和重要信息。
【专利/发明】 • CN201110110951.0 •
+2位作者
•
申请日：2011-04-29,
公开日：2011-09-14
申请人： 苏州中药研究所;周泉生
公开（公告）号： CN102178796A
摘要： 本发明公开了一种灯芯草有效组份在制备抗肿瘤和抑制肿瘤血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用。该发明首次发现灯芯草有效组份具有抑制肿瘤及肿瘤血管生成的活性，利用该发现制备抑制肿瘤及肿瘤血管生成的药物可用于治疗或预防和恶性肿瘤以及与肿瘤血管生成相关的疾病，还可用于肿瘤化疗和/或辅助化疗方面的治疗。本发明巧妙地以肿瘤干细胞、肿瘤细胞和肿瘤新生血管生成作为治疗疾病的靶点，研究并阐明灯芯草有效组份的药用疗效和作用机制，为灯芯草有效组份和有效成分的抗肿瘤创新中药研发奠定了基础，也为恶性肿瘤的中药治疗提供科学依据和重要信息。
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