文献检索结果-维普官网

二次检索

在结果中检索

在结果中去除

暂无数据

共 6 条结果，以下是1 - 6条

1 / 1

全选已选:0 清除

批量下载

批量引用

相关度时效性被引量

1. 认领

【学位/硕士】 • 李菊满 • 广西医科大学 • 导师：黄仁彬 • 2017年

摘要：目的:探讨杨桃根中的2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2,5-diene-1,4-dione,DMDD)对高脂高糖饮食引起的胰岛素抵抗小鼠的影响及其可能的作用机制。方法:将6～8周龄的雄性C57BL/6J小鼠随机地分成两组:正常饮食(ND或者Normal)组及高脂高糖饮食(HFSD)组,HFSD组采用高脂高糖饲料喂养12周后将体重超过ND组体重的20%且空腹血糖(FBG)≧ 7.8 mmol/L的小鼠随机分为模型(Model)组、二甲双胍(Metformin)组、DMDD低剂量(DMDDL)组、DMDD 中剂量(DMDDM)组、DMDD 高剂量(DMDDH)组;随后各组小鼠灌胃给药4周,DMDD低、中、高组、Metformin组的给药剂量分别为:12.5、25.0、50.0、280 mg·kg-1 Normal 及 Model 组给予等体积的双蒸水;给药期间,每周称体重、测FBG,第14周末进行糖耐量试验(IPGTT)、第15周进行胰岛素耐量试验(ITT)、第16周初进行胰岛素释放试验(IRT),16周末,取血,处死小鼠,测量如下指标:1.测量体长、腹围,称量肝脏、胰腺及附睾脂肪;比色法测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG);按试剂盒说明书测定肝脏组织中丙二醛(MDA)的含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)及还原型谷胱甘肽(GSH-PX)的活性;2.酶联免疫吸附法(ELISA)测血清胰岛素(Insulin)、游离脂肪酸(FFA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、瘦素(LEP)、抵抗素(Resistin)及脂联素(ADP),计算胰岛素抵抗指数(IRI)、胰岛素敏感指数(ISI)、糖耐量曲线下面积(IPGTTAUC)、胰岛素耐量曲线下面积(ITTAUC)、胰岛素释放试验曲线下面积(IRRTAUC);3.苏木精-伊红(HE)染色法观察附睾脂肪组织、肝脏组织及胰腺组织的病理变化;免疫组化法测定肝脏及胰腺组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)及凋亡相关蛋白:含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解-3(Caspase-3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解-8(Caspase-8)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解-9(Caspase-9),Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测胰岛细胞凋亡。4.实时定量-聚合酶链式反应(RTQ-PCR)法测定肝脏及脂肪组织中TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α 及 IL-6mRNA 的表达。结果:1.与模型组比较,DMDD各剂量组小鼠的体重、附睾脂肪重量、肝脏比重、FBG、TC、TG、肝脏组织中MDA的含量显著降低(P<0.01),T-SOD及GSH-PX的活性明显提高,但体长、腹围及进食量的变化不明显;2.与模型组比较,血清 Insulin、FFA、TNF-α、IL-6、LEP、Resistin明显降低,ADP、ISI明显提高;DMDD各剂量组各个时间点的血糖及AUC均显著降低;3.HE染色显示治疗组脂肪细胞的面积变小、脂滴沉积减少,肝脏脂肪变性明显改善;与模型组相比,经二甲双胍及DMDD治疗后,胰岛细胞的结构基本完整。免疫组化显示治疗组的肝脏及胰腺组织中的TLR4、MyD88、NF-κB,凋亡相关蛋白Caspase-3、-8、-9及促凋亡蛋白Bax的表达显著减少(P<0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2明显增多;与正常组比较,模型组中凋亡的胰岛细胞数明显增加;与模型组比较,各治疗组的胰岛细胞凋亡数明显减少;4.RTQ-PCR显示,与正常组比较,肝脏及脂肪组织中的TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α及IL-6 mRNA被上调;与模型组比较,经DMDD及Metformin治疗后,TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α及 IL-6mRNA 下调。结论:DMDD对肥胖诱导的胰岛素抵抗具有防治作用。其作用可能与其改善肥胖、高血糖、高血脂,抗氧化、抗炎、抑制凋亡有关;其改善IR的机制可能与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

摘要译文

关键词: DMDD ；肥胖；胰岛素抵抗 ；炎症；凋亡

引用

被引量 5

2. 认领

【学位/博士】 • 卢顺玉 • 广西医科大学 • 导师：黄仁彬 • 2020年

摘要：背景:糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy,DN）为糖尿病的常见并发症,发病机制复杂且尚未明确。目前,大量研究发现,TLR4信号通路在DN发生发展中发挥重要作用,抑制TLR4信号通路的表达将有助于改善DN。本课题组前期研究发现,杨桃根单体化合物2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮（DMDD）具有降低糖尿病小鼠空腹血糖、明显改善尿蛋白、减轻糖尿病小鼠肾脏损伤的作用,然而作用机制仍需深入研究。近期实验发现,DMDD可作用于TLR4信号通路对高脂所致胰岛素抵抗小鼠具有保护作用;同时,抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路显著性地抑制棕榈酸诱导的胰岛MIN6细胞炎症反应及细胞凋亡。基于前期研究,本实验推测DMDD可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路延缓糖尿病肾病。目的:本文主要研究杨桃根DMDD对糖尿病肾损伤及高糖所致足细胞损伤的保护作用及其DMDD对TLR4/My D88/NF-κB信号通路表达的影响,探寻DMDD延缓糖尿病肾病的作用机制。方法:⑴体内实验:采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）100mg.kg-1建立TLR4野生型（wild type,WT）和TLR4敲除型（knockout type,KO）糖尿病小鼠模型。予高糖高脂饲料喂养小鼠,随后腹腔注射低剂量STZ100mg.kg-1,72h后测量小鼠空腹血糖≥11.1mmol/L设为糖尿病小鼠。将造模成功的野生型和敲除型糖尿病小鼠随机分为以下5组:糖尿病肾病模型组（diabetic nephropathy,DN,予生理盐水）、阳性对照组(gliquidone group,G,予格列喹酮10 mg.kg-1.d-1)、DMDD高剂量组(high dosage group,H,予DMDD50 mg.kg-1.d-1)、DMDD中剂量组(medium dosage group,M,予DMDD25 mg.kg-1.d-1)、DMDD低剂量组(low dosage group,L,予DMDD12.5 mg.kg-1.d-1)。另外,分别设立TLR4野生型和敲除型的正常对照组（normal control group,NC,予生理盐水）。连续给予格列喹酮和DMDD干预4周后,拔眼球取血,颈椎脱臼处死小鼠,取肾脏组织。测定血清肌酐（serum creatine,Scr）、尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、胱抑素-C（Cystatin-C,Cys-C）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（Triglyceride,TG）、高密度脂蛋白（high-density lipoprotein,HDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）等,ELISA测定炎症因子白细胞介素-1β（interleukin-1,IL-1β）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、单核细胞趋化因子-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）等;HE染色观察肾脏组织病理变化情况,电镜观察肾足细胞超微结构改变,TUNEL测定肾组织细胞凋亡情况;分别采用PCR和免疫组化观察TLR4、My D88、NF-κB m RNA和蛋白表达情况,Western Blot测定TLR4/My D88/NF-κB信号通路蛋白表达水平。⑵体外实验:小鼠肾永生化足细胞株（MPC5）为对象,采用高糖（30mmol/L）构建MPC5细胞损伤模型。CCK-8法测定不同浓度DMDD对MPC5细胞活性和毒性情况,确定IC50及DMDD给药浓度。AO/EB方法及流式细胞分析术检测MPC5细胞凋亡情况,ELISA测定IL-6和TNF-α分泌水平,PCR和Western Blot测定TLR4、My D88、NF-κB m RNA和蛋白变化情况。结果:1.体内实验结果:（1）高糖高脂饮食联合腹腔注射100mg.kg-1STZ的方法成功诱导建立小鼠糖尿病模型,经过DMDD干预4周后,发现DMDD降低糖尿病小鼠的空腹血糖,降低肾组织重量,改善胰岛素抵抗和糖耐量,降低血清肌酐、尿素氮、胱抑素-C及尿蛋白含量（P<0.05）,同时改善血脂紊乱的现象,下调TG、TC、LDL并升高HDL的水平,但给予DMDD后,WT型糖尿病小鼠与KO型糖尿病小鼠的上述结果进行比较,并无明显统计学意义。（2）HE染色和电镜结果:糖尿病小鼠肾小球体积增大,基底膜增厚,炎症浸润;DMDD干预后,糖尿病小鼠的肾组织损伤得到不同程度的改善。电镜观察,糖尿病小鼠肾基底膜增厚,足突融合严重,足细胞数量减小;DMDD干预后,足突融合减小,足细胞数量增多。（3）TUNEL结果:DN组小鼠肾脏细胞凋亡明显增多,DMDD干预后,凋亡的肾细胞数量减小;与WT型比较,KO型糖尿病小鼠经DMDD治疗后,其肾细胞凋亡数量下降。（4）ELISA结果:与模型组小鼠比较,DMDD高剂量明显地抑制炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1的水平,增加IL-10的含量（P<0.05）;同时,予DMDD高剂量后,KO型糖尿病小鼠IL-6和TNF-α含量低于WT型糖尿病小鼠（P<0.05）。（5）免疫组化结果:与NC组比较,DN组小鼠肾组织中TLR4、My D88、NF-κB、IL-6及TNF-α蛋白表达明显增多;DMDD干预后,糖尿病小鼠肾组织中TLR4、My D88、NF-κB、IL-6及TNF-α蛋白表达下降。与WT型小鼠比较,DMDD治疗后,KO型糖尿病小鼠My D88、NF-κB、IL-6及TNF-α表达减小。（6）PCR和Western Blot结果:WT型小鼠,与NC组小鼠比较,DN组小鼠TLR4、My D88、NF-κB的表达增加,TLR4/My D88/NF-κB信号通路被激活;而经DMDD干预4周后,TLR4、My D88、NF-κB的m RNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）,TLR4信号通路被抑制。KO小鼠TLR4的m RNA和蛋白表达量极小。经DMDD高剂量干预后,相比于WT型糖尿病小鼠,KO小鼠的My D88、NF-κB的m RNA和蛋白表达降低。2.体外实验结果:采用CCK-8的方法检测DMDD对足细胞的半数抑制浓度(IC50)为60μmol/L,综合考虑药物毒性及高糖刺激诱导足细胞凋亡的影响,确定DMDD用于高糖所致足细胞损伤的低、中、高浓度分别为:1.875、3.75、7.5μmol/L。与低糖培养的细胞（5.5 mmol/L,LG）比较,高糖刺激足细胞48h,高糖组（30 mmol/L,HG）的足细胞凋亡明显增加,给予DMDD24h后,DMDD组的足细胞凋亡率减小（P<0.05）;流式结果也验证,暴露在高糖环境下的足细胞,细胞凋亡率明显高于低糖组,然而加入DMDD干预后,高糖所致足细胞的细胞凋亡率降低（P<0.05）;ELISA结果,DMDD明显降低高糖所致足细胞损伤时生成的炎症因子IL-6和TNF-a的水平,且与未加入TLR4抑制剂TAK-242比较,加入TAK-242后,DMDD下调IL-6和TNF-a的趋势更显著（P<0.05）;Western Blot方法检测TLR4、My D88、NF-κB的蛋白表达结果,发现,相对于LG组,HG组的TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达增多,而同HG组比较,DMDD高剂量组降低TLR4、My D88、NF-κB水平,增加TAK-242后,DMDD对TLR4、My D88、NF-κB的抑制作用更明显（P<0.05）;此外,PCR结果显示,DMDD能明显降低TLR4、My D88、NF-κB m RNA表达水平（P<0.05）。结论:（1）DMDD通过抑制TLR4/My D88/NF-κB通路延缓糖尿病肾病;（2）DMDD对高糖所致的足细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路介导。

摘要译文

关键词: 糖尿病肾病；DMDD ；TLR4信号通路；足细胞；凋亡

引用

3. 认领

【学位/硕士】 • 吴娅妮 • 广西医科大学 • 导师：张士军 • 2021年

摘要：目的: 探讨杨桃根单体化合物2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2,5-diene-1,4-dione,DMDD)对糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)小鼠的影响及其作用机制。方法: 雄性C57BL/6小鼠,适应性喂养1周后,喂以4周高糖高脂饲料。4周后,小鼠禁食12h,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)100mg·kg-1(STZ溶于p H=4.4的0.1mol/L柠檬酸盐缓冲液中),检测空腹血糖及心功能生化指标确认造模成功。将造模成功的小鼠随机分为糖尿病心肌病模型组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(3-Methyladenine,3-MA,15mg/kg)、抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸组(N-Acetyl-L-cysteine,NAC,100mg/kg)、DMDD高(50mg/kg)、中(25mg/kg)、低剂量组(12.5mg/kg)。另设空白组,予普通饲料喂养。各组小鼠给予相应药物灌胃,空白组和模型组灌胃等体积蒸馏水,持续干预8周。给药结束后,检测小鼠空腹血糖(FBG),称体质量(BW),摘除眼球收集血液,颈椎脱臼处死小鼠,取心脏组织。检测空腹胰岛素(FINS)、血清甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、总胆固醇(TC)、肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH);试剂盒法检测心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)等氧化及抗氧化物活性,ELISA检测心肌组织ROS活性;行苏木素-伊红(H&E)染色、天狼星红染色观病理变化及纤维增生情况;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况,q-PCR和Western Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡因子的m RNA和蛋白表达;透射电子显微镜(TEM)观察自噬体形成;分别使用q-PCR和Western Blot检测LC3II、Beclin-1、Agt5等自噬标志性因子m RNA和蛋白表达水平,以及PI3K/Akt/mTOR通路激活情况。结果: 1.DMDD改善DCM小鼠糖脂代谢异常与模型组相比,DMDD给药组FBG明显降低,胰岛素抵抗有所改善;同时DMDD能够调节DCM小鼠血脂水平,显著地降低血清中的TG、TC、LDL-C水平(P<0.05或P<0.01)。 2.DMDD改善DCM小鼠心肌损伤高糖高脂饲料联合腹腔注射小剂量STZ方法成功复制小鼠糖尿病模型。给予DMDD干预8周后,与模型组相比,DMDD给药组血清中CK、CK-MB、LDH、AST水平显著下降(P<0.05或P<0.01),心肌组织重量减轻。心肌组织病理检查结果显示,模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱,胶原纤维明显增加,DMDD给药组小鼠心肌细胞排列较为整齐,纤维增生明显减少。 3.DMDD减轻DCM小鼠心肌组织氧化应激与模型组相比,DMDD显著升高小鼠心肌组织中的SOD、GSH水平,降低MDA含量(P<0.05或P<0.01),提示DMDD能减轻DCM小鼠心肌组织氧化应激损伤。 4.DMDD减少DCM小鼠心肌细胞凋亡 TUNEL染色检测小鼠心肌细胞凋亡,结果可见模型组小鼠凋亡的心肌细胞明显增多,经过DMDD干预之后,DMDD给药组小鼠心肌细胞凋亡数量明显下降。q-PCR和Western Blot法分别检测了凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3 m RNA和蛋白表达,结果显示,与模型组相比,DMDD给药组能显著降低Bax、Caspase-3 m RNA和蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01),而增加Bcl-2的m RNA和蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。提示,DMDD能显著减轻DCM小鼠心肌细胞凋亡。 5.DMDD抑制DCM小鼠心肌组织ROS活性 ELISA试剂盒检测ROS结果显示,与模型组小鼠相比较,DMDD治疗组小鼠的心肌组织内ROS水平显著降低(P<0.05或P<0.01),提示,DMDD能抑制小鼠心肌组织中的ROS活性。 6.DMDD调控DCM小鼠心肌细胞自噬心肌组织TEM分析结果可见模型组小鼠有较多自噬体形成;经DMDD干预后,小鼠心肌组织中的自噬体生成减少。q-PCR和Western Blot结果显示,DMDD给药组的LC3II、Beclin-1、Agt5 m RNA和蛋白表达水平较模型组明显下降(P<0.05或P<0.01)。 7.DMDD调控ROS/自噬PI3K/Akt/mTOR信号通路实验结果显示模型组小鼠心肌组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平显著上调,PTEN蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。而经过DMDD的干预之后,p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达被明显上调,同时下调PTEN蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。q-PCR结果显示,与空白组相比,模型组小鼠心肌组织中的PI3K、Akt、mTOR m RNA表达水平显著下降,PTEN m RNA表达水平上升,而DMDD干预之后能够显著逆转这些基因的异常表达(P<0.05或P<0.01)。以上实验结果提示,DMDD可能通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,调控心肌细胞自噬。结论: DMDD能够减轻糖尿病所致的心肌损伤,其可能的机制与DMDD减轻心肌组织氧化应激、降低ROS水平、减少心肌细胞凋亡,调控ROS介导的自噬PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

摘要译文

关键词: 糖尿病心肌病；DMDD ；ROS ；自噬；PI3K/Akt/mTOR信号通路

引用

4. 认领

【学位/博士】 • 张宏亮 • 广西医科大学 • 导师：黄仁彬 • 2019年

摘要：背景:糖尿病肾病（Diabetic kidney disease,DKD）发病率高,危害性大,积极探索DKD的作用靶点及治疗药物意义重大。我们的前期研究发现,杨桃根提取物2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮（DMDD）有改善糖尿病肾病的作用,但其作用机制不明。目的:本论文旨在研究DMDD对TLR4/TGFβ信号通路及相关蛋白表达的影响,探索DMDD防治DKD的作用机制。方法:1、体内实验:采用高糖高脂饲料联合低剂量链脲佐菌素（Streptozocin,STZ）诱导的野生型小鼠及TLR4基因敲除(TLR4-/-)小鼠为体内模型。野生型小鼠和TLR4-/-小鼠分别随机分为6组:空白对照组（NC）、模型组（DM）、阳性对照组（GQ）和DMDD高、中、低剂量组。空白对照组给予蒸馏水灌胃,其余各组均给予高糖高脂饲料。高糖高脂干预4周后,单次110mg/kg腹腔注射STZ复制2型糖尿病模型。造模成功后,阳性对照组在高糖高脂饲料基础上给予格列喹酮(10mg/kg·d-1)。DMDD高中低剂量组则在高糖高脂饲料基础上分别给予50、25和12.5mg/kg·d-1的DMDD。连续给药4周后,处死小鼠,测定一般指标及肾功能的变化。HE染色观察肾脏组织病理学改变,Masson染色观察纤维化情况的变化,透射电镜观察肾小管形态及纤维化情况的变化。免疫组化检测TLR4、BAMBI、TGFβ1、Smad2/3的表达水平,RT-PCR和Western-blot检测TLR4、BAMBI、TGFβ1、Smad2/3的mRNA和蛋白表达的变化。2、体外实验:以人肾小管上皮细胞（HK-2）为体外模型,采用高糖（60mmol/L葡萄糖）刺激HK-2细胞转分化。CCK8法确定DMDD的给药剂量,然后观察不同剂量DMDD对HK-2细胞转分化的影响。免疫荧光法、RT-PCR和Western-blot法检测TLR4和TGFβ/Smad信号通路的基因及蛋白表达的变化。进一步,通过慢病毒转染过表达及沉默BAMBI蛋白,RT-PCR和Western-blot检测TLR4和Smad2/3以及转分化相关指标E-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表达的变化。结果:1、体内实验（1）高糖高脂联合STZ刺激可导致小鼠糖尿病肾病的发生,DMDD可以降低糖尿病小鼠的血糖和血脂,同时也可以改善胰岛素抵抗以及糖耐量和胰岛素耐量情况。（2）胱抑素C（CysC）和微量尿蛋白水平可以作为肾功能损害的敏感标志物,DMDD干预后可明显改善DKD小鼠的CysC和微量尿蛋白水平。（3）HE染色结果显示,在野生型小鼠中,糖尿病模型小鼠肾小球明显增大,基底膜异常增厚,间质出现炎症浸润以及纤维化,DMDD干预后,肾小球体积缩小明显,基底膜亦变薄,浸润的炎症及纤维化现象亦逐步减少,且病理改善随DMDD的剂量呈正相关变化。在TLR4-/-小鼠中,糖尿病模型组的病理改变程度较野生型同组比明显减轻,DMDD干预后,病理改变亦呈好转趋势。Masson染色结果显示,糖尿病组小鼠肾脏组织胶原沉积明显增加,DMDD干预后肾脏纤维病理改变明显减轻,而阳性对照组未发现明显的改善。与野生型小鼠相比,TLR4-/-小鼠的纤维化程度明显减轻。透射电镜显示,模型组肾间质成分明显增多,出现了较多的胶原纤维。当给予DMDD干预后,高中低各组的肾间质成分均明显减少,胶原纤维亦出现下降。阳性对照药物格列喹酮则无此效果。在TLR4-/-模型小鼠中,没有出现明显的纤维化。（4）免疫组化的结果显示,在野生型小鼠中,高糖高脂饮食与STZ刺激可使TLR4的表达明显增加,而给予DMDD干预后,TLR4的表达呈下降的趋势,且有剂量依赖性。在TLR4-/-小鼠中,没有检测到TLR4的表达,高糖高脂及STZ刺激亦没有增加TLR4的表达。TGFβ1在野生模型组中的表达明显升高,当给予DMDD治疗后,TGFβ1表达呈进行性下降,且有剂量依赖性。当TLR4基因敲除后,模型组的TGFβ1蛋白表达量与野生型同组比明显减少。Smad2/3作为TGFβ1调控的下游蛋白,其免疫组化结果表现与TGFβ1保持相同的趋势。与TGFβ1和Smad2/3相比,BAMBI的免疫组化结果呈现相反的趋势。无论是在野生型或TLR4基因敲除型小鼠中,空白对照组均有BAMBI蛋白表达出现,当给予高糖高脂和STZ刺激后,模型组小鼠BAMBI蛋白表达量均明显降低。DMDD干预后,各组的BAMBI表达均呈上升趋势,且呈剂量依赖性。作为阳性对照药物,格列喹酮对于以上几个蛋白在肾组织中的表达的变化几无影响,提示格列喹酮对糖尿病肾病的纤维化没有保护作用。（5）RT-PCR和Western-blot结果显示,TLR4-/-小鼠没有出现TLR4mRNA及蛋白的表达。而野生型小鼠中,模型组的TLR4 mRNA和蛋白表达均明显升高,当给予DMDD干预后,TLR4表达水平均下降,且呈剂量依赖性。BAMBI的mRNA和蛋白表达在TLR4-/-小鼠中各组之间无明显差异,而在野生型小鼠中,当给予高糖高脂联合STZ刺激后BAMBI的mRNA和蛋白表达水平均明显降低;再给予DMDD干预,各组的BAMBI又呈现不同程度的上升,中、高剂量组更明显。TGFβ1和Smad2/3的mRNA和蛋白表达表现出相似的趋势,在TLR4基因敲除型小鼠中,模型组的TGFβ1和Smad2/3的mRNA和蛋白均无明显改变,DMDD干预亦未见明显变化。在野生型小鼠中,模型组的TGFβ1、Smad2/3的mRNA和蛋白表达均明显升高,再予DMDD干预后,TGFβ1和Smad2/3的mRNA和蛋白均呈下降趋势,且呈剂量依赖性。阳性对照药格列喹酮对于上述相关蛋白的mRNA和蛋白的表达没有明显的影响,提示格列喹酮保护糖尿病肾病的作用机制与TLR4-TGFβ-Smad2/3信号通路无关。2、体外实验（1）CCK8确定DMDD对HK-2细胞的IC50值为80μmol/L,据此浓度进行实验,确定DMDD的高中低剂量浓度分别为:40、20和10μmol/L。（2）高糖刺激HK-2细胞后,其形态没有发生明显的变化。划痕实验显示上皮细胞运动迁徙能力增强,表现出纤维细胞的特性,提示高糖的存在使细胞发生了EMT。此外RT-PCR和Western-blot结果显示,在高糖刺激下EMT指标E-cadherin表达下降,而Vimentin表达升高,提示上皮细胞发生了转分化。当给予DMDD干预后,E-cadherin相对表达量明显升高,而Vimentin则明显降低。（3）免疫荧光结果显示,高糖刺激后HK-2细胞的TLR4和pSmad2/3表达明显升高,而BAMBI则表达降低。经DMDD的干预后,TLR4表达出现明显下调。（4）当加入TLR4阻断剂TAK-242抑制TLR4的功能后,RT-PCR和Western-blot结果显示,高糖诱导HK-2细胞中的E-cadherin表达增多,而Vimentin则呈下降趋势。（5）过表达BAMBI后,HK-2细胞EMT程度明显降低;沉默BAMBI后,EMT增强。沉默后再用高糖刺激以及DMDD干预,EMT无明显变化。（6）作为BAMBI的下游调控蛋白,Smad2/3的表达水平与BAMBI呈负相关。过表达BAMBI,Smad2/3的表达下调;当BAMBI沉默后,Smad2/3的mRNA及蛋白表达相应上调,此时继续使用高糖刺激以及DMDD干预,Smad2/3表达无明显变化。结论:（1）DMDD具有改善糖尿病肾病小鼠肾功能的作用。（2）DMDD可明显减少糖尿病肾病小鼠TLR4及TGFβ-Smad2/3的蛋白表达。（3）TLR4与TGFβ-Smad2/3信号通路之间通过BAMBI存在信号交叉。（4）DMDD通过调控TLR4-TGFβ/Smad2/3信号通路来减缓EMT的发生从而改善糖尿病肾病。

摘要译文

关键词: DMDD ；糖尿病肾病；Toll样受体4 ；转化生长因子β ；上皮间质转分化

引用

被引量 3

5. 认领

【学位/博士】 • 郑妮 • 广西医科大学 • 导师：黄仁彬 • 2014年

摘要： 2型糖尿病是一组由于胰岛素抵抗和胰岛素分泌障碍所导致的糖、脂质、蛋白质代谢紊乱，以血糖升高为基本特征的代谢紊乱疾病。近年来，随着人们生活水平提高、饮食习惯改变、体力劳动减少以及人口肥胖率的增加等多种因素，全球糖尿病的发病率呈逐年上升趋势。糖尿病现成为与心脑血管疾病、肿瘤并列的严重危害人类健康的三大疾病之一。因此，寻找一些简单方便、安全可靠的防治糖尿病的方法变的十分紧迫。杨桃根，作为酢浆草科植物Averrhoa carambola L.的根。作为一种中药材已有悠久的应用历史，用于治疗糖尿病以及糖尿病肾病。2-十二烷基-6-甲氧基-2，5-二烯-1，4-环己二酮（2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2，5-diene-1，4-dione，DMDD）是从杨桃根中提取出来的有效活性成分。目的:研究DMDD对2型糖尿病KKAy小鼠的血糖血脂，肝脏糖脂代谢的影响以及对于由糖基化终产物所介导的肾脏损伤的保护作用，从而证明其对于糖尿病治疗的有效性。方法：KKAy小鼠给予DMDD（12.5，25，50毫克/公斤体重/天）或氨基胍（200毫克/公斤体重/天）灌胃8周。记录体重，死亡，空腹血糖，总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），载脂蛋白（ApoAI，apoB），游离脂肪酸（FFA），总脂质酶，肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。然后，将小鼠处死，将其肾脏标本进行组织病理学和免疫组织化学（RAGE，NF-κBβκ，TGF-β1，CML）分析。结果：2型糖尿病KKAy小鼠的空腹血糖，糖化血红蛋白，TG，TC，LDL-C，ApoB和FFA均显著高于C57BL/6J小鼠，而HDL-C、ApoAI水平则明显降低。DMDD显著降低血糖， TG，TC，LDL-C，ApoB的含量，增加HDL-C、ApoAI水平。DMDD增加糖尿病小鼠的肝脏糖原含量，而降低FFA、TG水平。DMDD升高SOD活性和降低MDA，显著降低FFA，而增加脂联素水平与总脂质酶，超氧化物歧化酶活性。 DMDD显著降低肾脏AGES和相关蛋白的表达，如AGE受体，核因子-κB，转化生长因子-β1，NF-κBβκ。进行8周的治疗后DMDD显著改善了尿蛋白，血清肌酐，血清尿素氮和肌酐清除率，和肾小球系膜基肿胀。KKAy小鼠肾脏减少的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶也在DMDD治疗后有了显著提高。结论：这些研究结果表明，DMDD可抑制糖尿病肾病的进展，可能成为治疗糖尿病的药理学良好药物。

摘要译文

关键词: 糖尿病肾病；糖基化终产物；肿瘤坏死因子-α ；核转录因子kappa B

引用

被引量 4

6. 认领

【学位/博士】 • 郑妮 • 广西医科大学 • 导师：黄仁彬 • 2014年

摘要： 2型糖尿病是一组由于胰岛素抵抗和胰岛素分泌障碍所导致的糖、脂质、蛋白质代谢紊乱，以血糖升高为基本特征的代谢紊乱疾病。近年来，随着人们生活水平提高、饮食习惯改变、体力劳动减少以及人口肥胖率的增加等多种因素，全球糖尿病的发病率呈逐年上升趋势。糖尿病现成为与心脑血管疾病、肿瘤并列的严重危害人类健康的三大疾病之一。因此，寻找一些简单方便、安全可靠的防治糖尿病的方法变的十分紧迫。　　杨桃根，作为酢浆草科植物Averrhoa carambola L.的根。作为一种中药材已有悠久的应用历史，用于治疗糖尿病以及糖尿病肾病。2-十二烷基-6-甲氧基-2，5-二烯-1，4-环己二酮（2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2，5-diene-1，4-dione，DMDD）是从杨桃根中提取出来的有效活性成分。　　目的:研究DMDD对2型糖尿病KKAy小鼠的血糖血脂，肝脏糖脂代谢的影响以及对于由糖基化终产物所介导的肾脏损伤的保护作用，从而证明其对于糖尿病治疗的有效性。　　方法：KKAy小鼠给予DMDD（12.5，25，50毫克/公斤体重/天）或氨基胍（200毫克/公斤体重/天）灌胃8周。记录体重，死亡，空腹血糖，总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），载脂蛋白（Apo AI， apoB），游离脂肪酸（FFA），总脂质酶，肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。然后，将小鼠处死，将其肾脏标本进行组织病理学和免疫组织化学（RAGE，NF-κBβκ，TGF-β1，CML）分析。　　结果：2型糖尿病KKAy小鼠的空腹血糖，糖化血红蛋白，TG， TC，LDL-C，ApoB和FFA均显著高于C57BL/6J小鼠，而HDL-C、ApoAI水平则明显降低。DMDD显著降低血糖， TG，TC，LDL-C， ApoB的含量，增加HDL-C、ApoAI 水平。DMDD增加糖尿病小鼠的肝脏糖原含量，而降低FFA、TG水平。DMDD升高SOD活性和降低MDA，显著降低FFA，而增加脂联素水平与总脂质酶，超氧化物歧化酶活性。　　DMDD显著降低肾脏AGES和相关蛋白的表达，如AGE受体，核因子-κB，转化生长因子-β1，NF-κBβκ。进行8周的治疗后DMDD显著改善了尿蛋白，血清肌酐，血清尿素氮和肌酐清除率，和肾小球系膜基肿胀。KKAy小鼠肾脏减少的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶也在DMDD治疗后有了显著提高。　　结论：这些研究结果表明，DMDD可抑制糖尿病肾病的进展，可能成为治疗糖尿病的药理学良好药物。

摘要译文

关键词: 2型糖尿病；糖尿病肾病；杨桃根；环己二酮；糖脂代谢

引用

被引量 1