文献检索结果-维普官网

二次检索

在结果中检索

在结果中去除

暂无数据

共 3 条结果，以下是1 - 3条

1 / 1

全选已选:0 清除

批量下载

批量引用

相关度时效性被引量

1. 认领

【学位/硕士】 • 王静 • 中国海洋大学 • 导师：潘鲁青 • 2008年

摘要：多环芳烃化合物(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons,简称PAHs)是自然环境中持久性有机污染物的主要代表,具有致癌、致畸和致突变作用,随着煤、石油在工业生产、交通运输以及生活中被广泛应用,海上PAHs的污染日益加重。本论文以栉孔扇贝为研究对象,根据生物标志物筛选和评价原则,全面系统的研究了B[α]P对栉孔扇贝解毒代谢酶、DNA和蛋白质的影响,阐明了B[α]P在栉孔扇贝体内的毒性效应过程。采用统计学方法对所选指标进行了剂量效应和相关性分析,并将在实验室研究中筛选出的标志物应用于青岛近海环境中PAHs的监测。所得结果如下: 1 B[α]P对栉孔扇贝组织解毒代谢指标的影响本文研究了苯并(α)芘(B[α]P)对栉孔扇贝(Chlamys farreri)鳃丝和消化盲囊毒理学指标(包括AHH、GST、GSH和MDA)的影响,结果显示B[α]P对扇贝毒理学指标影响显著(P＜0.05),鳃丝和消化盲囊中各指标具有相似的变化规律:在为期15d的B[α]P一次染毒实验过程中,AHH活力和MDA含量被诱导升高,被诱导程度与曝污浓度呈现正相关,其中鳃丝被诱导的程度较消化盲囊要大,低浓度处理组GST活力和GSH含量先表现为被诱导升高,之后被抑制并低于对照组水平,高浓度处理组则表现为直接被抑制,被抑制程度与B[α]P浓度相关;当污染消除后,栉孔扇贝表现出良好的自我调节能力,各毒理指标较快地恢复到对照组水平,其中低浓度处理组的恢复速度较高浓度要快,消化盲囊的氧化损伤的修复能力较鳃丝强;经过为期30d的恢复实验后,立即进行二次染毒实验,除高浓度处理组表现为氧化损伤的加剧外,其它标志物的变化趋势与一次染毒实验时基本一致,表现出很好的重现性。本实验表明,栉孔扇贝鳃丝和消化盲囊毒理学指标(AHH、GST、GSH和MDA)能指示B[α]P污染程度,并具有较强的敏感性和良好的重现性,可以作为B[α]P污染的氧化压力生物标志物。 2 B[α]P对栉孔扇贝组织DNA和蛋白质损伤效应的研究在B[α]P胁迫下研究了栉孔扇贝(Chlamys farreri)鳃丝和消化盲囊DNA单链断裂(分别用碱解旋分析法和单细胞凝胶电泳实验测定)、DNA-蛋白质交联(DPC)和蛋白质羰基化含量的影响。结果显示,B[α]P对栉孔扇贝DNA和蛋白质损伤的诱导显著,且表现出明显的时间效应规律(P＜0.05)。在一次染毒阶段DNA单链断裂水平1d内被显著诱导,之后随着B[α]P在生物体内的不断累积,激活了体内DNA修复系统,是DNA单链断裂水平有所下降。最高浓度组由于浓度过高抑制了体内的修复系统,造成了不可逆的损伤,从而使扇贝具有了一定的本底水平。清除阶段,各处理组均显示了明显的恢复过程。二次染毒阶段处理组DNA单链断裂水平与一次染毒阶段类似,表现出很好的重现性。DPC与蛋白质羰基化含量变化在一次染毒过程中未表现出明显的修复过程,可见蛋白质损伤较之酶和DNA损伤更难恢复。清除阶段各处理组DPC和蛋白质羰基含量恢复较慢,且只有低浓度组恢复至对照组水平。二次染毒阶段与一次染毒阶段变化类似,但稳定后DPC水平和羰基含量均高于一次染毒阶段。总之,与单细胞凝胶电泳实验相比,碱解旋分析法更适于测定DNA单链断裂水平的变化,蛋白质损伤具有作为PAHs污染生物标志物的潜质。 3栉孔扇贝对B[α]P生物标志物筛选技术的研究本文根据生物标志物的筛选和评价原则,运用统计学方法研究了B[α]P对栉孔扇贝鳃丝和消化盲囊解毒代谢酶和损伤效应指标的剂量效应、一次染毒和二次染毒间指标的相关性以及所有指标间的相关性。结果显示,B[α]P胁迫下1d和15d栉孔扇贝鳃丝和消化盲囊解毒代谢酶和损伤效应指标的变化具有明显的线性剂量效应关系(P＜0.05);除了GSH和MDA其他各指标一次染毒和二次染毒间都变现为极显著性相关(P＜0.05);运用Pearson相关系数对所有指标进行回归分析发现,各指标均表现为极显著性相关,并且酶指标之间、DNA和蛋白质损伤指标之间的相关性要大于二者间的相关性。因此,AHH活力、GST活力、DNA单链断裂、DNA-蛋白质交联和蛋白质羰基含量均符合生物标志物评价的前三条原则,将用于下一章野外实验的进一步验证。 4青岛近海海水中B[α]P含量与栉孔扇贝生物标志物的现场验证与评价本章在青岛近海选择了三个位点(黄岛红石崖、太平角和8号码头)采取海水和栉孔扇贝样品,测定了海水中B[α]P含量以及栉孔扇贝鳃丝和消化盲囊AHH活力、GST活力、DNA单链断裂、DNA-蛋白质交联和蛋白质羰基含量的变化。结果显示,海水中B[α]P含量大小为:红石崖〈太平角〈8号码头;AHH活力和DPC在红石崖和太平角两个位点无显著差异(P＞0.05)。GST活力、DNA单链断裂和蛋白质羰基含量都很好的反映了海水中B[α]P的含量,且8号码头损伤最为严重。8号码头在两次取样间指标差异显著(P＜0.05),我们最终确定DNA单链断裂水平和蛋白质羰基含量作为基于双壳贝类海洋PAHs污染监测的生物标志物,为海洋生态保护和人类健康提供参考。

摘要译文

关键词: 栉孔扇贝 ；苯并(a)芘；生物标志物 ；筛选技术

引用

被引量 7

2. 认领

【学位/硕士】 • 赵亚楠 • 中国海洋大学 • 导师：潘鲁青 • 2018年

摘要：持久性有机污染物（Persistentorganicpollutants，POPs）被认为是21世纪影响人类生存和健康的重要环境问题之一。多种POPs会对人类和动物的神经系统，免疫系统，内分泌系统和生殖系统造成毒害。其中，多环芳烃（Polycyclicaromatichydrocarbons，PAHs）和二噁英（dioxins）均为POPs中的重要种类。随着工业化的进程，海洋环境中的PAHs和二噁英污染日益严重，因此水生生物对于此类物质的解毒代谢机制逐渐受到广泛的关注。基于此，本文选取经济贝类栉孔扇贝（Chlamysfarreri）作为研究对象，进行了栉孔扇贝芳烃受体蛋白（AhR）与外源性污染物配体结合的研究，并且进一步分析了栉孔扇贝在苯并芘（benzo[a]pyrene，B[a]P）、?（chrysene，CHR）和菲（phenanthrene，PHE）三种PAHs单一及混合胁迫下AhR信号途径的响应和Ⅱ相解毒代谢酶不同亚族的功能特点，同时初步研究了栉孔扇贝在2，3，7，8-四氯-二苯并-对-二噁英（2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD）胁迫下的解毒代谢机制，以期为海洋双壳贝类响应POPs暴露的机制提供更多信息，同时为海洋生物监测提供更多依据。　　1栉孔扇贝芳烃受体蛋白与外源配体结合的研究　　由于人为活动的原因，水生生物更大程度地暴露于持久性有机污染物POPs下，因此水生生物在POPs胁迫下的代谢机制受到更多的关注。芳烃受体蛋白（arylhydrocarbonreceptor，AhR）与污染物的结合是AhR在解毒代谢中发挥调控作用的关键，但是双壳贝类在这方面的研究却非常有限。为了查明五种代表性的POPs是否可以与栉孔扇贝AhR相互作用，本研究基于酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）构建了包含栉孔扇贝AhR与外源性物质响应元件（xenobioticresponseelements，XRE）的重组酵母Y187CfAhR/XRE，并用一系列浓度的TCDD，β-萘黄酮（β-naphthoflavone，BNF）、B[a]P、CHR和PHE）处理该重组酵母。依据前人的研究和预实验将TCDD和BNF的浓度设置为0.001、0.01、0.1、1、10、100、1000nM，B[a]P、CHR和PHE的浓度设置为0.001、0.01、0.1、1、10、50、100μM。报告基因产物β-半乳糖苷酶活力的结果显示：不经任何处理，栉孔扇贝AhR可以与XRE相互作用。重组酵母的β-半乳糖苷酶活力可以被TCDD显著诱导，表明TCDD是栉孔扇贝AhR的一种潜在激动剂，但在我们的实验中并没有充分的证据表明其他四种受试化合物可以与栉孔扇贝AhR结合。　　2栉孔扇贝在单一/混合PAHs胁迫下芳烃受体蛋白信号途径与Ⅱ解毒代谢酶不同亚族功能的研究　　本章从AhR途径和Ⅱ解毒代谢酶不同亚族的功能两方面进行研究，实验染毒浓度设置为B[a]P（0.7，2.1μg/L）、CHR（0.7，2.1μg/L）、PHE（0.7，2.1μg/L）、B[a]P+CHR+PHE（0.7+0.7+0.7，2.1+2.1+2.1μg/L）和对照组，染毒实验共进行15天，取样组织为消化盲囊，取样时间点为0、1d、3d、6d、10d、15d。结果表明：AhR信号通路关键基因AhR、ARNT、HSP90和XAP2均可被B[a]P、CHR和PHE单一及混合染毒显著诱导，XAP2的表达模式呈现显著的时间-剂量效应，且三种单一PAHs在相同浓度处理下对XAP2的诱导程度基本一致。　　对Ⅰ相代谢相关基因的研究表明，CYP1A1的表达量在B[a]P、CHR、PHE以及这三种污染物混合处理下呈剂量效应变化，在染毒的第1-10天，各污染物对CYP1A1的诱导效应为CHRgt;B[a]Pgt;PHE，第15天时B[a]P处理组CYP1A1表达量超过了CHR，且混合胁迫对CYP1A1的诱导效应大于单一胁迫，这三种PAHs对CYP1B1的诱导效应却为PHEgt;CHRgt;B[a]P。　　Ⅱ相解毒代谢酶GST各亚型可被不同的污染物显著诱导，且各亚型的响应模式有所不同。GST-theta的整体表达水平相较于其他GSTs较高，暗示GST-theta对于PAHs胁迫可能更为敏感。GST-sigma2和GST-3的表达量在第6天时达到峰值，且诱导效应为CHRgt;B[a]P+CHR+PHEgt;PHE。PHE比混合处理组对GST-microsomal有更强的诱导效应，且GST-microsomal的表达量与PHE和B[a]P+CHR+PHE处理浓度均呈正相关，作者认为GST-microsomal表达量也可作为PHE和B[a]P+CHR+PHE胁迫下的生物标记物。pi型GST在本研究中表现出了明显的剂量效应，且诱导效应为B[a]P+CHR+PHEgt;PHE。SULT各亚型在本研究中也展现出了不同的功能趋势。B[a]P对SULT1B1展现出较强的诱导效应。B[a]P、CHR、PHE及其混合处理均能诱导SULT1C2的表达，且在PHE处理组SULT1C2表达量变化呈现明显的剂量-效应，暗示SULT1C2可能也参与PAHs类致癌物的生物转化过程。B[a]P对SULT1C4的表达量无显著的诱导效应，但CHR和PHE以及混合处理组可诱导SULT1C4的高表达。　　关于Ⅲ相解毒代谢相关基因的研究表明，各处理组ABCB1的表达量自实验开始就迅速上调，且不同污染物处理下ABCB1的变化模式并不相同，B[a]P处理组于第6天达到最大值后开始下降，CHR、PHE处理组除在第6天达到峰值外，实验初期便出现了“小高峰”，推测在不同的时间点ABCB1主要转运的底物有所不同。ABCC1在整个实验周期内表达量均较高，说明ABCC1在持续地发挥作用。B[a]P处理组的ABCG2表达量在整个实验周期内保持持续上升的状态直至第15天实验结束时，且呈现明显的剂量效应，作者认为ABCG2可以作为B[a]P暴露的灵敏指示指标。　　3栉孔扇贝在TCDD胁迫下解毒代谢过程与生物标志物的研究　　本实验将栉孔扇贝分别暴露于0、0.001、0.01和0.1μg/L的2,3,7,8-四氯二苯并-对-二噁英（TCDD），分别于0、1、3、6、10、15d取样，取样组织为消化盲囊，通过对解毒代谢关键基因表达量的测定，初步探究了栉孔扇贝在TCDD胁迫下的解毒代谢机制。结果表明：TCDD对栉孔扇贝AhR信号通路、I相、II相和III相代谢过程各基因表达均具有显著影响。各基因在TCDD胁迫下呈峰值变化，均于10d达到最高值。其中，HSP90、XAP2和ABCB1表达量呈现剂量效应，CYP1A1在1-10d呈剂量效应，AhR、GST-microsomal、SULT1B1、UGT、ABCC1和ABCG2在各处理组的表达量均为：中浓度组gt;高浓度组gt;低浓度组。此外，综合生物标志物响应（IBR）分析表明ARNT和ABCG2表达量在各个时间点均具有较高响应水平，是对于TCDD胁迫更为灵敏的生物标志物。

摘要译文

关键词: 栉孔扇贝 ；多环芳烃；二噁英；芳烃受体信号途径；解毒代谢酶；基因表达

引用

3. 认领

【学位/博士】 • 刘娜 • 中国海洋大学 • 导师：潘鲁青 • 2012年

摘要：本文根据目前我国近海多环芳烃污染现状，以近海养殖重要经济贝类菲律宾蛤仔（Venerupis philippinarum）为研究对象，克隆了菲律宾蛤仔芳烃受体介导的解毒代谢途径几种关键基因，包括芳烃受体蛋白（AhR）、芳烃受体核转位因子（ARNT）、热休克蛋白90（HSP90）。研究了毒性最强的多环芳烃（PAHs）——苯并（a）芘（BaP）对菲律宾蛤仔组织解毒代谢相关基因的表达调控规律，通过对在BaP胁迫下菲律宾蛤仔解毒代谢相关基因的克隆及基因表达分析，探究双壳贝类PAHs解毒代谢机制；构建了菲律宾蛤仔PAHs消减cDNA文库，筛选、鉴定了差异表达基因，结合室内实验和海区现场验证，初步建立了基于菲律宾蛤仔的PAHs分子生物标志物监测技术，为海洋环境污染监测和水产品安全评价提供基础数据和技术支持。 1菲律宾蛤仔芳烃受体（AhR）介导的关键基因克隆与表达分析菲律宾蛤仔芳烃受体蛋白（VpAhR）的cDNA全序列长2870bp，开放阅读框（ORF）长为2391bp，共编码796个氨基酸残基，不具备信号肽，属于胞内蛋白，含有2个核定位序列（NLS）：K45RRRR49和P67SKRHRE73。BLAST分析表明VpAhR与其它物种AhR基因具有较高的同源性。VpAhR含有1个碱性螺旋-环-螺旋结构（bHLH domain）和2个配体结合区（PAS domain），属于bHLH-PAS转录因子家族。序列分析显示，VpAhR的配体结合区（a.a.220–383）与砂海螂（M. arenaria）和斑马纹贻贝（D. polymorpha）AhR的配体结合区相似性很高。实时定量PCR分析表明VpAhR在菲律宾蛤仔的鳃、消化盲囊、外套膜和闭壳肌中均有表达，鳃组织中表达量最高。菲律宾蛤仔ARNT片段长485bp，编码161个氨基酸残基，该序列含一个由44个氨基酸构成的PAS结构域（a.a.7-50），该区域与其他物种ARNT的PAS结构域相似性较高；VpARNT在菲律宾蛤仔消化盲囊中表达最高，在鳃、外套膜和闭壳肌中也均有分布。HSP90是分子伴侣家族的重要一员，菲律宾蛤仔的HSP90基因片段cDNA长687bp，编码299个氨基酸，具有HSP90家族保守信号区（GVVDSEDLPLNISRE），与其他物种HSP90氨基酸序列具有很高相似性，与栉孔扇贝（C. farreri）和海湾扇贝（A. irradians）的相似性均为99%，菲律宾蛤仔HSP90在鳃组织中表达量最高；不同浓度BaP（0.01、0.2μg/L）染毒处理3d、10d，菲律宾蛤仔鳃组织中AhR、ARNT、HSP90和谷胱甘肽硫转移酶（GSTpi）的基因表达水平随染毒浓度增大和处理时间延长而逐渐升高；除10d时0.2μg/L组细胞色素P4504（CYP4）基因表达被极显著（P＜0.01）上调外，其余处理组CYP4mRNA表达水平在染毒期间与对照组差异不显著（P＞0.05）。实验结果表明，BaP与AhR介导的菲律宾蛤仔解毒代谢相关基因AhR、ARNT、HSP90和GSTpi的mRNA表达具有明显的剂量—效应关系，符合生物标志物筛选原则，适于进行进一步的分析和现场验证。 2菲律宾蛤仔在苯并（a）芘胁迫下cDNA消减文库的构建与分析利用抑制性消减杂交技术（SSH）构建了BaP（1μg/L）胁迫下菲律宾蛤仔正、反向cDNA消减文库，分别获得194个和93个重组克隆，测序分析显示，正、反向文库分别得到168个和83个EST序列，经同源序列相似性比对，正向cDNA文库中有31种基因与已知功能基因具有较高同源性，12种为假定蛋白，2种为未知蛋白；反向文库中已知功能基因10种，假定蛋白4种。所有ESTs序列信息均已提交Genbank数据库，cDNA消减文库编号为LIBEST027169。进一步序列比对、功能注释及分类显示，通过SSH筛选到的菲律宾蛤仔差异表达基因主要为药物代谢、杂环化合物代谢、细胞分解代谢、抗生素响应等代谢过程相关基因。 3菲律宾蛤仔在苯并（a）芘胁迫下分子生物标志物的筛选与验证设置一系列BaP染毒浓度（0.25、1和4μg/L），利用实时定量PCR检测染毒处理10d时菲律宾蛤仔解毒代谢相关基因、SSH-selected差异表达基因及几种其他功能基因的mRNA表达。结果显示，测定的28种基因中Defensin、Serine protease、Thioesterprotein、GST C、Mn-SOD、ARNT等12种基因被BaP诱导表达上调，且与染毒浓度呈线性正相关关系，因此适于作为潜在的分子生物标志物进行进一步研究与验证。在胶州湾和胶南附近海域各选择一个实验站点（S1和S2），于2011年12月采集各站点表层海水及菲律宾蛤仔样品。高效液相色谱法（HPLC）测定海水中PAHs含量和菲律宾蛤仔软体部中PAHs的累积量。结果显示，S1站点海水和菲律宾蛤仔组织中的总PAHs和BaP含量均高于S2站点；实时定量PCR分析表明，除HSP90和AhR外，PAHs含量较高的S1站点的其余10种分子生物标志物基因表达水平明显高于S2站点，表现出一定的剂量—效应关系。由此表明，菲律宾蛤仔12种基因基本符合生物标志物筛选原则，适于作为分子生物标志物用于海洋环境PAHs污染监测及毒性效应评估。

摘要译文

关键词: 菲律宾蛤仔；苯并(a)芘；基因克隆；抑制性消减杂交；分子生物标志物

引用

被引量 15