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    1
    1. 认领
    【期刊论文】 •

    发文量: 被引量:0

    阮运昌
    • 《华西药学杂志》 北大核心 • 1994年第3期 205 - 207, 共3页
    机构: [1] 云南省医药产品质量监测站

    摘要: 从云南西双版纳热带植物园引种的菊叶薯蓣(Dioscorea composita Hemsl)中分离获得薯蓣皂甙元(Diosgenin),这种皂甙元中含有微量的亚莫皂甙元(yamogenin).薯蓣皂甙元是合成甾体激素类药物的重要原料. 摘要译文
    关键词: 菊叶薯蓣 ;薯蓣 ;皂甙元 ;质量
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    引用
    被引量 14
    2
    2. 认领
    【学位/硕士】 •

    发文量: 被引量:0

    郑晓琴
    • 西南农业大学 • 导师:梁国鲁 • 2003年

    摘要: 薯蓣属植物在我国分布广泛,种类繁多,具有很重要的药用价值和食用价值。其中大部分种类含有薯蓣皂甙元,如盾叶薯蓣(D. zingiberensis)、穿龙薯蓣(D. nipponica)、黄山药(D. panthaica)、三角叶薯蓣(D. deltoidea)等,是生产甾体激素类药物的重要原料。 药用植物的种质是整个植物药生产过程的关键,直接关系到药用植物栽培、产品质量(产量和有效成分含量)及生产成本并最终影响到产品的合格性。在我国,盾叶薯蓣和穿龙薯蓣等因为较高的薯蓣皂甙元含量,都有很大的栽培面积,但作为原料药其产量和质量并未达到植物药生产所需,导致市场供需矛盾十分突出,就是因为只简单地将野生资源挖回来种植,忽略了种质的不稳定和有栽培价值的品种的培育,因而保持优良种质的稳定性和培育高含量、高产量的薯蓣新品种是一个紧迫而又有价值的研究课题。 本试验利用组织培养技术,主要针对薯蓣皂素含量较高,栽培价值大的盾叶薯蓣、黄山药和墨西哥菊叶薯蓣建立快速繁殖体系,以期找到最佳的繁殖方式,以满足薯蓣属植物扩大生产的需要,同时为国外的一些高含量薯蓣的引种繁育和品种改良打下基础;另外,结合染色体工程,通过自然筛选和人工诱导的方法对盾叶薯蓣进行倍性育种,获取大量多倍体试材为培育高含量、高产量的盾叶薯蓣新品种奠定基础。 三种薯蓣属植物离体再生体系培养条件的探索试验结果表明:黄山药外植体适宜的增殖培养基为MS+BA1.0mg/l+NAA0.1mg/l,微型块茎诱导为MS+BA6.0mg/l+KT1.0mg/l+3%蔗糖,高浓度的蔗糖含量(6%)能提高微型薯蓣的诱导率,但对其诱导起关键作用的还是BA的浓度;菊叶薯蓣增殖效果较好的培养基为MS+BA1.0mg/l,以MS培养基为诱导微型薯蓣的最佳选择,诱导率可达50%;盾叶薯蓣最适宜的增殖培养基为MS+BA2.0mg/l,在诱导微型薯蓣的实验中发现,当BA浓度为6.0mg/l和8.0mg/l时,15d左右节间处膨大形成绿色圆球状小块,但继续培养其上则开始分化芽。黄山药和菊叶薯蓣带微型薯蓣的无菌苗在MS和1/2MS培养基上均能生根和发芽,且根的生长状况差异不大。盾叶薯蓣生根情况较好的培养基为1/2MS+IBA0.1mg/l,生根率有50%。 对重庆城口取回的盾叶薯蓣进行自然筛选,结果获得2株二倍体,1株三倍体,4株四倍体,其余大部分为二倍性和四倍性的混倍体植株。 对于嵌合体盾叶薯蓣植株,利用组织培养结合秋水仙素溶液进行浸泡处理,结果发现,在适宜的浓度和时间下处理,不仅能诱导出较高比例的四倍体,最高可达20%,而且还可获得六倍体和八倍体。以秋水仙素浓度和处理时间为变量因子,以诱导率和死亡率为因变量,进行方差分析,结果表明,秋水仙素浓度和处理时间的 薯莉属扳勃 fDforO。卜* #速绥殖妹系 ie太止与多侣体卦神质的培言 适且范围为:005%-0.!%处理15.35h。 对获得的盾叶薯猿自然多倍体与二倍体进行了植株外部形态比较观察,结果发 观,多倍体植株茎蔓生长慢于二倍体;在叶片形态上,多倍体充分体现了形态器官 的巨大性,叶片的长宽厚均大于二倍体,其厚度分别为二倍体的 125.0%和 156.3%; 多倍体叶色更加浓绿,叶形指数变小,多倍体叶形指数分别为二倍体的99%和97%。 对获得的所有多倍体类型与二倍体进行气孔特性的比较,结果发现,多倍体内保卫 细胞的叶绿体数目多于相应的二倍体,且气孔增大,而密度下降,三倍体和四倍体 之间气孔密度差别不大,约为二倍体的60-70%;六倍体和八倍体之pJ气孔密度的# 别也不明显,但较二倍体密度下降较大,约为二倍体的30一0%左右。 对获得的盾叶薯葡自然多倍体与二倍体进行同工酶分析发现;各类型植株的 EST同工酶酶谱带共分离 15条带,IUbeo.28-0.73。h倍体共分离 10条带,其中 3 条特强带,IiI5tl二8,0.31,0.36;I条强带,Ilq).47;2条次强带,Rf=0.38,0.58; 3条弱带,*卜0.41,0.43,o.60;1条痕迹带,R卜旬*0:其中*卜0.58,0石0为二倍 体的特征带。三倍体共分离 8条带,其中 1条特强带,Il50.411条强带,Rf=0.SI; l条次强带,If4).38;5条弱带,Itfro.28,0.32,0.44,0.48,0.73。四倍体共分离 7条带,其中1条强带,I(15.引:2条次强带,llf).36,O.41;3条弱带,R卜0.44, 0.7o,O.刀:1条痕迹带,Ile,1.38。其中,Itlno.44,0.73为三倍体和四倍体区别于 二倍体共有的特征带;ItrAI.70为四倍体的特征带。SOD同工酶酶活性较弱,共分 离6条带,Ro.28D,73。二倍体有6条带,其中有三条特征带,Rf=0.36,0.52, 0.62;而Rfro.28,0.45,0.刀为三种倍性植株共有酶带,且酶带基本相同。从以上 结果可知,多倍体同工酶酶谱和酶活性较二倍体有明显的差异。 利用 20个引物侣 IS20)对盾叶薯预 5个不同倍性材料进行 PCR扩增,其中 4 个引物SS,S7,SS和m 在全部材料中均扩增出DNA带,占引物总数的20%, 且不同倍性基因组DNA经扩增后,都表现出丰富的DNA多态性,基本片段有卜斗 条,不同倍性具有特异性片段,少的卜二条,多的达56条。 摘要译文
    关键词: 薯蓣属植物 ;快速繁殖 ;微型薯蓣 ;染色体工程 ;多倍体 ;生物学特性
    引用
    被引量 2
    3
    3. 认领
    【学位/硕士】 •

    发文量: 被引量:0

    彭红霞
    • 中国地质大学(武汉) • 导师:鲍建国 • 2010年

    摘要: 黄姜,学名盾叶薯蓣(DioscoreaZingiberensisC.H.Wright),是薯蓣科薯蓣属多年生草本植物,为我国特有的一个品种,也是世界上薯蓣属植物中薯蓣皂甙含量较高的种类。由盾叶薯蓣提取的薯蓣皂甙元,是合成甾体激素类药物和甾体避孕药的重要医药化工原料,以其为原料可以合成肾上腺皮质激素、性激素、蛋白同化激素等药物可达300余种。目前,薯蓣皂甙元生产厂家所采用的传统生产工艺极为落后,不但皂素的收率低,而且产生了大量含酸量高,胶质重、色素浓的酸性废水,对黄姜产区环境造成极大的污染。   为了解决环境问题,在推行清洁生产工艺发展黄姜皂素循环经济建设的现阶段,保证或者提高薯蓣皂甙元收率对黄姜产业循环经济的发展至关重要。本文通过对微生物发酵,酶水解,超声萃取,物理分离等多种清洁生产工艺进行研究,探讨了清洁生产工艺对皂素收率的影响,并对各个工艺中具体的工艺条件进行了优化,利用GC-MS对黄姜水解过程中的副产物进行了定性分析,同时还对工艺中提高薯蓣皂甙元收率的作用机理进行了初步探讨,以期为薯蓣皂甙元的实际生产提供技术理论依据。   微生物发酵有利于提高薯蓣皂甙元的收率。实验结果表明,黄姜在30℃条件下自然发酵48h能达到最佳效果。发酵过程中添加酵母也能提高薯蓣皂甙元的收率,但其增幅与自然条件下30℃发酵48h相差不大,生产过程中为节约生产成本可采用30℃条件下自然发酵48h。另外,黄姜利用接种土曲霉进行发酵可以转化薯蓣皂甙制备薯蓣皂甙元,发酵之后薯蓣皂甙元的总收率也会随之显著提高。   酶水解法提取薯蓣皂甙元工艺结果表明:利用α-淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、糖化酶5种酶对黄姜材料进行处理均可以提高黄姜中薯蓣皂甙元的收率,酶水解作用效果依次为:纤维素酶>糖化酶>果胶酶>木聚糖酶>α-淀粉酶。同时,本文还对这5种酶的作用机理作了初步探讨。实验结果还发现,在传统的双酶法生产薯蓣皂甙元工艺之前增加自然发酵过程有利于薯蓣皂甙元收率的提高,后发酵则会造成薯蓣皂甙元收率降低。   采用超声萃取-酸水解工艺提取黄姜中的薯蓣皂甙元,实验结果表明,超声萃取能将薯蓣皂甙提取更加完全,薯蓣皂甙元收率比直接酸水解法提高了近32%。对超声萃取-酸水解工艺进行单因素考察,进行了超声提取时间,提取次数,提取溶剂,料液比,硫酸浓度,硫酸催化水解时间对薯蓣皂甙元收率的影响考察,确定最佳提取工艺条件为:以甲醇为提取溶剂,料液比为1:20,对黄姜中的总皂甙超声提取3次,每次20min,合并提取液之后,加入1.5mol/L的硫酸,在100℃下恒温密闭水解4h,然后用石油醚萃取出薯蓣皂甙元。利用GC-MS对硫酸催化水解过程中的副产物进行定性分析,实验结果发现黄姜在水解时间过长时,薯蓣皂甙元会脱水生成二烯(△3,5-脱氧替告皂甙元)。   将黄姜粉碎料经20-200筛网进行物理分离,并测定不同目数的粉碎料中薯蓣皂甙元含量,实验结果表明,理论上只有当黄姜被磨碎到过200目筛的时候,才不会夹带甾体皂甙。证明文献报道中提出的采用物理分离法提取黄姜皂素时,分离粒径为100-120目,会造成薯蓣皂甙元的损失。   同时,本文还对黄姜不同部位薯蓣皂甙元含量进行测定,实验结果表明,根茎中薯蓣皂甙元含量为1.69%,黄姜芽,表皮和不定根中薯蓣皂甙元含量相对较低,分别为0.19%,0.15%和0.36%,说明黄姜的根茎是生产薯蓣皂甙元的最佳原料,同时黄姜其他部位也具有利用一定的利用价值。对发霉黄姜薯蓣皂甙元含量进行了测定,实验结果发现其含量显著降低。因此,为了保证生产过程中薯蓣皂甙元的收率和质量,重视黄姜原料的保存,避免其发霉具有很重要的意义。 摘要译文
    引用
    4
    4. 认领
    【学位/硕士】 •

    发文量: 被引量:0

    乔振杰
    • 西北农林科技大学 • 导师:李向民 • 2006年

    摘要: 盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis C. H. Wright)是生产甾体激素类药物的药源植物,为中国的特有种。盾叶薯蓣的有效成分是薯蓣皂甙元,为了提高薯蓣皂甙元得率,我们首先研究预发酵酸水解法提取薯蓣皂甙元工艺过程中的各个具体工艺条件,以得出薯蓣皂甙元得率最高的最佳工艺条件;其次研究了α-淀粉酶、纤维素酶、木聚糖酶、糖化酶在薯蓣皂甙元得率提高中的作用,并首次利用RP-HPLC研究了这些外源酶对薯蓣皂素质量的影响。 预发酵酸水解法提取薯蓣皂甙元工艺研究结果表明,盾叶薯蓣根茎粉碎的粒度,显著地影响薯蓣皂甙元的得率;水解物pH近中性时,薯蓣皂甙元的得率最高;单因素和正交试验优化的工艺条件为:原料粉碎到1mm以下,发酵温度为20℃~40℃,发酵24h,2.5mol/l盐酸水解6h,石灰乳中和,抽滤干燥,石油醚以12min/次的回流速率提取6h。 酶解法提取薯蓣皂甙元工艺研究结果表明,α-淀粉酶作用后,薯蓣皂甙元得率提高11.59%,残渣的残留率降低2.88%,且对薯蓣皂甙元的质量没有影响;纤维素酶作用后,薯蓣皂甙元得率提高了5.46%,残渣残留率降低4.72%,薯蓣皂甙元的质量也没有受到影响;木聚糖酶作用后薯蓣皂甙元的得率提高了1.02%,残渣残留率降低6.02%,却对薯蓣皂甙元的质量造成负面影响;糖化酶对薯蓣皂甙元的得率和盾叶薯蓣残渣残留率都没有影响。原料酸水解液用石灰水先中和后再水洗的方法与直接水洗对薯蓣皂甙元得率没有显著影响。 综合比较可知,原料粉碎到1mm以下,pH中性条件,加入α-淀粉酶发酵,可以得到薯蓣皂素的最大收率;酸解物水洗前用石灰水中和,可以节约大量生产用水。 摘要译文
    关键词: 盾叶薯蓣 ;黄姜 ;薯蓣皂甙元 ;提取
    引用
    被引量 9
    5
    5. 认领
    【学位/硕士】 •

    发文量: 被引量:0

    范俊强
    • 华中农业大学 • 导师:姚家玲 • 2008年

    摘要: 盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis C.H.Wrigh t),是我国特有的甾体激素类药源植物,也是世界上薯蓣皂甙元含量最高的资源植物。近些年,由于人类的过度采挖,野生盾叶薯蓣资源濒临枯竭,而人工栽培种存在皂甙元含量降低,种质退化等问题。细胞和基因工程技术可望为盾叶薯蓣的品种改良提供一个新的途径。本实验筛选了盾叶薯蓣易组织培养的基因型,并以其三种外植体—幼胚诱导的胚性愈伤,花序愈伤和花序作为转化受体,研究了根癌农杆菌介导的盾叶薯蓣转化的各种影响因素,获得了转基因植株,初步建立了根癌农杆菌介导的盾叶薯蓣转化体系,为通过转基因技术对其进行品种改良的研究奠定了技术基础。 主要研究结果如下: 一、转化受体的准备 1.基因型筛选。利用盾叶薯蓣四种基因型的幼胚进行了愈伤诱导实验,结果表明:不同基因型的组织培养能力不同,田间编号为4—73的材料最易进行组织培养,幼胚愈伤诱导率最高,达95.3%;其次是4—61,诱导率为91.2%;然后是5—88,诱导率为76.3%;4—72几乎没有诱导出愈伤。选择最容易组织培养的4-73作为以后研究的材料。 2.幼胚来源的愈伤继代和状态改良。4-73的幼胚诱导出来的初代愈伤,不成颗粒,生长缓慢,而且水浸状严重,再生困难,难以直接进行转化研究。通过调节激素种类与浓度、基本培养基成分,有机添加物,改变继代方式等,经过长时间的改良后,产生了白黄色,致密,表面呈颗粒的胚性愈伤。 3.花序愈伤诱导。取4-73幼嫩的花序,在MS附加0.5 mg/L 2,4-D,1.0 mg/L 6-BA或0.2 mg/L 2,4-D,1.0 mg/L 6-BA两种培养基上,均能诱导出高质量的愈伤。 二、影响转化的主要因素研究 1.外植体类型对转化的影响。利用4-73幼胚来源的胚性愈伤、花序诱导的愈伤以及花序三种外植体,分别与农杆菌共培养后,比较GFP的瞬间转化率。幼胚来源的胚性愈伤转化率最高,达到49.3%;花序愈伤转化率次之,达到40.5%;花序的瞬间转化率最低,只有5.5%,不适合直接作为转化的受体。 2.预培养对转化的影响。分别用幼胚来源的胚性愈伤和花序愈伤两种外植体作为转化受体,比较预培养与否时,GFP的瞬间转化率。结果表明:两种外植体经过预培养均比不经过预培养时转化率要高,预培养对转化有利。 3.预培养基和共培养基成分对转化的影响。通过MS,1/4MS和去掉CaCl2的MS三种基本培养基作为预培养和共培养基。结果发现,去掉CaCl2的MS最适合用作预培养和共培养的基本培养基。 4.AS对转化的影响。通过是否添加200μmol/L AS时的GFP瞬间转化率比较,发现预培养和共培养阶段,培养基中添加200μmol/L AS有利于提高转化率。 5.农杆菌浸染浓度对转化的影响。分别用OD600为0.3,0.5,0.8的农杆菌浸染液,感染胚性愈伤后,比较GFP瞬间转化率,结果显示,盾叶薯蓣转化的最佳菌液浓度为OD600=0.5。 6.共培养时间对转化的影响。用幼胚胚性愈伤作为受体,分别统计共培养1 d、2 d、3 d、4 d后,GFP的瞬间转化率。结果表明,共培养3 d时瞬间转化率最高。 7.转化参数的验证。以幼胚胚性愈伤和花序愈伤为受体,利用含有GUS报告基因载体的农杆菌EHA105介导,按照以上得出的转化参素进行转化,验证转化参数是否合适。结果显示:两种受体共培养后,经过GUS染液染色过夜,在大部分外植体上都观察到蓝斑,从而验证了前面得出的转化参数是正确的。 三、转化细胞的筛选、扩繁和再生,以及转基因植株PCR的鉴定 1.潮霉素筛选浓度的确定。将胚性愈伤转到含有潮霉素9个浓度梯度的培养基上,生长1个月后,观察愈伤在各个浓度上的生长状态,以确定潮霉素的筛选浓度。结果显示:在盾叶薯蓣转化实验中,合适的潮霉素筛选浓度为70mg/L。 2.转化细胞的筛选、扩繁和再生。共培养后,将各外植体转到响应的筛选培养基上,经过1-2个月的筛选,只有幼胚来源的胚性愈伤作为受体,进行转化后,产生了抗性愈伤,抗性愈伤在不含抗生素的培养基上扩繁两次,在再生培养基上分化出8棵拟转化苗。 3.转基因植株的GFP绿色荧光表达检测。将上面所得的拟转化苗进行扩繁后,在荧光体式显微镜下观察,发现在叶和叶柄上有微弱的绿色荧光表达。 4.转基因植株的PCR鉴定。提取扩繁后拟转化苗的总DNA,用潮霉素引物扩增出了潮霉素基因片段,说明筛选过程是严谨的,获得了转化的转基因植株。 摘要译文
    关键词: 盾叶薯蓣 ;胚性愈伤 ;农杆菌介导的转化 ;GFP瞬间表达 ;PCR
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    被引量 10
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