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摘要： 目的 观察10羟基喜树碱（ 羟基喜树缄） 和9二甲基氨基10羟基喜树缄（topotecan） 对卵巢癌细胞株体外生长的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（ M T T） 比色法，测定羟基喜树碱和topotecan 对卵巢癌细胞株 S K O V3 和 C A O V3 生长的抑制作用，并绘制浓度抑制率曲线，观察这两种药物对 S K O V3 和 C A O V3 的生长及集落形成的抑制作用，并与顺铂进行对比；用末端脱氧核酰转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法（ T U N E L） 、 D N A 梯形条带法检测药物诱导细胞凋亡的情况；免疫组化法检测药物对cmyc 、bcl2 、fas 基因的表达；并通过透射电镜观察应用羟基喜树碱后细胞超微结构的变化。结果 羟基喜树碱和topotecan 对卵巢癌细胞株 S K O V3 和 C A O V3 的生长抑制作用呈现明显的剂量依赖性；羟基喜树碱和topotecan 对 S K O V3 作用24 小时的50 ％ 抑制浓度（ I C50） 分别为72 ng／ml 和160 ng／ml，对 C A O V3 作用24 小时的10 ％ 抑制浓度（ I C10） 分别为141 ng／ml 和12 ng／ml，均明显高于顺铂（ P＜ 0 ．01）
关键词: 羟基喜树碱 ；topotecan ；卵巢肿瘤 ；药物疗法
被引量
17
摘要： 喹啉（Quinoline）也叫做氮杂萘,是一类非常重要的含氮杂环,其衍生物具有抗疟疾、抗菌、消炎、抗HIV、抗结核和抗肿瘤等药理活性,在药物化学等领域有广泛的应用.因此,喹啉衍生物的合成及其药理活性研究,一直受到有机合成化学和药物化学研究工作者的广泛关注.本论文主要研究了4-氨基喹啉-3-甲酸酯类化合物的合成及其生物活性研究.论文共分为五章:第一章综述了喹啉化合物特别是4位取代喹啉衍生物的生物活性研究进展,并介绍了喹啉的常用合成方法以及本论文的主要研究思路.第二章研究了以芳胺为主要原料来合成4-氨基喹啉-3-甲酸酯类化合物的方法.芳胺与乙氧甲叉基丙二酸二乙酯在乙醇溶液中反应生成芳胺甲叉基丙二酸二乙酯2和3,2和3在三氯氧磷中回流发生分子内环化反应,生成4-氯喹啉-3-甲酸酯类化合物4和5,4和5再与氨类化合物发生亲核取代反应,合成得到了30个4-氨基喹啉-3-甲酸酯类目标化合物6和7.此外还研究了6的两个化合物后续转化,合成了化合物8～10.论文共合成得到37个目标化合物,并用1H NMR、13C NMR和HRMS等对它们的结构进行了表征和确认.第三章研究了4-氨基喹啉-3-甲酸酯类化合物的体外抗肿瘤活性.采用MTT法测试了化合物对MGC-803（人胃癌细胞）、T-24（人膀胱癌细胞）、Skov-3（人卵巢癌细胞）、Hep G-2（人肝癌细胞）和DU-145（人前列腺癌细胞）这五种肿瘤细胞株的抑制作用及对HL-7702（人正常肝细胞）的体外细胞毒性.结果表明:部分化合物对常见的癌细胞株有较好的抗增殖活性,其中化合物6ab,6ad对T-24细胞株的体外抑制增殖的IC50值分别为5.34±0.22和6.48±0.07μM,略优于阳性对照物10-羟基喜树碱,与阿霉素活性相当,且它们对人正常细胞HL-7702均表现出相对较低的细胞毒活性.我们还对这一化合物骨架的抗肿瘤构效关系进行了初步讨论和总结.第四章研究了化合物6ab的体外抗肿瘤作用机制.采用流式细胞术检测了化合物6ab对T-24细胞株的细胞周期、凋亡、细胞内活性氧（ROS）、钙离子浓度以及caspase-8、caspase-9和caspase-3的激活效应的影响.结果表明:化合物6ab可将细胞周期阻滞在S期,提高细胞内活性氧（ROS）水平及钙离子浓度,激活caspase-8、caspase-9和caspase-3并诱导肿瘤细胞凋亡.采用琼脂糖凝胶电泳实验研究了化合物6ab与p BR322质粒DNA、DNA-Topo I的相互作用.结果表明:化合物6ab与超螺旋DNA并不存在明显的直接相互作用,但可在Topo I介导下嵌入松弛的DNA,进而抑制Topo I对DNA的催化解旋作用.我们还用蛋白免疫印迹实验（Western blot）检测了化合物6ab对受试细胞内γH2AX的表达量及p53蛋白S15位点的磷酸化水平.结果表明:化合物6ab可通过Topo I介导下嵌入DNA,引起双链DNA的断裂,激活p53信号通路诱导细胞凋亡.第五章对本论文的主要研究内容进行了总结.
关键词: 4-氨基喹啉衍生物 ；合成 ；抗肿瘤 ；DNA嵌入剂 ；作用机制
摘要： 对已知的活性分子进行结构改造是新药开发的一种重要途径。本论文着眼于一类分子靶向性的抗肿瘤药物和激素类药物,对其进行结构改造,以期发现活性更高、毒副作用更小、药代动力学性质更优越的抗肿瘤候选化合物,设计合成了一系列的衍生物,并对所合成的新化合物进行了结构表征和活性评价。全文内容共分为以下两部分：1.10,11-亚甲二氧基喜树碱类Survivin抑制剂的设计、全合成与活性研究喜树碱衍生物被誉为20世纪90年代抗癌药物的三大发现之一,显示了广谱的抗肿瘤活性和巨大的研究与应用价值。本论文以首次发现的作用于凋亡抑制蛋白存活素(Survivin)的小分子活性抑制剂FL118(10,11-亚甲二氧基喜树碱)为先导化合物,对其进行结构改造来研究此类化合物的构效关系和开发更加高效低毒的抗肿瘤化合物。以丙酮和草酸二乙酯为起始原料,通过缩合、取代、重排、环合和手性拆分等15步反应合成了关键的CDE三环中间体。以胡椒醛、3,4-亚甲二氧基苯乙酮和3,4-亚甲二氧基苯胺为起始原料,通过硝化、还原和缩合等2-4步反应构建了改造后的A环中间体。将两部分中间体连接以及进一步的结构修饰并结合计算机辅助药物设计等手段对10,11-亚甲二氧基喜树碱的7位和20位进行了结构改造,成功的设计合成了5个系列42个10,11-亚甲二氧基喜树碱衍生物,28个重要的中间体,均为新化合物；优化了10,11-亚甲二氧基喜树碱的全合成路线,改进了三环中间体的手性拆分方法,将总收率由2.1%提高到5.7%。对所合成的大部分目标化合物进行了系统的体内外抗肿瘤活性研究,其中,化合物ZJY-7-6,ZJY-7-17在浓度为0.1 μ时对人卵巢癌细胞株2008的Survivin抑制活性较高；化合物ZJY-7-6即使在浓度为1nM时依然对FaDu人咽鳞癌细胞有较高的体外抑制活性；细胞毒活性测试发现了6个对人肺腺癌细胞A549抑制IC50值在1-10 nM的目标化合物,5个ICso值在10-50 nM的化合物和14个对人红白血病细胞K562抑制IC50值在0.1-1 μM的化合物；在异种移植人头颈部鳞状细胞癌FaDu细胞和结肠癌细胞SW620的小鼠体内实验中,化合物ZJY-7-5,ZJY-7-14,ZJY-7-15和ZJY-7-17在给药10天后的最大抑瘤率均超过了90%,值得一提的是,化合物ZJY-7-15和ZJY-7-17在保持极强活性的同时小鼠体重损失均小于15%,说明其毒性较小,具有进一步开发的潜质。初步构效关系研究表明：对10,11-亚甲二氧基喜树碱的7位进行结构修饰能够提高抗肿瘤活性,其中以亲脂性基团取代活性最佳；20位羟基与取代苯甲酸成酯后活性减弱：20位葡萄糖基取代的衍生物随着连接臂的延长,对A549细胞的抑制活性逐渐减弱；无论是20位修饰的衍生物还是7位修饰的衍生物,对A549细胞的抑制活性均高于K562细胞。2.乳腺癌治疗药物氟维司群环磷酸酯前药的设计、合成和活性研究氟维司群是一种选择性的雌激素受体拮抗剂,用于抗雌激素疗法治疗无效、雌激素受体呈阳性的绝经后晚期乳腺癌的治疗。针对氟维司群原料药室温下不稳定、口服生物利用度低和静脉给药存在体内代谢过快,半衰期过短的缺陷。本论文将氟维司群的3位酚羟基与不同取代的环磷酸酯基团连接,设计合成了9个未见文献报道的氟维司群环磷酸酯前药。选取了其中的3个目标化合物进行了稳定性实验,以氟维司群为阳性对照,考察贮存温度和时间对化合物纯度的影响,结果表明所合成的环磷酸酯前药的稳定性比氟维司群大大提高。对氟维司群环磷酸酯前药衍生物进行了体外释药实验,结果显示,前药在酶的催化下能够逐渐代谢释放出氟维司群,代谢率超过80%,前药代谢较完全,能够释放出原药,符合前药的设计理念。
关键词: 抗凋亡蛋白 ；10,11-亚甲二氧基喜树碱 ；合成 ；前药 ；环磷酸酯 ；抗肿瘤
被引量
2
摘要： 癌症是严重危害人类健康的主要疾病之一。攻克癌症一直是世界瞩目的研究课题。世界卫生组织调查表明,癌症患者正逐年增加,我国癌症发病人数在120万左右,每年死于癌症的人数多达90万人,与此同时,癌症的药物治疗近年来取得迅猛发展,新的抗癌药物不断涌现。喜树碱、紫杉醇以及维生素甲类化合物抗癌作用的证实是90年代抗癌药物的几大发现。喜树广泛分布于长江、川南、贵州以及云南等地区,资源十分丰富。喜树碱是从喜树中提取的一种生物碱,对喜树碱进行研究可以促进抗肿瘤药物的发展,使得资源得到充分的利用。
天然喜树碱具有显著的抗肿瘤活性,对消化道肿瘤、白血病、膀胱癌、卵巢癌等有强效的治疗效果,但是它易引起骨髓抑制,呕吐,尿血等毒副作用,且喜树碱不溶于水,难溶于酯,不便制成适宜的剂型,进一步限制了它应用。因此,针对喜树碱及其衍生物制剂的缺陷,常利用现代药剂学方法来达到提高溶解度、保持内酯环稳定、延长血中循环、提高药物靶向性的目的。目前已有较多的前体药物、微球、脂质体等多种形式的剂型。
轮烷是由一个或多个环状分子作“转子”(如CD)和一条或多条线形分子“作轴”(PEG)由非共价键组装成的超分子体系,当线状分子两端用大基团封闭时称为轮烷。由于组成聚轮烷上的CD和PEG与生物体有良好的相容性,具有很多功能化的位点,可以将药物包合在腔内,也可以键接在外侧的羟基上。并且还可将这些功能化的(准)轮烷键接到具有靶向作用的物质表面,实现靶向给药。已经有一些研究者将茶碱,肽类化合物键接在CD(准)轮烷上后,研究其释放规律,表明可以实现控制释放。
聚轮烷载体作为一种新型的载体材料,近年来不仅在化学界、材料界引起广泛关注,而且在生物与医药界也引起广泛的兴趣。聚轮烷作为药物载体的特色是：
1.材料本身虽是大分子但它由改性的环糊精CD与线型PEG组成。CD与PEG水溶性良好,且无毒副作用,为优良的载体材料。
2.改性CD环上有许多活泼羟基,通过活化CD上的羟基,可形成药物与载体的稳定的复合物polyplex。
3.当复合物大分子载体进入细胞后,聚轮烷PR两头封帽的端基链断裂,整个大分子“瓦解”,成为小分子CD与线性小分子。同时释放出药物,进入细胞核。
综上所述,聚轮烷的的超分子结构及其良好的生物相容性,使其在作为新型药物传送系统方向上有广阔的前景。
抗肿瘤药物临床使用的局限性往往表现在其对肿瘤细胞特异性选择低,对正常细胞损伤较大,容易产生毒副作用等缺点,因此,一个理想的给药系统,应该达到给药以后,载体将药物选择性的浓集定位于靶组织,靶器官,靶细胞或者细胞内结构的给药系统。并且要求有一定浓度的药物滞留相当时间,以便发挥药效,而载体无遗留的毒副作用。药物的低毒和高效对疾病的临床治疗十分重要。
近年来,药物靶向传递的研究越来越受到研究者的重视。自从发现叶酸受体在绝大多数恶性肿瘤细胞膜内有大量表达,而正常细胞很少有表达以来,叶酸／叶酸受体介导靶向传递的研究成为该领域的热点问题。叶酸是小分子量维生素,相对于单分子抗体等蛋白质,具有结构稳定、价格低廉、无免疫原性等特点；而且叶酸与叶酸受体结合力强,能被高效介导进入肿瘤细胞,是一种很有应用价值的靶向物质。结合到药物缓释的要求,人们又将叶酸通过化学键合连接到药物载体上,如脂质体、多聚物、蛋白质,以及它们制成的纳米颗粒,这样就能效地同时实现抗肿瘤药物对肿瘤细胞的靶向识别和药物缓释,避免药物对正常细胞的伤害,提高肿瘤的治疗效果。
因此,我们提出设想,合成新型的以聚轮烷(PR)为载体的喜树碱新型给药系统,改善喜树碱溶解度差的问题,提高药物的溶解度。聚轮烷载体为大分子物质,在机体内可被单核-巨噬细胞系统吞噬,通过增强渗透和滞留(EPR)效应被动靶向并选择性的滞留于肿瘤组织周围；在聚轮烷(PR)载体上链接叶酸,利用叶酸受体对靶向大分子偶联物的摄取和对体内肿瘤分布的选择性的特征,减少临床使用中出现的毒副作用大的问题,促进其肿瘤特异性靶向作用。确保药物肿瘤靶向性的效果,为临床治疗提供有利依据。
为系统研究聚轮烷—喜树碱偶联物,以α-环糊精(α-CD)、PEG-BA(4000)、为主体,制备了叶酸／Tyr两种不同大分子封端的自组装超级分子聚轮烷作为药物载体；通过活化载体CD上的羟基,链接上喜树碱,制备聚轮烷—喜树碱偶联物,并运用红外、1H NMR等手段对进行了结构验证,结果表明,成功合成载体材料(PR)及PR-CPT偶联物给药体系。
通过考察聚轮烷—喜树碱偶联物体外释放情况,绘制百分累积释放度曲线,以反映其体外的释药趋势,实验结果表明,偶联物在3、6、12、24小时聚轮烷—喜树碱偶联物在PBS溶液中缓慢释放,没有发现突释的现象,经过36、48、72、96、120、144小时的观察,偶联物在120小时后释放达到80%以上。144小时时,释放将近90%。
运用SPSS13.0软件(Curve Estimation)功能对累积百分释放率结果进行各种模型优度检验,对累积百分释放率结果进行各种曲线模型的拟合,能够更好的通过药物的溶出度测定进行真实、客观的药物质控及评价。本实验合成的两种偶联物,以三次模型(CUB)为最佳释放模型。其R2分别为0.995%及0.998%。
采用HPLC法以流动相乙腈：水(30：70)；流速1ml/min;检测波长254nm；柱温为室温；进样量10μl进行检测,在此色谱条件下,喜树碱出峰时间为14.5min。各峰分离良好。喜树碱、FA-PR-CPT及Tyr-PR-CPT偶联物中喜树碱的溶解度结果分别为28μg/ml和187μg/ml、195μg/ml。结果表明,聚轮烷—喜树碱偶联物的溶解度较喜树碱提高了约7倍。证实偶联物能够有效的改善喜树碱溶解度低的缺点,这可能是由于聚轮烷载体中的PEG及CD等亲水性分子的存在,CD外部具有丰富的醇羟基,亲水性较强,可增加难溶性药物的溶解度；且外部醇羟基经进一步活化后,可与多种基团形成醚化、酯化、氧化等化学反应,使环糊精的分子外表面有新的功能团,从而进一步在CD上加载药物。PEG具有高度的亲水性,可以将其优良性质赋予修饰后的药物分子,改变它们在水溶液中的生物分配行为和溶解性,提高药物的溶解性,大大提高了聚轮烷—喜树碱偶联物的亲水性,使得其溶解度较喜树碱单体显著提高,明显改善了喜树碱溶解性难的缺点。
含量测定表明,喜树碱在0.017～17μg范围内线性良好。流动相乙腈：水(30：70)；流速1ml/min;检测波长254nm条件下,样品分离度较好,无干扰。结果显示,载药量约为8%。与文献报道一致。
为考察聚轮烷—喜树碱偶联物体外细胞增殖抑制,采用了MTT法检测不同浓度聚轮烷—喜树碱偶联物对卵巢癌A2780细胞的作用,计算抑制率及IC50值,结果表明,聚轮烷—喜树碱偶联物对卵巢癌细胞株A2780的抑制作用,随浓度增大,其抑制率增高,在作用的各个时间点,偶联物组抑制率均小于喜树碱单独给药组。提示偶联物较喜树碱的毒副作用降低,喜树碱、FA-PR-CPT组,Tyr-PR-CPT组的IC50分别为5.2、34.8 and 97.8mg/L, FA-PR-CPT组的IC50比Tyr-PR-CPT组低约2.8倍,其原因可能是因为叶酸封端的聚轮烷—喜树碱偶联物与叶酸受体阳性细胞A2780细胞膜表面叶酸受体特异性结合后,通过细胞内吞作用进入细胞,使药物进入细胞膜加快,从而提高了细胞毒性,FA-PR-CPT组IC50结果提示其具有肿瘤细胞特异性靶向作用。
镜下观察不同浓度偶联物对细胞形态学改变的影响,结果表明经过喜树碱及聚轮烷—喜树碱偶联物处理后,普遍出现细胞凋亡显著,失去正常生长形态,其生长明显受到抑制。
流式细胞仪检测偶联物作用后细胞凋亡情况及对细胞周期的影响,结果显示随着给药浓度增加,S期细胞的比例也不断上升；随着作用时间的延长S期细胞比例也随之明显增加。实验结果表明喜树碱及其偶联物对卵巢癌A2780细胞周期有阻滞作用,将细胞阻滞于S期,造成DNA损伤,抑制DNA复制,使细胞不能进入G2／M期进行分裂增殖,提示其抑制细胞增殖的机制可能与影响细胞周期有关。
考察偶联物对人肺腺癌A549细胞株体外细胞增殖抑制作用。结果表明,喜树碱、FA-PR-CPT组,Tyr-PR-CPT组的IC50分别为4.9.33.9 and 39.5mg/L, FA-PR-CPT组,Tyr-PR-CPT IC50无显著性差异。提示叶酸偶联物可能是通过叶酸受体介导,从而特异性的靶向于叶酸阳性受体肿瘤细胞内的。而对于叶酸受体阴性的细胞株,则无明显的受体靶向性情况。
对CPT及偶联物进行了小鼠急性毒性试验及体内抗肿瘤试验,结果表明,偶联物组最大剂量5mg/10g时,达到100%死亡,最低剂量组5mg×0.74／10g老鼠无死亡,高剂量组毒副作用明显,低剂量组毒副作反应轻缓,2～3天恢复正常,小鼠没有死亡。测得CPT组LD50为1.0573mg/10g偶联物LD50为2.30 mg/10g及2.45 mg/10g。
采用S180荷瘤小鼠进行体内抗肿瘤试验,结果表明,偶联物治疗组对S180荷瘤小鼠具有明显的抗肿瘤作用,肿瘤体积及重量与荷瘤模型组相比,有显著性差异。CPT阳性对照组、FA-PR-CPT组、Tyr-PR-CPT组抑瘤率分别为71%、81%及76%。病理学结果显示治疗组的肿瘤细胞在生长及浸润都较荷瘤组浅,病理切片可见明显的抑制生长浸润及血管数目,提示其抗肿瘤机理可能是通过减少供血从而导致肿瘤细胞坏死。
药代动力学试验中,采用羟基喜树碱作为内标物,喜树碱为对照品,建立了血浆样品分析方法。色谱条件为流动相——乙腈：1%三乙胺(35：65)流速：1ml/min进样量：20μl。根据获得的药时曲线,进行房室模型拟合。血药浓度—时间曲线和药动参数结果表明,偶联物组AUC(0-∞)有大幅度提高。CPT组、FA-PR-CPT组以及Tyr-PR-CPT组的AUC(0-t)分别为207.57、593.3、558.47μg/ml*h, CL分别为1.003、0.380、0.589(mg)/(μg/ml)/h。与CPT组相比较,偶联物组AUC约提高了两倍,消除速率CL明显降低。
针对聚轮烷载体的优势以及喜树碱的作用效果、现有剂型的缺点等方面,本实验合成了以聚轮烷为载体的聚轮烷—喜树碱偶联物给药体系,并从偶联物的表征,含量、溶解度以及体外释放度的测定、体内外抗肿瘤试验的等方面进行了研究。研究结果表明,聚轮烷—喜树碱偶联物给药体系有良好的溶解度,大大改善了喜树碱难溶的缺点；体外释放结果表明其具有良好的缓释效果,体内外抗肿瘤试验表明,偶联物对肿瘤细胞及实体瘤有明显的抑制作用；生物利用度是药物制剂质量的一个重要指标,静脉注射偶联物药物代谢动力学研究结果表明,偶联物的AUC大大提高,半衰期延长,有效促进了药物的生物利用度。
关键词: 聚轮烷-喜树碱偶联物 ；制备 ；体内外评价 ；抗肿瘤
被引量
2
摘要： 苯并菲啶类生物碱(benzo[c]phenanthridine alkaloids)是一种重要的异喹啉生物碱,广泛存在于罂粟科和芸香科植物中,大多具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎及抗菌等广泛生物活性.本论文主要研究了苯并菲啶A环结构改造物的设计、合成及其抗肿瘤等生物活性.论文主要分文献综述、化合物设计合成及化合物生物活性研究三个部分:文献综述部分主要概述了苯并菲啶生物碱的合成、结构改造及抗肿瘤活性研究进展;化合物设计合成部分主要研究了以1-萘胺为原料合成苯并菲啶A环结构改造的方法及化合物的结构表征;生物活性研究部分主要研究了目标化合物的体外抗肿瘤活性及其与DNA、拓扑异构酶Ⅰ等的相互作用.我们以1-萘胺及2-氰基-3-乙氧基丙烯酸乙酯(或乙氧亚甲基丙二酸二乙酯)等为原料,经3步反应合成得到了两个关键中间体4-氯-苯并[h]喹啉-3-甲腈5及4-氯-苯并[h]喹啉-3-甲酸乙酯6.5与6再分别与盐酸胍或脒类化合物反应即可得到5个A环替换为嘧啶环的结构改造物;5与6依次与伯胺、酸酐作用后,再进行关环反应,又可合成得到A环替换为吡啶环的结构改造物.目标化合物的结构经NMR,HRMS及X-单晶衍射等进行了表征和确认.我们利用MTT法测试了 口标化合物对MGC-803(人胃癌)、HepG-2(人肝癌)、NCI-H460(人非小细胞肺癌)、SKOV3(人卵巢癌)以及T24(人膀胱癌)细胞株的体外抗肿瘤活性.结果显示部分目标化合物对这五种肿瘤细胞的生长具有较好的抑制活性.尤其是化合物11cA对NCl-H460(人非小细胞肺癌)细胞株表现出优良的抑制效果,其IC50值为2.01 ± 0.22μmol/L,好于阳性对照的10-羟基喜树碱(38.55±1.35 μmol/L).利用流式细胞技术研究了化合物11cA对NCI-H460细胞周期和细胞凋亡的影响,结果表明化合物11cA能够将NCI-H460细胞阻滞在G2期,并促进NCI-H460细胞凋亡.Western Blot实验结果表明11cA能上调促凋亡蛋白及下调抗凋亡蛋白的表达.琼脂糖凝胶电泳法实验结果显示化合物11cA可强烈抑制拓扑异构酶Ⅰ对DNA的催化解旋作用.
关键词: 苯并菲啶 ；天然产物结构改造 ；抗肿瘤活性 ；拓扑异构酶Ⅰ抑制剂
被引量
2
摘要： 喜树碱(CPT)是20世纪60年代从珙桐科植物喜树中提取的天然生物碱,由于具有显著的抗癌活性,得到了广泛的重视。甲氧基喜树碱(MCPT)和羟基喜树碱(HCPT)均是喜树碱的天然衍生物,并具有较强的抗肿瘤活性。HCPT是我国临床应用的抗肿瘤药物,在药效学以及药剂学方面均有广泛的研究。关于MCPT的研究并不多见,这可能是由于MCPT较强的毒性所致。在我们的研究中发现,HCPT是MCPT的-种主要代谢产物,这激发了我们进一步研究MCPT的兴趣。在本文中我们研究了MCPT的细胞毒活性及其与细胞转运载体之间的相互作用,并进一步对MCPT及其代谢产物HCPT在大鼠血浆的药代动力学、组织分布特征以及排泄规律进行了研究。
为了初步确定MCPT的抗肿瘤活性,以CPT和HCPT为对照,研究了MCPT对人卵巢癌细胞2774、结肠癌细胞系HT29.前列腺癌细胞系DU145、肺癌细胞系NCI-H520以及人胰腺癌细胞系MPC2的体外细胞毒活性。结果表明,MCPT在所测试的所有细胞系中的细胞毒活性均高于HCPT;除HT29外,MCPT在其他细胞系中均表现出比CPT更强的细胞毒活性。
考察了CPT、MCPT和HCPT与多种转运蛋白的相互作用,发现这三种物质均能够有效抑制有机阴离子转运蛋白3(OAT3)的转运功能。这说明,这三种物质有可能是OAT3的底物。另外,由于OAT3主要分布于肾脏中,在肾脏毒素的排除中起到重要作用,这有可能是喜树碱类容易产生肾脏毒性的一个原因。
利用HPLC-PDA和LC-MS/MS的方法确证了HCPT为MCPT的代谢产物,并建立了一种灵敏的、可靠的同时检测大鼠血浆中MCPT及其代谢产物HCPT的高效液相色谱-荧光检测的方法。
考察了大鼠尾静脉注射5mg/kg MCPT后,MCPT及其主要代谢产物HCPT在血浆中药代动力学。尾静脉注射MCPT后,MCPT立刻达到最高浓度,随后浓度很快降低；而HCPT在5-10min后达到最高浓度,且明显高于MCPT,HCPT的药时曲线下面积约为MCPT的1.5倍,说明MCPT主要通过去甲基化作用代谢为HCPT。
考察了大鼠尾静脉注射5mg/kg MCPT后,MCPT及其主要代谢产物HCPT在大鼠各组织中的分布情况。结果表明,肝脏、脾脏和肾脏中MCPT的含量较高,而在脑中的含量最少；而对于HCPT,在肝脏和肾脏中的含量最高,其他组织中的含量略少。
比较分析了大鼠尾静脉注射MCPT后,MCPT及其代谢产物HCPT在胆汁、尿液和粪便中的排泄特征。结果表明,MCPT主要以胆汁的形式排出体外,而HCPT则主要以粪便的形式排除体外。
本文对MCPT及其代谢产物HCPT在大鼠体内的药代动力学进行了研究,明确了MCPT和HCPT在大鼠体内的吸收、分布、代谢和排泄的规律,为MCPT的临床应用及合理开发提供了一定的理论依据。
关键词: 甲氧基喜树碱 ；羟基喜树碱 ；细胞毒活性 ；药代动力学 ；组织分布 ；排泄
被引量
6
摘要： 喜树碱(Camptothecin,CPT)是一种具有显著抗肿瘤瘤活性的单萜吲哚类生物碱,最早从我国珙桐科(Nyssaceae)植物喜树(Camptotheca acuminata)中提取分离得到。20世纪七十年代,曾经掀起了针对于喜树碱的抗肿瘤研究热潮。但由于天然喜树碱水溶性差,难溶于人类生理可接受的任何溶剂,难以制成合适的剂型,因此早期临床研究主要使用了水溶性的喜树碱羧酸钠盐,但其抗肿瘤活性差,并能导致严重的毒副作用。1985年喜树碱独特的抗癌机理——抑制DNA拓扑异构酶Ⅰ(Topo Ⅰ)被发现,从而使喜树碱及其相关研究再次成为抗癌领域研究的热点。目前,研究者为使喜树碱类药物能够更好地应用于临床,一方面对喜树碱的结构进行改造和修饰,另一方面则致力于新型药物传递系统的开发研究。目前,在国际上已经有拓扑替康(topotecan,TPT)和和伊立替康(irinotecan,CPT-11)两种喜树碱类药物经FDA批准被用于癌症的临床治疗,还有一些正处于临床研发阶段。在我国目前临床应用较多的喜树碱类药物主要是羟基喜树碱注射剂及粉针剂、喜树碱软膏及贴片,科技附加值低,毒性较大,抗肿瘤活性低,因而在临床应用中受到了严重限制。因此在我国开发高效低毒的喜树碱类抗肿瘤新药是药学工作者的当务之急。本文对超临界反溶剂工艺(Supercritical antisolvent process,SAS)和高压匀质技术(High pressure homogenization technique)联用制备的喜树碱纳米粒(camptothecin nanoparticles,Nano-CPT)进行 了抗肿瘤药理学功能综合检测,对其体外(in vitro)和体内(in vivo)抗肿瘤活性、生物利用度、组织分布特点及其抗肿瘤作用机制等相关药理学评价指标进行了深入研究,以期为研发具有自主知识产权的、高效低毒、水溶性好的喜树碱类抗肿瘤新药奠定基础。1、本文采用MTT法和体外抑制DNA拓扑异构酶Ⅰ活性两种途径检测喜树碱纳米粒体外抗肿瘤活性,结果显示Nano-CPT体外抗肿瘤活性接近CPT原粉,比TPT体外抗肿瘤活性更强,其中抑制人类结肠癌HCT-8、人类前列腺癌PC-3、人类乳腺癌MCF-7生长的活性作用分别是TPT的3.3倍、4.2倍和6.4倍,并且在低浓度(≤10μM)条件下Nano-CPT对DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的抑制作用强于CPT原药。2、体内实验研究表明,Nano-CPT单次给药急性毒性的最大耐受量(MTD)为24 mg/kg,而CPT原粉的MTD为 3 mg/kg,TPT 的MTD为 15 mg/kg,Nano-CPT的体内毒性明显低于CPT原粉和TPT。在相同给药剂量情况下,Nano-CPT对人结肠癌HCT8裸鼠异种移植瘤生长抑制率为90%以上,与阳性对照药TPT的抑瘤率基本相同,在体内具有良好的抗肿瘤活性;但是Nano-CPT在体内的毒性明显小于TPT,尤其是对于肝和肾的毒性不明显,而肝和肾也正是TPT的毒性靶向器官。3、生物利用度和组织分布研究结果表明,CPT在纳米制剂前后药代动力学参数发生了明显变化,在静脉给药过程中,延长了药物驻留时间;在灌胃给药过程中,缩短了血药浓度达峰时间。在两种给药途径中,Nano-CPT的生物利用度与CPT原药相比均为后者的3倍左右,生物利用度显著提高。同时CPT在纳米制剂前后组织分布发生了明显变化,Nano-CPT的急性毒性减弱,主要的靶向分布器官从肺变为肝,并且提高了血浆中的分布率。4、相同剂量、时间条件下,Nano-CPT、CPT原药和TPT原药三者中,Nano-CPT诱导MCF-7肿瘤细胞周期阻滞和细胞凋亡效果最好,同时Nano-CPT诱导癌细胞出现线粒体膜电位下降的效果显著提高,与其它两组有显著差异,提示线粒体途径诱导细胞凋亡可能是Nano-CPT抗肿瘤效果显著提高的主要原因。综上所述,本研究证明Nano-CPT在有效提高CPT水溶性的同时,显著的提高了CPT的生物利用度,改变了 CPT的组织分布特点,在体内外抗肿瘤活性研究中均表现出了更好的抗肿瘤活性,并且体内毒性明显降低,在很多方面甚至优于已经临床应用的TPT,因此,Nano-CPT是一种高效低毒的CPT纳米制剂,有望开发成为抗肿瘤新药。
关键词: 喜树碱 ；纳米粒 ；药理学 ；抗肿瘤活性 ；生物利用度
被引量
1
摘要： 天然产物是新药开发的重要原料宝库,以天然的活性骨架结构进行改造和修饰以及构效关系研究是发现高效、低毒药物的有效途径之一,酚恶嗪-3-酮是许多活性分子的基本骨架,其衍生物具有广泛的药理活性,尤其在在抗肿瘤方面表现突出.本文以2-氨基酚恶嗪-3-酮为先导化合物,合成了一系列2-取代酚恶嗪-3-酮衍生物,并对其生物活性进行研究,主要工作包括:1.综述了酚恶嗪酮衍生物的合成方法,生理活性以及结构修饰方面的研究进展,简要介绍了本课题的设计思路与研究内容.2.合成并表征了 16个新的2-取代酚恶嗪-3-酮衍生物.以邻氨基苯酚为原料,一步法合成母体2-氨基酚恶嗪-3-酮;然后在三乙胺催化条件下与2种不同的氯代酰氯进行酰胺化,合成2个碳链长度不同的氯代物;最后与8种不同的仲胺反应,合成16个新化合物.运用1HNMR、13CNMR、HRMS等于段对化合物进行结构表征.3.研究了酚恶嗪酮衍生物的抗肿瘤活性以及作用机制.采用MTT法测试了 16个酚恶嗪酮衍生物对人肝癌细胞(7404)、人卵巢癌细胞(SKOV-3)、人膀胱癌细胞(T-24)、人胃癌细胞(MGC-803)等肿瘤细胞的体外抗肿瘤活性,以及人肝脏细胞(HL-7702)毒理活性.通过对这4个癌细胞株抑制能力的测定来比较酚恶嗪酮衍生物的抗肿瘤活性,并且分组讨论了它们的构效关系.实验结果表明2-取代酚恶嗪-3-酮衍生物具有良好的抗肿瘤活性,多个化合物的抗肿瘤活性优于阳性对照药10-羟基喜树碱,特别是化合物3-2b不仅对上述4种肿瘤细胞的抑制作用均优于阳性对照药10-羟基喜树碱,具有显著的抗肿瘤活性,同时对人肝脏细胞(HL-7702)的毒性较小,具有选择性抑制肿瘤细胞作用,所以我们以3-2b为考察对象,重点研究该化合物抗肿瘤活性的作用机制.论文以低廉的原料、简便的方法设计并合成了16个新的2-取代酚恶嗪-3-酮衍生物;运用HRMS、1H NMR、13C NMR等表征其结构;还对其抗肿瘤作用及相关机制进行了初步研究,为酚恶嗪酮类化合物抗肿瘤活性的靶向研究提供了一定的理论基础和实验依据.
关键词: 酚恶嗪酮 ；合成 ；抗肿瘤 ；作用机制
摘要： 盐酸拓扑替康（Topotecan，TPT）作为喜树碱的一种水溶性衍生物，因其较好的抗肿瘤活性和较低的毒性被广泛关注，已经被FDA批准用于含顺铂或紫杉醇化疗方案失败的恶性卵巢癌以及复发小细胞肺癌的治疗。但同其他喜树碱类药物一样，在生理条件下其结构中的内酯环易发生水解反应转变为羧酸盐形式，从而失去活性。为了解决这个问题，结合脂质体这种新型给药载体的特征，本文采用主动载药技术-硫酸铵梯度法制备了TPT普通脂质体及PEG修饰脂质体，从体外、体内等各个方面进行了系统的研究与探讨；并且合成了新型的温敏高分子材料，对其修饰的温度敏感脂质体的体外热敏性进行了系统研究，在此基础上制备了TPT温度敏感脂质体并对其体外热敏性进行了初步研究；以期为TPT的发展以及更好地应用于临床提供借鉴。本文的主要研究内容摘要如下：
1 TPT脂质体的制备工艺筛选。以包封率为主要评价指标，比较了传统的脂质体制备方法（包括薄膜分散法、乙醇注入法、反相蒸发法等）与主动载药方法-硫酸铵梯度法对TPT脂质体制备的影响，结果采用硫酸铵梯度法制备TPT脂质体可以获得较高的包封率、较大的药脂比；对硫酸铵梯度法制备TPT脂质体过程中的不同影响因素进行了考察，结果表明磷脂的种类与组成、硫酸铵溶液的浓度、药物／磷脂的摩尔比例、空白脂质体的粒径大小等是影响TPT脂质体包封率的主要因素。
2 TPT脂质体的体外稳定性研究。对影响TPT脂质体体外释放特性的不同因素进行了研究，结果表明胆固醇的含量、磷脂的饱和程度、PEG修饰对TPT脂质体的体外释放行为有一定的影响。增加胆固醇的比例可以减小脂质体中TPT的泄漏率；与不饱和的SPC脂质体相比，采用饱和的具有高相变温度的磷脂HSPC制备的TPT脂质体体外泄漏率降低；PEG修饰在一定程度上可以增加TPT脂质体在血清、血浆中的稳定性。对TPT的内酯开环速率进行研究，结果表明包封入脂质体后TPT的水解速率降低、内酯稳定性提高；与SPC脂质体相比，HSPC脂质体包封的TPT内酯稳定性更高。
3 TPT脂质体的初步稳定性研究。在对制剂单因素考察以及体外释放性质等研究的基础上，按不同组成制备的几种TPT脂质体，包封率均在90％以上，且粒径较均匀，平均粒径均在140 nm左右。初步稳定性考察结果表明，几种TPT脂质体的稳定性较好，4℃放置1个月、3个月（或6个月）后粒径、包封率及TPT含量未见明显变化。
4 TPT脂质体的体内分布研究。以荷瘤(S180)小鼠为试验对象，通过尾静脉注射给药，测定不同时间点时小鼠血浆、以及各个组织或器官中的药物分布，以此评价TPT脂质体的体内行为。结果表明脂质体包封后TPT的体内分布行为发生改变，体内稳定性提高。与游离药物相比，脂质体包封降低了药物在血液中的清除速率，增加了药物在血浆中的浓度，且内酯型药物的比例增加。脂质体膜流动性对TPT脂质体的体内分布行为有较大影响，与SPC脂质体相比，HSPC脂质体在血浆及各组织中的分布明显增加，且肿瘤靶向性提高，H-Lip组的肿瘤相对摄取率（对比游离药物）为S-Lip组的2.7倍。PEG修饰提高了TPT脂质体的体内稳定性，H-PEG组内酯型药物的血浆AUC为H-Lip组的3.7倍；同时PEG修饰降低了RES对脂质体的摄取，增加了药物在肿瘤中的分布，与H-Lip组相比，H-PEG组药物在肝、脾中分布明显降低，肿瘤相对摄取率从4.1提高到5.2。
5 TPT脂质体的体外细胞毒作用研究。采用MTT法研究了TPT脂质体在体外对人卵巢癌细胞株（A2780）、人结肠直肠癌细胞株（HCT-8）的细胞毒作用。结果与游离药物相比较，脂质体包封增加了TPT对A2780、HCT-8的细胞毒作用；而且与未修饰的脂质体相比较，PEG修饰的脂质体增加了TPT的细胞毒作用，抗A2780、HCT-8细胞增生时H-PEG组的IC50比H-Lip分别低5倍和9倍。
6 TPT脂质体的体内抗肿瘤作用研究。以肝癌H22实体瘤小鼠为动物模型，对TPT脂质体的体内抗肿瘤作用进行研究。结果表明，脂质体包封提高了TPT的体内抑瘤效果，与游离药物相比，S-Lip、H-Lip对H22实体瘤的抑制作用明显增强，抑瘤率提高；与S-Lip比较，H-Lip的抑瘤效果更加明显，但治疗期间荷瘤小鼠的体重有所减轻；与普通脂质体相比，PEG修饰后TPT脂质体的抑瘤率增加，小鼠体重变化率降低。
7温度敏感聚合物的合成。采用自由基聚合法合成了具有温度敏感特性的聚（N-异丙基丙烯酰胺）均聚物及共聚物，并对其进行红外光谱、LCST表征，研究其温度敏感性质。结果均聚物（PNIPAm）的LCST在32～33℃左右，在不同介质中其LCST会发生变化；与PNIPAm相比，疏水链节MA、EA的加入降低了聚合物的LCST值，而亲水链节AM的加入则提高了聚合物的LCST值，且随着AM含量的增加LCST值增加；对β-CD进行改性，并合成了N-异丙基丙烯酰胺与MAH-β-CD的共聚物，随着共聚单体MAH-β-CD含量的增加，其共聚物的LCST也随之增加，当MAH-β-CD的摩尔比例大于2％后其LCST高于均聚物的LCST。
8 Calcein温度敏感脂质体的研究。选择十八烷基丙烯酰胺（ODA）作为锚，进行了温度敏感聚合物Poly（NIPAM-co-AM-co-ODA）的合成，其LCST约为38℃，略低于Poly（NIPAM-co-AM）的LCST；制备了此聚合物修饰的Calcein温度敏感脂质体，并对其体外热敏性进行研究，结果表明与未经聚合物修饰的脂质体相比，在温度高于37℃经过聚合物的LCST时脂质体中的Calcein发生明显的释放；聚合物比例增加Calcein释放增加，在其比例达到0.1之后释放趋于饱和；而且与SPC脂质体相比，Calcein从Poly（NIPAM-co-AM-co-ODA）修饰的HSPC脂质体中的释放率较高。
9 TPT温度敏感脂质体的初步研究。制备了TPT温度敏感脂质体，即Poly（NIPAM-co-AM-co-ODA）修饰的TPT脂质体，并对其进行了初步的体外热敏性研究。结果表明脂质体中的TPT释放具有一定的温度依赖性，在37℃时TPT几乎不发生释放，而当温度升高到40℃左右时TPT从脂质体中快速释放，40℃时15min内释放率在20％左右。
关键词: TPT ；脂质体 ；PEG修饰脂质体 ；硫酸按梯度法 ；体外细胞毒 ；体内分布 ；体内抗肿瘤 ；聚(N-异丙基丙烯酰胺) ；温度敏感脂质体 ；热敏性
被引量
5
摘要： 膀胱癌是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤，90％以上为移行细胞癌。初次就诊的患者中70％～80％为浅表性膀胱癌，其中70％为Ta期，30％为T1期，不论肿瘤分化程度的高低，都未侵及膀胱肌层。经尿道切除术或者膀胱部分切除术可以切除原发肿瘤，但由于膀胱癌的多中心性和多发性特点，术后5年复发率高达三分之二，而术后15年的复发率则高达88％，复发的患者中约有15％会进展为浸润性膀胱癌。因此，浅表性膀胱癌手术后如何预防复发和疾病进展是泌尿外科医生共同努力的目标。自上个世纪60年代起开始的膀胱内灌注治疗有效地延缓或者阻止了肿瘤的复发和进展，因此，膀胱灌注治疗己成为膀胱癌治疗的重要手段之一。目前膀胱灌注治疗的药物主要为两大类，分别为化学药物和免疫制剂，其中喜树碱类衍生物是膀胱灌注化疗的重要药物之一。
喜树碱类衍生物的构效关系分析表明在7，9，10位被基团取代的喜树碱类衍生物具有很强的抗肿瘤活性。尽管在10位被羟基和烷基取代后，如10-甲氧基喜树碱有一定的抗肿瘤活性，但是其有较强的毒副作用限制了它的临床应用。相反在9位引入硝基，如9-硝基喜树碱，不仅能保证其治疗效果，同时还具有较低的毒副作用。但要将喜树碱硝化得到9-硝基喜树碱是比较困难的，因为12-硝基喜树碱会是最主要的产物。而对10—羟基喜树碱进行硝化则容易得到10—甲氧基—9—硝基喜树碱（MONCPT），国内华东师范大学合成了该化合物。该药系我国有自主知识产权的喜树碱类抗肿瘤新药，目前正在进行临床前研究。膀胱癌是泌尿系统最常见的肿瘤，本课题就是考察MONCPT对膀胱癌细胞增殖的抑制作用并对其作用机制进行研究。
目的：
1、研究MONCPT对膀胱癌5637细胞增殖的抑制作用（在体和离体）；
2、考察MONCPT对膀胱癌5637细胞周期的影响，若有影响则进一步探讨其作用机制；
方法：
1)采用MTT法，评价MONCPT体外抑制膀胱癌5637细胞活性；
2)采用裸小鼠皮下移植瘤模型，观察MONCPT对荷人膀胱癌5637裸小鼠的实验治疗作用；
3)应用流式细胞术检测不同浓度MONCPT和MONCPT在不同作用时间对5637细胞周期的影响；
4)采用Western blotting的方法检测MONCPT对5637细胞p53，CDK7，p21，AKT，Mat1，Wee1，Cyclin B1，CDK1，Cyclin H，Cdc25C等蛋白表达水平的影响；
结果：
1、MONCPT对人膀胱癌细胞株的体外抑制作用：
采用MTT法对人膀胱癌5637细胞进行体外IC50测定，结果表明，MONCPT对人膀胱癌5637细胞作用48小时有较强的抑制增殖作用，IC50值为1．31±0．16μM。结果还显示，随浓度的下降，MONCPT在体外对人膀胱癌5637细胞的抑制率迅速降低，呈明显的剂量依赖关系。
2、MONCPT对人膀胱癌5637细胞的实验治疗作用：
对裸小鼠体内5637肿瘤的实验治疗作用试验结果显示，MONCPT 5、10和20mg／kg组裸小鼠体重无明显影响（P>0．05）。与相应的溶剂对照组比较，Irinotican10mg／kg和MONCPT 10mg／kg组移植瘤体积从第5天开始显著减小（P<0．05—0．01），而MONCPT 20mg／kg组植瘤体积从第3天开始显著减小（P<0．05），MONCPT 5mg／kg组植瘤体积从第9天开始显著减小（P<0．01）。MONCPT 5mg／kg组在给药后第3、5、7、9、11、13和15天的相对肿瘤增殖率（T／C，％）分别为103．2％、84．6％、95．7％、80．2％、62．0％、41．6％和23．8％，从第13天开始相对肿瘤增殖率小于60％；MONCPT 10mg／kg组相应的相对肿瘤增殖率分别为95．3％、67．7％、61．4％、34．2％、21．2％、11．1％和6．2％，从给药后第9天开始相对肿瘤增殖率小于60％；MONCPT 20mg／kg组相应的相对肿瘤增殖率分别为73．2％、51．9％、40．3％、20．9％、11．7％、6．9％和3．3％，从给药后第5天开始相对肿瘤增殖率小于60％；Irinotican 10．0mg／kg组相应的相对肿瘤增殖率分别为88．1％、70．4％、50．5％、31．3％、20．8％、13．8％和7．3％，从给药后第7天开始相对肿瘤增殖率小于60％。给药15天后剖杀裸小鼠取瘤块称重发现，MONCPT 5mg／kg、10mg／kg和20mg／kg组的人膀胱癌5637移植瘤平均重量分别为0．63±0．12g、0．24±0．06g和0．06±0．03g，与阴性对照组的1．83±0．30g比较均有明显下降（P<0．01），三个剂量组相应的肿瘤抑制率分别为64．8％、86．2％和96．5％，肿瘤抑制率均大于40％。Irinotican 10．0mg／kg组的平均瘤重为0．36±0．09g，与溶剂对照组比较也有显著下降（P<0．01），抑瘤率为81．1％，大于40％。
3、MONCPT诱导人膀胱癌5637细胞周期阻滞作用：
MONCPT10，1，0．1，0．01μM分别对人膀胱癌5637细胞作用24小时后，DNA分析结果表明，溶剂对照组的G2／M期的肿瘤细胞百分率分别为8．56±2．13％；而MONCPT10，1，0．1，0．01μM处理24小时后，处于G2／M期肿瘤细胞百分率分别为19．7±3．6％、46．9±7．3％、76．8±9.2％和18．55±3．5％，0．1μM的MONCPT能达到最大的肿瘤细胞周期阻滞作用。用0．1μM的MONCPT处理5637细胞12h，24h，36h和48h，并设溶剂对照，收集各组细胞，用流式细胞术检测细胞的周期阻滞率。结果显示，溶剂对照组的G2／M期的肿瘤细胞百分率为11．45±2．3％，随着MONCPT作用时间的延长，G2／M期比率分别为22．4±3.85％（12h）、79．18±7．3％（24h）、50．15±6．25％（36h）和29．7±3.85％（48h）。
4、MONCPT对5637细胞周期相关蛋白表达量的影响：
用0．1μM MONCPT分别处理5637细胞12，24，36和48h，并设对照，收集各组细胞，提取蛋白，用Western印迹法检测CDK1、CyclinB1、Cyclin H、MAT1、AKT、Wee1、CDK7，Cdc25C，p21和p53蛋白表达量的变化。结果显示，随给药时间的延长，MONCPT可使人膀胱癌5637细胞p53，p21的表达先增加后下降，MAT1、CyclinB1的表达先下降后增加，CDK1、CDK7、Cdc25C、Cyclin H、AKT、Wee1的表达量下降。
讨论和结论：
MONCPT是新合成的喜树碱类衍生物。体内外的抗肿瘤实验证实MONCPT对人膀胱癌5637细胞具有很强的抑制增殖作用，同时我们还证实这种作用是可以通过对细胞周期G2／M期阻滞实现的。
近几年来，植物来源的抗肿瘤药物受到了广泛的关注。当哺乳动物细胞遇到DNA损伤时，细胞周期会停滞直到错误被纠正，细胞周期G2／M期被阻滞后细胞将停滞生长。相比较G1／S，人们对G2／M了解的并不多，然而这个周期检验点对于肿瘤发生却是非常重要的。G2／M的转变是受到Cdc家族蛋白和cyclin调控的，Cdc2可以被四个转录靶点p53，Gadd45，p21和14—3—3σ所抑制。p53可作为转录因子，诱导另外几种蛋白的产生，如p21，从而达到调控细胞周期的作用。在哺乳动物细胞中，cyclin的结合和CAK对Cdc2的Thr161位磷酸化对于Cdc2-cyclin B复合物的活性都是非常重要的。若没有Cdc25C对Cdc2的Thr14和Tyr15位去磷酸化，且Plk1磷酸化cyclin B时，细胞周期将被停滞。当用0．1μM MONCPT分别处理5637细胞12，24，36和48h，Western印迹法检测结果显示，随给药时间的延长，5637细胞的p53，p21表达先增加后下降，MAT1、CyclinB1表达先下降后增加，CDK1、CDK7、Cdc25C、Cyclin H、AKT、Wee1表达量下降。因此，我们推测，MONCPT使人膀胱癌5637细胞终止在G2／M期的作用可能是其通过诱导细胞p53、p21表达上调和CyclinB1、CDK1、CDK7、AKT、Wee1、Cyclin H、Mat1和Cdc25C表达下调，从而使细胞终止在G2／M期，达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。
综上所述，我们实验证实，MONCPT对人膀胱癌5637细胞的增殖具有明显的抑制作用，其作用机制可能与p53通路、CDK7、Cdc25C及cyclin B1-CDK1复合物有密切关系，通过阻滞膀胱癌细胞周期而发挥抗肿瘤活性。在体和离体实验证实，MONCPT具有良好的抗膀胱癌实验治疗作用，值得在临床进一步实验以确证疗效。
关键词: 膀胱癌 ；细胞周期 ；10-甲氧基-9-硝基喜树碱 ；抗肿瘤活性 ；G2/M期
被引量
2
摘要： 目的：通过对拓扑异构酶（topoisomerase，TOPO）Ⅰ抑制剂-羟基喜树碱（10-hydroxycamptothecin，HCPT）与TOPOⅡ抑制剂-阿霉素（adriamycin，ADM）联合化疗时的不同给药顺序、时间间隔进行体内、体外及临床研究，寻求两药的最佳配合顺序、时间间隔，以得到两药最佳疗效。
方法：1)用MTT法检测HCPT、ADM及两药在间隔0、12、24、36、48、60、72h各给药组对卵巢癌细胞株（SK-O-V3）生长抑制率的影响。2)通过小鼠腹腔内移植S-180腹水、24h后腹腔给药（ip-ip）的动物体内实验模型来观察对照组（注入生理盐水）、实验组：注入HCPT（10mg／kg）、ADM（5mg／kg）两单药组及注入HCPT后0、8、12、24、72h后给ADM各组对S-180腹水型小鼠生存期的影响及生命延长率、治愈率的测定。3)临床上，选择70例非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）的初诊患者，分为同时组及序贯组，前20个患者给予同时组治疗：HCPT 6mg／m2静滴，第1-5天、吡喃阿霉素（pirarubicin，THP-ADM）20mg／m2静冲，第1-2天、卡铂（carboplatin，CBP）75mg／m2静冲，第1-5天。后50个患者给予序贯组治疗：HCPT 10mg／m2静滴，第1-3天，
中文摘要
THP－ADM 20mg／m‘静冲，第 4巧天、CBP 75mg／ffi‘静冲，
第l6天，化疗后第7、8、11大给予人重组粒细胞集落
刺 激 因 子(human recomblnant g删ulocyte
colony七stimulating factor，rhG（SF人评价两组患者的近
期疗效及毒副反应。
结果：HCPT和 ADM联合用药 1）HCPT、ADM及
各实验组均对SK－O－V3细胞生长产生抑制作用，但HCPT
组对细胞生长的抑制率为36．95％，虽然高于同时给药组
33．枯％的抑制率但两组相比无显著性差异巾＞0刀5人
ADM组对细胞生长的抑制率为22石2％低于同时给药组，
两者相比有显著性差异b＜0刀5)．而先给 HCPT 12h后
给ADM组对细胞生长抑制率为49．28％，较同时给药组
的抑制率高，二者相比差异有显著性①＜0．05卜 并且在
先给 HCPT后给 ADM各组中，以两药间隔 12h组对细胞
生长抑制率最高，间隔24h组对细胞的抑制率也较高，二
者相比无显著性差异中＞0刀5人但与其他各时间组相比
有显著性差异中＜0．05人而在先给 ADM后给 HCPT各
组中，虽然间隔 12h组对细胞增殖抑制作用高于同时给药
组以及间隔 24h组，但无显著性差异中＞0刀5人在 HCPT
与ADM序贯给药时，先给HCPT后给ADM的各序贯组
对细胞增殖抑制作用均高于先给ADM后给HCPT各序贯
组的抑制作用，但先给 HCPT、24、72h后给 ADM各
组对细胞增殖抑制率与先给ADM后给HCPT相对应时间
段的各组相比无显著性差异巾＞0．05人2)HCPT、ADM
及不同时间给药组对S刁 腹水型小鼠生存期的影响：单
用HCPT组的小鼠生存天数虽有一定延长，但与对照组相
2
中文摘要
比较无显著性差异中＞0．05人 而单用ADM组小鼠的生
存天数较对照组明显延长，有显著性差异中＜o．05人不
同时间序贯给药：其中同时给予两药组，较单用HCPT组
生存天数有一定的延长但无显著性差异中＞0刀5人然而
较单用ADM组的生存天数明显降低。不同时间序贯给药
的4组中，以HCPT与ADM间隔sh组小鼠平均存活天
数最长。对小鼠生命延长率的影响：各实验组小鼠的生命
延长率均较对照组为高，均有显著性差异中＜0．05人在
不同时间序贯给药组中，HCPT与ADM同时给药较单用
HCPT高，但较单用 ADM低，有显著性差异中＜0刀5人
HCPT用药后sh后应用ADM可使小鼠的生命延长率达
300％，较其它3组为高，有显著性差异巾＜0刀5人对小
鼠治愈率的影响：除HCPT组外，其余各实验组的治愈率
均较对照组明显提高并有显著性差异中＜0刀5人其中以
HCPT与 ADM间隔 sh组的治愈率最高，间隔 12h组的治
愈率也较高，两者无差异中＞0刀5人3)［％床观察的70
例NSCLC初诊患者，均完成了2个周期的治疗。在20
例同时给药组的患者中，完全缓解（Complete remission，
CR）l例，部分缓解（Partial remission，PR）8例，稳
定（Stable disease，NC）9例，进展（Progression disease，
PD）1例，有效率KR＋PR)为 45O，而 50例序贯给药
组的患者中，CR 8例，PR 26例，NC例，PD 6例，
有效率为68％，两种治疗方案有效率有显著性差异中＜
0刀1人 两治疗方案的毒性反应主要表现为白细胞、血红
蛋白、血小板的降低及纳差、恶心、呕吐、脱发等，但均
为Ill缀反应，其中同时给药组的患者骨髓抑制5例，消
3
中文摘要
化道反应 11例，脱发 4例，而在序贯组中，骨髓抑制
关键词: 羟基喜树碱 ；阿霉素 ；TOPOⅠ抑制剂 ；TOPOⅡ抑制剂 ；序贯给药 ；协同作用 ；拮抗作用
被引量
1
摘要： 目的：
研究通过正交试验设计，进行人参皂甙Rg3，姜黄素，槲皮素三种中药复方对体外培养人膀胱肿瘤T24细胞株作用的优化研究，为进一步的研究与临床应用奠定基础，为解释中药组方的配伍原则，为科学的组方提供理论依据。
方法：
用细胞毒试验分别测定人参皂甙Rg3，姜黄素，槲皮素三种单体中药24小时对人膀胱癌T24细胞株的抑制率，通过IC50计算分析软件得出三种中药单体24小时内作用于膀胱癌细胞株T24的半数抑制率(IC50)。根据三种单体中药的IC50值制定正交试验因素水平。根据正交试验因素选取L9(34)正交试验表，用细胞毒试验测定表中每组中药复方配伍制剂24小时对人膀胱癌T24细胞株的抑制率，用Annexin V- FITC/ PI检测凋亡，将两种试验所得数据顺序入列，水平对号入座，利用正交试验助手分析软件计算分析试验结果(数据)，采用直观分析法，得出最佳剂量的配伍。将所得最佳配伍剂量与各个中药单体和羟基喜树碱进行对比，试验分组为空白对照组，中药复方制剂组，人参皂甙Rg3组，槲皮素组，姜黄素组，阳性对照组(羟基喜树碱)，得到双变量流式细胞仪的散点图，观察中药复方制剂的药物效果。用荧光显微镜观察中药复方制剂24h作用人膀胱癌T24细胞株后，细胞膜和细胞核的状态。
结果：
通过细胞毒试验和IC50计算分析软件得到三种中药的IC50值，人参皂甙Rg3160μmol/L，姜黄素24μmol/L，槲皮素152μmol/L。根据所得的IC50值制定出正交试验因素水平，人参皂甙Rg340μmol/L，80μmol/L，160μmol/L，姜黄素6μmol/L，12μmol/L，24μmol/L，槲皮素38μmol/L，76μmol/L，152μmol/L。选取L9(34)表格为本次试验的正交表格，通过细胞毒试验和流式细胞检测凋亡率试验，得到数据代入正交表格，通过正交助手试验分析软件，采用直观分析法得到，A3，B3，Cl均较其他水平好，由极差排列出主次顺序为A>C>B，故得出最佳剂量的配伍为人参皂甙Rg3160μmol/L，槲皮素38μmol/L，姜黄素24μmol/L。将所得最佳配伍剂量与各个中药单体和羟基喜树碱进行对比。流式细胞仪激发光波长用488nm，用一波长为515 nm的通带滤器检测FITC荧光，另一波长大于560nm的滤器检测PI，双变量流式细胞仪的散点图上，中药复方制剂的药效要好于其他分组，其作用后的人膀胱癌肿瘤细胞以凋亡和死亡为主，而活细胞基本没有。于荧光显微镜观察，可以清晰的观察到细胞凋亡和细胞坏死的存在。
结论：
依据国内外的研究成果及以上我们的前期工作基础，本课题应用正交试验技术设计三种中药单体优化配伍复方用于膀胱癌的研究，通过体外实验观察它们对膀胱癌细胞的凋亡诱导效应和生长抑制状况，挖掘其膀胱灌注优势复方。并且证实中药复方制剂24h对人膀胱肿瘤细胞株T24细胞，有很好的诱导凋亡的能力。但是，试验是利用直观分析法分析正交试验结果后，由于所得的最佳搭配只是相对于被选因素和水平而言的，不是绝对的“最佳”，因而也有一定的片面性。
关键词: 中药单体复方 ；正交试验 ；膀胱肿瘤 ；抑制率
摘要： 首先以喜树碱（化合物1）为原料合成了中间体10-羟基喜树碱（化合物2），进而又合成了9-二甲胺甲基-10-羟基喜树碱(Topotecan)（化合物3），化合物2和3分别经过TLC、HPLC、1H-NMR、IR和ESI-MS得到了表征。 选择两种单糖——葡萄糖和半乳糖，利用糖中的第一位羟基（半缩醛羟基）活性强于其他羟基，进行糖的保护和溴代，分别合成了1-Br-2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖（化合物4）和1-Br-2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖（化合物5），然后利用10-羟基喜树碱的10位羟基与化合物中溴原子相连的碳发生亲核取代反应，采用相转移催化法得到喜树碱乙酰化糖苷化合物（化合物7和8），同样的方法得到了喜树碱的乙酰化阿拉伯糖苷化合物（化合物9），产物具有高度的立体选择性，得到的化合物7-12均被证实是β构型。然后分别通过水解得到喜树碱的各糖苷化合物（化合物10-12），化合物10-12与10-羟基喜树碱在同一块板上进行TLC检测，显示极性增大，说明它们的水溶性有所增强。 本项研究共合成了10个化合物，其中六个未见报道的化合物（化合物7-12），各化合物结构经1H-NMR、IR和ESI-MS得到了表征。 采用MTT方法考察合成的喜树碱糖苷类衍生物（化合物7-12）对三种癌细胞株——口腔表皮癌细胞KB、结肠癌细胞HCT-8和肝癌细胞Bel7402的体外抑制作用。体外活性实验结果表明化合物7-11的IC50值均接近或大于实验的最大给药浓度5.0μg·m L-1，其中化合物12具有相对较好的活性，总的说来，这类化合物对上述癌细胞的体外杀伤活性不明显，若改变肿瘤细胞，或进行体内活性实验，变化用药方式及剂量，有可能显示更高的抑瘤活性;同时从另一个方面说明了这类化合物的毒性很低，从而得出结论:作为生物体内重要的生物分子——亲水性糖基对改变喜树碱的抗肿瘤功能和物理化学性能发挥了作用。
关键词: 喜树碱糖苷类化合物 ；体外活性 ；抗肿瘤功能 ；物理化学性能 ；相转移催化法