摘要: 本研究旨在评价两种罂粟科藏药矮紫堇和多刺绿绒蒿对缺血性心脏病的作用并初步探索其作用机制,以提升矮紫堇和多刺绿绒蒿用于治疗缺血性心脏病的基础研究,提升民族药创新药物研究,亦具有重要的启发和参考。矮紫堇Corydalis hendersonii Hemsl.为紫堇属植物尼泊尔黄堇的干燥全草,是我国藏族地区的特有品种之一,藏药名“日衮孜玛”,具有清热解毒、干淤血、降血压功效,传统用于高山多血症、脉管炎等。多刺绿绒蒿是绿绒蒿属植物多刺绿绒蒿Meconopsis horridula的地上部分,具有接骨、清热止痛、活血化瘀等功效,用于头伤、骨折、骨蒸、跌打损伤、胸背疼痛等。本研究结合二者清热解毒的传统应用,并根据所含成分类型,推测具有作用于缺血性心脏病的功效。研究采用小鼠左冠状动脉前降支结扎制备动物模型,评价其抗心肌缺血作用并探讨相应的作用机制,具体包括以下内容:一、论文综述:总结了多刺绿绒蒿的化学成分和药理活性的研究进展。化学成分主要包含生物碱和黄酮两大类,药理活性涵盖抗心肌缺血、抗肿瘤、抗病毒等。论文同时对多刺绿绒蒿的主要活性成分之一——马齿苋酰胺E的药理研究进行梳理,包括用于帕金森和阿尔茨海默病等方面的研究,以期为绿绒蒿属植物用于缺血性心脏病的相关研究提供参考。二、药效评价:矮紫堇和多刺绿绒蒿总提物抗心肌缺血的药效研究:通过结扎左冠状动脉前降支制备ICR和C57BL/6小鼠模型,术后24小时,灌胃给药矮紫堇乙醇提取物(100,200,400 mg· kg-1)和多刺绿绒蒿乙醇提取物(200,400,800 mg·kg-1)一周后进行心脏超声评价心功能;检测矮紫堇低中高剂量组小鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、TNF-α和IL-6的含量,检测小鼠心肌组织匀浆液中的MMP-2和MMP-9的含量,利用western-blot检测小鼠心肌组织中 p-p65,p65,p-IλBα,IλBα,p-JAK2,JAK2,p-STAT3,STAT3,MMP-2 和 MMP-9 蛋白的表达;检测多刺绿绒蒿各组小鼠血清中的CK-MB和LDH的含量,血浆中超氧化物歧化酶的(SOD)活力和丙二醛(MDA)的含量,利用western blot技术检测Bax Bcl-2,p53,caspase-3以及caspase-9蛋白的表达;HE与MASON染色法检测各组小鼠的心肌炎症浸润及心急纤维化程度。结果显示,矮紫堇能显著降低左室舒张末内径(LVID;d)和左室收缩末内径(LVID;s),显著升高小鼠的心脏射血分数(EF)和左室短轴缩短率(FS),降低小鼠血清中的CK-MB和LDH活力,降低血浆中AngⅡ,TNF-α,IL-6的含量,显著下调MMP-2和MMP-9的含量,能有效抑制心肌组织中p-p65,p-IκBα,p-JAK2,p-STAT3,MMP-2及MMP-9的表达,说明矮紫堇能有效改善缺血小鼠的心功能,具有抗心肌缺血作用,其机制与炎症通路相关。实验结果同时显示,多刺绿绒蒿总提取物能够显著降低各组小鼠的LVID;d和LVID;s,显著升高EF和FS,小鼠血清中的CK-MB和LDH含量减少,血浆中的SOD活力升高,MDA含量下降,通过western blot实验发现其能够下调心肌组织中凋亡相关蛋白Bax,p53,caspase-3以及caspase-9的表达,能够上调Bcl-2的表达,表明多刺绿绒蒿能明显改善有效改善缺血小鼠急剧下降的左心室功能,具有抗心肌缺血作用,其机制与抗氧化损伤抗凋亡相关。三、体外活性评价:体外利用H2O2诱导H9c2心肌细胞建立氧化损伤模型,对多刺绿绒蒿的多个单体化合物进行活性筛选,结果显示去甲血根碱(norsanguinarine,2),3-O-苯乙酰基-5,1 5-O-二乙酰基-6(17)环氧续随子醇(5,1 5-O-diacetyl-3-O-phenyl-6(17)-epoxylathyr-ol,18)和(3β-hydroxy-7α-ethoxy-24β-ethylcholest-5-ene,23)具有保护心肌细胞的活性。同时将LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞,以其分化产生的细胞上清液诱导H9c2心肌细胞建立心肌炎症模型,对矮紫堇和多刺绿绒蒿的多个单体化合物进行活性筛选,MTT法检测H9c2心肌细胞的活力,结果显示金圣草黄素(chrysoeriol,7),(3β-hydroxy-7α-etho-xy-24β-ethylcholest-5-ene,23)具有保护心肌细胞炎症损伤的活性。另外通过HPLC-MS-IT-TOF方法对矮紫堇提取物的成分定性分析。本研究显示,两种来源于罂粟科的藏药——矮紫堇和多刺绿绒蒿,皆能有效改善缺血性小鼠的心功能,对缺血心肌具有保护作用。矮紫堇能够减轻心肌组织炎症浸润情况,降低炎症因子的排出,调控NF-κB,JAK2-STAT3等通路,可能是与抗炎机制相关。多刺绿绒蒿减少心肌组织中的炎性细胞浸润、氧化损伤并抑制心肌细胞凋亡的发生,与抗氧化损伤、抗心肌细胞凋亡作用机制密切相关。该研究为首次发现此两种藏药的抗心肌缺血作用,为进一步拓展其临床应用,丰富民族药用于治疗缺血性心脏病的新药研究,提供了有益参考。 摘要译文