文献检索结果-维普官网

1

1.

认领

【期刊论文】 • 余榕捷 ¹高媛 ^1,2林剑 ¹谢秋玲 ¹ +3位作者 • 《中国生物化学与分子生物学报》 • 2006年第8期 652 - 658，共7页

机构： [1] 暨南大学生物工程研究所[2] 河北医科大学生物化学与分子生物学教研室[3] 暨南大学生命科学与技术学院

摘要：为了实现蛋白内含肽(Intein)介导的重组环状胸腺五肽结构类似物[cyclo-(Cys-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-),cTP]的高效制备,设计并合成编码6个氨基酸的cTP基因,克隆到表达载体pTWIN1,重组表达质粒pTW-cTp转化E.coliER2566构建工程菌,IPTG诱导由几丁质结合域纯化标签(chitinbindingdomain,CBD)、2个蛋白内含肽和目的多肽组成的“多元”融合蛋白(CBD-intein1-cTP-intein2-CBD)的高效表达.几丁质柱亲合层析纯化融合蛋白后,改变pH值和温度诱导intein1C端切割,硫醇MESNA诱导intein2N端切割,释放N端为Cys,C端为硫酯的重组cTP线性前体,通过非保护多肽硫酯环合法实现环肽生成.激光飞行质谱结果显示,纯化产物的分子量为764·4,与环肽的理论值相符.免疫活性检测结果显示,环肽cTP较线性多肽TP-5具有更显著的促进巨噬细胞吞噬能力的活性(P<0·01)和促进B细胞抗体生成的活性(P<0·01).

摘要译文

关键词: 重组环肽；蛋白内含肽；非保护多肽硫酯环合

智能阅读

免费下载

引用

被引量 8

2

2. 未缴年费专利权终止

【专利/发明】 • CN200510120644.5 • 韩为跃张仁怀杨立明阳勇 +4位作者 • 申请日：2005-12-16, 公开日：2009-06-03

申请人：东莞市博康健医药科技有限公司

公开（公告）号： CN100494218C

摘要：本发明公开了一种重组胸腺五肽结构类似物及其制备方法与应用。本发明属于基因工程技术领域，涉及重组胸腺五肽的结构类似物，其结构为cyclo-(Cys-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-)，其特征在于它是由半胱氨酸(Cys)介导的环状胸腺肽，是由6个氨基酸组成的环肽，具有较线性五肽高的生物活性和稳定性。本发明还提供了该重组胸腺肽结构类似物的表达方法，及其在制备用于免疫相关疾病治疗药物中的应用。

摘要译文

引用

3

3. 未缴年费专利权终止

【专利/发明】 • CN200510120644.5 • 韩为跃张仁怀杨立明阳勇 +4位作者 • 申请日：2005-12-16, 公开日：2007-06-20

申请人：东莞市博康健医药科技有限公司

公开（公告）号： CN1982331A

摘要：本发明公开了一种重组胸腺五肽结构类似物及其制备方法与应用。本发明属于基因工程技术领域，涉及重组胸腺五肽的结构类似物，其结构为cyclo－(Cys－Arg－Lys－Asp－Val－Tyr－)，其特征在于它是由半胱氨酸(Cys)介导的环状胸腺肽，是由6个氨基酸组成的环肽，具有较线性五肽高的生物活性和稳定性。本发明还提供了该重组胸腺肽结构类似物的表达方法，及其在制备用于免疫相关疾病治疗药物中的应用。

摘要译文

引用

4

4. 认领

【学位/硕士】 • 高媛 • 暨南大学 • 导师：洪岸 • 2006年

摘要： 胸腺五肽(thymopoietin pentapcptide，TP-5)是胸腺生成素Ⅱ(Thymopoieti-n Ⅱ)上的活性中心第32位～36位氨基酸序列(-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-)，具有胸腺生成素Ⅱ的全部生理功能，是具有重要免疫调节功能和极具应用价值的药物多肽。目前，临床应用的TP-5为化学合成的线状多肽，存在半衰期短，体内稳定性差，易被蛋白酶降解等问题，严重限制了其在临床上的应用。为提高多肽的活性和稳定性，本研究首次尝试采用基因工程手段，将蛋白内含肽可诱导剪切功能和非保护多肽硫酯环合技术相结合，实现新型重组环状胸腺五肽结构类似物cyclo-(Cys-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-)[以下简称cTP]的制备。cTP属于六肽环，其线性前体的结构设计是在胸腺五肽序列的N端添加了一个半胱氨酸残基。与线性多肽相比，活性环肽由于主链呈环状结构，具有一定的构象约束作用，使其构象更加稳定；由于没有所谓氨基端和羧基端，其抗酶解能力强于线性多肽。因此理论上环肽cTP比线性肽TP-5具有更高的生物利用度与更强的生物活性，更具有药用开发价值。试验设计并合成编码6个氨基酸的cTP线性前体基因，克隆到表达载体pTWIN1，重组表达质粒pTW-cTP转化E．coli ER2566构建工程菌cTP-ER2566，IPTG诱导实现由几丁质结合域纯化标签(Chitin binding domain，CBD)、2个蛋白内含肽和目的多肽组成的“多元”融合蛋白(CBD-Inteinl-cTP-Intein2-CBD)的表达。在实验室水平优化工程菌cTP-ER2566的发酵参数。初步的探索结果表明：1％甘油作为碳源，培养菌体密度至A600达到0.5-1.0时加入IPTG至工作浓度0.4mmol／L，30℃诱导表达3-4h，可保证目的融合蛋白的可溶性高效表达。以实验室研究为参考，利用5L发酵罐发酵，3L发酵液收获湿菌102g，其中目的融合蛋白表达量达到33—35％，可溶性成分占可溶性总蛋白的29％。几丁质柱亲合层析纯化融合蛋白后，改变pH值和温度诱导inteinl在其C端切割，硫醇试剂——巯基乙磺酸(MESNA)诱导intein2在其N端切割，释放出N末端为Cys，C端具硫酯键的重组cTP线性硫酯前体，通过非保护多肽硫酯环合实现环肽生成。激光飞行质谱结果显示纯化产物的分子量为764.4Dal，与环肽的理论值相符，环化效率初步检测达到95％以上。免疫活性检测结果显示，环肽cTP较线性多肽TP-5具有更显著的促进巨噬细胞吞噬能力的活性(P＜0.01)和促进B细胞抗体生成

摘要译文

关键词: 重组环肽；蛋白内含肽；非保护多肽硫酯环合

引用