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摘要： 为了研究钩藤内生真菌Hypoxylon sp.HD-2014大米发酵的次级代谢产物,采用正相硅胶、MCI、Sephadex LH-20凝胶、半制备HPLC等色谱技术从该菌株的发酵产物中分离得到了12个化合物,经多种波谱数据分析和文献比对,分别鉴定为methyl (E)-5-hydroxymethyl-6,7-dihydroxy-4,5-epoxy-octanoate-2-ene (1)、(2E,6E)-nona-2,6,8-triene-4,5-diol (2)、8-O-(R)-methoxynodulisporin A (3)、3-硝基丙酸(4)、3-硝基丙酸甲酯(5)、3,4-二羟基苯乙醇(6)、2,4-二氯苯甲酸(7)、cis-4-hydroxyscytalone (8)、4,6,8-trihydroxy-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one (9)、isosclerone (10)、4H-1-benzopyran-4-one-2,3-dihydro-5-hydroxy-8-(hydroxyl-methyl)-2-methy (11)、5-methylmellein (12),其中化合物1和2为新化合物。体外细胞毒活性结果显示化合物1~12在A549与HepG2细胞上均无显著的抑制活性。联合药敏抗菌实验结果显示,化合物3与阳性对照氯霉素有相加作用。
关键词: 内生真菌 ；Hypoxylon sp.HD-2014 ；次生代谢产物 ；联合抗菌活性
被引量
6
摘要： 本文对1株白木香内生真菌Hypoxylon sp.HK-37的化学成分进行了研究。采用硅胶柱层析、Sephadex LH‐20凝胶层析、半制备HPLC和重结晶等分离方法从白木香内生真菌Hypoxylon sp.HK-37的大米固体发酵产物中分离得到5个单体化合物,并利用波谱学方法结合文献数据对其结构进行鉴定,分别为:methyl 8-hydroxy-1-oxo-1H-isochromene-3-carboxylate(1)、8-hydroxy-1-oxo-1Hisochromene-3-carboxylicacid(2)、1,8-dimethoxynaphthalene(3)、(-)-5-methylmellein(4)和(-)-6-hydroxymellein(5)。其中化合物1为新化合物,化合物2为新天然产物,化合物5为首次从该属菌中分离得到,对分离所得的化合物进行体外乙酰胆碱酯酶抑制活性测试,结果表明所有化合物均具有一定的抑制活性。本研究丰富了白木香内生真菌次级代谢产物的化学成分及生物活性,也为其后续的综合开发及利用提供一定的理论依据。
关键词: 内生真菌 ；白木香 ；次级代谢产物 ；乙酰胆碱酯酶
摘要： 从藏药穹代尔(攀茎钩藤,Uncaria scandens)的内生真菌中筛选对单胺氧化酶及乙酰胆碱酯酶具有抑制活性的提取物,并对高活性提取物进行化学成分的鉴定。采用组织切块法分离内生菌,发酵、萃取、甲醇回流提取法得到待测提取物,酶标法测定酶活性,波谱解析法鉴定结构。从穹代尔组织中共分离到9株内生真菌,检测发现3株内生真菌发酵提取物具有一定乙酰胆碱酯酶抑制活性,其抑制率在50%以上。通过分子生物学方法及形态学分析对活性菌株QDE-6进行了菌种鉴定,鉴定为黑曲霉属(Aspergillus sp.)真菌。从内生真菌QDE-6的次级代谢产物中分离鉴定了5个化合物,分别是Aspergiketone(1)、Gliotoxin(2)、Pseurotin A2(3)、Brevianamide F(4)、Pseurotin A1(5)。相比其他化合物,化合物3抑制率为51. 67%,具有较高的抗单胺氧化酶活性,化合物4抑制率为42. 76%,具有较高的抗乙酰胆碱酯酶活性。可作为进一步研究藏药穹代尔中内生真菌及开发药物的基础。
关键词: 攀茎钩藤 ；内生真菌 ；次级代谢产物 ；单胺氧化酶抑制剂 ；乙酰胆碱酯酶抑制剂
被引量
3
会议时间： 2023-08-18
摘要： 本研究对分离自贵州的三株地衣内生真菌轮层炭壳菌属Daldinia (DPS-165-9)、黑团孢霉属Periconia (WM-063-2)和炭团菌属Hypoxylon (WM-652-5-2)大米发酵培养后乙酸乙酯提取发酵产物,经硅胶柱色谱法、重结晶等方法分离化学成分,滤纸片法测定单体化合物的抗菌活性,结合微量肉汤法进行活性化合物的体外药效学评价;通过测定核酸和蛋白的溶出量及AKP的活力初步探讨活性化合物的抗菌机理。结果从三株真菌种得到40个化合物,鉴定出32个化合物,包括1个新化合物,1个新天然产物,11个炭壳菌属首分,4个黑团孢霉属首分。其中化合物D5对白色念珠菌Candida albicans 10213、藤黄微球菌Micrococcus luteus 261、变形杆菌Proteus sp.P12、宋氏志贺菌Shigella sonnet的MIC为16μg/mL,对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus 6538、布氏杆菌Brucella sp.B103、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 163的MIC为64μg/mL;对C.albicans 10213、Proteus sp.P12、Shigella sonnet、S.aureus 6538、Brucella sp.B103的MBC分别为64μg/mL,对M.luteus 261和B.subtilis 163的MBC为128μg/mL。以2,6-二羟基苯甲醛作为原料,通过碘甲烷取代、丙基溴化镁加成、PCC氧化、三溴化硼还原等结构修饰,合成目标产物D5即1-(2,6-二羟基苯基)丁酮。抗菌机理显示,与对照组相比,D5可使实验组菌株胞外蛋白含量和核酸含量增多,AKP活力增强。本论文为进一步从地衣内生真菌中挖掘抗菌物质奠定基础。
关键词: 地衣 ；内生真菌 ；化学成分 ；抗菌活性
摘要： 内生真菌资源丰富,研究人员从内生真菌中分离出了大量结构新颖、活性显著的化合物。通过真菌代谢获得天然产物在产率、经济性和环境保护方面具有显著优势。本研究针对中药钩藤内生真菌次级代谢产物进行研究,以期发现结构新颖、活性显著的药物先导化合物,为新药尤其是新生物农药的开发提供依据。本论文对两株来自钩藤的内生真菌Trichoderma sp.TMS-2011和Hypoxylon sp.HD-2014的次级代谢产物进行研究。使用大米培养基进行大量发酵,利用乙酸乙酯溶剂进行超声提取,得到的粗提物采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、ODS柱色谱、MCI柱色谱以及半制备高效液相色谱等进行分离纯化,共分离得到30个化合物。综合利用核磁共振、高分辨质谱、旋光、红外、圆二色谱等表征方法确定了它们的平面和立体结构,经Scifinder检索其中6个化合物为未见文献报道的新化合物。同时,对所有分离得到的化合物进行了抗植物病原真菌和抗炎活性评价。从钩藤内生真菌Trichoderma sp.TMS-2011中分离得到17个化合物,分别为:8个木霉酸类衍生物（1-8）、3个二氧哌嗪生物碱（9-11）、1个二肽（12）、1个甾醇类化合物（13）、1个核苷类化合物（14）、1个酚酸化合物（15）和2个脂肪类化合物（16,17）,其中化合物1-4为未见文献报道的新化合物。从钩藤内生真菌Hypoxylon sp.HD-2014中分离得到13个化合物,分别为:5个脂肪族化合物（18-22）、3个酚酸（23-25）、3个萘酮（26-28）、1个苯并二氢吡喃酮类化合物（29）和1个香豆素（30）,其中化合物18和19为未见文献报道的新化合物。对所有分离到的化合物进行了植物病原真菌最小抑菌浓度测试,评价其抗植物病原真菌活性。结果显示化合物1-7在抑制灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）和交链格孢菌（Alternaria alternata）生长中体现出中等的抗真菌活性（MIC:32-64μg/m L）。但对尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）与串珠镰孢菌（Fusarium moniliforme）无明显影响。化合物8表现出良好的抗真菌活性,对灰葡萄孢菌的MIC为4μg/mL,对交链格孢菌的MIC为16μg/mL,对尖孢镰刀菌也显示出中等的抗真菌活性的MIC为32μg/m L。为了进一步探讨化合物8对灰葡萄孢菌的作用方式,使用了扫描电镜和透射电镜对化合物8处理后的灰葡萄孢菌丝进行观察。扫描电镜结果显示,经化合物8处理后灰葡萄孢菌丝延伸性变差,菌丝分支明显增多,表面的褶皱收缩。透射电镜结果显示,经化合物8处理后的灰葡萄孢细胞超微结构发生明显变化,细胞变形严重,质膜无定型,胞外物质增多且分布不均匀,细胞内囊泡增多、增大并合并成一个大的中央空泡,细胞内的大部分细胞器消失。初步阐明了化合物8抑制灰葡萄孢菌生长的作用方式。对所有分离得到的化合物进行了LPS诱导RAW264.7细胞产生NO抑制效果测试,评价其抗炎活性。结果显示相对于阳性对照Dexamethasone(IC50=7.80μM),化合物1-7和13均表现出一定的抗炎活性(IC50=24.3-49.5μM)。其余化合物均未表现出明显的抗炎活性(IC50>60μM)。本论文对两株钩藤内生真菌次级代谢产物的化学成分与抗植物病原真菌活性及抗炎活性进行研究。分离鉴定了30个化合物,部分化合物表现出一定的抗植物病原真菌活性和抗炎活性,并深入探究了化合物8的抗植物病原真菌方式。该研究结果丰富了Trichoderma sp.TMS-2011和Hypoxylon sp.HD-2014两株内生真菌次级代谢产物,为抗植物病原真菌和抗炎提供了潜在的活性分子,同时为Trichoderma sp.的抗真菌作用提供了可能的研究方向。
关键词: 钩藤 ；内生真菌 ；次级代谢产物 ；抗植物病原真菌活性 ；抗炎活性
摘要： 诺丽(Morinda citrifoli.Linn.)是茜草科巴戟天属的传统药用植物,发源于南太平洋热带诸岛,在我国海南、西沙和台湾也有少量分布。诺丽的根、皮、果实和叶都被用于药用,诺丽的果富含多种糖苷类物质、醌类化合物、环烯醚萜类、维生素等化学成分或有效营养组分,对癌症、高血压、肺结核、肝中毒、及抗氧化等疾病作用显著。虽然诺丽具有特殊的抗癌、抗氧化效果,但尚处于研究过程中,并且由于其生长条件的限制、种群分布的局限性和人们的疯狂追捧,致使该物种种质资源并不丰富,而且遭遇肆意砍伐和破坏,处于濒危灭绝边缘,故寻找新来源的抗氧化、抗肿瘤活性物质非常紧迫。海南拥有适宜诺丽生长的热带沿海气候和土壤条件,对诺丽的开发研究具有地理优势。本课题以海南省特色热带药用植物诺丽八成熟健康果和叶为材料,进行表明消毒,分离提取内生真菌,采用菌落特征和26srDNAD1/D2区域和ITSrDNA序列测序鉴定菌种。利用Mothur软件的Further Neighbor原则在0.03差异水平下对获取序列划分可操作分类单元(operation taxonomic unit,OTU),应用MEGA5.2.1软件按照N-J法构建聚类分析树状图。采用DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法和FRAP总还原能力分析其次生代谢产物的抗氧化能力,用福林-肖卡法和AlCl3显色法测定其次生代谢产物总多酚(TPC)、总黄酮(TFC)成分含量并分析抗氧化活性。以肝癌SMMC-7721、肺癌Lewis、前列腺癌PC-3为指示癌细胞,采用MTT法对其次生代谢产物的抗肿瘤活性进行测试,得到主要结果如下:(1)本实验共设计了三个空白对照试验(环境对照、表面灭菌检测以及组织印迹法),结果表明本次诺丽果和叶表面消毒彻底并且实验所得真菌即其内生真菌。本次试验中所使用的表面消毒试剂是75%酒精和2.6%次氯酸钠并按照时间梯度进行试验,实验结果表明,180 s+30s、180 s+60s处理8天左右出菌效果最好,菌落个数为 7-10 个,菌种 4-5 种;120s+30s、120s+60s、240s+30s、240s+60s、300s+30s、300s+60处理8天左右出菌效果良好,菌落个数为4-5个,菌种2-3种;80s+180s、240s+150s、240s+180s、300s+90s、300s+120s、300s+150s、300s+180s处理没有菌落长出。(2)本实验共分离纯化得到内生真菌共102株,观察其菌落形态特征初步鉴定为63种。通过PCR扩增获得序列,根据序列相似性(以97%为阈值),将获得的63株内生真菌划分为36个OTU,并构建其系统发育树,进行聚类分析。结果显示63个内生真菌分别属于担子菌门(Basidiomycota)、子囊菌门(Ascomycota)两个类群,部分属于隔孢球壳科(Didymosphaeriaceae)、煤炱菌科(Capnodiaceae)、Magnaporthaceae,其余属于枝孢属(Cldosporium)、曲霉属(Aspergillus)、刺盘孢属(Colletotrichum)、间座壳属(Diaporthe)、炭团菌属(Hypoxylon)镰刀菌属(Fusarium)、叶点霉属(Phyllosticta)、赤霉属(Gibberella)、金担子菌属(Aureobasidium)、蔷薇色酵母属(Rhodotorula)、隐球菌属(Cryptococcus)。其中优势类群为曲霉属(Aspergillus)、枝孢属(Cladosporium),分别占分离总数的 28.57%和 15.87%,其余菌属分离率均小于10%。(3)本试验中的所有诺丽内生真菌次生代谢产物均具有不同程度的抗氧化活性,且在一定范围内呈明显的量效关系。(Hh-1、Hs-2、Hd-3)提取物的DPPH抗氧化活性范围从23.93到31.27 mmol TE/gDW,其中Hd-3次生代谢物的抗氧化活性最强;ABTS抗氧化能力基于平均TE值排序为..Hh-1(11.04 mmol TE/g DW)>Hd-3(9.64 mmol TE/g DW)>Hs-2(6.08 mmol TE/g DW);FRAP 铁还原抗氧化能力 Hh-1最强为 8.22 mmol TE/g DW,而 Hs-2 的能力最低能为 5.68 mmol TE/g DW;TPC 含量在(52.29-72.81)的范围之间,最高值在Hh-1提取物中发现(72.81);TFC含量在(74.34-107.95)之间,最高值在Hd-3提取物中发现(107.95)。(4)内生真菌 Hh-1,Hs-2 和 Hd-3 对 SMMC-7721(肝脏),Lewis(肺)和 PC-3(前列腺)肿瘤细胞的增殖均有不同程度的抑制作用,呈现显著的剂量依赖性和极显著的差异性(P<0.05)。IC50范围从45.46到108.99μg/mL,其中的Hd-3对SMMC-7721、Lewis和PC-3肿瘤细胞的IC 50分别为45.46 μg/mL,分别为53.33μg/mL和80.48 μg/mL,具有光谱的抗肿瘤活性;Hh-1对SMMC-7721、Lewis和PC-3肿瘤细胞的IC50分别为106.18μg/mL,46.08 μg/mL和79.71μg/mL,对部分类型肿瘤细胞的抑制效果显著。其中真菌Leptoxyphium(Hd-3),可能产生氯过氧化物酶并对多种有机底物表现出泛催化活性。综上所述,海南特有传统药用植物诺丽内生真菌种类丰富,其次生代谢产物具有较强的抗氧化和抗肿瘤活性,内生真菌与宿主植物长期共生,协同进化可能导致其与宿主植物之间基因和信息的交换,从而产生类似的代谢途径和相同或相似生物活性的次生代谢产物,由此推断诺丽的生物活性可能与其内生真菌相关,为诺丽的开发利用提供一定的理论依据。
关键词: 诺丽 ；内生真菌 ；抗氧化活性 ；抗肿瘤活性
被引量
1
摘要： 凤尾蕨科（Pteridaceae）卤蕨属（Acrostichum L.）植物是红树林中唯一的蕨类植物,全球共有4种,我国有3种,即卤蕨（A.aureum）和尖叶卤蕨（A.speciosum）,以及它们的杂交种。据报道,卤蕨属植物及其内生真菌代谢产物结构新颖丰富,具有良好的生物活性。为进一步挖掘红树林蕨类植物内生真菌次生代谢产物中具有良好生物活性的化学成分,本研究从采自不同生境的卤蕨和尖叶卤蕨样品的不同组织部位中分别分离纯化得到内生真菌68株和43株。通过薄层层析和HPLC分析,从2种植物的内生真菌中各筛选出1株潜力菌株,分别为Colletotrichum sp.HD-1和Exserohilum rostratum HD-J30。潜力菌株经过大批量发酵后,利用正向硅胶柱、反向C18柱、葡萄糖凝胶柱和半制备HPLC等多种分离技术方法对其发酵产物进行分离纯化得到单体化合物;通过多种波谱技术相结合的方法鉴定单体化合物的化学结构。从Colletotrichum sp.HD-1的发酵产物中分离纯化得到25个化合物,包括6个生物碱类、8个聚酮类、1个甾体类、6个酚类以及4个其他成分,分别鉴定为colletotryptin G（1）、colletotryptin H（2）、3-（2-hydroxyethyl）-indole（3）、2-（3-indolyl）ethylamine acetate（4）、ferulic acid（5）、苯乙酰胺（6）、acropyrone（7）、macrophic acid（8）、α-pyrone convolvulopyrone（9）、nectriapyrone（10）、novae-zelandin A（11）、pyrenocine N（12）、phomopyronol（13）、4α,6α-epoxy1β-hydroxy-4β-methyleudesmane（14）、5α,8α-过氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇（15）、regiolone[（4RS）-4,8-dihydroxy-3,4-dihydronaphthalen-1（2H）-one]（16）、4-hydroxy phenethyl acetate（17）、对羟基苯乙酸甲酯（18）、2-（2-羟基乙基）苯酚（19）、甲氧基苯乙酸（20）、phenyl acetic acid（21）、对羟基苯乙醇（22）、1-phenyl-1,2-ethanediol（23）、p-hydroqhmldebyde（24）、monaspilosin（25）,其中化合物1和2为新的生物碱类化合物。从Exserohilum rostratum HD-J30的发酵产物中分离纯化得到9个化合物,经与文献对比鉴定了4个已知化合物,分别为monocerin（26）、infectopyrone（27）、11-hydroxymonocerin（33）和isocoumarin（34）。通过一维和二维谱图确定化合物28为1个聚酮类化合物,该结构目前未报道过。对分离鉴定的单体化合物1-24进行了乙酰胆碱酯酶抑制、α-葡萄糖苷酶抑制、抗农业病原真菌和抗人体病原细菌的生物活性测定。实验结果表明只有化合物2对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制活性,其IC50为133.4μM,优于阳性对照阿卡波糖（319.8μM）。另外,化合物1、3、6、7、11、12、15、20、21在抗农业病原真菌和抗人体病原细菌的活性测定中表现出了微弱的抑制活性。所有化合物均无乙酰胆碱酯酶抑制活性。本研究结果将为红树林蕨类植物资源的有效保护与高效利用提供模板。
关键词: 卤蕨 ；尖叶卤蕨 ；内生真菌 ；化学成分 ；生物活性
摘要： 兴山五味子（Schisandra incarnata）为五味子属药用植物,其果实和藤茎均可入药。藤茎部分实验室前期已经研究过,而果实部位化学成分尚未研究,为了系统研究兴山五味子,所以开展了此项研究。塞北紫堇（Corydalis impatiens）为罂粟科紫堇属植物,具有清热解毒、镇静、活血化淤等功效,为藏药常用药材。目前对于塞北紫堇的研究不够深入,希望进一步研究其化学成分以及生物活性,为藏药资源的开发和利用提供基础和依据。本论文共分为四章。第一章论述了兴山五味子（S.incarnata）果实及藤茎的化学成分及其生物活性研究。第二章论述了塞北紫堇（C.impatiens）的化学成分及生物活性研究。第三章论述了两株植物内生真菌Alternaria sp.共培养物的次生代谢产物及生物活性的研究。第四章为综述部分,对2014-2019年间五味子科植物中所发现新的三萜、木脂素以及倍半萜类化合物及其来源、全合成和生物活性。利用各种色谱分离技术、波谱解析、圆二色谱和单晶X-ray衍射等方法,从上述两种药用植物和两株植物内生真菌中得到了135个化合物,包括30个新化合物（其中新骨架9个）。从兴山五味子果实及藤茎中发现的化合物以三萜为主,涉及五味子降三萜、羊毛甾烷型和环阿尔廷型三萜。首次发现9个新骨架降三萜化合物,分属4种不同降三萜骨架类型,包括5个含有1-氧螺[6.6]十三烷系统、2个含有5/5/6/11/3骈合环系、1个四环[6.4.0.02,12.09,11]十二烷系统以及1个四环[6.3.0.11,6.02,4]十二烷系统的新骨架降三萜。从塞北紫堇中发现的化合物以异喹啉类生物碱为主,涉及8种不同骨架类型。从两株南五味子植物内生真菌链格孢霉Alternaria sp.共培养物发现的化合物以苯并吡喃酮类似物为主。同时对部分化合物的生物活性进行了筛选。一、兴山五味子化学成分及生物活性研究植物分类学上,曾经将五味子科归属于木兰科,后将其单独划分为一科,包括五味子属（Schisandra）和南五味子属（Kadsura）两属。兴山五味子,木脂藤本,主产于湖北西部及西南部等地。其果实和藤茎均可入药,果实有收敛安神功效,藤茎则具有舒筋活络功效。从该植物果实和藤茎中分离鉴定了101个化合物（新化合物29个）,包括63个三萜、21个木脂素、5个倍半萜以及12个其它类型化合物。本实验研究了40个三萜类成分对T、B淋巴细胞增殖的抑制作用。结果显示,化合物F49的免疫抑制作用最为显著,IC50分别为2.51μg/mL和2.54μg/mL;化合物F23,F36,F46～F48,F52和F57对T淋巴细胞增殖抑制作用的IC50均小于10μg/mL;化合物F36,F46～F48,F52和F57对B淋巴细胞增殖抑制作用的IC50均小于10μg/mL。同时,也测试了20个木脂素类化合物F63～F82的免疫抑制作用,化合物F64对T细胞增殖抑制作用的IC50为9.38μg/mL;化合物F63,F64和F72对B细胞增殖抑制作用的IC50分别为13.40μg/mL,13.11μg/mL和14.93μg/mL。结果表明,木脂素对T淋巴和B淋巴细胞增殖也有抑制作用。初步筛选了兴山五味子果实及藤茎中分离得到部分化合物的细胞毒作用。包括43个三萜类化合物和20个木脂素类化合物对人肝癌细胞HepG2、人乳腺癌细胞MCF-7和人结直肠腺癌细胞HT-29的细胞毒性作用。结果显示各测试化合物对上述肿瘤细胞毒性作用不明显,其中三萜类化合物F36和F57对HepG2有微弱的细胞毒作用,但IC50均接近于100μM。此外,本实验还测试了木脂素类化合物F63～F82的神经保护作用。结果显示:在50μM下,F79对CoCl2诱导的人神经母瘤细胞SH-SY5Y的缺氧和氧化损伤的神经保护作用,能提高细胞存活率为30.96%;F69,F70,F78和F79能提高H2O2损伤模型组细胞存活率分别为10.0%以上。低浓度（5μM）下,木脂素类化合物的神经保护作用不明显。二、塞北紫堇的化学成分及生物活性研究罂粟科Papaveraceae紫堇属Corydalis植物全世界约428种,紫堇属植物的药用部位以全草为主,中医上多用于清热解毒、除湿止痛,治疗感冒发热、疮疡痈肿、溃烂等症。塞北紫堇为紫堇属植物塞北紫堇（C.impatiens）的干燥全草。本实验对采自西藏该植物干燥全草的化学成分进行了系统的研究,并发现了26个化合物,包括25个生物碱。其中化合物C22,C23为首次从紫堇属中发现的成分,C1～C7,C9～C11,C17,C20和C24为首次从塞北紫堇中发现的生物碱成分。我们首次对从塞北紫堇中分离得到的生物碱类成分进行免疫抑制活性的探究。实验结果显示,各测试化合物对T、B淋巴细胞增殖均有一定的免疫抑制抑制作用,其中C11,C15,C16和C18对LPS诱导的B淋巴细胞增殖作用的IC50分别为5.85,7.40,7.75和9.23μg/mL。其次,本实验测试了化合物C1～C6,C8～C21,C23和C25对人肝癌细胞HepG2和人乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒作用。结果显示:在HepG2模型中,化合物C13和C23的IC50分别为18.92μg/mL和2.14μg/mL;所测试化合物对MCF-7细胞毒作用不明显。,最后,本次实验测试了单体化合物C3～C8,C10～C14,C16～C19,C21和C23对CoCl2和H2O2诱导的人神经母瘤细胞SH-SY5Y的缺氧和氧化损伤的神经保护作用,结果显示部分化合物在50μM下具有一定的神经保护作用,在低浓度（5μM）下神经保护作用不明显。三、两株内生真菌Alternaria sp.共培养物次生代谢产物及生物活性研究在实验室前期对南五味子的化学成分系统研究工作基础上。本实验对采自陕西商洛的两株南五味子内生真菌链格孢霉共培养物次生代谢产物及生物活性进行了系统的研究,从其固体共培养物中共分离鉴定了8个化合物,包括1个新化合物。此外,我们测试了部分化合物的生物活性,包括细胞毒性和免疫抑制作用。所测化合物对MCF-7和HepG2几乎没有细胞毒活性;化合物ST2,ST4和ST5对LPS诱导的B细胞增殖均有一定的抑制作用。其中ST4对B淋巴细胞增殖抑制作用的IC50为16.9μg/mL,其它化合物IC50大于40μg/mL。所测试化合物对Con A诱导的T淋巴细胞增殖抑制率均很低。四、五味子科植物化学成分研究进展第四章综述了2014-2019年间五味子科植物中所发现107个新的三萜、95个木脂素以及23个倍半萜类化合物的来源、全合成和生物活性。
关键词: 兴山五味子 ；塞北紫堇 ；内生真菌 ；化学成分 ；生物活性
被引量
5
摘要： 本课题以我国珍稀保护药用植物南方红豆杉内生真菌为研究对象，对其生物多样性及代谢产物和其与宿主的相关性进行系统地研究，以期为开发新的天然药物资源和提高药材品质提供新的思路。
与已报道的同属植物相比，南方红豆杉具有更加丰富的内生真菌种类。从3个产地（江西井冈山、浙江景宁、重庆缙云山）南方红豆杉3个部位（叶片、枝条、树皮中）共分离得到2442株内生真菌，根据菌株群落的培养特征及5.8S和ITS区片段序列相似性比较和系统发育分析，共鉴定为145个分类单元（分子鉴定143个分类单元，2个未能进行分子鉴定的形态型），归属到真菌界3个门6个纲20个目66个属，其中125个分类单元（占总数的86.2%）属于子囊菌门，14个（占9.8%）属于担子菌门，5个（3.4%）属于接合菌门，1个（0.7%）未确定分类地位。南方红豆杉内生真菌生物多样性及丰度受组织类型影响显著，枝条、树皮中内生真菌多样性及丰度为叶片的1.2-3倍。
地理位置、组织类型对南方红豆杉内生真菌组成及分布具有显著的影响，优势类群（目、属、种水平上）存在产地间、部位间明显差异。鉴定的145个分类单元中，仅10个分类单元为3个地点共有，20个分类单元为2个地点共有，其他分类单元只在1个地点出现。Hypoxylon、Pezicula、Pestalotiopsis为不同产地特有的优势属；最优势目Magnaporthales、Botryosphaeriales、Glomerellales、Diaporthales、Xylariales、Helotiales、Hypocreales，最优势属Phyllosticta/Guignardia、Colletotrichum/Glomerella、Phomopsis、Hypocrea/Trichoderma、Pezicula的分布具有显著的组织特异性。大多数优势种都表现出明显的地理特异性或组织特异性，许多分离频率低的菌还表现出地理专一性或组织专一性。由于产地和部位的作用，更多种类的内生真菌从南方红豆杉中获得。南方红豆杉丰富多样的内生真菌种类是极其重要的资源宝库，为内生真菌后续研究工作提供了重要素材。
利用高效液相色谱法测定有效成分（Taxol、10-DABⅢ）的含量，并结合南方红豆杉相关化学成分的HPLC-TOF/MS数据分析，比较3个产地南方红豆杉3个部位化学成分包括有效成分的差异。结果表明南方红豆杉Taxol与10-DABⅢ含量存在部位间、产地间显著差异。3个产地的南方红豆杉的Taxol含量均以树皮部位明显高于枝条、叶片部分，且以江西产地树皮含量最高；3个产地的南方红豆杉10-DABⅢ含量则均以叶片明显高于枝条、树皮部分，且以江西产地叶片中含量最高。
从化学成分质谱数据初步鉴别结果来看，南方红豆杉植物中的化学成分极为复杂，包含紫杉烷类化合物，部分松香烷类、木脂素类等化合物。南方红豆杉叶片、枝条、树皮3个部位化学成分的差异显著，这与内生真菌菌群部位间的差异结果相符。通过对飞行时间质谱数据的PLSDA分析筛选出18个在部位间分布有明显差异的化合物，比对确立的南方红豆杉化学成分数据库初步鉴别出11个化合物，8个紫杉烷二萜类（P2、P5-P7、N1、N2、N7-N9）、1个松香烷二萜类（N6）、和2个木脂素类（N3、N5）。
进一步考察南方红豆杉化学成分包括有效成分与内生真菌之间的关系，发现18个部位间差异化合物的量与一些具有组织特异性的内生真菌有关，它们之间存在正相关关系和负相关关系，表明内生真菌部位间的差异与宿主植物部位间成分差异相关。有效成分（Taxol与10-DABⅢ）含量与一些有组织特异性的优势类群的分布存在显著的相关性。与Taxol含量显著相关的有：在目水平上，Helotiales、Hypocreales、Xylariales目；在属水平上，Hypocrea，Pezicula属；在种水平上，Hypocrealixii。与10-DABⅢ的含量显著相关的有：在目水平上，Botryosphaeriales、Magnaporthales目；在属水平上，Fusarium/Gibberella、Phyllosticta/Guignardia属；在种水平上，Colletotrichumgloeosporioides,Glomerella lindemuthiana,Magnaporthales sp.2、Xylariales sp.1。Taxol或10-DABⅢ的含量和与其相关的不同内生真菌类群的相对频率之间的关系均最符合立方模型（CubicModel）。研究阐明内生真菌对药材品质（有效成分的含量）的影响，对提高药材品质、筛选优质药材具有重要的理论价值和现实意义。
通过稻瘟霉模型筛选和与宿主化学成分比较分析相结合的方法，对鉴定的145个内生真菌分类单元发酵提取物进行筛选，以Perenniporiatephropora（Z41）的抗稻瘟霉活性最好，并且与宿主共有的分子特征离子数目最多，因此对该菌发酵物乙酸乙酯提取部位进行分离，利用波谱方法共鉴定了5个化合物，1个新型的倍半萜类化合物PerenniporinA和4个已知化合物2-5依次为ergosterol、rel-(+)-(2aR,5R,5aR,8S,8aS,8bR)-decahydro-2,2,5,8-tetramethyl-2H-naphtho[1,8-bc]furan-5-ol、albicanol、para-methoxybenzoicacid，这些化合物都是首次从Perenniporia属真菌分离得到。Perenniporia tephropora发酵物的乙酸乙酯提取物（EPT）及5个化合物对HeLa细胞，SMMC-7721和PANC-1细胞系具有较好的细胞毒活性。倍半萜类化合物1、3、4都是潜在的肿瘤抑制剂。以生物活性和化学成分分析相结合的方法筛选得到的担子菌门内生真菌Perenniporia tephropora在筛选活性或新型化合物展现出较好的应用前景。
关键词: 南方红豆杉 ；内生真菌 ；优势类群 ；次生代谢产物 ；HPLC-TOF/MS ；抗肿瘤活性
被引量
23
摘要： 本文从柏木属（Cupressus）植物中分离内生真菌,测定其发酵物的抗单胺氧化酶（MAO）、乙酰胆碱酯酶（AChE）和磷酸二酯酶1（PDE1）活性,并对部分内生真菌的化学成分进行了研究。结果如下: 1.内生真菌分离:从四种柏木属植物中一共分离得到51株内生真菌。其中,从干香柏（Cupressus duclouxiana）中分离得到11株,从西藏柏木（Cupressus torulosa）中分离得到13株,从岷江柏木（Cupressus chengiana）中分离得到13株,从柏木（Cupressus funebris）中分离得到14株。 2.活性测定:将分离得到的51株内生真菌分别用PDB培养基和大米固体培养基进行了小批量发酵,通过有机溶剂提取得到153份粗提物样品。对这些样品的抗MAO、AChE、PDE1活性进行测定。结果表明,所有样品对MAO、AChE的抑制活性均较弱。两个样品MJ-j-3-C和BM-j-16-A对PDE1具有较强抑制活性,IC50值分别为46.74±3.16μg/m L和53.96±7.32μg/m L。这两份样品分别来自菌株MJ-j-3的大米培养基发酵粗提物和菌株BM-j-16的PDB培养基发酵粗提物。 3.PDE1活性测定平台的建立:通过筛选最适酶浓度、最适底物浓度、最适pH值、最佳反应温度及反应时长等,基于紫外分光原理利用酶标仪构建了PDE1活性测定平台。最佳反应条件为:PDE1初浓度0.09 UI/m L,底物初浓度6.5 mM,pH 8.9,反应温度45℃,反应时间15 min,L-半胱氨酸(IC50=6.12±0.54μg/m L)为阳性对照。 4.化学成分研究:利用大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、半制备硅胶薄层层析（TLC）等分离手段和NMR波谱鉴定方法,从两种内生真菌中分离并鉴定了20个已知单体化合物:（4R*,5S*）-5-羟基己-4-内酯(（4R*,5S*）-5-Hydroxyhexan-4-olide,1)、（4S,5S）-5-羟基-4-己内酯(（4S,5S）-5-hydroxy-4-hexanolide,2)、脱水甲羟戊内酯（Anhydromevalonolactone,3）、（3R,4R）-3-羟基-3,4-二甲基四氢-2H-吡喃-1-酮(（3R,4R）-3-hydroxy-3,4-dimethyltetrahydro-2H-pyran-1-one,4)、5-羟基-3-羟甲基-2-甲基-7-甲氧基色酮（5-hydroxy-3-hydroxymethyl-2-methyl-7-methoxychromone,5）、Cyclonerodiol（6）、Trichocarotin E（7）、Trichocarane B（8）、Didehydrobisdethio-bis（methylthio）gliotoxin（9）、绿毛菌醇（Viridiol,10）、CAF-603（11）、甘油-1-二十六烷酸酯（2,3-Dihydroxypropyl hexacosanoate,12）、6,9-环氧麦角甾-7,22-二烯-3-醇（6,9-Epoxyergosta-7,22-dien-3-ol,13）、亚油酸甲酯（Methyl linoleate,14）、epi-Guaidiol A（15）、（-）-cadin-4,10（15）-dien-11-oic acid（16）、Trichodermapene C（17）、麦角甾醇（Ergosterol,18）、过氧麦角甾醇（Ergosterol endoperoxide,19）、布雷非德菌素A（Brefeldin A,20）。其中化合物1-19分离自菌株GX-y-3（Trichoderma virens）,化合物20分离自菌株BM-g-3（Fusarium reticulatum）。化合物4作为天然产物首次被分离,化合物1、3、5、14、17、首次从该菌中分离得到,化合物2、9、12、15、16、19首次从该属真菌中分离得到,化合物20首次分离自Fusarium reticulatum。对它们的抗MAO、AChE、PDE1活性进行了测定,以上化合物对MAO、AChE的抑制活性均较弱,化合物10、14对PDE1具有中等的抑制活性,它们的IC50分别为65.93±0.09μg/m L和56.74±1.16μg/m L。 5.菌种鉴定:结合形态学和分子生物学方法,鉴定了部分内生真菌的种属。BM-j-16被鉴定为炭团菌属（Hypoxylon sp.）真菌;GX-y-3被鉴定为绿木霉菌（Trichoderma virens）;BM-g-3被鉴定为网状镰刀菌（Fusarium reticulatum）;MJ-j-3被鉴定为篮状菌属真菌Talaromyces brevis。
关键词: 内生真菌 ；次级代谢产物 ；生物活性 ；磷酸二酯酶1
摘要： 近些年来的研究表明,药用植物内生真菌可以产生许多结构新颖的活性次级代谢物,并且已经成为发现新的具有天然活性物质的重要来源。因此,本论文选取五种药用植物作为材料,对其内生真菌、内生真菌次级代谢产物的生物活性以及化学成分等方面进行研究,研究内容和结果如下：
1、运用组织块法,分别从药用植物荷叶(Nelumbo nucifera)、雷公藤(Tripterygium wilfordii)、钩藤(Uncaria tomentosa)、止泻木(Holarrhena antidysenterica)和大狼毒(Euphorbia nematocypha)的植物组织中分离得到14株、12株、7株、5株、8株,共计46株内生真菌。对这46株内生真菌的发酵液和菌丝体进行提取,得到了发酵液乙酸乙酯萃取物和菌丝体乙醇提取物。
2、运用酶标法,对内生真菌粗提物进行抗单胺氧化酶和抗乙酰胆碱酯酶活性的检测。抗单胺氧化酶活性显示,有24种内生真菌提取物具有单胺氧化酶抑制活性,在终浓度为167μg/mL下,抑制率在50%以上,其中有8种的抑制率在70%以上,以GT-7发酵液萃取物的抑酶活性最强,达92.53%。具有单胺氧化酶抑制活性的样品分别占各植物内生真菌总样品数的42.86%、58.33%、42.86%、40%、62.5%。抗乙酰胆碱酯酶活性显示,有2种内生真菌的提取物具有抑制乙酰胆碱酯酶活性,在终浓度为100μg/mL浓度下,其抑制率在50%以上,其中以ZXM-5发酵液萃取物的抑酶活性最强,达61.81%。
3、运用多种现代色谱(硅胶柱色谱法,制备薄层色谱法,凝胶色谱,HPLC等)分离技术,对LGT-2、LGT-4、GT-5菌株发酵液的乙酸乙酯萃取物和LGT-4菌株菌丝体醇提物中的化合物进行分离纯化,并借助'H-NMR、13C-NMR、ESI-MS、 HMBC、HSQC、1H-'HCOSY、NOESY、MS、IR等手段鉴定了23个化合物,分别被鉴定为：Citrinin(橘青霉素)(1)、4,6,8(14),22(23)-Tetraen-3-one-ergostane(4,6,8(14),22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷)(2)、2-Hydroxy-14-tricosenvic acid(2-羟基-14-二十三烯酸)(3)、Wortmannin(渥曼青霉素)(4)、Wortmannolone(5)、2,4-Dihydroxy-6-((R)-4-hydroxy-2-oxopentyl)-3-Methylbenzaldehyde (6)、(+)-Brefel dinA (布雷菲德菌素A,BFA)(7)、(22E,24R)-Ergosta-5,7,22-trien-3β-ol(8)、Epoxyvirone(9)、Secovironolide(10)、11-Desacetoxywortmannin-17β-ol(11)、Ergosta-7,22-dien-3(3,5a,6a-triol(cerevisterol)(12)、3-Dihydrovirone(13)、11-Desacetoxywortmannin (14)、Deacetylisowortmin(15)、Ergosterol(麦角甾醇)(16)、Campesterol (17)、Phenylalanine(苯丙氨酸)(18)、Physcion(大黄素甲醚)(19)、Chrysophanol(大黄酚)(20)、Rhein(大黄酸)、(21)Ergosterol peroxide(麦角甾醇过氧化物)(22)、Flufuran(23)。以上化合物中,化合物9、10为新化合物,其中10为virone类呋喃甾体在B环发生裂环重排后得到的一个新骨架化合物。
4、对分离出来的23个化合物进行抗单胺氧化酶和抗乙酰胆碱酯酶活性检测,结果表明,化合物4、10、23显示了中等强度的单胺氧化酶抑制活性,在终浓度167μg/mL时其抑制率分别为78.40%、83.55%、88.67%,其IC50值分别为91.22μg/mL、40.17μg/mL、29.19μg/mL。化合物1显示了中等强度的乙酰胆碱酯酶抑制活性,在终浓度167μg/mL时其抑制率为56.37%, IC50值为147.74μg/mL。
5、运用分子生物学手段,对菌株LGT-2、LGT-4和菌株GT-5的ITS区序列分析,在Blast上与其同源性较高的ITS rDNA序列进行比对,通过聚类分析,并结合菌落形态颜色及菌丝体、分生孢子梗的观察,鉴定菌株LGT-2和GT-5均为曲霉属(Aspergillus sp.)真菌,菌株LGT-4为裸节菌属(Talaromyces sp.)真菌。将菌株ITS序列提交到NCBI (The National Center for Biotechnology Information)数据库并收录,菌株LGT-2、LGT-4、GT-5录序列号分别为KF934203、KF850714、 KF934202。
关键词: 内生真菌 ；次级代谢产物 ；分子生物学鉴定 ；生物活性
被引量
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摘要： 随着社会老龄化进程不断加剧，随之而来的以阿兹海默症为代表的神经退行性疾病的防治，已成为重大的社会公共卫生问题。具有神经保护作用的神经营养因子是治疗神经退行性疾病的重要潜在药物。 瑞香科沉香属植物白木香Aquilaria sinensis(Lour.)Spreng.含有树脂的心材是我国传统中药材沉香。我们在前期的筛选中发现，沉香的主要成分沉香四醇对PC12细胞分化有一定的促进作用。为进一步阐明沉香中的活性成分，我们对沉香的活性部位进行了化学成分研究，并对从中分离得到的化合物进行了促PC12细胞分化活性评价。同时，因为沉香的形成可能与白木香体内的内生真菌密切相关，为了了解其结香机理，从而更好地指导生产，我们对白木香树脂部的内生真菌进行了分离鉴定及筛选。 综合运用各种色谱方法和结构解析技术，从沉香药材乙醇提取物中分离、鉴定了22个化合物。化合物类型包括2-(2-苯乙基)色酮类、倍半萜、苯丙素苷类等。其中，新化合物9个，包括6个2-(2-苯乙基)色酮，即(5S,6R，7R，8S,7'R)-7'-羟基沉香四醇(1)、(5S,6R，7R，8S，7'S)-7'-羟基沉香四醇(2)、白木香素A(3)、白木香素B(4)、白木香酮A(5)和白木香酮B(6);倍半萜类3个，即(4S,5S,7S,8S,10S,13R)-7,8,13-trihydroxyrotunda-1,11-dien-3-one(7)、(4S,5S,7S,8S,10S,13S)-7,8,13-trihydroxyrotunda-1,11-dien-3-one(8)和(4R,5S,7S,8S,10S,13S)-7,8,13-trihydroxyrotunda-1,11-dien-3-one(9)。 对所分离的化合物进行促NGF诱导的PC12细胞分化活性测试。结果显示，部分化合物对PC12细胞的分化有一定的促进作用，其中3个2-(2-苯乙基)色酮二聚体类化合物白木香酮A(5)，(-)-aquisinenone G(17)，(5S,6R，7R，8S)-2-(2-Phenylethyl)-5,6,7-trihydroxy-5,6,7,8-tetrahydro-8-[2-(2-phenylethyl)chromonyl-6-oxy]chromone(18)活性较好。当化合物5、17、18和浓度为10μM时，PC12细胞分化率分别为11.09％、12.04％和14.18％和;阳性对照为NGF，浓度50ng/mL时，PC12细胞分化率分别为19.32％。5，6，7,8-四氢-2-（2-苯乙基）色酮二聚体的活性优于单体。 为了进一步指导生产，找到可促进沉香产生的菌株，我们对新鲜的白木香树脂部及健康部位进行了内生真菌分离工作。共分离得到39株内生真菌，其中从白木香含油脂木块中分离得到36株，由白木香健康的木块中分离得到仅3株。这些内生真菌分别属于11个属，其中占主要优势属为镰孢属Fusarium(30.77％)、黑孢霉属Nigrospora(20.51％)、多节孢属Nodulisporium与炭团菌属Hypoxylon分别占11.11％，其余属例如链炭垫菌属Nemania和附球菌属Epicoccum等占比较少。通过顶空固相微萃取气质联用(HS-SPME-GC-MS)对上述内生真菌的代谢产物进行分析，我们发现炭垫菌属Nemania sp.(KET-30)可以产生跟沉香属植物相类似的挥发性成分，如Alloaromadendrene(S2)、2-Isopropenyl-4a，8-dimethyl-1,2,3,4,4a,5,6,7-octahydronaphthalene(S3)、[1R-(1α,7β.,8aα)]-1,2,3,5,6,7,8,8a-Octahydro-1,8a-dimethyl-7-(1-methylethenyl)-naphthalene(S4)和[2R-(2α,4aα,8aβ)]-1,2,3,4,4a,5,6,8a-Octahydro-4a,8-dimethyl-2-(1-methylethenyl)-naphthalene(S5)，具有很好应用潜力。 本研究结果丰富了沉香的化学成分研究，得到了符合预期的活性化合物;在沉香内生真菌分离筛选工作中，找到了有应用潜力的内生真菌（Nemania sp.）。本研究为沉香的进一步综合开发提供了基础。
关键词: 白木香 ；树脂部 ；化学成分 ；内生真菌 ；分离鉴定
摘要： 大量研究已证明,药用植物内生真菌已成为寻找结构新颖的活性物质的天然宝库。因此,本论文以5种天然药材作为研究对象,分离并纯化了这5种植物及其不同组织部位中的内生真菌,然后检测其代谢产物粗提物的生物活性,对部分有活性菌株代谢物的化学组成进行了初探。研究内容和结果如下:1、内生真菌的分离纯化:通过组织切块法,对陇蜀杜鹃(Rhododendron przewalskii)、攀茎钩藤(Uncaria scandens)、灰绿黄堇(Corydalis adunca)、鹿蹄橐吾(Ligularia hodgsonii)、亚欧唐松草(Thalictrum minus L.)五种天然药材不同组织部位中的内生真菌进行分离、纯化,共获得31株内生真菌,分别为:陇蜀杜鹃18株;攀茎钩藤9株;灰绿黄堇1株;鹿蹄槖吾2株;亚欧唐松草1株。其中根中分离得到的内生真菌占10%,叶中分离的占19%,茎中分离的占71%,植物茎中内生真菌分布最多,叶和根中分布较少。使用PDB培养基液态发酵技术、乙酸乙酯萃取、甲醇回流提取方法,获得了62个内生真菌粗提物。2、活性初探:通过酶标法研究了所有内生真菌提取物的抗单胺氧化酶活性,多种内生真菌粗提物均有不同程度的抗单胺氧化酶活性,50%以上有3株,分别为LSDJ-J-4、LSDJ-J-6和QDE-6,其菌液萃取物的百分抑制率分别为51.67%、50.72%和54.65%。使用改良Ellman法研究了62个内生真菌提取物的抗AChE活性,结果显示菌液和菌丝体粗取物对AChE有一定抑制活性,其中有9株内生真菌提取物的乙酰胆碱酯酶抑制率在60%以上,分别为:LSDJ-J-1、LSDJ-J-2、LSDJ-J-6、LSDJ-J-9、LSDJ-J-10、LSDJ-G-1、QDE-6、LTTW-Y-1和TSC-J-1。采用玻片浸渍法测定了所有内生真菌提取物的杀朱砂叶螨活性,其中3株菌株的提取物,其24 h致死率达50%以上,分别为:QDE-4、QDE-5和QDE-6。采用有毒培养基法测定所有内生真菌提取物的辣椒晚疫病菌抑制活性,研究表明有8株菌的提取物对辣椒疫霉菌的抑菌活性在80%以上,分别为:LSDJ-J-1、LSDJ-J-2、LSDJ-J-6、LSDJ-J-8、QDE-4、QDE-6、LTTW-Y-1和TSC-J-1。综合以上结果,菌株QDE-6(分自攀茎钩藤)在多种活性测定实验中均显示出较高活性,值得进一步研究其活性成分。3、化学成分初探:通过TLC薄层层析色谱、大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、凝胶柱色谱、高效液相色谱等多种色谱手段对内生真菌LSDJ-J-6和QDE-6的次级代谢物化学成分进行了研究。共分离获得11个单体化合物,利用1H-NMR、13C-NMR等波谱技术,对这些化合物进行了结构鉴定,最终确定了其中5个单体化合物,分别是Asper giketone(5)、Gliotoxin(6)、Pseurotin A2(7)、Brevianamide F(8)、Pseurotin A1(11)。4、菌种鉴定:通过分子生物学方法及形态学分析对部分活性菌株进行了菌种鉴定,确定了菌株的归属。菌株LSDJ-J-2被鉴定为链格孢属(Alternaria sp.)真菌;菌株LSDJ-J-6被鉴定为木霉菌属(Trichoderma sp.)真菌;菌株QDE-6被鉴定为黑曲霉属(Aspergillus sp.)真菌;菌株LTTW-Y-1被鉴定为黑曲霉属(Aspergillus sp.)真菌;菌株TSC-J-1被鉴定为镰胞菌属(Fusarium sp.)真菌。
关键词: 内生真菌 ；活性成分 ；结构鉴定 ；菌种鉴定
被引量
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摘要： 近些年来的研究表明，药用植物内生真菌可以产生许多结构新颖的活性次级代谢物，并且已经成为发现新的具有天然活性物质的重要来源。因此，本论文选取五种药用植物作为材料，对其内生真菌、内生真菌次级代谢产物的生物活性以及化学成分等方面进行研究，研究内容和结果如下: 1、运用组织块法，分别从药用植物荷叶(Nelumbo nucifera)、雷公藤（Tripterygiumwilfordii）、钩藤（Uncaria tomentosa）、止泻木（Holarrhena antidysenterica）和大狼毒(Euphorbia nematocypha)的植物组织中分离得到14株、12株、7株、5株、8株，共计46株内生真菌。对这46株内生真菌的发酵液和菌丝体进行提取，得到了发酵液乙酸乙酯萃取物和菌丝体乙醇提取物。 2、运用酶标法，对内生真菌粗提物进行抗单胺氧化酶和抗乙酰胆碱酯酶活性的检测。抗单胺氧化酶活性显示，有24种内生真菌提取物具有单胺氧化酶抑制活性，在终浓度为167μg/mL下，抑制率在50％以上，其中有8种的抑制率在80％以上，以GT-7发酵液萃取物的抑酶活性最强，达92.53％。具有单胺氧化酶抑制活性的样品分别占各植物内生真菌总样品数的42.86％、58.33％、42.86％、40％、62.5％。抗乙酰胆碱酯酶活性显示，有2种内生真菌的提取物具有抑制乙酰胆碱酯酶活性，在终浓度为100μ g/mL浓度下，其抑制率在50％以上，其中以ZXM-5发酵液萃取物的抑酶活性最强，达61.81％。 3、运用多种现代色谱（硅胶柱色谱法，制备薄层色谱法，凝胶色谱，HPLC等）分离技术，对LGT-2、LGT-4、GT-5菌株发酵液的乙酸乙酯萃取物和LGT-4菌株菌丝体醇提物中的化合物进行分离纯化，并借助1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS、HMBC、HSQC、1H-1HCOSY、NOESY、MS、IR等手段鉴定了23个化合物，分别被鉴定为:citrinin（橘青霉素）(1)、4，6，8(14)，22(23)-tetraen-3-one-ergostane(4，6，8(14)，22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷）(2)、2-Hydroxy-14-tricosenvic acid（2-羟基-14-二十三烯酸）(3)、wortmannin（渥曼青霉素）(4)、wortmannolone(5)、2，4-Dihydroxy-6-((R)-4-hydroxy-2-oxopentyl)-3-Methylbenzaldehyde(6)、(+)-BrefeldinA（布雷菲德菌素A，BFA）(7)、(22E，24R)-Ergosta-5,7,22-trien-3β-ol(8)、 epoxyvirone(9)、 secovironolide(10)、11-desacetoxywortmannin(11)、 ergosta-7,22-dien-3β,5α,6α-triol(cerevisterol)(12)、3-dihydrovirone(13)、11-desacotoxywortmannin(14)、deacetylisowortmin(15)、ergosterol（麦角甾醇）(16)、Campesterol(17)、Phenylalanine（苯丙氨酸）(18)、Physcion（大黄素甲醚）(19)、Chrysophanol（大黄酚）(20)、Rhein（大黄酸）、(21)、ergosterol peroxide（麦角甾醇过氧化物）(22)、Flufuran(23)。以上化合物中，化合物9、10为新化合物，其中10为virone类呋喃甾体在B环发生裂环重排后得到的一个新骨架化合物。 4、对分离出来的23个化合物进行抗单胺氧化酶和抗乙酰胆碱酯酶活性检测，结果表明，化合物4、10、23显示了中等强度的单胺氧化酶抑制活性，在终浓度167μg/mL时其抑制率分别为78.40％、83.55％、88.67％，其IC50值分别为91.22μg/mL、40.17μg/mL、29.19μg/mL。化合物1显示了中等强度的乙酰胆碱酯酶抑制活性，在终浓度167μg/mL时其抑制率为56.37％，IC50值为147.74μg/mL。 5、运用分子生物学手段，对菌株LGT-2、LGT-4和菌株GT-5的ITS区序列分析，在Blast上与其同源性较高的ITS rDNA序列进行比对，通过聚类分析，并结合菌落形态颜色及菌丝体、分生孢子梗的观察，鉴定菌株LGT-2和GT-5均为曲霉属(Aspergillussp.)真菌，菌株LGT-4为裸节菌属（Talaromyces sp.）真菌。将菌株ITS序列提交到NCBI（The National Center for Biotechnology Information）数据库并收录，菌株LGT-2、LGT-4、GT-5收录序列号分别为KF934203、 KF850714、KF934202。
关键词: 内生真菌 ；次级代谢产物 ；分子生物学鉴定 ；生物活性 ；药用植物 ；分离纯化