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1. 认领

【期刊论文】 • 罗颖懿 ¹李运容 ²雷胄熙 ¹袁媛 ³

+2位作者 • 《中国实验方剂学杂志》 • 2019年第1期 43 - 50，共8页

机构： [1] 广州中医药大学[2] 广西国际壮医医院[3] 中国中医科学院中药资源中心 +1个机构

摘要：目的:对不同道地种源铁皮石斛的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ(芹菜素-6,8-二-C-葡萄糖苷,vicenin Ⅱ)进行体外抗氧化及诱导肝癌HepG2细胞凋亡的活性研究。方法:采用2,2-联苯基^(-1)-苦基肼法(DPPH),2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸法(ABTS)和铜离子还原法对vicenin Ⅱ(0.005~1g·L^-1)进行体外的抗氧化活性研究;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测viceninⅡ(12.5~100μmol·L^-1)对人6种不同的肿瘤细胞体外的增殖抑制作用;后续凋亡实验viceninⅡ浓度为75μmol·L^-1,采用Hoechst33258染色,荧光显微镜进行HepG2细胞形态学观察;应用流式细胞术,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)检测HepG2细胞凋亡率;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路及相关凋亡基因的mRNA表达。结果:Vicenin Ⅱ质量浓度为1g·L^-1时,对DPPH的清除率和Cu2+还原率为48.82%和22.01%(P<0.01);当viceninⅡ质量浓度为0.5g·L^-1时,对ABTS清除率为86.88%(P<0.01);viceninⅡ显著抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,75μmol·L^-1的vicenin Ⅱ作用48h后,细胞存活率为45.69%(P<0.01),细胞凋亡率为14.57%(P<0.01),升高B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2,半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8,p38,细胞外信号调节激(ERK),c-Jun氨基末端酶(JNK),核转录因子-κB(NF-κB)mRNA表达(P<0.01)。结论:铁皮石斛不同道地种源的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ在体外具有一定的抗氧化作用,能有效抑制HepG2细胞增殖,并可能通过调控MAPK通路及Bax/Bcl-2途径诱导HepG2细胞凋亡。

摘要译文

关键词: 铁皮石斛 ；黄酮苷；新西兰牡荆苷Ⅱ ；抗氧化；HepG2细胞 ；凋亡

引用

被引量 35

2. 认领

【学位/硕士】 • 罗颖懿 • 广州中医药大学 • 导师：魏刚 • 2019年

摘要：肺癌是目前世界上恶性肿瘤发病率和死亡率最高的癌症,肝癌则是全球死亡率第三高的癌症。诱导癌细胞凋亡是目前抗癌的重要研究方向之一,通过利用药物诱导肿瘤细胞发生程序性死亡,达到逐渐消除肿瘤的目的。恶性肿瘤发生转移是癌症患者死亡的最主要原因,上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)与肿瘤的侵袭与转移密切相关,转化生长因子(Transforming Growth Factor-[β1,TGF-β1)能有效诱导细胞发生EMT。新西兰牡荆苷Ⅱ(ViceninⅡ)是课题组前期从铁皮石斛中提取分离得到的共性特征黄酮碳苷成分,其诱导肿瘤凋亡的研究较少,抗肿瘤转移及EMT的作用机制的研究尚无报道。因此本研究从诱导肝癌HepG2细胞凋亡及抑制TGF-β1诱导的肺癌A549与H1299细胞EMT、迁移和侵袭的分子机制两个方面探讨新西兰牡荆苷Ⅱ的抗肿瘤活性,为新西兰牡荆苷Ⅱ及铁皮石斛黄酮类成分的抗肿瘤活性提供重要的实验基础及补充依据。目的:研究新西兰牡荆苷Ⅱ诱导肝癌HepG2细胞凋亡及抑制TGF-β1诱导的肺癌A549及H1299细胞EMT、迁移和侵袭的分子机制。方法:1.新西兰牡荆苷Ⅱ诱导人肝癌HepG2细胞凋亡研究(1)MTT法检测新西兰牡荆苷Ⅱ对不同肿瘤细胞细胞增殖的影响,筛选出效果最好的细胞模型与合适的给药浓度开展后续凋亡实验;(2)Hoechst33258染色观察HepG2细胞凋亡形态学改变;(3)Annexin V-PI双染法,流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡率;(4)实时逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)测定凋亡及MAPK通路相关基因的表达。2.新西兰牡荆苷Ⅱ抑制TGF-p1诱导的肺癌A549及H1299细胞EMT的机制研究(1)MTT法检测新西兰牡荆苷Ⅱ与TGF-β1对肺癌A549及H1299细胞毒作用,筛选出合适的TGF-[β1造模浓度与新西兰牡荆苷Ⅱ给药浓度;(2)倒置显微镜观察新西兰牡荆苷Ⅱ与TGF-β1对肺癌细胞的形态学变化;(3)克隆形成实验检测新西兰牡荆苷Ⅱ对TGF-β1诱导的肺癌细胞增殖能力影响;(4)划痕实验检测新西兰牡荆苷Ⅱ对TGF-β1诱导的肺癌细胞迁移能力影响;(5)Transwell小室实验检测新西兰牡荆苷Ⅱ对TGF-β1诱导的肺癌细胞的侵袭作用;(6)免疫荧光实验检测新西兰牡荆苷Ⅱ对TGF-β1诱导的肺癌A549及H1299细胞EMT上皮标志物E-cadherin及间质标志物Vimentin表达的影响;(7)蛋白免疫印迹法(Western boltting)实验检测新西兰牡荆苷Ⅱ及路通抑制剂LY294002和SB431542对TGF-β1诱导的肺癌细胞EMT标志物及PI3K/Akt/mTOR和TGF-β/Smad通路蛋白表达影响;结果:1.新西兰牡荆苷Ⅱ诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡(1)12.5-100μM新西兰牡荆苷Ⅱ处理不同肿瘤细胞后,MTT实验结果显示新西兰牡荆苷Ⅱ对肝癌HepG2细胞增殖抑制里最强,其次是肺腺癌A549细胞、宫颈癌Hela细胞、胃癌SGC7901细胞、结肠癌HT-29细胞、和黑色素瘤B16细胞,故选择细胞模型为肝癌细胞;新西兰牡荆苷Ⅱ具有时间依赖性,48h细胞存活率显著低于于24h,当新西兰牡荆苷Ⅱ浓度小于75μM,HepG2细胞存活率呈浓度依赖性地下降,高于75μM存活率基本不变,故选用给药浓度为75 μM,给药时间为48h开展后续凋亡实验。新西兰牡荆苷Ⅱ的IC 50为50.35μM。(2)倒置显微镜下观察,新西兰牡荆苷Ⅱ组HepG2细胞表现出数量减少,体积缩小,细胞质缩合,膜起泡等调亡特征。用Hoechst 33258染色后在荧光显微镜下观察,正常细胞细胞核较大,无颗粒块状荧光,给药组细胞可以观察到细胞核固缩,染色质缩合,核内出现凋亡小体,可见浓染致密的颗粒块状荧光且荧光较强的凋亡典型特征。(3)流式细胞仪测定75μM新西兰牡荆苷Ⅱ作用HepG2细胞48 h后细胞的总凋亡率为14.57±0.91%(p<0.01),与空白对照组相比有显著性差异,表明新西兰牡荆苷Ⅱ能显著促进HepG2细胞凋亡。(4)RT-qPCR检测相关基因的表达量。75μM新西兰牡荆苷Ⅱ作用于HepG2细胞48 h后能显著提高促凋亡基因Bax的表达,降低抗凋亡基因Bcl-2的表达,提高Bax/Bcl-2比值(P<0.01),提高直接参与细胞凋亡caspase 8的mRNA表达(P<0.01),而TNF-α的水平无显著变化;另外MAPK信号通路中关键基因ERK、JNK、P38和NFκB的表达水平显著升高(P<0.01),而ERK、JNK、P38和NFκB表达上调能促进细胞凋亡的发生;表明新西兰牡荆苷Ⅱ可能通过MAPK通路和Bax/Bcl-2、caspase途径诱导HepG2细胞发生凋亡效应。2.新西兰牡荆苷Ⅱ通通过抑制TGF-β/Smad和PI3K/Akt/mTOR信号通路TGF-β1诱导的人肺癌A549及H1299细胞的EMT、迁移与侵袭(1)MTT结果显示小于10 μM的新西兰牡荆苷Ⅱ对肺癌A549及H1299细胞无显著的杀伤作用,当浓度大于10μM,药物浓度及时间依赖性地显著抑制细胞增殖。小于5ng/mL的TGF-β1能促进A549细胞增殖,对H1299细胞无毒作用,当浓度大于5ng/mL,TGF-β1浓度及时间依赖性地显著抑制A549及H1299细胞增殖。故最终选用新西兰牡荆苷Ⅱ的浓度为无细胞毒性的低浓度(2.5、5、10μM),TGF-β1的造模浓度为5 ng/mL进行后续EMT相关实验;(2)倒置显微镜观察5 ng/mL TGF-β1可诱导A549及H1299细胞外形变瘦长,形态变为细长纺锤状,细胞间连接消失,成功地诱导了 EMT的发生,而2.5、5、1OμM新西兰牡荆苷Ⅱ浓度依赖性地使这些EMT的典型特征逐渐消失,从细胞形态学上新西兰牡荆苷Ⅱ能抑制TGF-β1诱导的肺癌A549及H1299细胞的EMT;(3)克隆形成实验结果表明2.5、5、10μM新西兰牡荆苷Ⅱ能浓度依赖性地抑制TGF-β1诱导增加的A549及H1299细胞克隆能力;(4)划痕和Transwell小室实验结果表明2.5、5、10μM新西兰牡荆苷Ⅱ能浓度依赖性地抑制TGF-β1诱导增强的肺癌A549及H1299细胞迁移与侵袭能力;(5)免疫荧光实验结果表明10μM新西兰牡荆苷Ⅱ显著增强A549及H1299细胞中TGF-β1诱导减弱的上皮标志物E-cadherin绿色荧光表达,减弱TGF-β1诱导增强的间质标志物Vimentin绿色荧光表达。(6)Western boltting实验结果表明2.5、5、10μM新西兰牡荆苷Ⅱ浓度依赖性地增强TGF-β1诱导减弱的A549及H1299细胞的上皮标志物蛋白E-cadherin、紧密连接蛋白ZO-1及Claudin-1的蛋白表达量,减弱TGF-β1诱导增强的间质标志物蛋白N-cadherin及vimentin、基质金属蛋白酶蛋白MMP-2、转录因子Snail及Slug的蛋白表达;(7)Westernboltting研究EMT作用机制的结果表明2.5、5、10μM新西兰牡荆苷Ⅱ能浓度依赖性地降低TGF-β1诱导的A549及H1299细胞PI3K/Akt/mTOR通路蛋白p-mTOR、p-Akt、p-p70S6K 以及 TGF-β/Smad 通路蛋白 p-Smad2 和 p-Smad3 的蛋白表达;PI3K/Akt通路抑制剂LY294002组和TGF-β/Smad路通抑制剂SB431542组能显著减少TGF-β1诱导上调的N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug和MMP-2的蛋白表达,显著增加TGF-β1诱导下调的E-cadherin和ZO-1的蛋白表达水平,新西兰牡荆苷Ⅱ组与抑制剂组具有相同的效应,进一步证明了新西兰牡荆苷Ⅱ能通过抑制PI3K/Akt/mTOR及TGF-β/Smad信号通路逆转TGF-β1诱导的肺癌A549及H1299细胞的EMT。结论:本研究证明了新西兰牡荆苷Ⅱ可能通过MAPK通路抑制人肝癌HepG2细胞增殖并诱导其凋亡;此外,新西兰牡荆苷Ⅱ还能通过抑制TGF-β/Smad和PI3K/Akt/mTOR信号通路逆转TGF-β1诱导的人肺癌A549及H1299细胞的上皮间质转化、迁移与侵袭。本研究初步证实低浓度的新西兰牡荆苷Ⅱ具有抗肿瘤转移作用,高浓度新西兰牡荆苷Ⅱ具有诱导肿瘤凋亡的作用,为铁皮石斛黄酮类成分及新西兰牡荆苷Ⅱ的抗肿瘤活性提供重要的研究基础与补充依据。

摘要译文

关键词: 铁皮石斛 ；新西兰牡荆苷Ⅱ ；肝癌凋亡；转化生长因子；肺癌上皮间质转化；TGF-β/Smad 通路；PI3K/Akt/mTOR 通路

引用

被引量 2

3. 认领

【学位/博士】 • 李运容 • 广州中医药大学 • 导师：魏刚 • 2017年

摘要：具有官修性质的北宋《本草图经》记载石斛“以广南者为佳”,本研究在课题组前期研究基础上,对“以广南者为佳”中石斛在“广南”产区的历史分布进行大量地方志及本草考证、实地考察,并进一步运用色谱分析、活性筛选、转录组等现代技术来实证广西铁皮石斛品质,阐明古人认为石斛“以广南者为佳”的缘由。目的:对石斛“以广南者为佳”的历史进行考证,阐明北宋时期“广南”是指何处,且所指为哪种石斛。进而对广西不同产地铁皮石斛样品的品质进行评价,比较其差异,同时建立其黄酮类成分HPLC特征图谱研究,并与广东丹霞种、福建丹霞种、云南种、浙江种铁皮石斛黄酮特征指纹图谱进行比较,鉴定广西种铁皮石斛特异性成分,为广西铁皮石斛资源的开发应用提供实验依据。在此基础上探讨广西铁皮石斛多糖抗肿瘤、抗氧化活性,重点讨论多糖分子量对抗肿瘤活性的影响,以期初探铁皮石斛多糖具有抗肿瘤高活性的分子量范围。最后利用转录组分析多糖相关合称的基因。方法:1.通过对史料、主流本草及地方志对“广南”石斛历史分布进行考证,并实地考察。2.采用HPLC方法对广西不同产地铁皮石斛样品的甘露糖与葡萄糖峰面积比、甘露糖含量、多糖含量进行比较。3.采用HPLC特征图谱技术,建立广西不同产地铁皮石斛黄酮类成分HPLC特征图谱分析方法,采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)进行相似度分析。4.采用HPLC-MS方法鉴定广西不同产地铁皮石斛黄酮特征性成分。5.采用Fe2+-Vc-H2O2体系氧化法制备不同分子量铁皮石斛多糖片段。6.测定对人肺癌A549、PC9、人肝癌HepG-2、人结肠癌HT-29、人宫颈癌Hela、人胃癌SGC7901等肿瘤细胞增殖的抑制作用,流式测定对Hela细胞凋亡率的影响,荧光定量PCR测定对Hela细胞Bax、Bcl-2 mRNA表达量的影响,在细胞水平开展铁皮石斛不同分子量(652.29～11.10kDa)多糖抗肿瘤活性研究。体外清除自由基的方法研究铁皮石斛不同分子量多糖抗氧化活性的差异。7.转录组学分析广西桂平白石山种源铁皮石斛多糖合成相关基因。结果:1.《本草图经》中“广南”即为广南东路、广南西路暨当今广东、广西。①广西石斛历史分布主要分布于广西的东南部(容县、桂平、梧州、贺州等地)、东北部(桂林)、西北部(百色靖西、凌云县、德保,崇左、河池等地),其中容县“都峤山”、桂平“白石山”者为佳。②南北朝时期韶关已经盛产石斛,至唐代,石斛的产地扩大至广东省多地。在唐代和宋代,广州、韶关、泷州(罗定市)、春州、勤州(阳春市)石斛作为贡品上贡,说明了该地的石斛质量上乘。地方志记载广东石斛主要分布于西北部的清远市的阳山县、连山县,河源市连平县,肇庆市开建县;北部到东北部的韶关市始兴县、乐昌县、乳源县、南雄县,梅州市、英德市;东部到东南部的潮州市、汕尾市、东莞市。③本草考证、实地考察确认了生长于始兴天柱峯、容县都峤山、桂平白石山石上质量佳的石斛为铁皮石斛,即“以广南者为佳”的石斛为铁皮石斛,且天柱峯、都峤山、白石山均为典型丹霞地貌。2.①广西不同产地铁皮石斛甘露糖与葡萄糖峰面积比、甘露糖含量、葡萄糖含量具有显著性差异,其甘露糖与葡萄糖峰面积比为0.33到5.91,在采收期内广西产铁皮石斛甘露糖与葡萄糖峰面积比值为0.33-5.14。采收时间是影响甘露糖与葡萄糖峰面积比的重要因素,且在冬天采收的比值最大,而不同品种对铁皮石斛多糖甘露糖与葡萄糖峰面积比值的影响较小。②广西不同产地、不同采收期样品甘露糖含量为5.20%～30.95%,甘露糖与葡萄糖含量和为11.21%到51.13%,表明广西不同产地样品的多糖含量差异很大。其中以桂林永福县、荔浦县产多糖含量最高,依次为50.50%、51.13%。剔除离群值,广西不同产地铁皮石斛甘露糖含量13.93%～30.94%,多糖含量为29.81%～51.13%。3.建立了广西不同产地铁皮石斛黄酮类成分HPLC特征图谱,通过对照品、图谱峰紫外光谱图、质谱色谱数据,鉴定出广西铁皮石斛中的10个特征成分,分别为新西兰牡荆苷Ⅱ、新西兰牡荆苷Ⅰ、异夏佛塔苷,夏佛塔苷,新西兰牡荆苷Ⅲ、芦丁、芹菜素-6,8-二-C a-L-吡喃阿拉伯糖苷,芹菜素-6-C-β-D葡萄糖苷-8—C-α-L-鼠李糖与芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖-8—C-β-D葡萄糖苷、槲皮苷、槲皮素。不同产地铁皮石斛所含黄酮类成分的差异主要体现于芦丁与芹菜素-6-C-β-D葡萄糖苷-8—C-α-L-鼠李糖与芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖-8—C-β-D葡萄糖苷重叠峰的差异。容县、桂平样品芹菜素-6-C-β-D葡萄糖昔-8—C-α-L-鼠李糖与芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖-8—C-β-D葡萄糖苷重叠峰的相对峰面积明显比芦丁高。南宁市、河池市的芦丁相对峰面积比芹菜素-6-C-β-D葡萄糖苷-8—C-α-L-鼠李糖与芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖-8—C-β-D葡萄糖苷重叠峰高。桂林永福县的样品不含芹菜素-6-C-β-D葡萄糖苷-8—C-α-L-鼠李糖与芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖-8—C-β-D葡萄糖苷重叠峰,荔浦县的样品含,但含量很少,而这两地样品芦丁相对峰面积都很高,百色市当地种源含芹菜素-6-C-β-D葡萄糖苷-8—C-α-L-鼠李糖与芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖-8—C-β-D葡萄糖苷重叠峰,但相对峰面积没有芦丁高,引种的浙江种可以忽略不计。福建丹霞种、韶关丹霞种、浙江种、云南种铁皮石斛黄酮类成分特征图谱与广西不同产地共有模式比较,相似度分别为0.734、0.763、0.658、0.739,可见广西铁皮石斛黄酮类成分指纹图谱共有模式与其他种有一定差异。新西兰牡荆苷Ⅱ、新西兰牡荆苷Ⅰ、异夏佛塔苷峰为广西、福建、韶关、浙江种、云南种铁皮石斛黄酮类成分的共有峰。福建丹霞种、浙江种不含芹菜素-6-C-β-D葡萄糖苷-8—C-α-L-鼠李糖与芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖-8—C-β-D葡萄糖苷重叠峰;而韶关丹霞种含有,但相对峰面积比芦丁低;云南广南种图谱具明显特异性,芹菜素-6-C-β-D葡萄糖苷-8—C-α-L-鼠李糖与芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖-8—C-β-D葡萄糖昔重叠峰为最强峰,其他峰少,且峰面积小。4.通过Fe2+-Vc-H2O2体系氧化法降解得到7个主要由甘露糖和葡萄糖组成的铁皮石斛不同分子量多糖片段DOP、DOP1、DOP2、DOP3、DOP4、DOP5、DOP6,分子量分别为 652.29kDa、176.29 kDa、75.92kDa、40.96kDa、33.10kDa、28.48kDa、11.10kDa。这7个多糖片段对DPPH、羟基自由基均具有一定的清除能力,其清除能力和多糖浓度呈现依赖性,随浓度的增大而加强。而这7个多糖片段对DPPH、· OH自由基清除力具有显著差异,DOP(652.29kDa)的清除作用最强。(1)DOP对· OH自由基的清除能力比小分子量的DOP4、DOP5、DOP6强。可以看出分子量大的多糖片段在低浓度时就对·OH有较强的清除力。(2)在浓度为0.5-3.Omg/mL时,对DPPH的清除能力,DOP与DOP1,DOP2,DOP3,DOP4,DOP5比较均有统计学意义(P<0.05)。大分子量DOP对DPPH自由基的清除能力比小分子量的DOP1,DOP2,DOP3,DOP4,DOP5强。5.DOP、DOP1、DOP2、DOP3、DOP4、DOP5、DOP6 对A549、PC9、HepG-2、HT-29、Hela、SGC7901等肿瘤细胞的增殖均具有不同程度的抑制作用,抑制作用随浓度的增加而增强。其中对Hela、HT-29、SGC7901细胞增殖的抑制作用较为显著,且不同分子量多糖片段的抑制作用具有显著性差异。在25-400 μg/mL的多糖浓度之间,分子量为75.92kDa的DOP2对HT-29的抑制作用比其他分子量多糖片段强,在浓度为400 μ g/mL时,抑制率为62.7%;分子量为33.10kDa的DOP4对Hela的抑制作用比其他分子量多糖片段强,在浓度为400 μg/mL时,抑制率为60.4%。DOP5(28.48kDa)对SGC790的抑制作用比其他分子量多糖片段强,在浓度为400 μg/mL时,抑制率为58.9%。其次为HepG-2细胞;对人肺腺癌A549、人肺癌PC9有一定的抑制作用,但不是很显著,且不同分子多糖片段差异性不大。DOP、DOP1、DOP5、DOP6诱导Hela凋亡的凋亡率,与空白组比较,均有统计学意义(P<0.01)。与DOP组比较,DOP1、DOP5组的凋亡率明显高于DOP组,具有统计学意义(P<0.01),DOP6组没有统计学意义(P>0.05)。实验结果表明DOP、DOP1、DOP5、DOP6能诱导Hela细胞的凋亡,且DOP1(176.29kDa)和DOP5(28.48kDa)的凋亡率显著高于 DOP(652.29 kDa)和 DOP6(11.10 kDa)的。DOP、DOP1、DOP5、DOP6对体外培养细胞Hela细胞的Bcl-2、BaxmRNA表达的影响,荧光定量检测结果表明,不同分子量多糖片段在100μg/mL浓度下干预Hela细胞24h,与空白组比较,Bax mRNA表达量上调,而Bcl-2 mRNA表达量则下调。Bax与Bcl-2的比值增大,而促进细胞凋亡。且DOP、DOP1、DOP5、DOP6对Bcl-2和BaxmRNA表达影响有显著性差异,且Bax与Bcl-2的比值的增加趋势与MTT检测Hela细胞增殖的影响趋势是一致的。即铁皮石斛多糖在分子量为176.29～28.48kDa的范围内诱导Hela细胞凋亡的活性较高。6.本研究应用高通量测序技术对铁皮石斛茎的转录组进行测序,获得45012条独立基因(Unigenes)。将这些独立基因与公共数据库Nr、Swissprot、KOG、KEGG进行比对注释,获得注释的Unigenes分别为23685条、17925条、14887条、9100条。在Kegg数据库中得到注稀的9100条Unigenes,其中298条在与植物多糖合成与代谢相关的通路[Starch and sucrose metabolism(淀粉与蔗糖代谢)及 Fructose and mannosemetabolism(果糖和甘露糖代谢)]中得到注稀,共编码了 52个蛋白。通过SSR分析,从45012条独立基因(Unigenes)得到3887个SSR位点,表明该种源铁皮石斛拥有丰富的SSR位点。为同属物种的分子标记开发及遗传图谱的构建提供了参考。结论:1.《本草图经》“以广南者为佳”中“广南”即为今广东、广西。广东“石斛出始兴”、“天柱峯者为最良”,广西产“都峤山”、“白石山”石上者为良,且所指石斛为铁皮石斛。2.在采收期内,广西不同产地铁皮石斛甘露糖与葡萄糖峰面积比值为0.33-5.14,多数样品的值不在中国药典规定的2.4～8.0范围内,甘露糖含量13.93%～30.94%,在中国药典规定13.0%～38.0%的范围内,多糖含量为29.81%～51.13%,达到中国药典规定不得少于25.0%的标准。而广西为铁皮石斛的道地产地,故建议修改药典中铁皮石斛甘露糖与葡萄糖峰面积比值范围。3.广西不同产地铁皮石斛黄酮类化学HPLC特征图谱分析方法在一定程度上能够反映广西不同产地铁皮石斛黄酮类主要化学成分的组成和比例的差异。初步鉴定出广西铁皮石斛中的10个特征成分,不同产地铁皮石斛所含黄酮类成分的差异主要在芦丁与芹菜素-6-C-β-D葡萄糖苷-8—C-α-L-鼠李糖与芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖-8—C-β-D葡萄糖苷重叠峰的差异。4.铁皮石斛多糖的抗肿瘤抗氧化活性和分子量的大小有很大的影响,过大或者过小的分子量都不利于其生物活性的发挥。可通过氧化降解法制备分子量范围分布很大的多糖片段。其中分子量较大的粗多糖DOP(652.29kDa)对DPPH、羟基自由基清除能力最强,具有很有的抗氧化活性,是个很好的外源性抗氧化剂。5.铁皮石斛不同分子量(652.29-11.

摘要译文

关键词: 历史分布考证；铁皮石斛 ；特征图谱；不同分子量多糖；抗肿瘤

引用

被引量 4