文献检索结果-维普官网

1

1. 认领

【期刊论文】 • 赵轶男 ^1,2张树彪 ¹崔韶晖 ¹张传敏 ¹ +1位作者 • 《中国细胞生物学学报》 • 2013年第10期 1459 - 1464，共6页

机构： [1] 大连民族学院生物技术与资源利用国家民委–教育部重点实验室[2] 大连理工大学精细化工国家重点实验室

摘要：使用基因转运载体运载肿瘤细胞进行转染是基因治疗的关键环节之一。Lipofectamine 2000和DOTAP作为商品转染试剂,具有较高的转染效率。为了进一步发掘其作为基因转运载体的应用潜力,该文研究了Lipofectamine 2000和DOTAP的粒径、Zeta电位及形态,并分别与绿色荧光蛋白基因(pGFP-N2)、荧光素酶基因(pGL3)结合,形成脂质体/DNA复合物,通过载入人喉癌细胞(Hep-2)和人肺癌细胞(NCI-H460),考察了其转染效率和细胞毒性。结果表明,脂质体Lipofectamine 2000与DOTAP都能有效压缩DNA,形成复合物。Lipofectamine 2000与DOTAP相比,转染效率高,与DNA最佳转染比例范围为2:1～4:1。毒性实验显示,在N/P大于3/1时,Lipofectamine2000与DOTAP对癌细胞具有一定的细胞毒性。细胞种类对脂质体的转染效率有很大影响,Lipofectamine 2000对Hep-2细胞的转染效率比NCI-H460高。

摘要译文

关键词: 阳离子脂质体 ；脂质体 ；DNA复合物；基因转运；细胞毒性

引用

被引量 13

2

2. 认领

【期刊论文】 • 曹琼洁董菁李丽陈晓燕 +2位作者 • 《中华眼视光学与视觉科学杂志（中英文）》 • 2018年第9期 546 - 551，共7页

机构： [1] 温州医科大学附属眼视光医院省部共建眼视光学和视觉科学国家重点实验室

摘要：目的:研究microRNA-127(miR-127)在人葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达水平及其对细胞增殖的影响。方法:实验研究。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-127在葡萄膜黑色素瘤细胞M23和SP6.5与正常葡萄膜黑色素细胞UM95中的表达水平。细胞实验通过阳离子脂质体介导的方法将miR-127和阴性对照(NC)转染入M23和SP6.5中,并应用细胞增殖实验法(MTS法)和流式细胞技术分别检测细胞增殖能力和细胞周期,采用WesternBlot法检测转染miR-127后细胞周期相关蛋白的表达。另外,通过RT-qPCR检测用表观药物5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和(或)曲古抑菌素A(TSA)处理后的M23和SP6.5细胞内miR-127的表达水平。MiR-127的表达量及细胞实验各参数在2组间比较采用独立样本t检验。结果:miR-127在M23和SP6.5中的表达水平低于UM95(t=72.2、591.5,P<0.001)。MTS结果显示,在M23和SP6.5细胞中,转染miR-127组相对细胞数目较NC组的100%分别减少至(62.3±4.2)%和(65.4±2.3)%,差异具有统计学意义(t=12.7、21.6,P<0.001)。流式细胞技术分析显示,转染miR-127组处于G0/G1期的M23和SP6.5细胞数量比例明显高于NC组(t=-6.7,P=0.003;t=-9.9,P<0.001),同时处于S期的M23和SP6.5细胞数量比例明显低于NC组(t=8.6,P=0.001;t=12.7,P<0.001)。WesternBlot结果表明miR-127可明显降低M23和SP6.5细胞内磷酸化Rb蛋白的表达水平(t=22.2、15.6,P<0.001)。此外,miR-127在M23和SP6.5细胞中的表达可被5-Aza-dC和TSA诱导上调(P<0.05)。结论:miR-127通过抑制细胞周期而抑制人葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖,并可被DNA甲基化和组蛋白乙酰化表观遗传机制调控。

摘要译文

关键词: 葡萄膜黑色素瘤；microRNA-127 ；细胞周期；细胞增殖；表观遗传调控

引用

被引量 8

3

3. 认领

【期刊论文】 • 李佩 ¹胡静 ¹张莹 ¹李剑平 ¹ +4位作者 • 《细胞与分子免疫学杂志》 • 2018年第2期 148 - 153，共6页

机构： [1] 空军军医大学西京医院放疗科[2] 空军军医大学生物化学与分子生物学教研室

摘要：目的探讨microRNA-182(miR-182)在宫颈癌细胞增殖中的作用及其机制。方法使用脂质体介导的瞬时转染法增加或降低宫颈癌细胞系He La和Si Ha细胞中miR-182水平,利用CCK-8法和平板克隆形成实验观察miR-182对宫颈癌细胞增殖能力的影响,使用生物信息学预测、实时定量PCR和双荧光素酶报告基因等实验明确miR-182对腺瘤性息肉病基因(APC)的转录后基因表达调控的作用以及对Wnt下游经典信号分子c-Myc和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)水平的影响。结果过表达miR-182明显促进宫颈癌细胞的增殖,抑制miR-182的表达则显著抑制肿瘤细胞的增殖;过表达miR-182抑制宫颈癌细胞中APC的表达,调控miR-182的表达水平影响肿瘤细胞中经典Wnt信号通路下游的表达。结论 miR-182通过抑制APC的表达激活经典Wnt信号通路的活性,提高宫颈癌细胞增殖能力。

摘要译文

关键词: 宫颈癌细胞；细胞增殖；微小核糖核酸-182 ；腺瘤性息肉病基因；Wnt信号通路

智能阅读

PDF下载

引用

被引量 13

4

4. 认领

【期刊论文】 • 张兴艳 ¹马志萍 ¹崔文丽 ¹庞雪莲 ¹ +4位作者 • 《中华病理学杂志》 • 2018年第1期 25 - 31，共7页

机构： [1] 新疆医科大学第一附属医院病理科[2] 新疆医科大学第一附属医院血液科

摘要：目的研究PRDM1基因失活对C-MYC的调控在弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中的作用,探讨其与免疫分型及预后相关性.方法选取2009年1月至2015年12月在新疆医科大学第一附属医院收治DLBCL患者的石蜡包埋组织100例,反应性增生淋巴结20例.免疫组织化学EnVision法检测CD20、CD10、MUM1、Ki-67、bcl-6、Blimp1、C-MYC、PAX5蛋白表达,根据Hans分型法进行免疫分型.逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测两组中PRDM1、C-MYC mRNA表达情况.单因素生存分析（Kaplan-Meier）法从蛋白、mRNA水平分析 PRDM1/Blimp1及C-MYC与预后相关性.应用阳离子脂质体转染法介导的小干扰RNA（siRNA）转染OCI-LY1[生发中心B细胞型（GCB型）]和OCI-LY3（non-GCB型）细胞系,RT-PCR和 Western blot方法检测 siRNA转染前后细胞系中 C-MYC mRNA和蛋白表达情况.结果 100例 DLBCL患者中,GCB型27例（27/100,27.0%）,non-GCB型73例（73/100,73.0%）.Blimp1蛋白在肿瘤中阳性表达26例（26/100,26.0%）,反应性增生淋巴结中阳性表达20例（20/20,100.0%）.PRDM1 mRNA 高表达58例（58/100,58.0%）,其中 GCB 型22例（22/27,81.5%）,non-GCB型36例（36/73,49.3%）,两者之间差异有统计学意义（P=0.004）.同时,在mRNA水平,PRDM1在不同免疫分型、血清乳酸脱氢酶（LDH）水平、B症状、原发部位等临床病理参数表达有差异,C-MYC在性别、国际预后指数（IPI）评分、血清 LDH水平之间表达有差异, PRDM1与C-MYC 具有显著相关性（χ2=7.648,P=0.006）.沉默两个细胞系中 PRDM1基因后, RT-PCR和Western blot结果显示在OCI-LY1细胞系中C-MYC基因和蛋白在转染组表达较空白对照组及阴性对照组表达上调.结论在DLBCL中PRDM1基因失活所致的C-MYC基因表达上调可能是DLBCL发生的一个重要因素,为相关研究提供实验证据.同时,PRDM1蛋白及mRNA和免疫分型相关,PRDM1 mRNA是提示不良预后的标志.

摘要译文

关键词: 淋巴瘤；大B-细胞；弥漫性；基因；原癌基因蛋白质c—myc

引用

被引量 14

5

5. 认领

【期刊论文】 • 拜合提亚·阿扎提李前进刘强王玉杰

• 《现代肿瘤医学》 • 2022年第9期 1573 - 1578，共6页

机构： [1] 新疆医科大学第一附属医院泌尿外科

摘要：目的:探索靶向缺氧诱导因子-2α(hypoxia-inducible factor-2α,HIF-2α)的阳离子脂质体-siRNA复合物(liposome-siRNA,Lipo-siRNA)是否可以有效干扰HIF-2α的表达并抑制肾透明细胞癌的生长。方法:使用ZetaSizer Nano及电镜鉴定Lipo-siRNA,荧光显微镜观察脂质体介导的siRNA转染786-O细胞的情况,CCK-8检测Lipo-siRNA对786-O细胞的抑制能力,Western blot检测Lipo-siRNA对HIF-2α表达的影响,活体成像检测Lipo-FAM-siRNA的体内转染情况,裸鼠皮下移植瘤模型检测Lipo-siRNA对肿瘤生长的抑制情况。结果:Zata电位、粒径大小及电镜观测结果均表明Lipo-siRNA构建成功;荧光显微镜观察表明脂质体可以有效介导FAM-siRNA对786-O细胞的转染(P<0.05);CCK-8实验表明Lipo-siRNA可以显著沉默HIF-2α表达(P<0.01)并抑制786-O细胞的增殖(P<0.05);活体成像结果显示Lipo-siRNA可以显著富集于肿瘤部位(P<0.001);裸鼠皮下移植瘤模型显示Lipo-siRNA可以有效降低肿瘤组织中HIF-2α的表达(P<0.05),并抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论:携带靶向HIF-2αsiRNA的阳离子脂质体可以在裸鼠体内外水平显著干扰HIF-2α的表达,抑制肾透明细胞癌细胞的生长,具有治疗肾透明细胞癌的潜力。

摘要译文

关键词: 肾透明细胞癌；阳离子脂质体 ；siRNA ；HIF-2α

智能阅读

PDF下载

引用

被引量 2

6

6.

认领

【期刊论文】 • 韦世元 ¹唐放 ¹彭旭 ²何学令 ² +1位作者 • 《四川动物》 • 2020年第1期 34 - 40，共7页

机构： [1] 四川大学生命科学学院[2] 四川大学实验动物中心

摘要：目的研究阳离子脂质体介导mGM-csf和mFlt-kdr3基因治疗以及2个基因联合治疗对小鼠B16-F10黑色素瘤肺转移以及实体瘤的生长抑制作用。方法通过尾静脉注射法和皮下注射法分别将10~5个以及10~6个对数生长期黑色素瘤细胞注入BALB/c小鼠体内,构建小鼠肺转移模型和腋下实体瘤模型。将2组模型小鼠分别分成5组:mFlt-kdr3治疗组、mGM-csf治疗组、联合治疗组(1次mFlt-kdr3,2次mGM-csf)、H1299脂质体质粒对照组和生理盐水对照组。肺转移模型小鼠建模3周后,尾静脉给药治疗,每次给药80μL,每次间隔1 d,共3次。完成后3 d,解剖取出小鼠肺组织并对肿瘤灶进行计数、苏木精-伊红染色。实体瘤模型小鼠在建模1周后开始瘤体穿刺给药,每次给药25μL,每次间隔1 d,共9次,每次给药前用游标卡尺测量瘤体的长、短径。结果肺转移治疗实验中,治疗组平均肿瘤个数显著少于对照组(P<0.05),且联合治疗组肿瘤个数最少,并且肺部结构完整,基本未见明显的肿瘤灶,可以看到明显的肺泡结构。实体瘤模型实验中,治疗组瘤体平均体积显著小于对照组(P<0.05),且在观察的时间内联合治疗组瘤体平均体积呈现明显的下降趋势,治疗组的疗效价值为联合治疗组>mFlt-kdr3治疗组>mGM-csf治疗组。结论GM-csf和Flt-kdr3基因药物对黑色素瘤具有协同治疗效用,可以明显抑制肺部肿瘤灶的形成和实体瘤的生长。

摘要译文

关键词: B16-F10黑色素瘤；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；血管内皮生长因子；基因治疗

智能阅读

免费下载

引用

被引量 1

7

7.

认领

【期刊论文】 • 岳冉 ^1,2刘子洋 ²郑岩 ²陆小丹 ² +5位作者 • 《中国肿瘤生物治疗杂志》 • 2020年第2期 109 - 114，共6页

机构： [1] 新乡医学院研究生院[2] 郑州大学人民医院消化内科[3] 河南省立眼科医院暨河南省人民医院眼科中心

摘要：目的:探索新型阳离子聚合物纳米载体mPEG-P(Asp-AED-g-HFB)(PAEF)和PiggyBac转座子介导嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰自然杀伤(natural killer,NK)细胞的基因转染方法,为肿瘤细胞免疫治疗制剂研发提供新策略。方法:制备PAEF/DNA(转座酶+转座子)复合物,通过Nano-ZSE动态光散射系统(Malvern Instruments)测量PAEF/DNA复合物的粒径分布和表面电位;DNA凝胶电泳验证PAEF的DNA包封率、释放性和稳定性,结合粒径电位选择进入细胞合适的N/P值;CCK-8细胞毒性实验分析不同N/P值条件下PAEF/DNA复合物的细胞毒性;荧光显微镜及流式细胞术检测细胞转染效率,评估PAEF基因转染载体的可行性。结果:PAEF可包裹DNA形成粒径100~150 nm的纳米复合物,后者易于介导DNA进入细胞;当N/P值为20时,PAEF即可实现DNA的完全包裹;在还原剂二硫苏糖醇(dithiothreotol,DTT)存在下,PAEF对DNA有良好的释放能力;N/P值为80时,PAEF/DNA复合物转染组的NK-92细胞存活率显著高于脂质体转染组[(72.50±3.9)%vs(64.03±1.8)%,P<0.05];荧光显微镜下观察发现,PAEF/DNA组荧光多、荧光强度大;流式细胞术显示最高转染效率为83.4%。结论:纳米载体PAEF通过静电吸附作用能够很好地包裹DNA,且生物相容性好,基因转导效率较高,成功制备的CAR-NK细胞为过继免疫治疗提供良好的实验基础。

摘要译文

关键词: 纳米载体；PiggyBac转座子；嵌合抗原受体；NK细胞；肿瘤免疫治疗

智能阅读

免费下载

引用

被引量 4

8

8. 认领

【期刊论文】 • 杨军峰赵璞张全务森

• 《中国老年学杂志》 • 2018年第23期 5783 - 5786，共4页

机构： [1] 河南省人民医院胸外科

摘要：目的探讨人第10号染色体确实的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)对磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂治疗非小细胞肺癌(NSCLC)疗效的评估价值。方法采用脂质体介导法成功将p BP-PIEN质粒转染入H1793细胞,分为对照组、糖原合成酶(GSK)低剂量组(10μmol/L)、GSK中剂量组(20μmol/L)和GSK高剂量组(30μmol/L)。分别检测肿瘤细胞的增殖、凋亡及信号通路的改变情况。结果 PI3K抑制剂作用72 h后,GSK低、中和高剂量组H1793细胞株抑制率分别为7. 89%、23. 86%和29. 99%,H1793-pBP-PTEN细胞株抑制率分别为12. 83%、36. 21%和61. 26%。相同浓度PI3K抑制剂对H1793细胞株和H1793-p BP-PTEN细胞株的抑制率存在显著差异(P <0. 05)。GSK低、中和高剂量处理48 h后,H1793细胞株凋亡率分别为8. 22%、12. 12%和18. 93%,H1793-pBP-PTEN细胞株凋亡率分别为18. 29%、26. 83%和39. 67%,相同浓度PI3K抑制剂对H1793细胞株和H1793-pBP-PTEN细胞株的凋亡率存在显著差异(P<0. 05)。随着PI3K抑制剂浓度增加,H1793细胞株和H1793-pBP-PTEN细胞株p-EGFR、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平均下降,且相同浓度PI3K抑制剂作用下,H1793-pBP-PTEN细胞株p-EGFR、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平显著低于H1793细胞株(P<0. 05)。结论 PTEN在NSCLC的发生发展过程中具有重要作用,是评估PI3K抑制剂治疗疗效和预后的潜在指标。

摘要译文

关键词: 非小细胞肺癌；PTEN ；磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂；H1793

智能阅读

PDF下载

引用

被引量 5

9

9. 认领

【期刊论文】 • 王丽花赵云萍金珊珊王教 +2位作者 • 《中华眼视光学与视觉科学杂志（中英文）》 • 2020年第3期 184 - 190，共7页

机构： [1] 温州医科大学附属眼视光医院省部共建眼视光学和视觉科学国家重点实验室

摘要：目的:探讨MicroRNA-96(miR-96)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖和迁移的影响。方法:实验研究。通过RNA原位杂交检测人胚胎眼(20周)石蜡切片中RPE层miR-96的表达情况。将miR-96和随机序列寡核苷酸链[阴性对照(NC)]通过阳离子脂质体介导转染人眼RPE细胞,采用细胞增殖实验(MTS)、流式细胞术和Transwell实验分别检测细胞增殖、细胞周期以及细胞迁移能力。通过生物信息学及Western blot法确定miR-96作用的靶基因。应用Western blot检测miR-96对细胞增殖迁移相关信号通路蛋白(Akt、ERK)及细胞周期相关蛋白(p-Cdc2、CyclinD2、p-Rb)表达的影响。组间数据比较采用独立样本t检验。结果:miR-96在人眼RPE细胞中有表达。MTS结果显示,转染NC、miR-96后,人眼RPE细胞的相对增殖速率分别为100%、74%±2%,差异有统计学意义(t=42.174,P=0.002)。流式细胞术检测结果显示,转染miR-96后阻滞在G1期的RPE细胞明显多于转染NC后,且差异有统计学意义(t=-18.444,P=0.003)。Transwell实验结果显示,与转染NC相比,转染miR-96能显著抑制RPE细胞的迁移,差异具有统计学意义(t=6.754,P=0.002)。进而,明确了MITF是miR-96作用的靶基因。Western blot检测结果显示,转染miR-96后细胞中细胞周期相关蛋白p-Rb(t=11.211,P=0.002)、p-Cdc2(t=9.133,P=0.003)、CyclinD2(t=7.542,P=0.005)以及迁移相关信号通路蛋白p-ERK(t=16.699,P<0.001)、p-Akt(t=23.552,P<0.001)的表达水平均降低。结论:miR-96通过作用于靶基因MITF,调控细胞周期和迁移相关蛋白的表达从而抑制人RPE细胞的增殖和迁移。

摘要译文

关键词: 视网膜色素上皮；microRNA-96 ；细胞增殖；细胞迁移；MITF

引用

被引量 2

10

10. 认领

【期刊论文】 • 王教王丽花曹琼洁赵云萍 +1位作者 • 《中华眼视光学与视觉科学杂志（中英文）》 • 2019年第8期 569 - 575，共7页

机构： [1] 温州医科大学附属眼视光医院

摘要：目的:探讨MicroRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对脉络膜黑色素瘤细胞OCM290增殖的影响及机制。方法:实验研究。首先采用Real-time PCR技术检测miR-199a-3p在正常的脉络膜黑色素细胞UM96和肿瘤细胞OCM290中的表达情况;其次采用阳离子脂质体Lipofectamine介导的转染方法,将miR-199a-3p转染入体外培养的人脉络膜黑色素瘤细胞OCM290中过表达作为实验组,将随机序列寡核苷酸链转染入OCM290细胞作为阴性对照组;然后在转染的基础上运用细胞增殖实验法(MTS法)、克隆形成实验检测细胞增殖和生长能力。流式细胞术检测细胞周期。Western blot法检测与细胞周期相关的信号蛋白如CDK2、CDK4、E2F1等的表达。组间数据比较采用独立样本t检验。结果:miR-199a-3p在UM96中高表达,而在OCM290中表达明显下调(t=13.2,P<0.001)。OCM290细胞转染miR-199a-3p后,MTS结果显示实验组细胞数为对照组的(23.8±1.7)%,细胞增殖明显被抑制(t=78.1,P<0.001);细胞克隆数减少;细胞周期滞留在G1期(t=-8.5,P=0.001);Western blot法检测发现miR-199a-3p能下调OCM290中CDK2、CDK4、E2F1等的表达水平(t=10.3,P=0.001;t=9.9,P=0.001;t=10.4,P<0.001)。结论:miR-199a-3p通过下调调控细胞周期进程的关键蛋白,影响细胞周期的进程,从而抑制脉络膜黑色素瘤细胞的增殖。

摘要译文

关键词: MicroRNA-199a-3p ；脉络膜黑色素瘤；增殖

引用

11

11. 认领

【期刊论文】 • 丰天宇 ¹朱中凯 ²王豪 ¹毛筱涵 ¹ +5位作者 • 《中国细胞生物学学报》 • 2019年第3期 446 - 455，共10页

机构： [1] 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆市重点实验室[2] 重庆医科大学附属第一医院心血管内科[3] 重庆医科大学实验教学管理中心

摘要：该文主要研究microRNA-708-5p(miR-708-5p)在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞凋亡、迁移的影响及机制。该研究利用miRNA基因芯片筛选差异表达miRNA; qRT-PCR(quantitative Realtime PCR)检测miR-708-5p在骨肉瘤细胞株MG63和正常细胞hMSC、HS-5中的表达;通过阳离子脂质体介导法过表达miR-708-5p;分别用Hoechst 33258染色、流式细胞术、划痕实验、Transwell法检测凋亡和迁移;通过qRT-PCR检测miR-708-5p、ZEB1(Zinc?nger E-box binding homeobox 1)的RNA水平; Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达;利用TargetScan和双荧光素酶报告实验预测并验证miR-708-5p与ZEB1的靶向关系。结果显示, miR-708-5p在MG63中表达下调,恢复miR-708-5p表达水平可诱导MG63细胞凋亡并抑制迁移。Western blot结果显示,过表达miR-708-5p可上调E-cadherin,下调N-cadherin和ZEB1。双荧光素酶报告实验显示, miR-708-5p可直接靶向ZEB1。敲低ZEB1可抑制MG63迁移。该项研究结果表明, miR-708-5p可诱导骨肉瘤细胞凋亡,且通过靶向ZEB1来抑制迁移。

摘要译文

关键词: miRNA-708-5p ；骨肉瘤；凋亡；迁移；ZEB1

引用

被引量 2

12

12.

认领

【期刊论文】 • 蔡辉黄文利孙朝辉 • 《中国现代医药杂志》 • 2019年第9期 21 - 25，共5页

机构： [1] 云南省中医医院云南中医药大学第一附属医院老年病科

摘要：目的构建人醛固酮合成酶基因(CYP11B2)的真核表达质粒,并在人肾上腺上皮细胞(NCI-H295R)中表达,为下一步定点突变研究奠定基础。方法从人的肾上腺组织中提取总的RNA,采用RT-PCR扩增法扩增人的CYP11B2全长cDNA并克隆到PMD18-T载体中,然后再亚克隆于PcDNA3.1(+)真核表达载体,通过菌液PCR和酶切鉴定重组真核表达质粒,并以DNA测序证实。利用阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染NCI-H295R,RT-PCR和放射免疫法(RIA)检测CYP11B2基因的表达。结果菌液PCR扩增和酶切证实真核表达质粒构建成功,测序表明CYP11B2基因cDNA全长(1 509bp)和GenBank上公布的序列(D13752)相比较,存在一个碱基差异A3323G,这个变异使得第173位的赖氨酸变为精氨酸,核苷酸序列的同源性为99.9%,氨基酸序列的同源性为99.8%。真核表达质粒转染人肾上腺上皮细胞后CYP11B2 mRNA表达增加,细胞上清中的醛固酮含量显著增加。结论①通过查阅国外SNP数据库得知K173R为一个SNP位点,编号为rs4539。②成功构建了人CYP11B2基因的真核表达质粒,阳离子脂质体是NCI-H295R有效的体外转染体系,本实验为进一步研究该基因的结构与功能关系奠定了基础。

摘要译文

关键词: PcDNA3.1(+)/CYP11B2 ；NCI-H295R ；转染

智能阅读

免费下载

引用

被引量 2

13

13.

认领

【期刊论文】 • 陈红霞 ¹赵前锋 ¹周海胜 ²刘淼 ¹ +2位作者 • 《安徽医科大学学报》 • 2013年第7期 734 - 738，共5页

机构： [1] 安徽医科大学病原生物学教研室[2] 安徽医科大学生物化学教研室

摘要：目的分别构建和包装携带CARex基因、PTDtat基因、CARex和PTDtat融合基因的重组腺病毒。方法采用基因重组技术将CARex基因、PTDtat基因、CARex和PTDtat融合基因克隆在腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,经过Pme I线性化后转化BJ5183感受态细胞,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,构建重组腺病毒质粒pAd-CARex、pAd-PTDtat、pAd-CARex-PTDtat,然后转化DH5α感受态细胞,大量制备重组腺病毒质粒,经过Pac I线性化后回收,在脂质体介导下转染293A细胞,通过倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达来确定病毒在细胞内复制,当细胞发生病变时证明病毒包装成功。结果在293A包装细胞系中成功包装携带CARex、PTDtat、CARex和PTDtat基因的重组5型腺病毒,倒置荧光显微镜观察到明显的GFP表达,PCR检测表明包装病毒含有目的基因,半数培养组织感染量(TICD50)显示重组腺病毒具有较高的滴度。结论成功包装了pAd-CARex、pAd-PTDtat、pAd-CARex-PTDtat重组腺病毒,为进一步探讨CARex和PTDtat基因对腺病毒感染肿瘤细胞效率的影响奠定了实验基础。

摘要译文

关键词: CARex ；PTDtat ；同源重组；重组腺病毒载体

智能阅读

免费下载

引用

14

14. 认领

【期刊论文】 • 蔡善君

詹文芳刘锐谢兵 +2位作者 • 《中华眼底病杂志》 • 2010年第4期 367 - 371，共5页

机构： [1] 遵义医学院附属医院眼科

摘要：目的建立能稳定分泌人内皮抑素（hES）的基因工程细胞系，观察内皮抑素（ES）蛋白和hES的表达。方法以hES重组质粒pcDNA3．0（pcDNA3-Endo）为模板，通过聚合酶链反应（PCR）扩增获得hES基因片段，且在基因前加信号肽序列，将其定向插入真核表达载体绿色荧光蛋白（pEGFP—N1）质粒中，获得重组质粒pEGFP—N1-ES；利用阳离子脂质体介导将其转染到人胚胎肾细胞（HeK-293）细胞中，G418筛选后得到阳性克隆hES／293，采用蛋白免疫印迹（Westernblot）法检测转染细胞上清中ES蛋白的表达；用海澡酸钠壳聚糖（ACA）微囊包裹hES／293细胞，分别收集培养3、7、21、35d的AcA微囊化hES／293细胞的培养上清液，Westernblot法检测包裹后培养液上清中hES的表达。结果重组质粒pEGFP-N1-ES经限制性核对内切酶HindⅢ和限制性核酸内切酶BamHI双酶切得到4700碱基对（bp）和600bp2条带；PCR扩增出600bp条带；测序结果与NCBI上序列比对软件（BLAST）比对，同源性达到100％。pEGFP—N1-ES转染HeK-293细胞，经G418筛选后获得阳性克隆，选取筛选的10株单克隆细胞培养上清液进行Westernblot分析，在相对分子质量为20×10。处出现蛋白条带。在ACA微囊内hES／293细胞随着培养时间的延长，细胞团逐渐长大，充满整个囊内空间。培养3、7、21、35d时，在相对分子质量为20×10^2处出现蛋白条带。结论重组pEGFP—N1-ES真核表达载体构建正确，转染HeK-293细胞后可有效的表达hES蛋白，并能分泌到细胞外；微囊化hES／293细胞产生的ES蛋白可以自由扩散出微囊膜外，并呈持续性表达。

摘要译文

关键词: 内皮抑素类/生理学；微囊藻属/细胞学；细胞系

引用

被引量 1

15

15. 认领

【期刊论文】 • 唐津天 ¹唐润娟 ²薛峰 ¹黎旺红 ¹ • 《东南大学学报（医学版）》 • 2023年第1期 40 - 48，共9页

机构： [1] 新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆胰外科二病区[2] 新疆医科大学第二附属医院康复科

摘要：目的:探究酪蛋白激酶1α1(caseinkinase1alpha1,CSNK1α1)在胆管细胞性肝癌(intrahepatic cholangiocarcinoma, ICC)组织中的表达,及其对肿瘤细胞转移及血管生成的影响。方法:收集新疆医科大学附属肿瘤医院50例ICC组织及癌旁组织样本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和免疫组化染色法检测CSNK1α1表达水平;将ICC细胞系HUCCT-1培养后随机分为对照组、si-NC组、si-CSNK1α1组,通过脂质体介导法将靶向CSNK1α1基因的短发夹RNA序列转染至HUCCT-1细胞,qRT-PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定细胞内CSNK1α1mRNA与蛋白的表达变化,以鉴定转染效果;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移与侵袭能力变化,细胞免疫荧光染色观察细胞内上皮间质转化标志物钙黏附蛋白E(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达强度,血管生成实验检测肿瘤血管生成情况,Western blotting检测细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、基质金属蛋白酶(matrix metallopeptidase, MMP)2(MMP-2)及MMP-9的蛋白表达变化。结果:ICC组织CSNK1α1 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织,且ICC组织CSNK1α1阳性率也显著高于癌旁组织(P<0.01);与对照组和si-NC组比较,si-CSNK1α1组HUCCT-1细胞中CSNK1α1 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均下调,细胞划痕愈合率降低,细胞迁移与侵袭数目均减少,E-cadherin荧光密度值下降而Vimentin荧光密度值升高,细胞管样形成数目减少,细胞内VEGF、MMP-2及MMP-9的蛋白相对表达量均显著下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:CSNK1α1在ICC组织内呈高表达,靶向下调ICC细胞CSNK1α1表达后可抑制细胞迁移、侵袭及上皮间质转化过程,并减少血管生成,从而控制肿瘤进展。

摘要译文

关键词: 胆管细胞性肝癌；酪蛋白激酶1α1 ；转移；血管生成

智能阅读

PDF下载

引用

被引量 1

16

16. 认领

【期刊论文】 • 王坤贾志凡张安玲王广秀 +2位作者 • 《中华实验外科杂志》 • 2011年第7期 1152 - 1154，共3页

机构： [1] 天津医科大学总医院神经外科天津市神经病学研究所神经肿瘤实验室

摘要：目的观察敲低microRNA（miR）-30a-Sp表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学特征的影响。方法用脂质体介导转染寡聚核苷酸抑制物（miR-30a-Spinhibitor）于人脑胶质瘤U251细胞。采用实时聚合酶链反应（real—time PCR）检测转染后U251细胞的miR-30a-5p表达水平以鉴定抑制效果；噻唑蓝（MTT）比色法评价miR-30a-5p inhibitor抑制U251细胞生长的作用；Transwell实验检测细胞侵袭能力变化；流式细胞术检测细胞周期变化；AnnexinV法检测细胞早期凋亡。结果real-time PCR检测结果显示转染miR-30a-5p inhibitor后，肿瘤细胞miR-30a-5p表达下降，细胞增殖活性降低，细胞侵袭能力明显受到抑制，细胞周期阻滞在G0／G1期及早期凋亡增加。结论miR-30a-5p可能是癌微RNA（oncomiR）之一，有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。

摘要译文

关键词: 胶质瘤；增殖；侵袭；细胞周期

引用

被引量 3

17

17. 认领

【期刊论文】 • 罗燕徐崇明段丽群 • 《中国老年学杂志》 • 2017年第20期 5005 - 5006，共2页

机构： [1] 湖北省肿瘤医院胸部放疗科

摘要：目的探讨PIM1对老年食管癌患者癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将RNAi重组质粒(PIM1-shRNA-3)经脂质体介导转染食管癌ECA-109细胞株。PIM1基因沉默(PPIM1-shRNA-3)稳定转染的ECA-109细胞(转染组),用空质粒载体稳定转染的ECA-109细胞(空白转染组)和正常培养的ECA-109细胞(对照组)作为对照进行体外研究。通过细胞计数法绘制细胞生长曲线图,RT-PCR法测量PIM1基因表达水平,CCK-8法计算其增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI流式法和TUNEL法测算凋亡情况来检测细胞的增殖能力。结果载体成功转入到食管癌细胞中并表达,转染组ECA-109细胞数量减少;转染组肿瘤细胞PIM1基因表达水平明显低于空白转染组和对照组(P<0.05),且转染组PIM1 mRNA相对表达与空白转染组和对照组相比显著降低(P<0.05);相比空白转染组和对照组,ECA-109细胞计数和增殖能力在转染组明显降低(P<0.05);与空白转染组和对照组比较,转染组细胞的细胞抑制率明显升高,P<0.05;TUNEL和Annexin V-FITC/PI法检测结果表明:PIM1基因沉默可促进细胞的凋亡反应,进而抑制细胞的增殖水平。结论食管癌ECA-109细胞株可通过PIM1基因沉默抑制增殖,增加凋亡。

摘要译文

关键词: 食管癌；PIM1 ；基因沉默；细胞增殖；细胞凋亡

智能阅读

PDF下载

引用

18

18.

认领

【期刊论文】 • 郭隽馥 ¹王艳杰 ²苗兰英 ¹丛培玮 ¹ • 《肿瘤防治研究》 • 2015年第3期 225 - 228，共4页

机构： [1] 辽宁中医药大学教学实验中心[2] 辽宁中医药大学基础医学院

摘要：目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)对肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响。方法体外化学合成针对TLR4的小干扰RNA(TLR4-si RNA),通过脂质体介导转染人肺腺癌A549细胞。采用Real-time PCR和流式细胞仪检测分析干扰后A549细胞中TLR4 m RNA及蛋白的表达情况。另外,采用流式细胞仪检测分析干扰72 h后细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果与对照组比较,转染TLR4-si RNA后,A549细胞中TLR4 m RNA及蛋白的表达显著下降(P<0.05),细胞的凋亡率明显增加[(1.73±0.32)%vs.(7.40±0.75)%(P<0.01)],细胞周期出现G0/G1期停滞[(48.21±1.15)%vs.(66.26±2.45)%(P<0.05)],同时S期细胞比例明显减少[(34.25±1.46)%vs.(22.63±3.39)%(P<0.05)]。结论 TLR4-si RNA能有效沉默A549细胞中TLR4的表达,在促进细胞凋亡的同时能够影响细胞周期分布从而抑制肿瘤细胞的生长,特异性干预TLR4基因的表达有望成为治疗肺癌的一种新手段。

摘要译文

关键词: 肺癌；Toll样受体4 ；si ；RNA ；凋亡；细胞周期

智能阅读

免费下载

引用

被引量 7

19

19. 认领

【期刊论文】 • 张浩然曾志勇陈君敏 • 《中国生物工程杂志》 • 2013年第5期 13 - 21，共9页

机构： [1] 福建医科大学附属第一医院

摘要：目的:研究探讨应用RNA干扰技术构建人DEPTOR基因的shRNA慢病毒载体,鉴定在多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞上的沉默效果,并评价DEPTOR对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡能力的影响。方法:设计4个DEPTOR siRNA序列,化学合成后退火形成双链,克隆到酶切的hU6-MCS-CMV-EGFP(GV115)-shRNA慢病毒载体。重组质粒经PCR测序鉴定后,脂质体介导下转染293T细胞,Western blot检测DEPTOR的表达,筛选出干扰效果最佳的GV115-shRNA。将筛选的GV115-shRNA与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成病毒,收集病毒上清并浓缩,测定浓度。将病毒颗粒感染多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞,应用Real-time PCR方法从mRNA水平及Western blot方法从蛋白水平检测DEPTOR的沉默效果。运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测骨髓瘤细胞增殖能力的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡;用Western blot分析cleaved caspase-3和cleaved PARP的变化。结果:构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,成功筛选出最有效抑制DEPTOR表达的shRNA2序列,包装病毒后滴度达到1×109TU/ml。慢病毒感染RPMI-8226细胞后可表达EGFP,Real-time PCR和Western blot检测DEPTOR的表达明显下降。下调DEPTOR基因可显著减慢骨髓瘤细胞的生长速度(P<0.05),肿瘤细胞的凋亡率上升(P<0.01)。DEPTOR shRNA上调cleaved caspase-3、cleaved PARP和Bax表达,下调Bcl-2及PI3K/Akt信号通路的表达(P<0.01)。结论:成功构建了DEPTOR shRNA重组慢病毒载体,其转染多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞后显著抑制了DEPTOR的表达。DEPTOR shRNA可以有效地诱导骨髓瘤细胞的凋亡,并抑制肿瘤细胞的增殖。PI3K/Akt信号通路可能参与了其凋亡过程。

摘要译文

关键词: DEPTOR ；多发性骨髓瘤RNA干扰增殖凋亡

引用

被引量 6

20

20.

认领

【期刊论文】 • 冯付明 ^1,2杨娟 ^1,2张红 ^1,2赵路 ^1,2 +3位作者 • 《世界华人消化杂志》 • 2011年第32期 3302 - 3307，共6页

机构： [1] 郑州大学第一附属医院病理科[2] 郑州大学基础医学院病理教研室河南省肿瘤病理重点实验室

摘要：目的:探讨抑癌基因TSC2反义寡核苷酸对人食管癌EC9706细胞增殖、凋亡的影响.方法:运用阳离子脂质体介导TSC2的反义寡聚核苷酸(ASODN)转染食管癌Ec9706细胞,并分5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L3组作为实验组.以终浓度为15μmol/L正义寡核苷酸(SODN)/无关寡核苷酸(N-ODN)及未转染组分别作为无关对照组、细胞对照组.分别在转染后连续培养24 h、48 h、72 h这3个不同时间点,用MTT检测细胞的增殖情况;免疫细胞化学检测TSC2蛋白表达:RT-PCR检测tsc2mRNA表达.用TUNEL检测转染后48 h细胞的凋亡情况.结果:同一时间点,不同浓度的TSC2反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞增殖有不同的促进作用,实验组与正义组、无关组及正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),以浓度为15μmol/L作用最强:实验组各组凋亡指数均低于对照组,且与对照组相比,差异具有统计学意义(13.11±0.13,9.31±0.29,4_38±0.43vs 16.46±0.43,16.63±0.34,16.23±0.45,均P<0.05).同一浓度的TSC2反义寡核苷酸,在不同时间点对食管癌EC9706细胞增殖的促进作用,随时间的增加而增强,以72 h作用最强.同一时间,不同浓度的TSC2反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞TSC2基因的表达有不同程度的抑制作用,实验组与正义、无关及正常对照组相比,差异有统计学意义(F蛋白=50.60、330.69及1221.28,均P<0.05;FmRNA=260.23、572.22及1004.35,均P<0.05),以浓度为15μmol/L作用最强;同一浓度的TSC2反义寡核苷酸,在不同时间内对食管癌EC9706细胞TSC2基因的表达的抑制作用,随时间的增加而增强,以72 h作用最强.结论:抑癌基因TSC2反义寡核苷酸可促进食管癌EC9706细胞增殖、抑制其凋亡.

摘要译文

关键词: TSC2 ；反义寡核苷酸；EC9706细胞；增殖；凋亡

智能阅读

免费下载

引用

被引量 2