- 首页
- 产品推荐个人精选服务科研辅助服务教育大数据服务行业精选服务学科系列服务产品服务
- 期刊大全
- 充值
- 会员
- 职称材料
- 首页
- 产品服务
- 知识脉络
- 期刊大全
- 充值
- 会员
- 职称材料
智能检索
二次检索
任意字段
在结果中检索
在结果中去除
暂无数据
共
12
条结果 ，以下是1
-
12条
1 / 1
已选:0 清除
批量下载
批量引用
相关度
摘要： 中药青风藤是防己科防己属植物青藤及毛青藤的干燥藤茎，用于风湿痹痛，关节肿胀，麻痹瘙痒，具有驱风除湿、通经络之功能。
研究表明，青风藤中的主要抗风湿、类风湿关节炎的活性成分是生物碱类成分，但截至目前，青风藤的抗炎机制却没有完全清楚。体外的抗炎药理模型显示青风藤的提取物只具有微弱的抗炎活性，临床上使用的青风藤提取物却显示具有良好的抗炎作用。这个矛盾提示，青风藤提取物中的成分可能作为前体药物，在体内转化成活性代谢产物进而发挥作用。因此，系统地研究青风藤中生物碱类成分的体内代谢，不仅可为青风藤的临床用药提供体内药物代谢信息，而且还可为青风藤体内药效物质的阐明奠定基础。基于此目的，我们首先对青风藤原植物中的生物碱类成分进行了一个较为系统的研究，利用现代色谱分离手段，从其70％乙醇提取物中分离得到18个化合物，通过理化常数测定、化学方法和各种谱学数据(UV、NMR、MS)分析等，鉴定了其中15个化合物，分别属于菲类生物碱、吗啡烷型生物碱、原小檗碱型生物碱、阿朴菲型生物碱以及其他等成分。分别为：N-(1，7-二甲氧基-菲-2-基)-乙酰胺[N-(1，7-dimethoxy-phenan-thren-2-yl)-acemmide，1]，青藤碱[sinomenine，2]，3-甲氧基吗啡烷[3-methoxymorphinane，3]，3-甲氧基-17-甲基吗啡烷[3-methoxy--17-methyl-morphinane，4]，3-甲氧基-6-羟基-17-甲基吗啡烷[3-methoxy-6-hydroxy-17-methylmorphinane，5]，3-甲氧基-17-甲基吗啡烷-6-酮[3-methoxy-17-methylmorphinane-6-one，6]，3-甲氧基-14-羟基-17-甲基吗啡烷-6-酮[3-methoxy-14-hydroxy-17-methylmorphinane-6-one，7]，3-甲氧基-7，8-二脱氢-17-甲基吗啡烷-6-酮[3-methoxy-7，8-didehydro-17-methylmorphinane-6-one，8]，青风藤碱[sinoacutine，9]，13，13a-二脱氢-9，10-二甲氧基-2，3-亚甲二氧基小檗因[13，13a-didehydro-9，10-dimethoxy-2，3-(methylenedioxyl)-berbine，10]，青风藤定碱[sinomendine，11]，7-甲氧基青风藤定碱[7-methoxylsinomendine，12]，7，10-二烯十六烷酸甲酯[7，10-hexadecadienoic acid，methyl ester，13]，6，9-二烯十八烷酸甲酯[6，9-octadecadienoic acid，methyl ester，14]，以及β-谷甾醇[β-sitosterol，15]。其中，化合物1为一未见文献报导的新化合物，化合物10为首次从该属植物中分离得到。上述化学成分的分离鉴定为青风藤生物碱类成分体内代谢研究奠定基础。
青藤碱是青风藤中主要生物碱类成分，其盐酸盐制剂在我国和日本已开发成临床用药，广泛应用于类风湿性关节炎以及多种类型心律失常的治疗。然而，迄今没有见到其体内代谢研究的相关报道。本文对盐酸青藤碱在大鼠的体内代谢进行了研究。
关键词: 青风藤 ；生物碱 ；青藤碱 ；大鼠 ；代谢产物
被引量
20
摘要： 目的:运用网络药理学方法构建青风藤的化学成分-疾病靶点-代谢信号通路网络,从而分析青风藤干预强直性脊柱炎(AS)的分子作用机制。方法:通过检索相关文献,并运用TCMSP数据库和SwissTargetPrediction数据库获取青风藤主要活性成分和作用靶点,利用DrugBank、GeneCards、TTD等数据库获取与AS相关的靶基因;整合药物与疾病的交集靶点,以String数据库对核心靶点构建蛋白互作网络(PPI)分析;最后通过DAVID数据库对核心靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析,采用Cytoscape3.6.0构建青风藤活性成分-AS作用靶点-代谢信号通路的可视化网络。结果:通过筛选获得青风藤潜在活性成分共6个,得到可作用于AS的靶点37个,核心靶点涉及溶质载体家族6(神经递质转运蛋白),成员4(SLC6A4)、多巴胺受体D2(DRD2)、5-羟色胺受体3A(HTR3A)、前列腺素G/H合酶2(PTGS2)、细胞色素P450 2D6(CYP2D6)等。GO功能富集分析共得到150个条目(P<0.05),其中生物过程98个,细胞组成19个,分子功能条目33个。KEGG通路分析富集得到13条信号通路(P<0.05),主要包括神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、血清素激活突触通路、环磷酸腺苷(cAMP)信号通路、血管平滑肌收缩、环磷酸鸟苷-依赖性蛋白激酶(cGMP-PKG)信号通路等;分子对接研究证实青风藤中大多数活性成分与治疗AS的靶点有着较好的结合活性。结论:基于网络药理学的研究表明,青风藤中千金藤啶碱、青藤碱等成分是治疗AS的关键成分,这些成分可能调节PTGS2、SLC6A4等靶点,并作用于血清素激活突触、 Janus激酶/信号转导与转录激活因子(JAK-STAT)等多条信号通路发挥发挥抑制炎症反应、调节免疫功能等作用来治疗AS,实现多成分、多靶点、多通路发挥对AS的治疗作用,具有一定的临床应用价值。
关键词: 网络药理学 ；青风藤 ；强直性脊柱炎 ；分子机制
被引量
9
摘要： 背景和目的:系膜增生性肾小球肾炎(Mesangial proliferative glomerulonephritis,Ms PGN)是原发性肾小球疾病常见的病理类型,以肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质弥漫增生为主要病理表现,是一种免疫介导的炎症反应性疾病。临床上常采用激素及免疫抑制剂治疗Ms PGN,但由于效果不理想及不良反应较多等原因,使其应用具有一定的局限性,目前暂无较好的治疗手段。近年来,我国大力发展中医药事业,中医药在各类疾病的治疗中均取得良好的成效。青风藤是中国传统中药材,其主要活性成分是青藤碱(Sinomenine,SIN)。盐酸青藤碱(Sinomenine Hydrochloride,SH)作为青藤碱的水溶性盐酸盐,具有免疫抑制、抗炎及抑制肿瘤细胞增殖等药理作用,目前临床上将其作为类风湿关节炎的辅助治疗药物,同时也是肿瘤的潜在治疗药物。Ms PGN是以系膜增殖为主要病理改变的自身免疫性疾病,因此我们提出假设SH能否用于Ms PGN的治疗。本研究拟通过建立Ms PGN动物模型——抗Thy-1肾炎大鼠模型,探究SH对Ms PGN大鼠的保护作用及其机制,以期为Ms PGN在临床治疗方面及创新药物的研发与应用提供理论依据。方法:SH治疗Ms PGN模型大鼠的作用效果研究:(1)在小鼠腹腔注射OX-7杂交瘤细胞,诱导其产生含m Ab OX-7的单克隆抗体腹水,产生的腹水用Protein A亲和层析法纯化后得到抗Thy-1抗体;(2)将90只大鼠随机分为对照组、模型组、SH低剂量治疗组(21.6mg/kg)、中剂量治疗组(43.2mg/kg)、SH高剂量治疗组(86.4mg/kg)。模型组及SH治疗组大鼠单次尾静脉注射抗Thy-1抗体(2.5mg/kg),建立抗Thy-1肾炎大鼠模型,对照组大鼠注射同等体积的磷酸盐缓冲液。SH治疗组大鼠造模后每日连续灌胃给药,同时给予对照组和模型组等体积的生理盐水,各组在建模后第3、7、14天分别取材;(3)PAS染色观察光镜下各组病理变化情况;(4)检测各组大鼠血肌酐、血尿素氮及尿蛋白、尿肌酐水平;(5)免疫组织化学染色观察系膜细胞增殖、免疫细胞浸润及p-STAT3表达情况;(6)Western blot检测JAK2、pJAK2、STAT3、p-STAT3、TNF-α的蛋白表达变化。SH对原代人肾脏系膜细胞(HRMC)异常增殖的作用机制研究:(1)利用PDGF-BB建立细胞增殖模型;(2)CCK-8检测法确定SH有效给药浓度;(3)采用Western blot法检测细胞增殖和炎症因子表达情况;(4)检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果:成功制备抗Thy-1抗体,并建立大鼠抗Thy-1肾炎模型。光镜观察PAS染色结果显示,建模第3天模型组肾小球系膜细胞溶解;第7天模型组系膜细胞增殖显著,中、高剂量治疗组可呈剂量依赖性改善系膜细胞增殖;模型建立第14天,模型组与治疗组无统计学差异。尿蛋白肌酐比值结果显示,建模后第7天,与模型组相比,中、高剂量治疗组呈剂量依赖性降低。免疫组织化学染色结果显示,第7天系膜细胞显著增殖、巨噬细胞浸润增多、STAT3磷酸化水平增高,而经中、高剂量SH治疗后均有改善。CCK-8检测结果显示,50ng/ml的PDGFBB刺激HRMC 48h引起细胞增殖,细胞模型建立成功。加入50μM的SH后减轻HRMC异常增殖。体内外Western blot结果显示,SH处理后,p-JAK2、p-STAT3及炎症相关因子TNF-α蛋白表达减少。结论:SH治疗可以降低抗Thy-1肾炎大鼠尿蛋白肌酐比,减轻肾脏病理损伤,同时减少巨噬细胞浸润;SH处理能够抑制PDGF-BB诱导的HRMC的异常增殖,减少促炎细胞因子TNF-α的表达。本研究利用SH治疗Ms PGN模型动物,并发现其对Ms PGN大鼠的保护作用,初步证实SH可能通过调控JAK2/STAT3信号通路抑制系膜细胞增殖,减轻肾脏局部免疫炎症反应。以上研究结果表明,SH可能是Ms PGN潜在的治疗药物,为SH在以系膜细胞增殖为主要病理表现的原发性肾小球疾病治疗中的应用提供了理论依据。
关键词: 盐酸青藤碱 ；系膜增生性肾小球肾炎 ；系膜细胞增殖 ；炎症反应 ；JAK2/STAT3信号通路
被引量
1
摘要： 青风藤(Sinomenium acutum)又称青藤,为毛莨目防己科(Menispermaceae)植物。其主要活性成分为青藤碱,但青藤碱的含量在不同来源的植株中存在较大差异。根据种植经验,青风藤雌雄株中青藤碱含量存在明显差别,导致药用价值也出现较大差异。为明确青风藤雌雄株中青藤碱含量的差异,探究其调控机制,本研究对不同性别的青风藤植株(雌株、雄株、未分化株)的地上(叶)和地下(根)部分进行代谢组学分析,并进一步结合激素水平和生物活性验证,明确青风藤雌雄株的代谢物差异,为青风藤资源的高效开发利用提供参考。 本研究主要结果如下: 1.通过非靶向代谢组学分析不同性别的青风藤叶片和根中的化学组成,共鉴定出1213种代谢物,包括脂类化合物、苯丙素和聚酮类化合物、苯型烃类和生物碱及其衍生物等12类,其中生物碱类鉴定到喹啉、异喹啉等。通过主成分分析(PCA)发现雌雄株叶片中代谢物差异不明显,差异代谢物主要集中在根部。从根部共筛选出264个显著差异代谢物,富集到半乳糖代谢、酪氨酸代谢、植物激素信号转导通路和异喹啉类生物合成等通路。将青藤碱与异喹啉合成通路上的代谢物进行相关性分析,发现青藤碱与乌药碱含量呈现显著正相关。预测青藤碱的合成通路为:酪氨酸经酪氨酸脱羧酶催化生成多巴胺,随后通过酚氧化偶联反应形成乌药碱,乌药碱在经过去甲乌药碱、番荔枝碱等中间体转化为清风藤碱,最终经特异性羟基化/环化反应生成青藤碱。 2.对不同性别青风藤根部进行内源植物激素检测,共检测到34种激素,激素水平在雌、雄和未分化植株中存在差异。将内源激素水平与生物碱含量进行关联分析,发现脱落酸(abscisicacid,ABA)水平与青藤碱含量存在显著正相关。使用不同浓度的外源ABA对青风藤植株进行处理,结果表明,不同浓度的ABA处理能够促进生物碱的积累,在叶片中,ABA(100μM)处理10d后生物碱含量最高(62.34mg/g);在根中,则是在ABA(100μM)处理15 d后达到峰值(166.52mg/g)。qPCR检测表明ABA处理提高了青藤碱合成相关基因cnmt和tydc的表达量。 3.分别将青风藤雌雄株叶片和根部用70%无水乙醇超声处理提取,测得提取物中生物碱含量大小顺序为:雄根(MR)>雌根(FR)>未分化根(NR)>未分化叶片(NL)>雄株叶片(ML)>雌株叶片(FL)。体外抗氧化分析显示,提取物抗氧化能力为MR>FR>NR>NL>ML>FL。将提取物喂食野生型秀丽隐杆线虫用于比较体内抗氧化活性,结果显示:在百草枯急性氧化应激下,喂食提取液(5 mg/mL)后均能提高线虫存活率,其中MR组最高(82.30%),其次是FR组(79.14%)。在MR和FR中设置浓度梯度(0.1、1、5 mg/mL)进行后续分析;寿命实验中,1 mg/mL MR组培养下效果最好,平均寿命延长了 15.34%,其余顺序为:1 mg/mLFR>0.1 mg/mLMR>0.1 mg/mL FR>5 mg/mLMR>5 mg/mLFR,且对线虫的生殖能力没有显著影响;头部摆动频率提高,在0.1 mg/mL MR组和1 mg/mL FR组摆头次数较高,比空白组分别提高了 21.42%和20.04%;施加青风藤提取液后,可以提高秀丽线虫对于37℃高温和紫外应激的抵抗性,热应激中存活率最高的是0.1 mg/mLMR组,存活率为82.30%;紫外应激下,MR组均显著提高了存活率,效果最显著的是0.1 mg/mL,存活率为73.67%;qPCR分析表明,MR组和FR组均能够显著上调线虫抗氧化相关基因daf-16、skn-1、sod-3的相对表达量。 综上所述,雌雄株青风藤的根部中代谢物组成和激素水平具有较大差异;其中乌药碱可能是雌雄株青风藤的青藤碱合成差异的关键中间代谢物;ABA水平与青藤碱含量存在显著正相关,外源施加ABA能够促进青藤碱的合成;青风藤提取物具有较好的抗氧化效果,可有效提高线虫的活动能力和环境胁迫耐受力,但不同性别、不同部位的青风藤提取物的生物活性存在显著差异。
关键词: 青风藤 ；青藤碱 ；植物激素 ；ABA ；抗氧化
摘要： 类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是一种以关节肿胀,疼痛和僵硬为主要临床表现的自身免疫性疾病。壮药八味龙钻颗粒是在龙钻通痹方的基础上自主研发的民族药复方制剂,临床上主要用来治疗RA。目前八味龙钻颗粒化学成分研究较少及缺乏抗RA整体药效学评价及作用机制研究。本课题采用UPLC-Q-TOF-MS技术鉴定其化学成分,HPLC-DAD法测定主要有效成分含量;并采用1H-NMR的代谢组学方法探讨八味龙钻颗粒治疗RA的作用机制,为其质量控制及临床开发利用提供依据。目的:1.鉴定八味龙钻颗粒的化学成分,测定其4种有效成分含量,促进其质量控制;2.评价八味龙钻颗粒治疗RA模型大鼠的药效作用及分子代谢作用机制。方法:1.应用UPLC-Q-TOF-MS技术鉴定八味龙钻颗粒的化学成分,采用HPLC-DAD法测定其4种有效成分的含量;2.采用牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂建立胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠模型,八味龙钻颗粒药液（1.25,2.5,5 g/kg）灌胃干预30天,然后通过评价各组大鼠体重、足趾容积、关节炎指数、免疫器官指数、膝关节组织病理指标,探讨八味龙钻颗粒对CIA大鼠的治疗作用。另外,采用ELISA法检测血清中促炎细胞因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-6、IL-1β和抗炎细胞因子IL-4、IL-10的含量,探讨八味龙钻颗粒对CIA大鼠的抗炎作用。3.采用1H-NMR的代谢组学结合多元统计分析方法对正常对照组、CIA模型对照组和八味龙钻颗粒高剂量组（BLG-H）大鼠血清进行系统性分析,确定与RA相关的潜在差异代谢物及该药物在代谢水平对RA的调控作用。通过代谢通路网络分析,揭示八味龙钻颗粒治疗RA的分子代谢作用机制。结果:1.从八味龙钻颗粒中共鉴定出20个化学成分,包括衡州乌药碱、木兰花碱、青藤碱、木兰箭毒碱、四氢巴马汀等成分。八味龙钻颗粒中青藤碱、木兰花碱、橙皮苷及毛两面针素的平均含量依次为6.054、4.866、2.436、2.102 mg·g-1。2.与正常对照组比较,CIA模型对照组大鼠足趾容积从第10天（P<0.05）起明显升高;胸腺指数（P<0.05）和脾脏指数（P<0.001）均明显上升;膝关节表现炎性细胞浸润,滑膜增生;血清中IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ的水平明显升高（P<0.01）,而IL-4的水平显著下降（P<0.01）。与CIA模型对照组比较,八味龙钻颗粒中、高剂量（2.5,5 g/kg）组分别从第25天（P<0.05）、20天（P<0.05）起显著抑制CIA大鼠足趾肿胀;中、高剂量组还可显著降低胸腺指数（P<0.01）,明显减轻CIA大鼠炎性细胞浸润,滑膜增生,显著降低CIA大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量（P<0.05）,同时能明显升高IL-4、IL-10的含量（P<0.05）。3.代谢组学PLS-DA得分图显示,正常对照组、CIA模型对照组和BLG-H组的代谢轮廓区分显著,提示八味龙钻颗粒干预了大鼠体内某些内源性代谢物。CIA模型对照组较正常对照组大鼠血清中共筛选出18个差异内源性代谢物,八味龙钻颗粒干预后,回调了其中16个异常代谢物,其中下调了10个代谢物:低密度脂蛋白/极低密度脂蛋白、3-羟基丁酸、脂质、氮乙酰基糖蛋白、氧乙酰基糖蛋白、乙酰乙酸、磷酸胆碱、氧化三甲胺、甜菜碱、甲酸;上调了6个代谢物:乳酸、肌酸、葡萄糖、丙氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸。代谢通路影响值大于0.1的潜在靶标代谢通路有4条,分别为酮体的合成和代谢、丙氨酸/天冬氨酸/谷氨酸代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、丁酸代谢。结论:1.八味龙钻颗粒主要含有生物碱类成分,少数为黄酮类、木脂素类等成分。建立的HPLC-DAD法简便、准确,重现性好,可用于八味龙钻颗粒中4种有效成分的含量测定,并为其质量控制提供参考。2.八味龙钻颗粒中、高剂量组（2.5,5 g/kg）有效地改善了CIA大鼠关节炎的严重程度,其中高剂量组效果最佳。八味龙钻颗粒可以通过下调促炎细胞因子（IL-1β、TNF-α、IL-6）和上调抗炎细胞因子（IL-4、IL-10）来抑制炎症反应。3.八味龙钻颗粒治疗RA的作用机制可能与改善脂质代谢、糖酵解、氨基酸代谢、酮体代谢、炎症反应和肠道菌群代谢有关。
关键词: 类风湿性关节炎 ；壮药 ；八味龙钻颗粒 ；质量控制 ；胶原诱导性关节炎 ；代谢组学 ；作用机制
被引量
4
摘要： 目的
青藤碱(Sinomenine)是从中药青风藤中提取的生物碱单体,具有抗炎、抗免疫、镇痛、降血压、促组胺释放等药理作用,广泛用于治疗风湿性及类风湿性关节炎。该药物在临床应用一般需长期口服,且用药剂量偏大、给药间隔短,有研究表明青藤碱半衰期短,生物利用度低,与其他药物合用时可产生相互作用。
本研究采取吸收模型与体内药动学相结合研究中药有效成分单体青藤碱及其提取物在正常和病理条件下的体内过程,预测影响其口服吸收的因素,探讨导致青藤碱口服生物利用度低的原因,可为临床合理用药、剂型设计及结构改造提供参考,并有利于原植物青风藤的进一步开发和利用。通过上述工作,也可为药物渗透性、吸收和生物利用度预测方面的计算方法和模型提供有价值的数据,有利于探索提高口服制剂生物利用度的理论基础与研究手段。
方法
本文建立了灌流液及血浆样品中各药物成分的高效液相色谱(HPLC)定量分析方法,用以进行青藤碱的吸收特性与药代动力学研究；采用在体单向灌流法对青藤碱及其提取物在大鼠小肠的吸收特性进行系统的研究,并应用已建立的HPLC法测定灌流液中青藤碱的浓度,计算有效渗透系数,应用SPSS 16.0软件比较青藤碱及其提取物的吸收情况；正常大鼠和肝纤维化大鼠分别灌胃给予考察青藤碱及其提取物,按实验设计在不同时间点采血,应用已建立的HPLC法测定血浆中青藤碱的浓度,采用DAS 2.0软件计算药动学参数,应用SPSS 16.0软件比较正常大鼠和肝纤维化大鼠的药动学参数。
结果
1、本实验所建立的灌流液中各药物成分的HPLC定量分析方法学结果显示,各组分分离完全,且空白肠灌流液中的物质不干扰药物的测定；日内和日间RSD均小于15%,回收率均在95-105%之间；各成分在灌流液中4h内稳定。该方法可满足生物样品分析的要求。
2、各肠段NWF值为负值,表明水分在肠道有吸收；通过对大鼠各肠段的Peff进行比较,青藤碱在各肠段吸收无显著性差异(P>0.05),氢氯噻嗪、茶碱的Peff均与文献值相近,且符合BCS分类；在同一肠段,浓度对Peff有明显影响(P<0.05),在低、中浓度时,青藤碱的Peff随剂量的增大而增加,但在高浓度时,其Peff降低；加入抑制剂后P-gp表达最丰富的空肠段的肠有效渗透系数明显增加；提取物中青藤碱浓度对Peff有明显影响(P<0.05),在低、中浓度时,Peff随剂量的增大而增加,高浓度时,Peff降低；相同浓度的提取物在十二指肠和空肠段的渗透性系数较青藤碱单体均有所下降,中、高浓度的数据有显著性差异(P<0.05)。
3、本实验所建立的青藤碱大鼠血浆样品的HPLC定量分析方法学结果显示,血浆中内源性物质不干扰青藤碱和内标的测定；回归方程为Y=0.148X-0.007,r=0.9985,线性范围0.2-50.0 ug·mL-1，定量下限为0.2 ug·mL-1；该方法的日内精密度、日间精密度和准确度均符合要求,低、中、高三个浓度的提取回收率均大于75%。内标提取回收率接近70%；样品中青藤碱在冻融、室温和长期冷冻状态下保持稳定,均无明显降解。可用于血浆中青藤碱浓度的测定以及药动学研究。
4、大鼠灌胃给予青藤碱60、30、15 mg·kg-1的药动学均符合二室模型,各剂量组的t1/2z、Tmax、MRT无显著性差异(P>0.05)；Cmax、AUC均有显著性差异(P<0.05),随剂量增加而增加,药动学行为基本呈线性关系；三组Vz/F、CLz/F均有显著性差异(P<0.05),随剂量增加而减小。高、中剂量(30 mg·kg-1)提取物组较青藤碱组的AUC、Cmax显著降低(P<0.05),CLz/F及Vz/F显著增加(P<0.05)。
5、肝纤维化大鼠组的肝脏呈肝纤维化病理改变,可用于本课题药动学的研究。各剂量青藤碱在肝纤维大鼠体内的药代动力学过程也均符合二室模型,肝纤维化大鼠各剂量组的t1/2z、Tmax、MRT无显著性差异(P>0.05)；在肝纤维化鼠中,高剂量组AUC、Cmax虽显著高于低剂量组(P<0.05),但较中剂量组无明显增加(P>0.05),中剂量组与低剂量组均有显著性差异(P<0.05)；三组Vz/F、CLz/F均有显著性差异(P<0.05)。肝纤维化鼠灌胃给予青藤碱后的药物动力学行为,与正常大鼠相比有显著性差异(P<0.05)：其中t1/2z、Tmax、MRT差异不大；给予高剂量(60 mg·kg-1)时,正常鼠的AUC、Cmax均大于肝纤维化鼠,Vz/F、CLz/F小于肝纤维化鼠；给予中、低剂量(60、30mg·kg-1)时,与高剂量相反,正常鼠的AUC、Cmax均小于肝纤维化鼠,Vz/F、CLz/F则大于肝纤维化鼠。
结论
1、本实验建立的单向灌流模型稳定,可用于青藤碱吸收特性的研究；青藤碱属于高渗透性药物,在各肠段均有较好吸收(P>0.05),无特定吸收部位；浓度对青藤碱的有效渗透系数有显著影响(P<0.05),存在高浓度(300.0 umol·L-1)饱和现象,其吸收机制为主动转运；加入P-gp抑制剂盐酸维拉帕米(100 umol·L-1)后,空肠段的肠有效渗透系数明显增加(P<0.05),青藤碱可能是P-gp的底物；提取物中复杂成分对青藤碱肠吸收有显著影响。
2、本研究建立的青藤碱大鼠血浆样品测定方法具有干扰小,专属性高,准确度好、稳定的特点,可用于血浆中青藤碱浓度的测定及药动学研究；大鼠灌胃给予青藤碱与青藤碱提取物后的药动学行为具有显著性差异(P<0.05)；肝纤维化鼠灌胃给予青藤碱后的药物动力学行为,与正常大鼠相比有显著性差异(P<0.05)。
综上所述,青藤碱口服进入体内后,鉴于其良好的溶解性,在肠道以较高的渗透性进行主动转运,在低浓度时受P-gp外排作用,导致其吸收入血的量减少,也可能与肠壁代谢偶联作用,从而使化合物在吸收过程就受到阻碍,青藤碱在体内大多经过肝脏进行生物转化。提取物在体内吸收较单体更差,在临床应用需配伍其他药物或改变青藤碱的剂型来提高其生物利用度。肝脏疾病患者服用青藤碱时应注意给药剂量,并随时监测其血药浓度和生理反应。
关键词: 青藤碱 ；肠吸收 ；药动学
被引量
9
摘要： 雷公藤在现代临床应用中,常作为治疗风湿顽痹之要药,因其有大毒,毒性涉及消化、泌尿生殖、血液、心血管等多个系统,很大程度上限制了其在临床上的应用。清络通痹方为临床治疗类风湿关节炎的有效验方,组成中以雷公藤为臣药,配伍三七、青风藤、僵蚕、生地,方中诸药相互协同,达到了减毒增效的作用。前期对复方中雷公藤配伍减毒的化学物质基础及药代动力学研究发现,三七、青风藤为方中与配伍减毒有关的主要药味,且其配伍减毒作用与雷公藤中毒性成分雷公藤甲素的体内过程有关。本课题以雷公藤单味药、雷公藤配伍三七、雷公藤配伍青风藤及清络通痹复方为研究对象,旨在研究复方中雷公藤配伍前后四种有效成分的肠吸收动力学的变化以及三七配伍雷公藤前后体内代谢过程的变化。从肠吸收和体内代谢的角度来探讨清络通痹复方中,雷公藤配伍三七、青风藤后的减毒机制。本文主要从雷公藤配伍减毒的化学基础,雷公藤单味药、雷公藤配伍三七、雷公藤配伍青风藤及清络通痹复方中4种有效成分的肠吸收动力学以及雷公藤配伍三七前后代谢组学三个方面开展研究工作。1、雷公藤配伍减毒的化学基础研究:基于前期复方中雷公藤配伍减毒的化学基础研究,选取雷公藤单味药、雷公藤配伍三七、雷公藤配伍青风藤及清络通痹方为研究对象,测定当雷公藤投料量相同时,各组雷公藤甲素的溶出含量。结果:雷公藤甲素的溶出趋势为雷公藤>雷公藤配伍青风藤>雷公藤配伍三七>全方。此趋势表明清络通痹全方,雷公藤配伍三七,雷公藤配伍青风藤均能使雷公藤甲素的溶出明显降低(P<0.5)。2、配伍前后雷公藤中四种有效成分的肠吸收动力学研究:(1)建立了雷公藤配伍组合肠灌流液中雷公藤中四种有效成分(雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤内酯甲、雷公藤红素)的LC-MS检测方法。方法学考察结果表明,该方法的专属性、线性、提取回收率、日内及日间精密度和稳定性均符合生物样品的分析要求,可靠可行。(2)采用在体单向肠灌流模型分别初步考察了雷公藤中四种有效成分(雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤内酯甲、雷公藤红素)的肠吸收特性。结果:四种成分在不同肠段的吸收趋势分别为雷公藤甲素:回肠>十一指肠>结肠>空肠;雷公藤内酯酮:十二指肠>结肠>回肠>空肠;雷公藤内酯甲:结肠>回肠>空肠>十二指肠;雷公藤红素:回肠>结肠>空肠>十二指肠,均无特殊吸收部位。其中,雷公藤红素吸收百分率最低约为6%,雷公藤甲素、雷公藤内酯甲、雷公藤内酯酮的10cm肠吸收百分率在29%-51%间。(3)采用在体肠灌流模型比较了雷公藤、雷公藤配伍三七、雷公藤配伍青风藤和清络通痹复方各组间雷公藤中四种有效成分的肠吸收情况。结果:雷公藤在配伍三七、青风藤后及在复方中,雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤红素的肠吸收特性均与单体相同;而雷公藤内酯甲的各肠段吸收趋势有所变化,但并未显示出一致性,均未显示出特定的吸收部位。雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤内酯甲在雷公藤配伍三七、青风藤及复方中,肠壁吸收有效渗透系数、10cm%肠吸收百分率和肠吸收速率常数都有所减少,其中复方降低最多,说明雷公藤在配伍三七、青风藤后及在清络通痹复方中这三种有效兼毒性成分的肠吸收量和速率都有所减少。雷公藤红素在雷公藤三七、清络通痹复方组中的肠吸收量和速率均高于雷公藤单味药组,而雷公藤配伍青风藤后的肠吸收量和速率低于雷公藤单味药组,说明三七配伍雷公藤及在清络通痹复方中雷公藤红素的肠吸收反而增加,雷公藤配伍青风藤后雷公藤红素的肠吸收减少。3、基于代谢组学的雷公藤配伍三七的减毒研究(1)雷公藤的肝、肾毒性研究:结合了大鼠肝、肾组织病理学检查、血清中生化指标的检查,利用代谢组学的手段将连续7 d给予大鼠雷公藤水提物、雷公藤甲素后的尿液及血清代谢产物谱与空白组进行分析比较,找出可能与肝、肾毒性有关的生物标记物。初步确定了与雷公藤引起的肝、肾损伤有关的生物标记物21个(尿11个,血浆10个)。其中与肝脏损伤相关的生物标记物主要有扩牛磺酸、蛋氨酸、柠檬酸盐、苹果酸、延胡索酸、PC(o-22:0/22:3,18:1)、LPC(14:1,20:4)和磷酸;与肾脏损伤相关的生物标记物主要有马尿酸、肌酐和蛋氨酸。主要涉及的体内代谢过程的改变包括蛋白质合成、三羧酸循环、尿素循环、磷脂代谢、能量代谢和脂类代谢变化。(2)雷公藤配伍三七的减毒研究:结合了大鼠肝、肾组织病理学检查、血清中生化指标的检查,利用代谢组学的手段将连续7 d给予大鼠雷公藤水提物、雷公藤三七水提物后的尿液及血清代谢产物谱与空白组进行分析比较,找出可能与配伍减毒有关的生物标记物。结果发现连续给予雷公藤三七水提物后,只引起了大鼠轻微的肝损伤,并未引起肾损伤,结合前期毒性研究可以推断三七配伍雷公藤后可以对抗雷公藤引起肝、肾毒性。通过对尿液、血液中的差异性代谢产物的分析,初步确定了与雷公藤配伍三七减毒作用有关的生物标记物17个,主要包括牛磺酸、蛋氨酸、柠檬酸盐、延胡索酸、甲基琥珀酸,cis-4-Octenedioic acid,半胱氨酸,苏糖醇,Tiglylglycine,PC(o-22:0/22:3,22:0)、LPC(15:0,18:1,18:2,22:5,22:6)和磷酸。主要涉及的体内代谢过程的改变包括蛋白质合成、三羧酸循环、尿素循环、磷脂代谢、能量代谢、脂类代谢和碳水化合物代谢的变化。雷公藤引起的肝、肾毒性会对这些生物途径产生影响,而配伍三七后使这些被改变的途径得以回调,这可能与三七配伍雷公藤的减毒作用有关。
关键词: 雷公藤 ；配伍 ；减毒 ；肠吸收 ；代谢组学
被引量
3
摘要： 研究背景：
化学性肝损伤已成为继病毒性肝损伤之后的第二大肝病诱因,目前临床应用的500至1000余种中西药物以及多种化学药品,均可引起不同程度的肝病。据国内外资料报道,有20%的暴发性肝衰竭由化学药物引起。近年来,化学性肝损伤呈增加趋势,严重威胁人们的生命健康。研究肝炎的发生机理及寻找有效的治疗措施是国内外学者共同研究的热门课题,大量研究表明,国内很多专家学者把研究的重点转向我们传统的中药,研究治疗肝炎的中药是目前我国研究领域的一个热点。但目前临床上仍缺乏有效的防治药物,因而加强肝脏损伤保护研究、开展对化学性肝病的防护工作,对于提高人类健康水平具有重要意义。
西医用于肝炎的治疗多见于抗病毒药、护肝降酶药及免疫调节类药物,目前临床上常用的品种有干扰素、阿糖胞苷、干扰素诱导剂聚肌胞、无环鸟苷、左旋咪唑、转移因子、辅酶Q、胸腺素、右旋儿茶素、甘草甜素、齐墩果酸、葫芦素B、葫芦素E、联苯双酯、维生素类等。临床治疗结果表明,这些药物多具有良好的抑制病毒复制,恢复正常肝功能,保护肝细胞等作用,并且疗效迅速,不足之处为远期疗效不稳定,易反复,HBsAg转阴率低,有些药品价格昂贵和表现一定的副作用。
中医学认为肝损伤的病因多与外感时邪、饮食失常、情志失调或正气虚弱等有关。金实等认为本病的病因主要是外感湿热邪毒和饮食不当,并且与体虚劳倦有关,病机变化主要为湿热邪毒蕴结肝脾,肝胆失疏,脾胃不健,气滞血瘀,脉络失和所致。连粤湘等认为本病的病因病机为湿热外侵或疫毒感染,郁于脾胃,以致湿热熏蒸,脾失健运,肝失疏泄,肝脾不和,胆液外溢而为之。孙江桥等认为本病的病因病机多为湿热毒淤,肝郁气滞,瘀血阻络,脾失健运,肝肾阴虚所致。中医中药具有不良反应较少,可长期服药的特点。近年来,中药治疗肝炎取得了良好的疗效。
生物碱(alkaloid)是存在于生物体(主要为植物)中的一类含氮的有机化合物,大多数有复杂的环状结构,氮原子多包含在环内,多呈碱性,可与酸成盐,有显著的生物活性,是中草药中重要的有效成分之一。
生物碱是研究得最早的一类有生物活性的天然有机化合物。目前已分离到10000余种,其中80余种已用于临床,如黄连中的小檗碱用于抗菌消炎,麻黄中的麻黄碱用于平喘,萝芙木中的利血平用于降压,喜树中的喜树碱与长春花中的长春新碱用于抗肿瘤等。
目前已对数十种生物碱进行了研究,麻黄碱、苦参碱、氧化苦参碱、秋水仙碱、烟碱、毒藜碱、罂粟碱、吐根酚碱、半边莲碱、奎宁、辛可宁、紫堇碱、小檗碱、吗啡、可待因、汉防己碱、延胡索乙素、吴茱萸碱、乌头碱、马钱子碱、士的宁、长春碱、长春新碱、厚朴碱、槟榔碱、槟榔次碱、东莨菪碱、山莨菪碱、木兰碱、蝙蝠葛碱、青藤碱、青风藤碱、莲花氏碱、麦角新碱、利血平、红豆杉醇、贝母碱等。其中许多以应用于临床并取得较好的疗效,如麻黄碱、秋水仙碱、苦参碱、吗啡、麦角新碱、延胡索乙素山莨菪碱等。文献已有报道不少生物碱对肝脏具有保护作用,例如：粗叶悬钩子总生物碱对急性肝损伤大鼠肝组织CYP2E1与CYP3A1酶mRNA表达的影响,岩黄连总碱提取物对小鼠免疫性肝损伤的改善作用,鬼针草提取物对小鼠实验性肝损伤的预防作用,氧化苦参素碱的抗乙型和丙型肝炎病毒效应,延胡索乙素对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用。
红背叶根为双子叶植物药大戟科植物红背山麻杆Alchornea trewioides (Benth.) Muell.-Arg.的根,别名为名红灵丹、红罗裙、红帽顶、红背娘、红骨白颧树根。主要分布于我国中部和东南、华南。其味甘,性凉,根四季可采,载于《广西中草药》。灌木或小乔本,嫩枝有毛,生山坡、荒地的灌丛中。具有清热解毒,祛风除湿,散瘀止血,平喘,杀虫止痒等作用。传统应用于治疗肠炎腹泻。痢疾,黄疸型肝炎,尿路感染和结石,肾炎,小便不利,尿血,血崩,白带,湿疹,荨麻疹,疮痈肿毒,疮疡久不收口等症。同时也用于治疗各型肝炎,是民间常用的保肝治肝药物,但目前国内外对其研究尚未深入报道。
现代医学研究表明,红背叶根中含生物碱和酚性物质,具有止咳、祛痰作用,抗乙酰胆碱作用和轻度抑制金黄色与白色葡萄球菌作用。本课题组首次发现其水提物及水提醇沉所得的浸膏具有抗肝炎病毒和阻止肝纤维化的作用,有保肝、降酶、抗肝纤维化作用。体外实验研究表明有一定的抗乙肝病毒的作用。抗鸭乙肝病毒试验表明红背叶根有抑制体内D-HBV复制的作用,作用与剂量和用药时间相关。其作用较拉米夫定弱,但维持时间长、服药安全。课题组研究了红背叶根对卡介苗和脂多糖诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用,结果表明红背叶根可显著改善免疫性损伤小鼠胸腺、肝脏、脾脏系数,降低血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、一氧化氮的活性以及肝组织匀浆中TNF-α、IL-1β的含量,提示红背叶根对免疫性肝损伤具有显著的保护作用。上述实验表明,红背叶根是一个较为理想的多途径、多靶点、多环节治疗乙肝的候选药物。但经文件检索发现目前对红背叶根的研究并不多。
研究目的：
本课题组通过不同的提取方法对红背叶根进行提取,并比较不同提取方法所得的生物碱的含量,从中找到提取红背叶根生物碱中的最佳提取方法,并从中分离得出生物碱。同时比较不同提取方法的提取物对肝损伤的保护作用,对红背叶根总生物碱对四氯化碳所致的急性肝损伤的作用进行初步研究,以了解红背叶根中的有效成分,进而为其进一步的研究开发奠定理论和实验基础。
研究方法：
1红背叶根不同成分的提取
1.1粉碎：除去泥沙杂质后,将红背叶根粉碎成粗粉,备用。
1.2水提：取红背叶根原药材加8倍量水,加热回流2小时,收集提取液。残渣再加8倍量水加热回流2小时,过滤,合并提取液,蒸去多余水份,浓缩,冷藏备用。
1.3醇提：取红背叶根原药材加8倍量95%乙醇,加热回流2小时,收集提取液。残渣再加8倍乙醇加热回流2h,过滤,合并提取液,回收乙醇后,冷藏备用。
1.4生物碱的提取：采用酸水-碱化-亲脂性溶剂萃取,最终得到总生物碱。按与原药材的比例配置成一定浓度混悬水液。生物碱中、低剂量组分别用混悬液加蒸馏水稀释成1/2、1/4剂量,冷藏备用。
2红背叶根不同提取物对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的实验研究
2.1实验分组
昆明种小鼠96只,体质量18～22 g,雌雄各半(南方医科大学实验动物中心提供)。采用随机分组的方法分为正常组、模型组、联苯双酯组(175mg/kg)、红背叶根水提物(7.8g生药/kg)、红背叶根醇提物(7.8g生药/kg)及红背叶根总生物碱高(7.8g生药/kg)、中(3.9g生药/kg)、低(1.95g生药/kg)剂量组,每组12只,雌雄各半。除正常组小鼠外,其余小鼠在造模的同时灌胃给药,灌胃剂量为0.5m/20g,正常组小鼠给同等剂量生理盐水。
2.2造模方法
连续灌胃给药5 d,第5天给药后1 h,采用腹腔注射0.12%四氯化碳(用橄榄油配制)0.1 ml/10 g,正常组小鼠腹腔注射相同体积的橄榄油,禁食不禁水16小时。
2.3指标检测
2.3.1摘眼球采血后,离心获得血清,按试剂盒说明操作检测血清ALT、AST、T.Bili活性。
2.3.2肝脏组织病理学检查：处死动物,取出肝脏,用冷生理盐水洗去浮血,拭干。于肝门处及右肝叶取材1块,用10%中性福尔马林溶液固定,70%、80%、90%、95%、100%乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,切片机作4um切片,常规脱蜡,HE染色,中性树胶封片。用显微镜观察,以及PM-20型显微摄像系统照相。
2.4统计处理方法实验结果计量资料用均数±标准差,方差齐性时,组间比较用One-Way ANOVA。采用LSD方法进行组间多重比较；方差不齐时,用Welch法,采用DunnettT3方法进行组间多重比较。用统计软件SPSS13.0进行分析,数据以(X±s)表示,P<0.05定为差异有统计学意义。
结果：
1采用不同提取方法对红背叶根成分进行提取,并比较所得的生物碱的含量,最终得出的结果为：采用水提法和醇提法所提取得到的生物碱的量约为0.06%,采用醇提法,提取所得生物碱含量稍高些。采用水提法,提取出来的其他非生物碱成分较多,分离生物碱比较麻烦。所以提取生物碱的较佳途径为醇提法。
2与正常组比较,模型组血清ALT、AST水平升高(P<0.05),表明本次实验的小鼠急性肝损伤造模成功。红背叶根水提物、醇提物及总生物碱高、中、低剂量组与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组相比较,模型组小鼠血清中胆红素水平升高(P<0.05),各给药组与模型组比较,血清胆红素的活性差异有统计学意义(P<0.05)。
3小鼠肝组织形态学观察,镜下观察各组小鼠肝脏的病理变化。模型组小鼠肝细胞改变明显,部分肝小叶失去正常结构,肝细胞有不同程度的坏死灶伴炎症细胞浸润,部分可见体积增大,呈空泡片状病变,与正常组相比有显著性差异,提示造模成功。阳性药联苯双酯组小鼠肝细胞基本正常,仅见部分轻度肿胀,未见坏死灶。红背叶根水提物组、醇提物组、总生物碱高剂量组肝细胞轻度肿胀,未见坏死灶。总生物碱中剂量组肝细胞轻度肿胀,有点状坏死。低剂量组肝细胞肿胀明显,伴有散在点状坏死。红背叶根三种提取物组与模型组相比较上述病理改变有所减轻。
结论：
1红背叶根总生物碱的较佳提取方法为：用8倍量的95%乙醇提取红背叶根中的总生物碱,本方法含杂质少,且含量较高。
2结果显示红背叶根水提物、醇提物、总生物碱均具有预防四氯化碳所致肝损伤的作用。
3红背叶根抗急性肝损伤的有效成分之一是红背叶根总生物碱,为红背叶根的进一步的研究开发奠定理论和实验基础。
关键词: 红背叶根 ；生物碱 ；急性肝损伤
被引量
3
摘要： 中药复方是中医辨证论治、整体观思维的具体表现,它是一组具有化学成分非常复杂、干扰因素众多等特点的典型复杂体系。中药复方通过君臣佐使各味药材之间的配伍组合,针对疾病的病因病机,通过适当的给药途径被吸收入血,整体协同互济达到治疗疾病的目的,所以对中药复方的体内外物质基础研究也应从其整体入手。中药复方药效物质基础研究是中药现代化的核心问题之一。对复方化学成分的研究有可能从本质上阐明复方作用的物质基础,可为优化处方,制定科学的制剂工艺,提高制剂质量提供依据。
清络方是类风湿性关节炎湿热阻络证的代表方剂,为揭示清络方的药效物质基础,研究药物体内变化规律,提高整方的质量控制手段,本论文采用HPLC-DAD. HPLC-DAD-MS／MS等多种成熟的分析技术研究并阐明了清络方主要的药效物质基础,运用正常及病理状态大鼠血清药物化学的分析手段研究了清络方主要的体内作用物质基础。在体内外物质基础明确的基础上,对清络方的主要成分进行质量控制研究。具体研究思路如下所示：
第一部分文献综述
总结了清络方的临床应用和现代研究,并对清络方复方的三个单味药苦参、青风藤、黄柏进行了简介,对清络方中主要的化学成分进行了综述。共引用参考文献56篇。
第二部分清络方中化学成分定性研究
首先建立了清络方全方液质联用的分析方法,采用HPLC-DAD-MS／MS技术对清络方复方中检测到的主要化合物进行了分析,共推测鉴定了包括木兰碱、氧化苦参碱、青藤碱、苦参碱、小檗碱等14个主要的生物碱类化合物及2个未知物。已推测并鉴定的生物碱类别主要包括氮杂环已烷类生物碱(苦参碱类)、氮杂环已烷类生物碱(无叶豆碱类)、.高苄基四氢异喹啉生物碱(四氢原小檗碱类)、阿朴啡型生物碱(阿朴啡季胺盐类)、四氢异喹啉生物碱(原阿朴啡类)。HPLC-DAD-MS／MS分析条件的建立及主要化合物的分析鉴定,为下一步血清药物化学研究及主要成分定量研究奠定了基础。
第三部分清络方正常大鼠及病理大鼠入血成分初步研究
在已建立的HPLC-DAD-MS／MS分析方法的基础上,本实验通过动物造模、血清前处理及部分色谱条件的优化,建立了清络方血清药物化学分析方法。运用HPLC-DAD-MS／MS方法对清络方全方提取液、正常大鼠及病理大鼠给药血清和空白血清进行对比分析。从正常大鼠含药血清中共检测到13个主要色谱峰,鉴定了其中的7个原型入血成分及三种主要类型的代谢产物。从病理大鼠含药血清中共检测到14个主要色谱峰,鉴定了其中的7个原型入血成分及三种主要类型的代谢产物。正常大鼠及病理大鼠血清中均可检测到的以原型入血的化学成分主要包括木兰碱、羽扇豆碱、苦参碱、青藤碱、槐果碱、小檗碱及一种结构未知的苦参碱类化合物。正常大鼠与模型大鼠的代谢产物主要包括羟基氧化代谢产物、葡萄糖醛酸结合产物及一种未知类型的代谢产物三个主要类别。在这些入血成分中,大部分化合物都已经证明对类风湿关节炎有相关的治疗作用。本部分最后,分析比较了正常大鼠与病理大鼠清络方入血成分的区别,正常大鼠及病理大鼠对清络方中部分原型成分的吸收及对部分化合物的代谢能力存在一定的差别。清络方血清药物化学的研究初步明确了清络方的体内作用的药效物质基础。
第四部分清络方中的主要药效成分的定量研究
本部分根据上述分析的研究结果,采用HPLC-DAD联用技术对清络方中8个主要成分(其中包括5个主要的入血成分)进行了定量研究。通过对多个主要药效成分的同时定量测定,不仅可以提高清络方的质量标准,而且使该复方的稳定性得到了有力的保障.
本课题采用液相色谱/电喷雾质谱联用技术等多种分析方法,通过对清络方全方物质基础、正常及病理状态大鼠的入血成分的研究及主要作用成分的定量研究,基本阐明了清络方的体内外作用的物质基础,并为质量控制提供了稳定可靠的方法。清络方药效物质基础的阐明,为进一步揭示复方多成分多靶点的作用机制提供了理论依据。本方法简便、准确、快速,重复性好,实现了中药复方全方定性、指标性成分定量,血清成分定性的原则,能够为清络方的指纹图谱质量控制以及血清药物化学的血清指纹图谱进一步研究打下基础,对临床用药和进一步开发利用提供了依据,为实现中药现代化进行了有价值的研究。
关键词: 清络方 ；定性 ；定量 ；血清药物化学 ；HPLC-DAD-MS/MS
被引量
14
摘要： 本论文采用HPLC法对6种25个居群千会藤属植物 (云南地不容 Stephaniayunnanensis、齿叶地不容 S.dentifolia、地不容 S.epigaea、长柄地不容 S.longiPes、黄叶地不容 S.viridiflavens和河谷地不容S.intermedia) 中12种生物碱成分进行含量测定;对其化学成分变异式样以及云南地不容的化学指纹图谱进行了分析：
并对从山乌龟亚属植物中分离出的部分生物碱成分进行抗心律失常作用的筛选。
具体研究内容如下:
1. 6种千金藤属植物的化学成分变异式样的研究目的：探讨6种地不容居群间和居群内生物碱变异式样,为地不容类药材中生物碱成分的分布格局及遗传多样性研究提供依据。方法：利用 HPLC-DAD 法,采用ODS柱(250mm×4.6mm,5μm) 以甲醇-水-三乙胺系统为流动相梯度沈脱,测定6种25个居群200多个样品中青凤藤碱(sinoacutine)、异紫堇定(isocorydine)、无根藤新碱(1-cassythincine)、8羟基罗默碱(8-hydroxyromerine)、左旋四氢巴马汀(1-tetrahydropatmatine)、荷包牡丹碱(dicentrine)、sukhodiamine、克班宁(Crebanine);罗默碱(roemerine)、千金藤碱(stephanine)、去氢克班宁(dehydrocrebanine)、粉防己碱(tetrandrine)的含量,借助SAS9.0统计分析软件对生物碱变异式样进行描述性分析、主成分分析、R-聚类分析、Q-聚类分析和巢式方差分析.结果:居群内生物碱成分变化丰富.云南地不容生物碱变异式样与地理位置、海拔等生境条件关系不明显。除云南地不容的另外5种植物中,同种不同居群中生物碱分布无明显规律,但生物碱种间分布的差异有助于物种的化学分类。结论：6种千盒藤属植物生物碱变异式样的研究,能够为地不容类药材的质量评价及优良品种的选育提供依据。
2. 云南地不容HPLC的指纹图谱研究目的：建立云南地不容药材的高效液相指纹图谱 (HPLC-FP),为云南地不容的鉴别及品质控制提供依据。方法：采用HPLC对不同产地云南地不容与齿叶地不容主要成分生物碱成分进行指纹图谱研究,以相似度和系统聚类分析进行评价。结果:测定了2种14个不同居群原药材,获得12个共有色谱峰,且方法学考察符合标准规定。用系统聚类分析将原药材分为三类,同种之间相距较近,同种不同居群中产地相距较近的居群首先聚为一类。云南地不容10个产地样品的相似度在0.9～1.0之间,齿叶地不容4个产地样品的相似度在0.6～0.9之间。结论:高效液相指纹图谱方法与系统聚类分析和相似度评价相结合,能更全面地反映原药材整体质量。
3. 抗心律失常药理实验目的：对从山乌龟亚属植物中分离出的7种生物碱成分进行抗心律失常作用的药理筛选。方法：采用BaCl<,2>实验性心律失常模型观察了青风藤碱(sinoacutine)、罗默碱(roemerine)、巴马汀(palmatine)、8羟基罗默碱(8-hydroxyroemerine)、四氢巴马汀(tetrahydropalmatine)、Rao-5(结构未确定)、8-甲氧基青藤碱(cephamonine)、青藤碱(sinomenine)的抗心律失常作用.结果:治疗组iv四氢巴马汀5mg·kg<'-1>可使大鼠恢复窦律,与对照组(生理盐水组)比较有显著性差异。罗默碱有减慢心率的作用。结论：四氢巴马汀对大鼠实验性心律失常具有治疗作用。
关键词: 千金藤属 ；云南地不容 ；HPLC指纹图谱 ；生物碱变异式样 ；抗心律失常
摘要： 类风湿性关节炎是一种常见的慢性炎性关节疾病。临床研究表明，类风湿性关节炎的发作呈近似昼夜变动。病人的症状如疼痛、晨僵、炎症等在清晨加重，下午及夜里缓解。作为我国的优秀文化遗产的中医中药，近年来对类风湿性关节炎的治疗进行了许多有益的探索。
青风藤为防已科防已属植物青藤(SinomeniumacutumRehd.etWils.)的茎，其性味苦、辛、平。《本草纲目》认为有“治风湿流注，历节鹤膝”之功。青藤碱是从青风藤中提取的有效生物碱单体(C19H23NO4)，药用多为其盐酸盐(C19H23NO4·HCl·2H2O)。临床上主要用于治疗类风湿性关节炎。其化学名为：7，8-二去氢-4-羟基-3，7-二甲氧基-17-甲基-9a，13a，14a-吗啡烷-6-酮盐酸盐，分子式为：C19H23NO4，化学结构式为：
从化学结构上看，它由氢菲核及乙胺桥组成，结构类似吗啡，为长丝状晶体，易溶于氯仿、丙酮、乙醚、乙醇和碱液中，微溶于水。其盐酸盐为长针状晶体，易溶于水。
从20世纪20年代开始，中外学者对青风藤有效成分青藤碱进行了较全面的基础研究。研究表明，青藤碱具有广泛的药理活性，(1)镇痛作用：小鼠热板法显示，青藤碱口服和皮下注射镇痛的ED50分别为154.9mg/kg和125.2mg/kg，小鼠电刺激甩尾法表明，青藤碱皮下注射镇痛的ED50为161.2±28.7mg/kg，以上实验证明青藤碱有明显的镇痛作用;(2)抗炎作用：青藤碱60mg/kg腹腔注射，对大鼠甲醛性、蛋清性关节炎，无论预防给药或治疗给药均可使关节肿胀程度显著改善;(3)免疫系统的作用：青藤碱腹腔注射或肌肉注射25、50、100mg/kg能明显降低小鼠碳粒廓清速率和脾脏及胸腺的重量，显著抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，引起血浆中cGMP/cAMP比值的下降，对体液免疫和细胞免疫均有明显抑制作用;(4)镇静作用：青藤碱对小鼠、犬、猴试验均有显著的镇静作用，青藤碱能明显减少小鼠的自发活动和被动活动;(5)镇咳作用：小鼠和豚鼠二氧化碳引咳法及电刺激猫喉上神经均表明青藤碱具有明显的镇咳作用;(6)抗心律失常作用：动物静脉或腹腔注射20mg/kg青藤碱后，对乌头碱和哇巴因诱发的大鼠及豚鼠心律失常有明显的拮抗作用，对氯化钙引起的大鼠室颤、氯仿-肾上腺素诱发的家兔心律失常、氯仿诱发的小鼠室颤均有明显的拮抗作用，同时青藤碱还可拮抗异丙肾上腺素引起的心律加快，青藤碱对缺血性心律失常有明显的对抗作用;(7)降压作用：对麻醉猫或不麻醉大鼠、犬和兔，无论静注或灌胃均有急性降压作用;(8)组胺释放作用：青藤碱是目前所知的植物成分中最强的组胺释放剂之一，给狗注射青藤碱，可使血浆中的组胺含量升高。
自70年代以来，青藤碱就运用于临床治疗风湿性、类风湿性疾病。青藤碱的镇痛抗炎免疫作用是治疗此类疾病的药理学基础，大量的临床使用也表明其疗效确切，治疗风湿、类风湿性疾病以及慢性肾炎等，有效率达90％以上。近期经过历时三年的双盲比较，证实青藤碱与国际治疗风湿病的金标准药物甲氨喋呤的疗效相当，但副作用小，耐受性小，较其它抗风湿中药雷公藤制剂(具致突变作用)具有许多优点，有很好的研究与开发应用潜力。目前，青藤碱主要给药途径有口服、肌肉注射、穴位注射、离子导入等。现有品种为盐酸青藤碱片、注射液，市场上较多见的为正清风痛宁片(盐酸青藤碱片)、正清风痛宁缓释片、正清风痛宁注射液等。从药剂学的角度看，青藤碱的生物半衰期较短，约5～6小时。且有释放组胺而致皮疹等副作用，对光、热不稳定，易分解，因而有必要进行药剂学研究，采用适宜的剂型使青藤碱的血药浓度维持在稳态有效浓度以弥补上述缺点。青风藤在我国南部大部分地区均有分布，青藤碱的含量也较高，因此大力开发和推广青藤碱的临床使用有很大的经济价值和社会价值。
本文制备了盐酸青藤碱24小时缓释胶囊并考察了盐酸青藤碱胶囊的制备工艺及缓释微丸包衣层处方的组成。试验结果表明，制备的缓释微丸外观美白而有光泽，体外释药可达24小时。
盐酸青藤碱缓释胶囊可用紫外分光光度法进行体外释放度考察和含量测定。处方前研究表明处方中主药和辅料的相容性较好。采用国产离心造粒设备，运用粉末层积法制备了盐酸青藤碱微丸，通过处方筛选和工艺考察，目标微丸的收率可达90％以上，盐酸青藤碱微丸的载药量约为24.5％，试验结果表明运用离心造粒技术能达到预期的目的。选用丙烯酸树脂水分散体作为包衣材料在微型流化床上对盐酸青藤碱微丸进行了包衣。考察了包衣的工艺因素和处方因素对其影响，结果表明包衣后的盐酸青藤碱微丸有显著的缓释效果。动物实验表明：盐酸青藤碱缓释胶囊与市售缓释片比较，Tmax、t1/2明显延长，血药浓度平稳且维持时间长，具有更好的缓释效果;盐酸青藤碱缓释胶囊与渗透泵片比较，Tmax延长，具有更高的相对生物利用度。
材料与方法1.采用HPLC法研究了盐酸青藤碱与辅料的配伍作用。
2.制备了MCC空白丸芯，对其聚结机理进行了研究，以此为基础，采用粉末层积法制备了盐酸青藤碱微丸，对影响微丸质量的处方因素和工艺因素进行了初步考察，对微丸的质量进行了评价。
3.采用微型流化床包衣机，选用丙烯酸树脂水分散体为包衣材料制备了盐酸青藤碱缓释微丸，同时研究了包衣液的配方和缓释微丸的释药机理。
4.以市售盐酸青藤碱缓释片和自制盐酸青藤碱渗透泵片为参比制剂，考察了盐酸青藤碱缓释胶囊在家犬体内的释药情况，对其药物动力学参数、体内外相关性和相对生物利用度进行了研究。
结果1.方法确证性表明，适合用高效液相法测定盐酸青藤碱缓释胶囊的含量，用紫外分光光度法测定盐酸青藤碱缓释胶囊的释放度。
2.制备了MCC空白丸芯，微丸表面圆整光滑，粒径均一，脆碎度合格，流动性好。
3.通过在同一胶囊内装人不同释药速率的微丸得到缓释胶囊，结果稳定性良好。
4.动物实验表明，盐酸青藤碱缓释胶囊具有更好的缓释效果。
讨论1.掌握药物的溶解度数据以及相关介质对药物溶解度的影响规律，对于微丸丸芯和包衣膜的处方的设计均有指导意义。青藤碱作为生物碱单体对光和热不稳定，要注意避光，同时在阴凉处保存。
2.制备圆整的丸芯是制备膜控型缓释微丸的基础，工艺条件是影响微丸表面形态的主要因素，制得圆整的微丸，有利于制备良好的衣膜。
3.包衣温度的选择尤为重要，因为它与包衣液的成膜性密切相关;为了解决溶出时滞的问题，在同一胶囊内装入具有不同释药速率的微丸，最后获得理想的释药速率。
4.采用HPLC法测定盐酸青藤碱的血药浓度，方法简便、准确;通过体内外相关性研究，说明体外溶出条件能准确的反映体内的情况，可以用体外释放度为指标来控制盐酸青藤碱缓释胶囊的质量。
结论1.建立了用高效液相法测定缓释胶囊中盐酸青藤碱的含量的体外分析方法。紫外分光光度法测定盐酸青藤碱缓释胶囊的释放度。
2.制备了MCC空白母核，研究了母核形成的聚结机理;考察了各项工艺参数对成丸过程的影响，结果发现主机转速、喷浆速度及供粉速度对成丸过程影响较大。
3.经考察确定了包衣处方和包衣温度，通过试验表明所制得的微丸稳定性较好。
4.药动学结果表明，缓释胶囊与市售缓释片比较，具有更好的缓释效果;缓释胶囊与渗透泵片比较，具有更高的相对生物利用度。
关键词: 盐酸青藤碱 ；离心造粒 ；缓释微丸
摘要： 中药复方是中医临床治疗最主要的特点之一,研究中药复方作用的物质基础在中医药现代化过程中具有重要意义。本研究以针对类风湿性关节炎湿热阻络证的代表方剂--清络方为研究对象,分五个部分对其活性部位的物质基础进行研究。
第一部分文献研究
总结了清络方的临床应用和现代研究（前言部分）,并对组成清络方复方的三个单味药苦参、青风藤、黄柏的化学成分和药理活性进行综述。共引用文献213篇。
第二部分清络方活性部位制备工艺研究及其药效初步评价
首先以总生物碱含量为指标,优选了清络方的提取方案;接着以尽可能保留复方的多种有效成分为目标,对多种树脂的富集纯化效果和工艺流程的合理性进行考察后,优化制备工艺流程,得到清络方活性部位;并对该制备工艺进行验证,3批样品的制备和含量测定结果显示制备工艺稳定。
采用酸性染料比色法建立了清络方活性部位总生物碱的定量测定方法,结果表明方法精密性和重现性良好,回收率符合要求,可作为清络方活性部位的质量控制方法之一。
本部分还对清络方活性部位的药效进行初步评价。①选择巴豆油致小鼠耳肿胀反应和醋酸致小鼠扭体反应两个模型分别考察了抗炎和镇痛活性,表明清络方活性部位具有良好的抗炎镇痛作用。②研究了清络方活性部位对胶原诱导性关节炎大鼠的影响,实验表明清络方活性部位能有效地改善胶原诱导性关节炎大鼠关节肿胀,降低其血清中抗Ⅱ胶原抗体含量,提示其对胶原诱导性关节炎大鼠有治疗效果,并在抗血管新生方面表现出一定的作用。
第三部分清络方活性部位及君药苦参黄酮部位的化学成分研究
采用多种纯化分离方法和结构鉴定技术(如UV,IR,MS,1H-NMR,13C-NMR等波谱学技术和化学方法)对清络方活性部位和君药苦参黄酮部位的化学成分进行系统研究,共分离鉴定了26个化合物。
①首次对清络方进行化学成分研究,从其活性部位中分离鉴定了17个化合物;其中生物碱9个,苯丙素类2个,内酯类2个,甾体类2个,黄酮苷类1个,长链烷酸类1个。
其中的2个化合物:石虎柠檬素A和正二十六烷酸属首次在组成清络方的三味中药苦参、青风藤、黄柏中发现;根据结构类型和生源途径判断石虎柠檬素A很可能来源于黄柏,而正二十六烷酸应该来源于苦参。
其余的15个化合物为清络方各单味药已有报道的化合物。根据文献可以推测苦参碱、槐果碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、三叶豆紫檀苷来源于苦参;青藤碱、尖防己碱、尖防己定碱来源于青风藤;小檗碱、巴马汀、黄柏内酯来源于黄柏;丁香苷、丁香脂素-4,4′-O-双-β-D-葡萄糖苷在青风藤、黄柏中均有发现;β-谷甾醇、胡萝卜苷在三味中药中均有发现。
②苦参为清络方的君药,对苦参黄酮部位进行化学分离和结构鉴定,旨在为清络方指纹图谱的建立和活性筛选提供单体化合物。
从苦参黄酮部位中分离鉴定出9个化合物,其中正二十六烷酸属首次从苦参中获得。其他8个化合物分别为苦参酮、降苦参酮、三叶豆紫檀苷、芒柄花素、苦参醇O、正-谷甾醇、胡萝卜苷、蔗糖。
第四部分君药苦参药材中苦参酮与降苦参酮的含量测定
建立了同时测定君药苦参药材中2种典型黄酮--苦参酮和降苦参酮含量的高效液相色谱法,为苦参药材及其中药（复方）制剂质量控制与评价提供参考;尤其是对苦参酮的含量测定,本研究之前尚未见文献报道。
采用Phenomenex Gemini C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-水（50:50）为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长290nm。结果表明:苦参酮和降苦参酮的线性范围分别为0.3186～1.5930μg（r=0.9998）,0.1128～0.5640μg（r=0.9999）;苦参药材平均加样回收率（n=6）分别为100.56%（RSD=0.93%）,96.66%（RSD=0.85%）;该方法简便、准确、重现性良好。研究发现:不同产地的苦参药材苦参酮和降苦参酮的含量有较大的差异。
第五部分清络方活性部位入血移行成分初步研究
采用HPLC-MS技术对清络方活性部位的入血移行成分进行初步研究。通过比较含药血浆、空白血浆、清络方活性部位的质谱信息,发现了8个入血新增质谱峰,鉴定了其中6个,分别为氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、青藤碱、槐果碱和巴马汀;而质荷比为594.8、780.2的2个质谱峰,在清络方的活性部位中并未存在,初步推测可能为清络方活性部位中某些成分的转化物（或药物代谢产物）,也不排除可能是清络方活性部位给药后家兔产生的内源性物质。
在定性研究清络方活性部位入血移行成分的基础上,对其中的5种主要入血成分在体内的经时变化情况做了初步分析,为其进一步的药代动力学和临床药理研究提供参考。
关键词: 清络方 ；活性部位 ；制备工艺 ；抗炎镇痛 ；抗血管新生 ；苦参黄酮部位 ；化学成分 ；苦参酮 ；含量测定 ；入血移行成分
被引量
12