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摘要： 通过硅胶、反相、凝胶等分离方法从放线菌A5发酵液乙酸乙酯萃取相分离得到4个化合物,采用MS、1H NMR、13C NMR、COSY等对其结构进行鉴定,分别是6-benzyl-3-isopropylpyrazin-2(1H)-one(1),N-(4-hydroxyphenethyl)acetamide(2),3-(4-hydroxyphenyl)-2-((2-oxotetrahydro-2H-pyran-3-yl)oxy)propanoic acid(3)和尿嘧啶(4)。其中3的波谱数据首次报道。生测结果表明,在样品浓度为0.1 mg/mL时,1、2和3的海虾校正死亡率依次是43.2%,38.3%,43.2%,表明均具有一定的细胞毒活性。
关键词: 植物内生放线菌 ；代谢产物 ；分离鉴定 ；活性测定
被引量
11
摘要： 中药石斛始载于《神农本草经》,位于“九大仙草”之首,具有滋阴清热、润肺止咳、生津益胃等功效。中医用石斛讲究“鲜品为上”,现代研究表明,石斛等兰科植物具有与菌物形成典型共生关系的微生态系统特征,如石斛种子在自然条件下萌发必须依靠共生真菌,内生菌对石斛具有促进其植物生长、增强抗性、诱导次生代谢产物合成等功能;并且研究发现许多石斛属内生菌具有丰富的菌群多样性,但目前对其内生放线菌尤其是其次生代谢产物的研究少见报道。本论文针对研究较少的玫瑰石斛及其近似种,开展内生放线菌的系统研究,通过HPLC-DAD-MS分析寻找新型次生代谢产物,指导目标菌株的培养基配方优化,结合基因挖掘技术和活性评价手段,发现活性次生代谢产物。主要研究结果如下:(1)本论文采用组织切块法和平板划线法分离和培养了菌株,从石斛的根、茎、叶、花和土中分离纯化得到77株内生菌株,采用16S rRNA基因分析技术对内生放线菌进行种属鉴定;对菌株发酵粗提物进行生物活性评估和HPLC-DAD-MS化学成分分析,最终筛选出玫瑰石斛(Dendrobium crepidatum Lindl.et Paxt)内生链霉菌(MG-F-1)和束花石斛(Dendrobium chrysanthum Lindl)内生链霉菌(SH-R-1)开展进一步研究。(2)根据MG-F-1全基因组的次级代谢产物基因簇分析,并结合OSMAC策略对MG-F-1发酵条件进行优化,选择MG-F-1和Bacillus cereus MG-1在种子培养基中混合共培养7d,在放大发酵、提取粗提物后,经正相硅胶、反相硅胶(ODS)、凝胶色谱柱和制备液相等方法进行分离、纯化,从MG-F-1和MG-1的粗提物中分离鉴定了 15个化合物,其中5个为含硫吡喃萘醌类新化合物。体外细胞毒性和抑菌活性测定显示:化合物frenolicin H～L(1～5)、UCF76-A(6)、frenolicinB(7)、frenolicinG(11)和 K1115A(12)对 MV4-11显示较强的细胞毒性,IC50值为0.09～25.3 μM;化合物UCF76-A(6)和frenolicin B(7)对B.subtilis和S.aureus均有较强的抑制活性,MIC为2～8μM。此外在抗病活性测定中,frenolicin B对小麦赤霉病菌显示强烈的抑制活性(10 μg/mL的剂量下抑制率为76.21%),有望成为一种新型抗赤霉病农药。(3)基于OSMAC策略优化发酵条件,SH-R-1在MA培养基中培养7 d,在放大发酵、提取粗提物后,经正相硅胶、反相硅胶(ODS)、凝胶色谱柱和制备液相等方法进行分离、纯化,从SH-R-1的粗提物中获得11个化合物,其中2个为新的hygromycin A类似物(16,17),鉴于碳谱信号的缺失,利用化学沟通方法,通过乙酰化反应确证了化合物的平面结构。同时天然hygromycinA糖苷配基(18)的分离,为hygromycinA生源合成途径的完善提供依据。活性测试结果显示对B.subtilis和S.aureus有一定的抑制作用。
关键词: 石斛 ；内生菌 ；OSMAC ；次生代谢产物 ；生物活性
摘要： 蔬菜是我国重要的经济作物。由于栽培面积扩大、品种多样化、复种指数提高及设施栽培技术推广,蔬菜病害发生种类、频次和程度日趋严重,成为制约蔬菜产业可持续发展的重要障碍。利用拮抗微生物或次生代谢产物防治蔬菜病害是一条理想的生防途径。本文针对性分离筛选了黄瓜的内生放线菌Streptomycesrochei,明确了放线菌对植物病原真菌的,拮抗活性及其代谢产物,研究拮抗菌对多种蔬菜土传病害的防治效果,为蔬菜真菌病害的生物防治提高参考。主要取得如下研究结果:1、分离鉴定及发酵培养了黄瓜内生放线菌S.rochei黄瓜植株不同部位的组织中均分离获得内生放线菌。根、茎、叶中分离菌株分别占总分离株的65.4%;23.1%和11.5%。分离内生放线菌经形态学初步确定为链霉菌属,分子生物学鉴定为娄彻氏链霉菌S.rochei。以硝酸盐、玉米粉为主要C、N源筛选了适合内生放线菌S rochei的发酵培养基,液体深层发酵培养生产工艺,控制培养温度30-33℃,起始pH7.0,装液系数0.7,菌体生长良好,内生放线菌培养生物量达18 PMV(%)。2、分析明确了内生放线菌S.rochei的拮抗活性及代谢产物S.rochei培养液对黄瓜枯萎病菌、茄子黄萎病菌、番茄灰霉病菌等7种靶标真菌都有较高的抑菌活性,EC50在27.54-398.25mg/L。同时内生放线菌无菌滤液对黄瓜枯萎病同样具有拮抗活性,表明内生放线菌S.rochei在发酵过程中代谢产生具有拮抗活性的代谢产物。从硅胶柱层析的9个极性组分中初步分离获得了 3个代谢产物,其中2个化合物分别鉴定为羟吲哚和苯甲酸。3、开展了内生放线菌对蔬菜土传真菌病害的防效试验S.rochei包衣处理黄瓜种子对立枯病、猝倒病、枯萎病的防治效果在70.35%～86.92%之间。不同处理方式对黄瓜、番茄、辣椒立枯病的防治效果存在显著差异,表现为种子包衣>蘸根移栽>稀释灌根。S.rochei种子包衣处理提高了蔬菜的产量,番茄平均单株产量增加10.1%～14.59%,辣椒平均单株产量增加7.67%～13.57%。
关键词: Streptomyces rochei ；抗菌活性 ；病害 ；控制作用
被引量
3
摘要： 本论文以从印楝中分离出的放线菌菌株R6为研究对象,系统的研究了该菌株的分类地位和发酵液抑菌活性,菌株R6的发酵培养基和发酵条件优化,发酵液中抑菌活性物质的提取、分离和纯化,对分离纯化出的单体化合物进行结构鉴定及解析,以及单体化合物抑菌活性测定和对作物安全性的测定。主要研究成果如下:1.从印楝中分离筛选具高抑菌活性的内生放线菌R6。采用组织法和标准法从印楝叶片和果仁中分离纯化内生真菌114株,内生细菌26株,内生放线菌85株。采用平板对峙法,测试85株内生放线菌对13种植物病原真菌的抑菌活性,试验结果表明24株放线菌具有杀真菌活性。采用平板对峙法和喷雾法分别对24株放线菌进行细菌抑菌活性和杀虫活性测定,试验结果表明,抑菌活性较强的菌株G20、G27、G49、G60和R6 5株菌株杀虫活性较弱。采用薄层色谱法对抑菌活性较强的5株菌株进行化学初筛,综合抑菌活性和化学筛选的试验结果,确定具有高杀菌活性,产生丰富物质的菌株R6为目标菌株。2.通过传统分类学和生物学鉴定菌株R6为密旋链霉菌。对放线菌菌株R6的形态学特征和培养特征进行观察,对生理生化特性进行测定,对16S r DNA序列进行分析比对。通过序列比对,放线菌R6菌株与密旋链霉菌和橄榄色链霉菌在同一系统进化分支上,与密旋链霉菌相似度为98.87%,与橄榄色链霉菌相似度为98.85%,结合R6菌株形态特征、培养特征以及生理生化特征,与密旋链霉菌的特征基本一致,因此,最终确定R6菌株为密旋链霉菌（Streptomyces pactum）。3.放线菌菌株R6发酵工艺的优化。综合单因素试验和正交试验方法,对菌株R6进行发酵工艺优化。综合活性和条件筛选结果,确定优化后发酵条件:种龄为3 d,培养时间为7 d,温度为28.0℃,摇床转数为180 r/min,装液量为100 m L,接种量为8.0%,p H值为8.0。综合碳、氮源等筛选结果,确定优化后培养基配方:可溶性淀粉20.0 g、葡萄糖10.0 g、蛋白胨5.0 g、酵母浸粉5.0 g、NaCl 4.0 g、K2HPO4 0.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、CaCO3 2.0 g、pH 8.0。4.从菌株R6发酵产物中分离纯化单体化合物Y1、Y2、Y3。采用大孔树脂吸附法和溶媒萃取法,提取获得菌株R6的粗提物11.58 g;采用活性跟踪法,对粗提物进行抑菌活性测试,结果表明粗提物对植物病原菌细菌和真菌均具有较好的抑菌活性。通过一级硅胶柱层析对粗提物中的活性物质进行分离纯化,得到C1、C2、C3、C4、C5、C6,合计6个馏分。经过对番茄灰霉病菌和胡萝卜软腐病菌的活性测定,对抑菌活性较强的两个组分C1、C2进行分离纯化,经过多次硅胶柱层析、凝胶柱层析、薄层层析以及高效液相制备等多种方法,得到3个单体化合物Y1:48.2 mg;Y2:24.4 mg;Y3:81.6 mg。5.经结构鉴定Y1和Y2为聚酮类新化合物。3个单体化合物通过IR、MS、NMR、旋光度测定等多种技术手段进行结构鉴定,采用微量稀释法进行活性检测。经过综合分析测定后的相关数据和查找的文献,最终鉴定:Y1和Y2是新化合物,均为聚酮类化合物,分别命名为Lobophorin N,Lobophorin O,分子式分别是C33H44O6和C39H54O9。Y3为已知化合物大环内酯类抗生素Divergolide C,分子量为549,分子式是C31H35NO8。抑菌活性测试结果表明:3个化合物对细菌和真菌均有抑制作用。化合物Y1的活性最强,对番茄细菌性斑疹病、黄瓜细菌性角斑病、胡萝卜软腐病的MIC值分别为7.81μg/m L、15.63μg/m L和3.91μg/m L。化合物Y1对番茄灰霉病的MIC值为1.95μg/m L。6.化合物Y1对番茄灰霉病抑菌活性高且对番茄植株安全。聚酮类化合物Y1采用了菌丝生长速率法、孢子萌发法、菌丝干重法等多种技术手段对番茄灰霉病菌的菌丝生长、孢子萌发、菌丝生物量的产生、分生孢子的产生以及菌核的产生进行了抑制作用的测定。试验结果表明:随着浓度的升高,化合物Y1对番茄灰霉病菌各项测试指标的抑制作用在增加。当浓度达到最高时,菌丝生长和孢子萌发的抑制率均为100%。产生微量菌丝,不产生菌核和分生孢子。采用盆栽法测定生物活性和安全性。化合物Y1在浓度为7.81μg/m L时,防效最高,达到85.44%。化合物Y1防治番茄灰霉病效果良好,并且对番茄植株安全。
关键词: 印楝 ；密旋链霉菌 ；结构鉴定 ；聚酮化合物 ；生物活性
被引量
8
摘要： 由尖孢镰刀菌香蕉专化型（Fusarium oxysporum f.sp.cubense,Foc）侵染引起的香蕉土传枯萎病已成为全球香蕉种植产业面临的主要问题。利用生防菌进行生物防治是防控香蕉枯萎病的重要途径。本论文以香蕉枯萎病原菌4号生理小种（Foc4）为靶标菌,对五指山药用植物内生放线菌进行了分离鉴定及抗菌活性筛选,优化了具有高拮抗活性链霉菌5-4的发酵条件,研究了链霉菌5-4的抑菌机理及对香蕉枯萎病的防治效果。该研究将为链霉菌5-4的研发和应用奠定基础,为绿色防治香蕉枯萎病提供参考。具体研究结果如下:1.以海南省五指山自然保护区的35种药用植物为试验材料,共分离到144株内生放线菌。其中43株内生放线菌对香蕉枯萎病菌具有抑菌活性,且大多数属于链霉菌属（Streptomyces）,尤其是放线菌5-4和5-10表现出较强的抑菌活性。通过形态特征观察、生理生化特性测定和16S r DNA的分类鉴定,表明放线菌5-4属于吸水链霉菌吸水亚种（Streptomyces hygroscopicus subsp.hygroscopicus）,放线菌5-10归属于链霉菌属。2.通过响应面优化法得到试验模型:Y=87.29-1.52X1+7.99X2+3.16X3+2.52X1X2+3.55X1X3+1.97X2X3-14.36X1～2-12.74X2～2-5.32X3～2。最终确定链霉菌5-4的最优发酵培养条件为:可溶性淀粉21.512 g/L,黄豆粉15 g/L,酵母粉5 g/L,蛋白胨2 g/L,Ca CO34 g/L,Na Cl 4.734 g/L,p H 7.0,接种量为3.217%,并预测其最大抑菌率为89.24%。验证试验表明通过响应面法优化发酵条件后,其抑菌率达到了88.36%,比优化前（54.96%）提高了33.4%,且与预测值相差不大,说明优化后的发酵培养基更有利于发酵粗提物活性物质的生成。3.链霉菌5-4具有广谱抗真菌活性,对6个属的13种靶标菌都表现出较好的拮抗作用。链霉菌5-4粗提物能够抑制Foc4病菌孢子的萌发,使其菌丝出现明显的肿大、皱缩、干瘪和断裂,且其细胞的细胞壁出现不规则加厚,呈多层细胞壁,细胞器大多破损水解,出现明显的空泡化。链霉菌5-4粗提物处理后的Foc4病菌随着用药浓度和时间增加,其胞外还原性糖和丙二醛的含量越高,而可溶性蛋白含量和NADH氧化酶的活性则显著降低,表明了链霉菌5-4粗提物使Foc4病菌的细胞膜出现了氧化损伤,导致病菌胞外调节能力降低以及物质代谢等生理功能絮乱的病变。链霉菌5-4粗提物还能够水解几丁质和β-1,3-葡聚糖,破坏Foc4病菌的细胞壁,从而抑制了菌体的正常生长。表明了链霉菌5-4粗提物能够影响菌丝体、孢子等的正常生长发育,使香蕉镰刀菌难以维持正常的生理过程,因此,链霉菌5-4粗提物对Foc4病菌具有毒杀或者抑制的作用。4.链霉菌5-4的盆栽防效试验表明,只接种Foc4的处理,其发病率高达74.07%,且球茎出现明显的黑化现象,通过激光共聚焦扫描显微镜发现有大量的GFP-Foc4菌丝体和分生孢子存在于香蕉根部,表明了GFP-Foc4病菌能迅速在香蕉根中定殖,侵染并导致其发病。施加链霉菌5-4的处理防治效果达到71.36%,其香蕉根系仅有少量GFP-Foc4附着。说明了链霉菌5-4能抑制病原菌侵染香蕉根系。在盆栽试验研究中还发现,施加链霉菌5-4的香蕉苗株高、茎粗、叶面积、生物量等指标均比对照组（H2O处理、Foc4处理）高,表明了链霉菌5-4具有促进植物生长的作用。5.链霉菌5-4的基因组总长度为9,929,690 bp,（G+C）mol%含量为72.094%,其中COG功能注释显示有280个基因参与了次生代谢产物的合成、转运和代谢,占注释到的总基因数的4.38%。KEGG富集分析显示基因涉及最多的通路主要有:萜类化合物和聚酮类化合物的代谢（119个基因）、其他次生代谢物的生物合成（122个基因）、生物降解和代谢（146个基因）、碳水化合物代谢（636个基因）以及氨基酸代谢（485个基因）等途径。链霉菌5-4基因组中还蕴含有51个次级代谢物生物合成基因簇,主要包括了NRPS、T1 PKS、T2 PKS、萜烯、细菌素、吲哚、四氢嘧啶、铁载体等合成基因簇,充分展示出链霉菌5-4具有很大的次级代谢产物潜能。6.通过链霉菌5-4在发酵过程中的代谢组学研究分析,发现其代谢产物差异显著,且大部分差异代谢物出现在培养的前期（2 d）和后期（7 d）。以VIP值>2且p<0.05为条件进一步筛选差异代谢物,共检测到990种代谢物,已知物质只有46种,表明链霉菌5-4发酵液的组分复杂,仍有大量的未知代谢物。链霉菌5-4在发酵第7d时产生的较大差异的已知代谢物主要有13种,且大多数具有抗菌活性。其中hygromycin B、sarmentosin、betavulgaroside VIII、pubescenol等代谢物可能是抑菌作用的关键性代谢物。对筛选得到的差异代谢物进行代谢通路分析,发现主要涉及了精氨酸和脯氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢,组氨酸代谢,氨基丙酸代谢,甘油磷脂代谢,卟啉和叶绿素代谢,酰胺t RNA生物合成,抗生素生物合成,植物次生代谢产物的生物合成等通路。综上所述,链霉菌5-4是一株具有香蕉枯萎病拮抗性能、促生能力的生防菌株,可作为绿色防治香蕉枯萎病的生物菌剂。
关键词: 香蕉枯萎病 ；链霉菌 ；响应面优化法 ；抑菌机制 ；代谢组学
被引量
6
摘要： 近年来科学家们在探寻新型抗生素的筛选途径时,发现昆虫内生菌能够产生许多种类多样的次生代谢产物,尤其那些能够帮助宿主抵御病原菌入侵的放线菌,其中一些具有新颖的结构并表现出较好的生物活性。由于这些化合物能够存在于真核宿主体内,且不危害宿主,所以它们很有可能对人类也没有毒副作用。因此这些昆虫内生放线菌具有很大产生人类药用的抗生素潜力,所以近年来昆虫内共生放线菌受到越来越多科学家的关注,昆虫内生放线菌也将是持续地发现新抗生素的重要领域之一,这对于对抗日益增多的抗药病原菌和新型疾病具有重要意义。本研究以实验室筛选得到的30株蚂蚁内生菌为材料,通过培养特征观察、抗菌活性测试和16S rRNA序列测序结果分析,发现两株潜在的放线菌新种3H-GS17T和2H-TWYE14T和一株具有良好抗菌活性放线菌1H-GS2,对它们分别进行了系统的分类学鉴定和活性物质的分离鉴定,结果如下:（1）16S rRNA分析结果显示菌株3H-GS17T是珊瑚放线菌属的一株菌,与Actinocorallia glomerata JCM 9376T（98.13%）和Actinocorallia longicatena JCM 9377T（97.64%）的16S rRNA序列相似性最高。化学分类学特征也与Actinocorallia的特征一致。而DNA–DNA杂交结果和表型分析结果显示菌株3H-GS17T明显不同于与它相近的菌株,进一步的实验证明菌株3H-GS17T和珊瑚放线菌属的其他菌株都不相同。因此确定菌株3H-GS17T是珊瑚放线菌属的一个新种,命名为Actinocorallia lasicapitis,典型菌株是3H-GS17T（=DSM 100595T=CGMCC4.7282T）。（2）16S rRNA分析结果显示2H-TWYE14T是链霉菌属的一株菌,与Streptomyces niveus NRRL 2466T（98.84%）的16S rRNA序列相似性最高。gyr B基因分析结果同样显示2H-TWYE14T属于链霉菌属。化学分类学特征也与链霉菌属的其他菌株相一致。而2H-TWYE14T与S.niveus NRRL 2466T之间的DNA–DNA杂交结果和表型分析结果显示2H-TWYE14T明显不同于S.niveus NRRL 2466T。因此确定菌株2H-TWYE14T是链霉菌菌属的一个新种,命名为Streptomyces camponoticapitis,典型菌株是2H-TWYE14T（=DSM 100523T=CGMCC 4.7275T）。（3）活体生物活性检测显示菌株1H-GS2对部分测试真菌具有较好的生物活性,将菌株进行发酵,发酵产物同样显示良好的真菌抑制活性。对发酵产物中的化合物进行分离纯化后,利用现代光谱学进行结构分析鉴定,最终得到化合物白诺菌素（Albonoursin）。
关键词: 昆虫内生放线菌 ；Actinocorallia lasicapitis ；Streptomyces camponoticapitis ；多相分类学 ；白诺菌素
被引量
8
摘要： 微生物在自然界广泛存在,它们在数量上远远超过动植物,其次生代谢产物结构及生物活性多样,是天然活性物质的重要来源之一。微生物的次生代谢产物研究对发现新的药物先导化合物有着重大意义。本论文分为四个章节,第一章对分离自三七的两株内生真菌球毛壳菌(Cheatomium globosum PH30461)和炭角菌(Xylaria bambusicola PH30434),在筛选鉴定的基础上对其次生代谢产物进行了分离鉴定及活性测试。第二章对来自西藏草甸的土壤真菌,葡萄穗霉菌(Stachybotrys sp. PH30583)的次生代谢产物进行了分离鉴定及活性筛选。第三章分别对分离自毛萼香茶菜,雷公藤,车桑子中的三株植物内生放线菌：Streptomyces sp. YIM66403, Nocardia alba YIM64630以及Streptomyces sp. YIM65033的次生代谢产物进行了分离鉴定及活性筛选。第四章对微生物来源的胆碱酯酶抑制剂进行了综述,为今后从微生物资源中发现治疗阿兹海默症的胆碱酯酶抑制剂提供了参考。本文应用多种现代分离技术,通过核磁共振波谱,质谱,紫外光谱及红外光谱等波谱学方法,辅以X-单晶衍射和计算化学方法,从六株微生物次生代谢产物中共分离鉴定了89个化合物,包括81个不同的化合物,其中11个为新化合物。化合物结构类型涉及生物碱,多酚,蒽醌,萜类,甾体,环肽,黄酮,核苷等多种类型,其中包括微生物特有的一些次生代谢产物类型。对分离得到的部分化合物进行了抑菌活性,细胞毒活性,抗氧化活性,抗凝血活性及乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选,发现了一些活性较好的化合物。从Cheatomium globosum PH30461分离得到该属化合物特有的代谢产物,flavipin类衍生物,虽然这些化合物为己知化合物,但是首次发现它们为良好的抗氧化剂及乙酰胆碱酯酶抑制剂；从Xylaria bambusicola PH30434中分离得到了三个新结构的化合物22-hydroxy-24-gluco ergosta-4,6,8(14)-22-tetraen-3-one, PH30434-2,16-β-D-glucopyranosyloxyisopimar-7-en-19-oic acid,并首次通过X-单晶衍射确定了oxacyclotetradeca-3,6,9-trien-2-one,5,8-dihydroxy-14-methyl-,(3E, 5S,6Z,8S,9E,14S)的绝对构型：从Stachybotrys sp. PH30583中分离得到了三个多酚类化合物及它们的三个二聚体,其中包括五个新化合物,二聚体均表现出了中等的乙酰胆碱酯酶抑制活性；从Streptomyces sp. YIM66403分离得到了一个新的蒽醌类化合物misamycin以及一个新的环四肽cyclo (L-Val-Try-L-Ile-Try),并且misamycin在体外对五株肿瘤细胞有中等细胞毒活性。更多还原
关键词: 真菌 ；放线菌 ；次生代谢产物 ；抗氧化活性 ；乙酰胆碱酯酶抑制活性 ；细胞毒性
被引量
3
摘要： 近年来，生物活性化合物对人体和植物的健康有较多益处，在医药领域中有着很高的需求。微生物可以单独或与植物结合合成这些化合物和一些酶。植物组织中的微生物，也被称为内生微生物，其产生了一系列的化合物。内生放线菌能够产生具有生物活性的次级代谢产物，它是一种具有广泛应用前景的生物技术资源。内生链霉菌产生了一些对多重耐药菌有效的新型抗生素，由内生菌产生的抗菌剂是环保的，其对人体不具有毒性，但对病原体具有较高的毒性。多样性高的内生放线菌以及其对各种环境胁迫的强适应能力似乎是新次生代谢产物尚未开发的来源。寄生在宿主植物内部的内生放线菌由于其产生大量次生代谢物的能力而受到人们的广泛重视。 本次实验选取黑豆的根部作为研究对象，用三种分离培养基通过多次分离，纯化，从植物根内共分离出221株放线菌，合并后为60种放线菌。将菌株用ISP3培养基进行培养，逐一观察菌落的形态特征，发现菌株NEAU-BB2C19T具有较为特殊的形态，于是将其进行16SrRNA基因序列对比，发现其为一株潜在的新种放线菌，于是对该菌株进行了系统性的分类学鉴定。本实验使用实验室提供的10种供试真菌和3种供试病原细菌作为靶标菌株，秀丽隐杆线虫作为供试线虫，将60株放线菌分别进行菌株单点及液体发酵后，进行抗菌活性及杀线虫活性实验，筛选出了一些具有良好抗菌或杀线虫的菌株，其中菌株2C24的生物活性在抗真菌、细菌和线虫方面均作用效果显著，遂将其进行大量发酵以分离鉴定生物活性物质。具体结果如下: (1)野野村氏菌属是放线菌属中的稀有放线菌，在16S rRNA对比分析后，将其通过Mega6.06软件构建系统发育树，发现了该菌的最高相似性菌为N.guangzhouensis NEAU-ZJ3T(98.75％)，将菌株进行生理生化特征，化学分类学特征，以及分子学特征等实验分析后，表明NEAU-BB2C19T属于野野村氏放线菌属并与此菌属内其他菌株的各项特征都具有明显差异，由此认为菌株NEAU-BB2C19T是野野村氏放线菌属的一个新种，命名为Nonomuraeaglycinis，其典型菌株为NEAU-BB2C19T(=CGMCC4.7430T=DSM104838T)。 (2)将60株放线菌进行抗10种病原真菌生长的单点实验后，发现有13株放线菌对一种以上病原真菌具有活性;将放线菌进行发酵后，有8株菌的发酵液对秀丽隐杆线虫有10％以上的杀伤作用;放线菌发酵液的上清及菌体浸提液中有17株菌对一种以上的病原细菌有抑制作用。 (3)通过抗菌活性以及杀线虫活性检测后发现，菌株2C24具有较好的生物学活性，将菌株用发酵罐进行大量发酵，利用化学相关方法对其进行分离和纯化，现代光谱学对其结构进行分析鉴定后，得到的化合物为安沙霉素大环内酯类Hygrocins D，麦芽酚和维生素K3。
关键词: 植物内生放线菌 ；多相分类学鉴定 ；次级代谢产物
摘要： 植物内生放线菌普遍存在于目前发现的各种陆生及水生植物中,其多样性受多种因素的影响。不同的区域或位点、气候条件、植被等均可影响内生放线菌类群的多样性。研究发现,药用植物中蕴含着大量的有益内生放线菌,这些内生放线菌与宿主之间具有紧密的生态关系,其产生的次生代谢产物在医药、植物病虫害生物防治等方面的用途逐渐增大,成为寻找新的天然活性产物的重要方向。本文以宁夏干旱荒漠区重要的沙生药用植物苦豆子为研究对象,进行了内生放线菌的分离鉴定、多样性分析、高活性菌株的筛选及16S rRNA基因序列同源性分析,并对其生防作用作出评价。研究结果如下：
1、从宁夏灵武白芨滩国家级自然保护区不同土壤类型、不同优势植被的6个样区采集的健康苦豆子中,分离得到158株内生放线菌。同一植株不同组织中,内生放线菌数量以根部最多,其次为种子,叶部最少；淡灰钙土中苦豆子内生放线菌数量比风沙土中多；鉴定结果表明：内生放线菌以链霉菌属和诺卡氏菌属较多,其中链霉菌属以白孢类群为主。
2、采用透明圈法对126株苦豆子内生放线菌进行分泌胞外酶活性检测,有71株内生放线菌具有酶活性,占总菌株数的56.3%。有8株菌株酶活性最为显著,其中菌株NDZKDS73、NDZKDS7对淀粉酶活性最高,透明圈半径达到24.62和19.12mm；菌株FJYKDS5对蛋白酶活性高,透明圈半径16.94mm；菌株FJYKDS11、BJGKDS2对纤维素酶活性最高,透明圈半径为24.72和22.40mm；菌株FJJKDS2对几丁质酶活性最高,透明圈半径17.76mm；菌株NDZKDS24、NDZKDS20对葡聚糖酶活性最高,透明圈半径为12.06和10.50mm。通过形态特征和16S rRNA基因序列同源性分析,有7株活性菌株属链霉菌属(Streptomyces),1株属拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)。3、以6种植物病原真菌为靶标菌采用皿内对峙法对126株苦豆子内生放线菌进行了抗菌活性筛选,15株菌具有较高的抑菌活性(占11.9%)。其中菌株YWZKDS4对稻瘟病病菌的抑菌圈半径最大达到15.12mmm；NDZKDS65对黄瓜枯萎病菌的抑菌圈半径最大达到18.54mm；菌株NDZKDS22具有广谱抗菌活性。根据菌株形态特征和16S rRNA序列分析,将3株菌株归入链霉菌属,菌株YWZKDS4.NDZKDS22.NDZKDS65分别与Streptomyces scabiei、Streptomyces albospinus和Streptomyces capillispiralis亲缘关系最近,序列相似性分别为99.1%、96.4%和98.8%。
4、选取28株苦豆子内生放线菌的代表菌株,对其分泌生长素(IAA)的能力和抑制杂草种子萌发的活性进行测定。结果表明：1株菌株NDZKDS1显色反应为粉红色,分泌生长素的能力较强；3株菌株YCZKDS3.FJJKDS19、NDZKDS22的发酵液对杂草种子的萌发有明显的抑制效果。通过形态特征和16S rRNA基因序列同源性分析,1株具有分泌IAA能力的菌株属拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis),3株发酵液具有抑制杂草活性菌株均属链霉菌属(Streptomyces)。
关键词: 苦豆子 ；内生放线菌 ；生物活性 ；16S rRNA序列分析 ；鉴定
被引量
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摘要： 本论文以一株黄花蒿内生放线菌A5为研究对象，在转速150rpm，温度28℃的摇床中振荡培养5天后，发酵液用乙酸乙酯萃取。主要对乙酸乙酯相的活性成分进行了提取、分离和结构鉴定，同时对原发酵液的稳定性和水溶性活性成分也进行了初步的分离研究，主要结果如下：
(1)采用硅胶柱层析、反相液相色谱、凝胶色谱等分离方法从放线菌A5发酵液的乙酸乙酯萃取相中分离得到4个化合物，采用MS、1H NMR、13C NMR、COSY等技术对其结构进行了鉴定，得到的四个化合物分别是6-benzyl-3-isopropylpyrazin-2(1H)-one(Ⅰ)，N-(4-hydroxyphenethyl)acetamide(Ⅱ)，3-(4-hydroxyphenyl)-2-((2-oxotetrahydro-2H-pyran-3-yl)oxy) propanoic acid (Ⅲ)和尿嘧啶(Ⅳ)。其中Ⅲ的波谱数据为首次报道。生物测定结果表明，化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ0.1mg/mL的溶液对海虾的校正死亡率依次是43.2%，38.3%，43.2%，表明三个化合物均具有一定的细胞毒活性。
(2)以猕猴桃溃疡菌为靶标菌，通过石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，发现活性物质集中在水相，有机相中没有活性，表明该活性物质属于大极性化合物。发酵液在不同温度、不同pH值、紫外照射不同时间处理后，活性基本不变，表明发酵液中水溶性活性成分对高温、pH、紫外线稳定性好。
(3)捷克八溶剂系统纸色谱测定结果表明，该发酵液中主要抑菌活性物质为水溶性抗生素。利用大孔树脂、732阳离子交换树脂、硅胶层析、凝胶层析等分离手段得到的活性成分A，其为无色针状结晶，易溶于甲醇和水。在样品浓度为3mg/mL时，用打孔法测定其对猕猴桃溃疡菌的抑菌圈是14mm。
关键词: 黄花蒿 ；内生放线菌 ；代谢产物 ；分离鉴定 ；细胞毒活性
被引量
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摘要： 千年来，药用植物在我国被广泛用来预防和治疗疾病，是中华民族健康发展的有力保障。植物内生菌广泛分布于药用植物中，种类丰富、活性多样，其活性次生代谢产物的挖掘为医药行业的发展奠定了一定基础。目前，该领域的研究已经趋于成熟，研究的流程主要是:药用植物内生菌分离→优势菌种筛选→发酵条件考察→大批量培养发酵→次生代谢产物提取→分离纯化→鉴定→生物活性评价。本文从10种新鲜的药用植物出发，开展内生菌的研究，主要研究结果如下: (1)采用组织切块法和平板划线法，从直立百部、牛膝和益母草等10种药用植物的根、茎、叶等不同部位中共计分离纯化出405株内生菌株。基于菌株的16SrRNA序列和ITS序列进行菌种鉴定和多样性分析，结果显示主要为内生放线菌，以及少量的内生细菌和1株内生真菌，共计分布于26个属。以抗菌活性为导向，结合HPLC-MS分析结果，选定牛膝内生真菌Penicilliumsp.NX-S-6、野胡萝卜内生链霉菌Streptomycessp.YHLB-L-2和直立百部内生链霉菌Streptomycessp.ZLBB-S-6为后续活性次生代谢产物分离的目标菌株。 (2)通过不同培养基条件下Penicilliumsp.NX-S-6、Streptomycessp.YHLB-L-2和Streptomycessp.ZLBB-S-6的次生代谢产物的比较分析，以主产物明显、同类紫外吸收产物多等为指标，选择较优的培养基进行量大发酵。发酵产物采用正反相硅胶、MCI、凝胶色谱柱和制备液相进行分离纯化，结合MS、1D/2DNMR等波谱学方法进行化合物结构解析，从三株内生菌中分离鉴定了23个化合物，分别为5-amino-5-dehydroxyosorbicillinol(1)、oxosorbicillinol(2)、sorrentanone(3)、bisorbicillchaetoneA(4)、bisorbicillchaetoneB(5)、bisorbibutenolide(6)、citreorosein(ω-hydroxyemodin)(7)、emodicacid(8)、daidzein(9)、GKK1032B(10)、soyasapogenolB(11)、ergosterol(12)、α-linolenicacid(13)、linoleicacid(14)、nocardamine(15)、desferrioxamineD1(16)、toyocamycin(17)、tetramycinA(18)、tetramycinB(19)、cytoxazone(20)、quinomycinA(21)、benarthin(22)、actinolactomycin(23),其中化合物1为新的sorbicillin类化合物。 (3)化合物1～23的抑菌活性结果显示，sorrentanone(3)、emodicacid(8)、GKK1032B(10)、linoleicacid(14)和quinomycinA(21)对B.subtilis和S.aureus均表现出一定的抑制作用;emodicacid(8)对A.baumannii有一定的抑制活性;核苷类化合物toyocamycin(17)特异性抑制Paeruginosa;quinomycinA(21)对E.coli、A.baumannii有良好的抑制作用，并进一步发现其对A.fumigatus和C.neoformans表现出一定的抗真菌活性，MIC值为4～16μg/mL;citreorosein(7)和emodicacid(8)、α-linolenicacid(13)和linoleicacid(14)的结构相似，但是对病原菌的抑制效果有明显差异，可能存在构效关系。 (4)化合物1～23的体外细胞毒活性结果显示:GKK1032B(10)、toyocamycin(17)、quinomycinA(21)和actinolactomycin(23)对A549、HepG2和MV4-11细胞均有一定的细胞毒活性，其中，MV4-11细胞存活率仅为10％左右，细胞毒活性显著;citreorosein(7)对HepG2和MV4-11细胞增殖表现出抑制作用;nocardamine(15)对A549和MV4-11细胞有抗增殖作用;daidzein(9)和desferrioxamineD1(16)特异性抑制HepG2细胞增殖;sorrentanone(3)和tetramycinB(19)特异性抑制MV4-11细胞增殖。
关键词: 药用植物 ；内生菌 ；次生代谢产物 ；化学研究 ；生物活性
摘要： 植物内生菌是一类生活在植物组织内部，并与植物建立了和谐关系的特殊微生物资源，它们物种高度丰富，而且次生代谢产物结构类型变化多样，是目前人们寻找新型活性天然药物的重要来源。我国传统药用植物资源十分丰富，开展相关植物内生菌的研究将有利于我国微生物源药物的开发、应用与保护。
本文以黄花蒿(Artemisia annua L.)植物内生放线菌为研究对象，通过基于菌株16S rRNA基因序列的分析，完成了分离菌株物种多样性的研究并建立了黄花蒿内生放线菌资源库;选择2株放线菌进行菌株发酵，次生代谢产物分离纯化及结构解析研究;希望能够从黄花蒿植物内生放线菌菌株中发掘出具有良好应用潜力的微生物菌种资源。
从云南省不同地区的黄花蒿植物样品中分离到了523株内生放线菌菌株，经鉴定这些分离菌株分别属于放线菌门中的9个亚目，13个科，24个属，其中Streptomyces，Pseudonocardia，Micromonospora为主要类群：并发现25株分离菌株为以前未被报道过的潜在新物种。建立黄花蒿内生放线菌资源库，部分菌株表现出较强的抗菌/抗肿瘤细胞活性，结果表明黄花蒿内生放线菌具有很好的深入开发研究的潜力。
利用Pseudonocardia属特异性引物PCR和ARDRA分析，从107株分离菌株中快速鉴别出69株假诺卡氏菌属菌株并从中挑选出18株不同的假诺卡氏菌株，实现了假诺卡氏菌属的快速鉴别。通过对18株假诺卡氏菌属代表性菌株的生理学特性的研究，揭示了内生假诺卡氏菌株的生理学特性规律，其结果为设计选择性分离内生菌假诺卡氏菌培养基提供了实验依据。
本文选择16个候选新分类单元的菌株，完成了包括形态与培养特征、生理生化实验、细胞化学组成、菌株DNA G+C mol％、DNA同源性分析和16S rRNA基因序列系统发育分析的多相分类研究，确定了这16株菌株的分类地位;其中，菌株YIM63587T被命名为黄花蒿假诺卡氏菌(Pseudonocardia artemisiae)，YIM63158T被命名为昆明假诺卡氏菌(Pseudonocardia kunmingensis)，YIM63101T被命名为版纳假诺卡氏菌(Pseudonocardia bannaensis)，YIM63233T被命名慢生假诺卡氏菌(Pseudonocardia serianimatus)，YIM63638T被命名西山假诺卡氏菌(Pseudonocardia xishanensis)，YIM63235T被命名抗菌假诺卡氏菌(Pseudonocardiaantimicrobica)，YIM65623T被命名黄花蒿诺卡氏菌(Nocardia artemisiae)和YIM65754T被命名黄花蒿红球菌(Rhodococcus artemisiae)。
采用TLC和HPLC相结合的化学筛选方法，对2株具有生物活性的黄花蒿内生放线菌代谢产物的化学多样性进行研究，确定适合这2株放线菌菌株发酵的培养基，并完成菌株的大量发酵。对菌株发酵产物运用萃取，薄层层析，硅胶柱层析，Sephadex LH-20凝胶柱层析及反相高压液相等分离纯化手段，从菌株YIM63111(Pseudonocardia sp.)的代谢产物中分离得到15个化合物，从菌株YIM65710(Streptomyces sp.)中分离得到了20个化合物;通过现代波谱分析法鉴定了其中16个化合物的结构。
通过本研究，我们对黄花蒿内生放线菌物种资源及其潜在应用价值有了更加深入的了解;扩展了药用微生物资源的研究领域，同时也为植物内生微生物资源的合理有效利用提供重要的科学依据。
关键词: 黄花蒿 ；内生放线菌 ；rRNA基因 ；多相分类 ；代谢产物 ；药用植物
被引量
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摘要： 植物内生菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物中的各组织和器官内部的真菌或细菌（包括放线菌），其存在一般不引起宿主产生可见的病症。植物内生菌分布广、种类多、具有极其丰富的生物多样性。感染内生菌的宿主植物往往具有生长速度快、抗逆境胁迫、抗病虫害、抗食草性哺乳动物摄食等优势，比未感染植株更具生存竞争力。形成这种情况的物质基础是植物内生菌产生的或诱导宿主产生的次生代谢物。事实上，植物内生菌可以产生丰富多样的具生物活性的代谢产物，是新化合物、新药物的潜在资源，在农业和医药业中具有重要的应用前景。是近年来医药科技工作者研究的热点。
本文对二株植物内生真菌Fusarium sp.IFB-121和Cephalosporium sp.IFB-018的次生代谢产物进行了研究。分别将两菌株用固体培养基进行小规模发酵，然后综合应用各种化学和物理方法，以及现代色谱（硅胶、ODS、Sephadex LH-20柱层析以及半制备HPLC）技术，对发酵好的菌体进行提取、分离，一共得到19个次生代谢产物（化合物）。利用现代光谱技术（IR、MS、<'1>H-NMR、<'13>C-NMR、DEPT、HMQC、HMBC、NOESY等），并结合化学物理方法，鉴定了其中14个化合物的结构，它们分别为fusaruside（Qu-1）、（2S，2＇R，3R，3＇E，4E，8E）－1－O－β－D－吡喃葡萄糖基－2－N－（2＇－羟基－十八－3＇－烯基）－3－羟基－9－甲基－鞘氨－4，8－二烯醇（Qu-2）、（2S，2＇R，3R，4E，8E）－1－O－β－D－吡喃葡萄糖基－2－N－（2＇－羟基－十八烷基）－3－羟基－9－甲基－鞘氨－4，8－二烯醇（Qu-3）、麦角甾醇（Qu-4）、4，22－二烯－麦角甾－3－醇（Qu-5）、3β－甲氧基－18－烯－齐墩果烷milliacin（Qu-6）、甘露醇（Qn-7）、fusaramide A（Qu-8）、6，22-二烯-5，8-过氧麦角甾-3-醇（Qu-9）、5－羟基－2－（2－羟基－6－甲氧基－4－甲基－）苯基－3－甲氧基－苯甲酸甲酯（Im-1）、烟曲霉纹丙C（Im-2）、烟曲霉酸（Im-3）、Brefeldin A（Im-4）、3，3＇－二羟基－5，5＇－二甲基二苯醚（Im-5）和尿嘧啶（Im-6）。其中脑苷脂fusaruside（Qu-1）和脂环肽fusaramideA（Qu-8）为两个未见报导的新化合物。
体外抗菌活性实验表明，从头孢霉属Cephalosporium sp.内生真菌IFB-018中得到五个化合物（IIn-1、Im-2、Im-3、Im-4、Im-5）均显示较强、较广谱的抗菌作用。特别是Im-2、Im-3和Im-4三个化合物的最低抑菌浓度与阳性对照相近，并且几个化合物的得率（均大于0.18％）都比较高。预示着就新的高效抗菌药物而言，该菌种极具开发潜力。从镰刀属Fusarium sp.内生真菌IFB-121中得到的三个脑苷脂类化合物（Qu-1、Qu-2、Qu-3）选择性地仅对细菌有中等强度的抑制活性，对真菌无明显效果，并且其抑制细菌活性的能力似乎与脑苷脂的结构呈现一定的关系，即随着化合物结构中双键数目的减少，其抑菌能力逐渐降低，但降低的程度并不十分明显。不过这为将来有关脑苷脂类化合物相关活性的构效关系研究提供了思路。
体外抗幽门螺旋杆菌活性的实验研究表明，化合物Qu-4、Qu-5、Im-1和Im-3四个化合物具有抗Hp活性。其完全抑制5个临床菌株和1个标准菌株（ATCC 43504）生长的最小浓度分别为：20.0、25.0、10.0和8.0μg/ml。阳性对照氨苄西林对6株测试菌完全抑制的最小浓度为2.0μg/ml。化合物Im-1和Im-3的抗Hp效果十分显著，它们抑制幽门螺旋杆菌活性的能力与氨苄西林相近，说明对于与幽门螺旋杆菌密切相关的急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃疡等疾病来讲，化合物IM-1和IM-3是两个极具开发潜力的植物内生真菌次生代谢产物。
黄嘌呤氧化酶活性的抑制实验表明，两个脑苷脂类化合物Qu-1和Qu-2具有中等强度的抑制活性，其IC<,50>值分别为43.8士3.6μM和55.5士1.8μM，它们均属于混合型抑制剂。尽管与阳性对照别嘌呤醇的IC<,50>值9.8士1.2μM比较相差一个数量级，但是脑苷脂类化合物的抑制黄嘌呤氧化酶活性实验研究以前未曾报导，我们首次开展这方面的工作，这为将来研究这类化合物在抑制黄嘌呤氧化酶活性作用提供了参考资料。
新化合物fusaruside免疫抑制活性研究的结果表明，Fusaruside具有改善Concanavalin A所致肝损伤的作用，能显著降低血清中ALT，AST以及LDH的水平，且作用具有剂量依赖性关系。体外试验显示Fusaruside能剂量依赖性的抑制ConcanavalinA所刺激的脾淋巴细胞表达IL-2，TNF-α，IFN-γ和T-bet等。FACS结果表明，Fusamside处理组外周脾T细胞表面表达CD25，CD69，Fas和FasL，等分子的比例较模型组显著下降。Western结果显示，Fusaruside可显著降低肝组织表达Fas和FasL等的水平。
对黄花蒿发根抗寒性和青蒿素合成的影响实验表明，新化合物Fusaruside可以在激素水平上提高黄花蒿发根的抗寒能力，并且能使青蒿素的合成量增加。因此，Fusaruside有望成为一种新的植物生长调节剂，并为建立青蒿素高产的发根培养技术和大规模的生物反应器培养提供实验依据。
另外，我们还对昆明山海棠[Tripterygium hypoglaucum（Levl.）Hutch简称：THH]的化学成分进行了初步研究，目的是希望从中分离出具有抗肿瘤活性的化学成分，为昆明山海棠的进一步开发利用提供依据。
综合应用各种化学和物理方法，以及现代色谱技术，从其根的粗粉中提取并分离得到14个化学成分。运用现代光谱技术（IR、MS、<'1>H-NMR、<'13>C-NMR、DEPT、HMQC、HMBC、NOESY等）并结合化学物理方法鉴定了其中10个化合物的结构，它们分别为：齐墩果酸（1）、乌苏酸（2）、epikatonic acid（3）、雷公藤内酯乙（4）、16α-18-二羟基-贝壳松烷-19-羧酸（昆明山海棠二萜酸A）（5）、山海棠酸（6）、胡萝卜甙（7）、β-谷甾醇（8）、棕榈酸（9）和硬脂酸（10）。其中化合物5是一个未见报导的新物质。
上述化合物的分离和鉴定进一步阐明了昆明山海棠中富含萜类成分，尤其是新化合物5的结构推定，丰富了昆明山海棠植物化学内涵，对本植物的植化继续研究以及植物分类学深入开展都具有指导意义。
关键词: 植物内生真菌 ；镰刀属 ；头孢菌属 ；次生代谢产物 ；生物活性 ；山海棠 ；黄嘌呤氧化酶
摘要： 随着陆生的微生物资源尤其是放线菌资源被深入研究和开发，资源几近枯竭，已经无法为制药业提供足够的药物先导化合物。目前很多学者将目光着眼于新资源中放线菌的研究，这些新资源包括海洋和植物内共生等。已有的研究表明这些放线菌具有相对特殊的代谢途径，能够产生结构新颖、活性突出及作用机制独特的的次级代谢产物，这些新资源成为天然产物研发的新热点。
本研究采用选择性分离方法对采自西太平洋近赤道区的19个深海沉积物样品中的放线菌进行了较为系统的分离，从中分离到90株放线菌，对其发酵液乙酸乙酯抽提物的生物活性进行筛选。对3株放线菌(1株海洋放线菌和2株云南美登木内生放线菌)进行了次级代谢产物研究，从其发酵产物中分离鉴定42个化合物(包括1个乙酰化产物，2个Mosher酯化和1个对溴苯甲酰化产物)，其中25个是新化合物。对部分化合物进行了生物活性研究。并对具有较强细胞毒活性的新化合物Naphthomycin L进行了初步的作用机制研究。
对从19个海洋沉积物样品中分离的90株放线菌，采用滤纸片琼脂扩散法和MTT法，对其发酵液乙酸乙酯抽提物的抗菌活性和体外细胞毒性进行筛选。结果显示，有35株菌对至少一种细菌或者真菌有抑制作用，有29株菌对青枯雷尔氏菌有抑制作用，分别占总供测菌株的38.8％和32.2％。有32株放线菌具有体外细胞毒性占供测菌株的35.6％，其中只对KB细胞有抑制作用的菌株有16株，只对Raji细胞有抑制作用的菌株有9株，对两种肿瘤细胞都有抑制作用的菌株有7株分别占供测菌株的17.8％、10.0％和7.8％。海洋沉积物来源的放线菌种蕴藏着丰富的产生生物活性物质的菌株，具有潜在的应用前景。
对海洋放线菌DSS-18进行了高氏培养基的150 L发酵罐发酵，并对其次生代谢产物进行了分离纯化，通过波谱学方法对化合物结构进行了测定，经过结构解析测定了16个结构，化合物类型涉及聚酮类、大环内酯和环肽。其中化合物DS-20、DS-25、DS-26、DS-27、DS-28和DS-31为新Ⅱ型聚酮类化合物，DS-9和DS-16为已知聚酮类化合物;化合物DS-3、DS-5、DS-6、DS-8和DS-10为已知的四重内酯(Nonactin)类化合物DS-1和DS-2为其单体酸;化合物DS-11为环肽类化合物与Valinomycin结构相同，四重内酯类化合物和环肽类化合物均属于离子载体类抗生素。四重内酯类化合物具有较强的抗细菌和细胞毒活性;DS-11具有极强的细胞毒活性，对Raji细胞IC50为0.8 ng/mL，而且具有一定的抗真菌活性。根据化合物和粗提物活性实验结果我们可以初步推测构成DSS-18菌株发酵液粗提物抗菌、抗肿瘤活性的成分主要为这些四重内酯以及环肽。
对云南美登木内共生放线菌CS进行了Waksman培养基的150 L发酵罐发酵，从其发酵提取物中分离鉴定了26个结构(包括1个乙酰化产物，2个Mosher酯化产物和1个对溴苯甲酰化产物)，其中19个新化合物，化合物类型包括大环内酯类、大环内酰氨类、聚酮类和萜类。化合物CS1-2-1、CS1-2-2、CS1-4-1、CS1-4-2、CS4-3、CS4-8、CS1-3、CS3-4-1和CS3-4-3为新型聚酮类化合物;CSM1-1、CSM1-3、CSM2-1、CSM2-2、CSM2-3为新型大环内酯类化合物;CS4-2为新型大环内酰氨类化合物。通过Mosher酯化反应确定了化合物CS1-4-1的绝对构型。将化合物CS1-3乙酰化后的产物进行X-ray衍射实验确定了化合物CS1-3的相对立体构型。对化合物CSM1-3及CSM2-3进行X-ray衍射实验确定了这类化合物的相对立体构型。初步的活性测试表明化合物CSM1-1，CSM1-3，CSM2-1，CSM2-2，CSM2-3和CS4-2具有较强的细胞毒活性。
经过生物活性测试表明化合物CS4-2(Naphthomycin L)具有很强的细胞毒性，对其进行了细胞毒性作用机制的初步研究。
对滑桃树内共生放线菌W6F2B进行了YMG培养基的50 L发酵罐发酵。并从发酵产物中分离鉴定了2个化合物，W1-2和W1-3均为已知化合物，本文首次应用晶体衍射实验确定化合物W1-2的相对立体构型。
本研究的结果表明，无论是海洋放线菌，还是植物内生放线菌都蕴藏着丰富的次生代谢产物资源，这些结构新颖、活性突出的次生代谢产物将是药物或先导化合物的重要来源。
关键词: 微生物资源 ；生境放线菌 ；代谢产物 ；选择性分离法 ；细胞毒性
摘要： 近年来由于真菌感染呈上升趋势，以及真菌对目前使用药物产生耐药性等问题，所以寻找新的抗真菌剂刻不容缓。本论文以从植物和植物共生微生物天然产物中寻找具有抗真菌活性的化合物为主线，在初步活性筛选的基础上，选定以藏药甘青铁线莲（Clematis tangutica）以及热带植物滑桃树（Trewia nudiflora）作为研究对象，从植物体、植物愈伤组织培养、植物共生微生物三个方面开展了相关研究，取得了以下研究结果：
从甘青铁线莲地上部分的乙醇提取物中，通过活性追踪分离得到两个新的抗真菌三萜皂苷。根据光谱数据结合化学反应，将它们的结构分别鉴定为3-O-a-L-arabinopyranosyl hederagenin 28-O- a-L-rhamnopyranosyl ester (1)和3-O-b-D-glucopyranosyl-(1→4) -a-L-arabinopyranosyl hederagenin 28-O- a-L-rhamnopyranosyl ester (2)。这两个化合物对7株真菌的抗菌活性试验表明，它们对Saccharomyces cerevisiae有较好的抑制活性(MIA ≈ 2.5mg/disc)，与阳性对照两性霉素B的活性相当;对Penicillium avellaneum UC-4376, Cadidan glabrata, Trichosporon beigelii的抑菌活性一般 (MIA ≈ 10mg/disc)。对于筛选的大多数菌株，化合物2比化合物1的活性更强。关于该属植物的三萜皂苷已有较多的研究和文献报道，但这是首次报道从该属植物发现具有抗真菌活性的三萜皂苷。
活性追踪分离结合传统的植物化学成分分离方法，对滑桃树果皮不同材料（新鲜、风干、发霉、机械损伤等）的抗真菌等化学成分进行了对照研究，从中共分离并鉴定了25个不同化合物，其中有3个为新的阿替烷型二萜（BP3，BP7，AC2），1个为新的闭花烷型二萜（TC7）。闭花烷型二萜与分离到的其它二萜有显著差异，对其来源进行了初步的探讨，实验结果表明只有发霉的滑桃树果皮中含有该化合物，因此推断TC7可能为滑桃树果皮受真菌胁迫所产生的应激代谢产物（stress metabolite）。活性追踪分离实验结果表明，滑桃树果皮中抗真菌活性最强的成分为美登木素类化合物，并且以特利回生（trewiasine）为主，因此认为美登木素类化合物是滑桃树植物的组成型抗真菌次生代谢产物，它可能在植物对外界有害微生物的化学防御中起重要作用。
从滑桃树种子萌发的无菌苗成功地诱导出愈伤组织，并进行了继代培养;对愈伤组织的化学成分进行了研究，分离鉴定了15个化合物，包括5个新的阿替烷型二萜（TnC 1,10,12,13,14）（其中2个同时在滑桃树果皮中分离得到）;实验结果表明：滑桃树愈伤组织在目前使用的培养条件下不能产生美登木素类化合物。
从温室栽培滑桃树的不同部位、滑桃树无菌苗、愈伤组织进行内生菌的分离，共分离纯化了未鉴定的内生真菌57株 (isolates)、内生放线菌10株、内生细菌2株。采用共培养拮抗实验 (antagonistic test)与小规模发酵产物的活性测试相结合，对分离到的菌株进行抗真菌活性筛选，发现具有抗真菌活性的菌株10株，其中真菌8株、放线菌2株。对活性较好的4株真菌进行了分类学鉴定，从中挑选了2株 (1TnR2-4和2TnP1-2)进行了化学成分研究。
活性追踪从菌株1TnR2-4 （Cylindrocarpon sp.）琼脂固体发酵（7L）产物中，分离到抗真菌活性成分——化合物CSE1 (brefeldin A)及其衍生物CSE3 (7-acetylbrefeldin A)、CSE4 (7-dehydrobrefeldin A)，其中CSE3为一新天然产物。初步的抗癌活性测试表明：化合物CSE1及CSE3具有抗癌活性。这是首次从柱孢属（Cylindrocarpon）真菌中分离到这类化合物。从中分离到的其它次生代谢产物还包括鞘糖脂（CSE5）、甾体和脂肪酸等。
活性追踪结合常规的化学成分分离方法，对菌株2TnP1-2 （Fusarium sp.）的次生代谢产物进行了研究，从2L琼脂固体发酵的产物中分离并鉴定了3个化合物FS1、FS2、FS3，其中FS3为一新化合物。初步的抗癌活性测试结果表明：FS1具有抗癌活性。
最后在论文的综述部分，介绍了植物利用次生代谢产物作为防御外界病原菌、植食性动物等侵害的武器，这些化学防御涉及3种不同类型：组成型化学防御、诱导型化学防御以及共生化学防御。
关键词: 药用植物 ；铁线莲 ；滑桃树 ；抗真菌成分 ；美登木素类化合物 ；内生菌 ；化学防御 ；抗癌活性
摘要： 植物内生链霉菌次生代谢产物结构类型多样，具有较强的生理活性，是产生抗生素及多种活性物质的重要微生物资源。尤其是一些药用植物内生链霉菌，还具有产生与宿主植物相同或类似次生代谢产物的能力。云南有着丰富的民族药用植物资源，为开展植物内生链霉菌的研究提供了有利条件。 本论文分为三章，第一章总结了近年来国内外关于微生物中的抗菌次生代谢产物的研究进展，阐述了微生物次生代谢产物及其抗菌活性研究在寻找新的活性药物先导化合物中的作用。 第二章对143株内生放线菌进行了化学多样性和生物活性筛选。通过TLC检测和抑菌活性实验，从中筛选出五株可作为进一步研究的链霉菌(YIM67071、YIM67086、YIM67005、YIM67032、YIM66262)，并采用改良61＃培养基进行扩大发酵。 第三章对筛选出的两株分别分离自云南文山的草玉梅(Anemone rivularis)植物内生链霉菌YIM67071和水虎尾（Dysophylla stellata）植物内生链霉菌YIM67086的代谢产物进行了分离和鉴定。应用多种色谱技术手段对其发酵物进行化学成分研究，并通过NMR、MS等波谱方法进行结构鉴定。从菌株YIM67071中共分离鉴定了26个化合物，包括1个新天然产物3，3'-thiobis[2-methyl-2-propenoic acid](1)，以及25个已知化合物:trans-3-(methylthio)-acrylic acid(2);1H-pyrrole-2-carboxylic acid(3);2-phenylacetic acid(4);3R,4S-dihydroxy-3-methyl-2-pentanone(5);4-hydroxyphenyl alcohol(6);2,3-dihydroxybenzoic acid(7);methyl-2-(4-hydroxyphenyl)acetate(8);4-hydroxybenzoic acid(9);1H-indole-3-carboxylic acid(10);7,4'-dihydroxy-isoflavone(11);7-methoxy-4'-hydroxy isoflavone(12);5,7,4'-trihydroxy-isoflavone(13);5,4'-dihydroxy-7-methoxy isoflavone(14);diisobutylphthalate(15);N-acetyltyramine(16);cyclo(L-Pro-Gly)(17);ergost-5-en-3β-ol(18);cyclo(L-Gln-L-Leu)(19);cyclo(L-Leu-L-Pro)(20);nicotinic acid(21);cyclo-(L-tyrosyl-trans-4-hydroxy-L-proline)(22);cyclo-(L-Pro-L-Tyr)(23);uracil(24);alpiniamide(25);cyclo(L-Tyr-L-Pro-L-Phe-trans-4-hydroxy-L-Pro)(26)。从菌株YIM67086中共分离鉴定了11个化合物，其中包括1个新化合物2-amino-3，4-dihydroxy-5-methoxybenzamide(1)，及10个已知化合物:4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid(2);3-hydroxy-4-methoxybenzoic acid(3);5,7,4'-trihydroxy-isoflavone(4);7,4'-dihydroxy-isoflavone(5);7,4'-dihydroxy-5-methoxy isoflavone(6);5,4'-dihydroxy-7-methoxy isoflavone(7);lH-pyrrole-2-carboxylic acid(8);2-phenylacetic acid(9);N-acetyltyramine(10);p-hydroxytruxinic acid(11)。 论文还对分离到的部分化合物进行了抗菌活性(MIC)、抗氧化活性(IC50)及细胞毒活性(IC50)筛选。其中从YIM67086发现新化合物2-amino-3，4-dihydroxy-5-methoxybenzamide(1)具有较好的抗氧化活性（IC50为68.6μg/mL），一定的抗白色念珠菌活性（MIC为32μg/mL）和抗大肠杆菌活性(MIC为64μg/mL);已知化合物4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid(2)和p-hydroxytruxinicacid(11)对白色念珠菌均有抑制作用，其MICs均为64μg/mL。从YIM67071中发现有2个已知化合物具有一定抗菌活性，其中化合物trans-3-(methylthio)-acrylicacid(2)对大肠杆菌的MIC为32μg/mL，化合物ergost-5-en-3β-ol(18)对大肠杆菌、白色念珠菌的MICs均为64μg/mL。
关键词: 内生菌 ；链霉菌 ；次生代谢产物 ；抗菌活性 ；民族药用植物
摘要： 当前，畜禽场废弃物（羽毛、毛发、角、蹄等）的大量堆积既造成严重的环境污染，又是极大的资源浪费。羽毛的主要化学成分是角蛋白，是一种良好的可替代或部分替代鱼粉的饲料蛋白来源。对羽毛等角蛋白资源的开发利用既有科学价值又有经济价值。传统的物理、化学水解法开发利用角蛋白能耗高且效率低，而利用生物技术降解角蛋白既对环境友善，又可改善羽毛等角蛋白的营养组成，具有无可比拟的优势和广阔的应用前景。
本文在“羽毛角蛋白微生物降解的研究”中，以羽毛作为唯一碳源和氮源，从本实验室保藏的具有羽毛角蛋白降解活力的几十株真菌和放线菌中通过试管静止培养初筛和摇瓶发酵复筛获得两株高效角蛋白降解菌：B221，C-28-1。经鉴定B221为链霉菌属放线菌，C-28-1为链格孢属真菌。通过测定发酵液的角蛋白酶活确定了这两株茵摇瓶液体发酵的最适产酶条件：B221为42℃、pH9.0，C-28-1为28℃、pH9.0，最适条件下角蛋白酶产量的最高点都出现在第3天至第4天。本实验还对它们在最适产酶条件下降解角蛋白的生化机制进行了初步研究，测定了不同取样时间发酵液中硫酸盐、亚硫酸盐和巯基化合物的含量，绘制了含硫化合物含量的消长变化曲线。实验中未检测到亚硫酸盐。本研究可望为利用生物技术途径开发废弃角蛋白资源提供理论依据。
植物内生菌以其独特的生境特征、重要的生态学作用、丰富的生物多样性和极具应用价值的次生代谢产物越来越受到人们的关注。黄花蒿是传统抗疟名中药，其有效成分为青蒿素。研究表明，青蒿素及其衍生物有不断扩大的医药用途，同时有望应用于农业、畜牧业等，世界范围内的青蒿素需求量有增加的趋势。全面系统地研究黄花蒿内生真菌及其发挥的生物学作用，探讨其对宿主青蒿素产量的影响，可望为大幅提高青蒿素及其衍生物产量寻找到新的途径。
本文在“黄花蒿内生真菌的生物多样性研究”中，分春、夏、秋三季采集南京市郊的野生黄花蒿进行内生真菌的分离和鉴定，从150个根样品、369个茎样品、244个叶样品和101个花序样品中共分离获得375株内生真菌，已鉴定17属计276个分离株，另有54株为不同形态的茵丝体，经实验诱导不产孢，作不育菌丝处理。统计了各属真菌在不同季节的分离频率，初步揭示了黄花蒿内生真菌的生物多样性。实验发现内生真菌在黄花蒿不同组织中的分布是不均匀的，主要集中在茎段，根、叶次之，花序最少;链格孢属真菌是南京近郊黄花蒿中的最优势内生真菌;在不同生长时期从黄花蒿中分离的内生真菌种类、数量上有明显区别。本研究可望为系统掌握黄花蒿内生真菌的资源情况、进而拓展黄花蒿内生真菌的利用价值奠定理论基础。
关键词: 角蛋白 ；微生物降解 ；角蛋白酶 ；液体发酵 ；硫酸根 ；巯基 ；内生菌 ；黄花蒿 ；生物多样性 ；菌种鉴定 ；分离频率
被引量
1
摘要： 植物内生菌是指那些在其生活史的一定或全部阶段生活在健康植物的各种组织内部，且不引起宿主明显感染症状的真菌和细菌(包括放线菌)。植物内生菌和宿主之间存在着互惠共生的关系，它可促进宿主植物的生长，提高宿主抵抗逆境、病原体、以及动物危害等方面的能力，使宿主植物比一般未感染的植株更具生存竞争力。内生菌由于其独特的生境，能够产生丰富多样的次生代谢产物，它们常具有新颖的结构和多种生物活性，在农业和医药业都具有重要的应用前景，成为近年来的一个研究的热点。
本论文对三株植物内生真菌的次生代谢产物的分离、结构和生物活性进行了研究，一共分离得到了34个化合物，鉴定了其中30个化合物的结构，其中6个是首次发现的新化合物;从这些化合物中筛选到2个具有较强抗菌活性的化合物，2个具有中等细胞毒活性的化合物，1个具有较强的抑制黄嘌呤氧化酶活性化合物，以及1个具有一定的抑制可溶性环氧化物水解酶活性的化合物。具体分述如下：
HG1是从苔草(Carex aridula V． Kmcz．)茎中分离得到的一株交链孢属(Alternaria sp．)内生真菌。利用硅胶、ODS反相柱、葡聚糖凝胶和高压液相等色谱技术，从HG1的固体发酵产物中分离得到13个化合物，综合运用多种波谱方法(MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HMQC、HMBC、NoESY和CD等)，鉴定了其中12个化合物的结构，其中1个为首次发现的化合物(4)，它的骨架在天然产物中是未报道的。抗菌活性试验结果表明：化合物1-4表现出抗菌活性，其中化合物4具有较强的抗真菌活性，对真菌红发毛癣菌(Trichophyton rubrum)和白色念珠菌(Candida albicans)的MIC值分别为15.0和30.1 μM，和阳性对照酮康唑相近。而化合物3也表现出较好的抗菌活性，对荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorecens)和白色念珠菌的MIC值分别为9.0和20.5 μM。另外，化合物1对黄嘌呤氧化酶具有较强抑制活性，IC50值为15.5 μM，和阳性对照别嘌呤醇相当(14.7μM)。基于化合物4的新颖结构和较好的生物活性，我们对其可能的生物合成途径进行了探讨，并进行了它的全合成工作，目前合成已进入后期阶段。 II(r)-2是从青皮(Vatica mangachapoi)的根中分离出的一株曲霉属(Aspergillussp．)内生真菌，利用硅胶柱层析，Sephadex LH-20和HPLC等手段从它的发酵液乙酸乙酯提取物中分离到了10个化合物，综合运用各种波谱技术(MS、UV、1H-和13C-NMR等)鉴定了9个化合物的结构，其中7个为二酮哌嗪类(环二肽)化合物或其衍生物。其中，化合物17表现出了中等的抑制可溶性环氧化物水解酶活性，IC50值为48.0μM，这属首次从天然产物中发现有抑制该酶活性的化合物。
IFB-18是从黄花蒿(Artemisia annua)的茎中分离到的一株炭团菌属(Hypoxylon truncatum)内生真菌，利用硅胶柱层析，Sephadex LH-20和HPLC等方法固体发酵产物中分离到11个化合物，运用多种波谱方法(MS、UV、1H-NMR、13C-NMR、1H，1H-COSY、HMQC、HMBC、NOESY和CD)以及单晶X—ray衍射分析鉴定了其中9个化合物的结构，其中5个化合物(24-28)为新化合物，属于tetralone二体或单体的衍生物。在此基础上对24，25的可能的生物合成途径进行了探讨。体外细胞毒活性试验表明，化合物24和25具有中等的细胞毒活性，其IC50值分别为49.5，41.0 μM(SW1116细胞);26、27对Hep G2细胞显示弱细胞毒活性，IC50值分别为96.0和91.0 μM。另外，化合物26和27还表现出一定的抗细菌活性，其中27对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和荧光假单胞菌的MIC值分别为28.5和30.0 μM。
最后对近几年来关于真菌次生代谢产物的全合成工作进行了简要的综述。
关键词: 植物内生真菌 ；次生代谢产物 ；生物活性 ；抗菌活性
摘要： 天然产物因其新颖的化学结构和独特的生物学活性，在新型先导化合物及新药的发现中一直有着不可替代的重要作用。而植物内生放线菌作为近二十年内新兴的一类天然产物的重要来源，受到了广泛的关注。本文综述了近二十年来植物内生放线菌来源的天然产物的研究进展：测定了数百株分离自云南西双版纳药用植物的内生放线菌的抗菌、抗肿瘤活性;并在此基础上选择了5株活性菌株，对其活性次生代谢产物进行了分离纯化及结构鉴定工作。
以临床耐药菌和植物病原菌等为标靶，分两组测定了共307株分离株的抗菌活性。结果显示：第一组(云南大学提供)的142株分离株中，超过71％的菌株具有抗菌活性;第二组(本实验室分离保存)的165株分离株中，超过42％的菌株具有抗菌活性。以鼠黑色素瘤细胞系B16和人肺腺癌细胞A549为标靶，测定了本实验室分离株的抗肿瘤活性。结果显示：超过88％的分离株具有抗肿瘤活性，62.5％的分离株对肿瘤细胞表现出了强抑制活性。上述结果远远好于常见土壤放线菌的活性表现，表明药用植物内生放线菌很可能是一种极具开发潜力的生物资源。
菌株119及150为第一组中的两株对革兰氏阳性细菌具有高抗性的内生链霉菌。通过液-液萃取、硅胶柱层析、凝胶柱层析以及高压液相层析的方法，从菌株119的菌丝体和发酵液中分离得到2个活性化合物，并通过波谱学方法确定了它们的化学结构，分别是Quinomycin A(1)和Quinomycin C(2);从菌株150的菌丝体和发酵液中只分离得1个活性化合物：Novobiocin(3)。
菌株D62是本实验室分离的一株对白色念珠菌菌和肿瘤细胞均有高抗性的内生链霉菌。通过液-液萃取、硅胶柱层析、凝胶柱层析以及高压液相层析等方法，从其菌丝体和发酵液提取物中分离获得若干化合物，通过波谱学方法确定了其中7个产物的化学结构，分别是：1-(4-aminophenyl)ethanone(4)，Antimycin A2a(5)，Antimycin A7a(6)，3-(3-formanudo-2-hydroxybenzamido)-8-hexyl-2，6-dimethyl-4，9-dioxo-1，5-dioxonan-7-yl-3-methylpentanoate(7)， Adenosine(8)，6-(2-(4-aminophenyl)-2-oxoethyl)-3，5-dimethyl-tetrahydropyran-2-one(9)，4，10-dihydroxy-10-methyl-dodec-2-en-1，4-olide(10)，其中化合物7和9为新化合物，其余为已知化合物。
菌株D65是一未发表的内生链霉新种，具有抗革兰氏阳性细菌活性和抗肿瘤活性。从其菌丝体和发酵液中共分离得到2个活性化合物，分别是：7-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-4H-chromen-4-one(11)和N-Acetyltyranune(12)，均为已知化合物。
菌株HS-HY-045是一株具有强抗肿瘤活性的分离株。从其菌丝体和发酵液中共分离得到5个活性化合物，并通过波谱学方法确定了它们的化学结构，分别是：(-)-(2R，4S)-4-hydroxy-2-methoxy-2-(9E-pentenyl)-tetrahydropyran(13)，Streptenol C(14)，Streptenol A(15)，Fujianmycin A(16)，和4-Hydroxy-2-((3'S，8’E)-3’-hydroxy-5’-oxodec-8’- enyloxy)-2-(9E-pentenyl)-tetrahydropyran(17)，其中化合物15为新化合物。进一步使用人肺腺癌细胞系A549对这5个化合物的抗肿瘤活性进行测试，结果Fujianmycin A表现出较好的抑制作用，其IC50值为5.2μM。
关键词: 西双版纳 ；药用植物 ；内生放线菌 ；生物活性 ；分离纯化 ；抗肿瘤活性
摘要： 当今世界，许多国家在新药开发方面都寄希望于天然药物，并将其作为药物发现和发展的先导来源，在抗癌、抗感染和抗老年性痴呆药等方面，目前临床应用很大一部分药物都是植物来源的，如著名的紫杉醇、喜树碱、长春新碱、青蒿素，石杉碱甲等。
我国植物药的使用历史源远流长，从《神农本草经》、《黄帝内经》以及到后世的《千金方》、《伤寒论》、《本草纲目》等等，植物药在中国历史上的应用已经有几千年，延续至今，影响深远。我国还拥有世界上最丰富的药用植物资源，其种类和数量均为世界之最。躺在如此巨大的植物药典籍和宝库上面，如何一方面依据经典的医书药方，直接从前人未注意到或研究较少的植物中寻找新活性天然药物;另一方面，如何从已经被前人研究透了的，具有明确疗效的药用植物中获得突破，即：从药用植物中分离内生菌并从其次生代谢产物中寻找新型、活性成分，便是本论文所关心的问题．
那么，什么是植物内生菌呢?植物内生菌就是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物的各种组织间或器官内部的真菌、细菌或放线菌。越来越多的事实证明，植物内生菌已成为新结构和/或高活性化合物的重要资源，具有非常重要的研究意义和广阔的开发前景。
本论文从寻找新型、活性细胞毒素、抗感染和酶抑制剂药物的角度出发。对在体外活性测试中有较强的细胞毒活性或酶抑制剂活性的植物—无翼坡垒(Hopea exalata)的化学成分进行了深入、系统的研究。此外，分别从药用植物黄花蒿、白茅和栓皮栎的健康组织中分离得到四株植物内生真菌Paraphaeosphaeria nolinae IFB—E011，Pleospora sp． IFB—E006，Chaetomiumglobosum IFB—E019，Penicillium sp．IFB—E022并对其化学成分和生物活性进行了深入细致的研究．利用硅胶、ODS、Scphadex LH-20、HPLC、PTLC等现代色谱技术共分离得到45个化合物，综合运用各种波谱方法(IR、UV、MS、NMR、CD)、X—ray单晶衍射、计算化学手段和化学衍生化等技术鉴定了其中43个化合物的结构，其中13个新化合物包括6个新骨架化合物。根据不同的活性筛选模型，我们从中筛选出具有细胞毒、抗植物病源菌、乙酰胆碱酯酶抑制、尿素酶抑制活性的化合物。具体创新点如下：
1．从海南岛特有植物无翼坡垒(Hopea exalata)中共分离得到19个化合物，鉴定了其中18个的结构，包括六个未见报道的化合物，其中4个为新骨架(1-4)，2个为新化合物(5，6)．新化合物1具有很强的酶抑制剂活性，而与之结构相近的化合物2-4和la却几乎没有活性，通过insight Ⅱ软件模拟小分子和酶之间的相互作用，揭示了构效关系;化合物1、2和la在常温下显示了比较特殊的NMR现象，这种类似的现象曾经被日本和中国的学者都观测到，但本论文第一次从计算化学角度对此现象背后产生的机理进行了有益的探讨。新化合物3具有很强的细胞毒活性，对六株肿瘤细胞株的活性都超过了阳性对照5—FU．新化合物5对某些植物病源菌有很好的抗菌活性，其中对Pyricularia oryzae的MIC达到了0.10 μg/ml。化合物7表现出了中等的体外抑制尿素酶活性，天然产物中有关尿素酶抑制剂的报道非常少，以此作为先导化合物，寻找低毒、高效的尿素酶抑制剂可能具有一定的研究价值。
2．从黄花蒿(Artemisia annua)内生真菌Paraphaeosphaeria nolinae IFB—E011的液体发酵产物中分离得到7个化合物，鉴定了其中6个化合物的结构，其中化合物20为首次发现的新化合物。化合物20具有自然界为数不多的双甲基化xanthane骨架，化合物20还是目前所知的唯一一个具有四环xanthane构架(framework)的化合物．
3．从白茅(Imperata cylindrical)内生真菌Pleospora sp．IFB—E006的液体发酵产物中分离并鉴定了9个化合物，其中化合物33为首次发现的化合物．6个蒽醌类化合物27、28和30-33进行了体外抗SW1116和K562肿瘤细胞活性的筛选，活性测试的结果阐明了简单的构效关系：a)蒽醌c环的氢化程度对其抗肿瘤细胞活性影响巨大;b)取代基的位置对活性也有一定影响．另外，从另一株该植物的内生真菌Chaetomium globosum IFB—E019的固体发酵产物中分离得到两个新骨架的azaphilone类生物碱chaetomiumin A和B，通过饲喂13C标记的醋酸钠，确定了它们是聚酮的生物合成途径。 4．从栓皮栎(Quercus variabilis)内生真菌(Penicillium sp．)的固体发酵产物中分离并鉴定了8个化合物，其中3个为首次发现的新化合物。与化合物40-42在结构上非常接近的化合物如vermistatin或funicone及其衍生物(含γ-pyrone环的结构)在Penicillium属真菌中有很多报道，但本研究所发现的含γ-pyridone环的天然产物骨架为首次发现，推测可能是氨基转移酶作用的结果．化合物40-42有中等强度的体外抑制肿瘤细胞的活性。
另外，本论文对上世纪60年代以来龙脑香科植物天然产物的研究作了简要的综述。
关键词: 天然药物 ；天然活性产物 ；植物药