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摘要： 目的:叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA)具有特异性抑制死菌DNAPCR扩增而对活菌细胞无影响的特点,将其应用于鸡肉中鼠伤寒沙门氏菌活菌检测。方法:待测样品中加入EMA至终质量浓度为50μg/m L,卤素灯曝光处理10 min,提取DNA进行RT-PCR反应,根据Ct值和标准曲线计算样品中活菌的数量。结果:相同细胞浓度条件下,活菌经EMA处理后其Ct值与未经EMA处理组的Ct值无显著性差异(P>0.05),且细胞浓度与Ct值均呈显著负相关性,相关系数分别是0.9916和0.9832;死菌经EMA处理后其Ct值与活菌经EMA处理后的Ct值有显著性差异(P﹤0.05),而与阴性对照组无显著性差异(P>0.05);死/活鼠伤寒沙门氏菌混合菌液污染鸡肉样品检测结果显示,与直接RT-PCR方法相比,EMART-PCR方法的检测结果更接近于平板计数结果。结论:EMA与RT-PCR相结合的方法可以快速、准确地检测鸡肉中鼠伤寒沙门氏菌活菌的数量,避免假阳性结果,具有实用意义。
关键词: 叠氮溴乙锭 ；逆转录-聚合酶链式反应 ；鼠伤寒沙门氏菌 ；鸡肉
被引量
10
摘要： 为了研究河北省承德地区鸡肉加工及零售环节中沙门氏菌致病性、血清型分布、毒力基因及耐药性等生物学特性,对2021-2022年采集自河北省承德地区鸡屠宰场、加工厂及零售样品257份进行沙门氏菌分离鉴定,采用人工感染小鼠试验、玻板凝集试验、PCR方法及K-B药敏纸片法检测分离菌株的致病性、血清型、毒力基因及耐药性情况。结果显示,从257份样品中分离到70株致病性沙门氏菌,70株沙门氏菌中有12种血清型,其中以肠炎沙门氏菌(24.3%)、鼠伤寒沙门氏菌(21.4%)、都柏林沙门氏菌(17.1%)为流行优势血清型;毒力质粒基因spvA、spvB、spvC、spvR检出率在12.9%~88.6%之间,毒力岛基因SPI-1 SPI-2、SPI-3、SPI-5检出率在27.0%~90.0%之间;对阿莫西林、氨苄西林、磺胺间氧嘧啶等7种药物耐药率在51.4%以上,对其他药物的耐药率在5.7%~40%之间,以耐10(15.0%)、9(20.0%)、8(17.1%)种药物为主;耐药基因Sul1、Sul2、Sul3、TetA、TetM、TetR、aac(3)-Ⅰv、aac(6′)-Ⅰb检出率在45.7%~97.1%之间,其他耐药基因检出率在8.6%~17.1%之间,耐药表型与耐药基因之间(除酰胺醇类、多黏菌素类)基本呈正相关。结果表明,从承德地区鸡肉加工及零售环节中分离的70株致病性沙门氏菌具有多种血清型、携带多种毒力基因、耐药性严重,且携带多种耐药基因,耐药表型与耐药基因之间存在相关性。
关键词: 鸡肉 ；沙门氏菌 ；致病性 ；血清型 ；毒力基因 ；耐药基因
被引量
5
摘要： 为了研究yibT基因在鼠伤寒沙门氏菌增殖过程中的作用及分子调控机制,采用基因工程方法提取沙门氏菌的RNA,反转录成cDNA,然后利用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测WT、WTΔyibT、WTΔyibT/pyibT的lptA-G和Lpt转运蛋白及csgD、rpoS的信使核糖核酸(mRNA)表达水平,研究yibT基因对沙门氏菌生物膜形成的影响。结果表明,yibT基因缺失后,可不同程度致使转运蛋白lptA-G的mRNA表达水平下调(P<0.05),其中lptB下调最为显著(P<0.01);yibT缺失可导致csgD表达量(P<0.05)和rpoS表达量显著下调(P<0.01);当yibT回补过表达后可致csgD、rpoS的mRNA表达水平均有不同程度的上调(P<0.05);同时,yibT基因的缺失可导致yecF和uspB的mRNA表达水平均不同程度的下降(P<0.05)。因此,推测yibT基因可能通过参与介导脂多糖的转运与合成来影响鼠伤寒沙门氏菌的生物膜形成,其可能是一种全局转录调控因子或DNA聚合酶,通过影响菌体DNA的复制而调控鼠伤寒沙门氏菌的多个生物学过程。
关键词: 鼠伤寒沙门氏菌 ；yibT基因 ；生物膜 ；基因转录水平
被引量
1
摘要： 为建立饲料中肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)的快速检测方法,针对sdfⅠ基因设计交叉引物,优化反应条件,建立饲料中肠炎沙门氏菌的交叉引物等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测法(CPALFD)。检测条件:反应时间60 min、反应温度63℃、甜菜碱浓度1.2 mmol/L、Mg^(2+)浓度5.0 mmol/L、BST DNA聚合酶8 U、dNTPs浓度0.3 mmol/L。结果显示:检测限为1.0×10^(1)ng/L,与鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、德尔卑沙门氏菌、单增李斯特菌、志贺氏菌等常见菌无交叉反应;对56份疑似污染样品检测结果显示,CPA-LFD法与国标法和PCR法检测结果一致。研究表明,初步建立饲料中肠炎沙门氏菌的CPA-LFD检测方法。
关键词: 肠炎沙门氏菌 ；饲料 ；交叉引物扩增 ；可视化核酸检测
被引量
3
摘要： 目的 实现食品中5种致病菌的同步增菌,并结合实时荧光聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)技术,建立快速检测的方法体系。方法 比较金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7、副溶血性弧菌和鼠伤寒沙门氏菌5种目标菌分别在营养肉汤和缓冲蛋白胨水中的生长曲线;优化DNA模板提取的方法;采用实时荧光PCR技术及熔解曲线分析,建立5种致病菌的快速检测方法。结果 缓冲蛋白胨水可以作为5种目标菌的同步增菌液,增菌3h后5种目标菌能被检出,最低检出的DNA浓度范围为10~10ng/μL。经熔解曲线分析, 5种目标菌的平均特征熔解温度(Tm)值范围为79.51~87.39℃。结论 本研究建立的5种致病菌快速检测方法,检测总时间大约为6 h,且方法灵敏度和特异性均能满足检测要求。
关键词: 同步增菌 ；食源性致病菌 ；实时荧光聚合酶链式反应 ；熔解曲线
被引量
4
摘要： 根据克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)16S rRNA基因以及局部大分子合成(MMS)操纵子特异序列设计2对引物,经反应体系和条件优化,建立了双重PCR检测方法。特异性检测结果显示,Cronobacter spp.菌株PCR扩增均可见2条特异性条带,而其他菌株PCR扩增均为阴性。纯菌检测双重PCR的灵敏度为6.3×103 CFU.mL-1,而相对应单重PCR的灵敏度分别为6.3×101 CFU.mL-1和6.3×103 CFU.mL-1;人工污染的食品样品(奶粉、牛奶、鸡肉)在经过24 h增菌后,检测限均可达100 CFU.mL-1或100 CFU.g-1。在鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)存在的条件下,双重PCR的检测限没有受到影响。表明本试验建立的双重PCR检测方法具有很好的特异性和灵敏度,能克服食品样品基质及杂菌的干扰,可应用于食品中Cronobacter spp.的检测。
关键词: 克罗诺杆菌(原阪崎肠杆菌) ；双重PCR ；食品检测
被引量
3
摘要： 目的建立多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,mPCR)法检测3种常见血清型沙门氏菌的分析方法。方法以肠炎沙门氏菌Hat基因、鼠伤寒沙门氏菌Stm-4495基因、乙型副伤寒沙门氏菌sdfI基因设计合成特异性引物,提取沙门氏菌基因组DNA为扩增模板,验证引物特异性,优化多重PCR退火温度及引物浓度,检测方法特异性及检出限,并利用该方法对人工污染冷鲜鸡肉进行检测。结果3对引物特异性强且无交叉影响;25μL多重反应体系中,引物STM、HAT、SDF最佳终浓度分别为:0.5、0.5、0.4μmol/L,最佳退火温度为60℃;11株阴性对照菌无目标条带检出,方法特异性良好,以3种血清型沙门氏菌纯培养物DNA混合物为模板,检出限低至DNA质量浓度1 pg/μL;人工污染鸡肉经过12 h增菌,能同时检测出3种血清型沙门氏菌的检测限为:肠炎沙门氏菌(4.0±1.0)CFU/g、鼠伤寒沙门氏菌(8.0±0.9)CFU/g、乙型副伤寒沙门氏菌(8.0±0.6)CFU/g。结论本方法特异性强、检测限低,对食品中3种常见血清型沙门氏菌快速检测具有重要意义。
关键词: 多重PCR ；血清型 ；沙门氏菌
被引量
7
摘要： 目的研究维生素D(VD)缺乏对细菌诱导的小鼠溃疡性结肠炎的影响,并初步探讨其可能的机制。方法24只3w龄雌性C56BL/6小鼠随机分为阴性对照(NC)组,阳性对照(PC)组和VD缺乏模型(VDDM)组。建立VD缺乏模型后,用鼠伤寒沙门氏菌制备小鼠结肠炎模型。1w后,处死小鼠,分离结肠、肝、脾,称重。观察小鼠结肠组织大体形态,并进行组织学评分;ELISA法检测小鼠血清IL-17和IL-23的含量;RT-PCR法检测小鼠结肠组织维生素D受体(VDR)mRNA的表达。结果与NC组比,PC组和VDDM组体重下降,结肠湿重指数、肝重、脾重、组织学评分均增加,IL-17、IL-23及VDR表达增加;与PC组比较,VDDM组脾重和组织学评分增加,IL-17、IL-23蛋白的表达增加,但VDR基因的表达却降低。结论 VD缺乏影响VDR基因水平,加剧细菌诱导的小鼠溃疡性结肠炎,其机制可能与IL-23/IL-17炎性通路有关。
关键词: 维生素D ；溃疡性结肠炎 ；维生素D受体 ；IL-17 ；IL-23
被引量
9
摘要： [目的]了解常见致病菌产生耐药性后耐药基因和毒力基因的变化。[方法]采用微量肉汤二倍稀释法测定21种临床常见抗生素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等5种标准菌株的最小抑菌浓度,选取敏感药物进行体外诱导耐药试验,采用PCR法检测耐药基因和毒力基因。[结果]5个标准菌株均对氨基糖苷类药物敏感;大肠杆菌对四环素类药物敏感;鼠伤寒沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌和肺炎链球菌对喹诺酮类药物敏感;金黄色葡萄球菌对克林霉素敏感。与标准菌株相比,氨基糖苷类和四环素类耐药菌株中均检测出新出现的相关耐药基因;喹诺酮类耐药基因parE在多杀性巴氏杆菌的标准菌株和耐诺氟沙星菌株中检测出,gyrB基因仅在肺炎链球菌的标准菌株和耐氧氟沙星菌株中检测出。在大肠杆菌中均检测出CS31A毒力基因,此外标准菌株中检测出fimH基因,耐多西环素菌株中检测出afa基因;多杀性巴氏杆菌标准菌株未检测出毒力基因,耐药菌株中均检测出oma87和tbpA基因;而鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌仅在标准菌株中检测出毒力基因。[结论]说明氨基糖苷类抗生素更容易诱导菌株产生耐药基因,而毒力基因与耐药基因无明显的相关性。细菌获得耐药性后,其毒力基因变化因菌株不同存在差异。
关键词: 体外诱导耐药 ；耐药基因 ；毒力基因 ；标准菌株 ；最小抑菌浓度(MIC)
摘要： 目的探究乳粉中阪崎肠杆菌活菌检测的灵敏度和最低检出线的实时荧光逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)方法。方法将羊奶粉作为基质,根据GB4789.40-2016中第一法中规定的增菌方法,一组加入10CFU阪崎肠杆菌,另一组加入等量的阪崎肠杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、普通变形杆菌、粪肠球菌,培养时间分别设置为15h和18 h,将不同培养时间的培养物分别取1mL进行RNA提取,以cDNA为模板进行扩增。结果增菌培养18h后,提取RNA采用实时荧光RT-PCR技术,结果显示扩增曲线良好, Ct值稳定。结论乳粉中阪崎肠杆菌活菌检测,增菌培养18 h后,采用实时荧光RT-PCR,最低可检出10 CFU的阪崎肠杆菌。
关键词: 阪崎肠杆菌 ；活菌检测 ；转录-聚合酶链反应
被引量
4
摘要： 目的 观察载脂蛋白E （ApoE）模拟肽ApoE23对细菌性脓毒血症小鼠血浆脂多糖（LPS）质量浓度变化的影响及其对肝脏低密度脂蛋白受体（LDLR）表达的调节作用.方法 设计ApoE模拟肽（ApoE23）并采用固相合成法进行合成,高效液相色谱（HPLC）技术对合成物进行纯化,电离子质谱对合成物进行鉴定并对合成物进行氨基酸组成分析;B组鼠伤寒沙门氏菌诱导C57BL细菌性脓毒血症模型并对感染小鼠尾静脉注射ApoE23进行治疗.小鼠血浆LPS质量浓度测定采用连续透射免疫比浊法.采用定量RT-PCR技术及Western blot技术检测小鼠肝脏中LDLRmRNA及蛋白质表达水平的变化.结果 细菌性脓毒血症小鼠血浆LPS浓度显著升高,肝脏LDLR表达明显降低.ApoE23治疗明显降低细菌性脓毒血症小鼠血浆LPS浓度,并使细菌感染导致的小鼠肝脏LDLR mRNA和蛋白质低表达得到明显纠正.结论 ApoE23可能是一种潜在的抗细菌性脓毒血症药物,其作用机制可能与其调解肝脏LDLR表达有关.
关键词: 载脂蛋白E ；载脂蛋白E模拟肽 ；细菌性脓毒血症 ；脂多糖 ；低密度脂蛋白受体
被引量
3
摘要： 为评价鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白(FliC)以及鸡GM-CSF(chGM-CSF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗的免疫增强效果,本实验通过PCR扩增fliC,并合成chGM-CSF编码基因,分别构建重组质粒pBrClone30-fliC和pBrClone30-GM-CSF,拯救获得重组病毒rClone30-fliC和rClone30-GM-CSF。RT-PCR和ELISA检测结果表明:fliC和chGM-CSF基因正确插入重组病毒,并获得稳定表达;重组病毒免疫7 d后重组NDV HI抗体效价检测显示,实验组平均HI效价分别达到4.5 log2和4.8 log2,而r Clone30组和空白组HI效价仅为3 log2和1 log2;免疫7 d后攻毒,空白组SPF鸡均死亡,rClone30组有两例发病,实验组SPF鸡全部存活并且无任何临床症状。本研究结果表明,FliC和chGM-CSF作为佐剂能够有效提高弱毒疫苗的免疫效果。
关键词: 鞭毛蛋白 ；鸡GM-CSF ；新城疫病毒 ；反向遗传操作技术
被引量
2
会议时间： 2019-10-13
摘要： 目的:鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella Typhimurium,S.Typhimurium）是一种常见的病原菌,能感染人和脊椎动物,引起胃肠炎、甚至败血症等疾病,危害人和动物的健康。肉桂醛是中药桂枝中的有效成分之一,对沙门氏菌有抑菌作用,但其作用机制尚未明确。方法:通过同位素标记相对和绝对定量与高效液相色谱及质谱联用（iTRAQ-LC-MS/MS）技术结合生物信息学,分析差异表达蛋白的功能和通路。在通过RT-PCR验证肉桂醛对细菌相关毒力基因转录水平的影响,以16s为内参基因和2-ΔΔCt法对数据进行分析验证。结果:通过iTRAQ共检测到2212个蛋白,其中上调的差异蛋白73个,下调的差异蛋白82个。通过GO功能注释发现差异蛋白涉及10个细胞组成、13个生物过程以及9个分子功能。KEGG通路分析结果显示这些差异蛋白涉及了57条相应的细胞通路,主要为泛酸盐和辅酶A合成、氰氨基酸代谢和硝基甲苯降解等相关的通路。还发现肉桂醛可以显著下调Ⅰ型菌毛和Ⅲ型分泌系统中相关的蛋白的表达。RT-PCR实验结果显示,经肉桂醛处理后,鼠伤寒沙门氏菌中毒力因子invB、CR0791855和fimA的转录水平明显下降,而sipA、prgI和fimW的转录水平则发生显著上调。结论:肉桂醛对鼠伤寒沙门氏菌的氨基酸生物合成与代谢过程有明显的抑制效果,进而影响菌体蛋白质的合成,同时肉桂醛还抑制了沙门氏菌的氧化还原相关蛋白,以及下调了耐药性相关蛋白和毒力因子的表达水平。肉桂醛对Ⅰ型菌毛的抑制效果可能是通过上调负调控因子fimW实现,但是对Ⅲ型分泌系统的抑制机制尚未明确。
关键词: 肉桂醛 ；鼠伤寒沙门氏菌 ；蛋白质组学 ；作用机制 ；毒力因子
摘要： 根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计1对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源NDV分离株JS5F基因(约1700bp),测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。pVAX1-F经脂质体转染COS-7细胞,间接免疫荧光试验检测出F基因在COS-7细胞中的表达产物。将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F)。重组菌以109CFU/只的剂量2次免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDVF蛋白的血清抗体和小肠粘膜抗体应答,SL7207(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于SL7207(pVAX1)组(P<0.05)。将SL7207(pVAX1-F)以109CFU/只剂量口服免疫1日龄雏鸡,免疫保护试验结果显示,SL7207(pVAX1-F)免疫组对鸡具有良好的保护率(77.27%),与空白对照组和SL7207(pVAX1)空载体组之间存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能成功释放所携带的质粒,并能刺激机体产生免疫应答,可对NDV强毒攻击提供良好的免疫保护作用,提示该疫苗候选株对新城疫的控制有重要应用前景。
关键词: 减毒沙门氏菌 ；DNA疫苗 ；新城疫病毒 ；免疫原性
被引量
11
摘要： 用长距离RT PCR扩增了传染性法氏囊病病毒 (infectiousbursaldiseasevirus,IBDV)ZJ2 0 0 0株多聚蛋白基因 ,定向克隆入真核表达载体pCI,电转化dam- 和phoP- 双突变的减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111株 ,并直接转染Vero细胞。RT PCR和间接免疫荧光试验可从Vero细胞中检测到阳性信号 ,SDS PAGE和West blotting均可检测到 4 1kD的蛋白条带。结果表明减毒沙门氏菌可将外源基因导入Vero细胞 ,并进行转录和表达 ,具有免疫反应性 ,为进一步研制减毒沙门氏菌为载体的IBDV口服DNA疫苗打下基础。
关键词: 鸡传染性法氏囊病病毒 ；多聚蛋白 ；减毒沙门氏菌 ；基因疫苗载体
被引量
10
摘要： 目的建立实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法基于鼠伤寒沙门氏菌II型限制酶基因,设计引物及Taqman探针,利用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果特异性探针可从25种血清型沙门氏菌(共49株)及11株阴性对照菌株中检测出全部的11株鼠伤寒沙门氏菌。以鼠伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.998,扩增效率90%,最低检测浓度300cfu/mL。对已接种鼠伤寒沙门氏菌的4种模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致。结论此方法特异、灵敏、准确,适于食品中鼠伤寒沙门氏菌的检测。
关键词: 实时荧光PCR法 ；鼠伤寒沙门氏菌 ；Taqman探针 ；沙门氏菌属
被引量
18
摘要： 【目的】探讨以减毒沙门氏菌为载体,进行TGEV DNA疫苗口服免疫可行性。【方法】通过RT-PCR扩增TGEV四川株(SC-H)S基因5’端约2.1 kb的主要抗原位点片段,将其插入真核表达载体pVAX1,构建重组质粒pVAX-S,体外转染COS-7细胞,间接免疫荧光检测S基因表达。通过电转化将pVAX-S转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建SL7207(pVAX-S)重组菌,并在体外感染小鼠腹腔巨噬细胞,以RT-PCR、间接免疫荧光检测细胞内S基因的转录与表达情况。将SL7207(pVAX-S)重组菌以5×108、1×109、2×109CFU剂量口服接种BALB/c小鼠,分析其安全性,并以1×109CFU剂量的重组菌3次免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA检测免疫小鼠的血清IgG与肠道粘膜IgA抗体。【结果】成功构建重组质粒pVAX-S,且重组质粒能在COS7细胞中表达。重组菌SL7207(pVAX-S)感染巨噬细胞后检测到目的基因的转录、表达。小鼠口服接种不同剂量重组菌,具有良好的安全性。免疫小鼠于二免后两周可检测到针对TGEV S蛋白的特异性血清IgG与肠道粘膜IgA抗体,且三免后两周与SL7207(pVAX1)空载体免疫组间分别存在显著性差异(P<0.05)和极显著性差异(P<0.01)。【结论】携带TGEV DNA疫苗的减毒沙门氏菌小鼠试验显示了良好的免疫原性与安全性。
关键词: 猪传染性胃肠炎病毒 ；S基因 ；减毒沙门氏菌 ；DNA疫苗 ；安全性 ；免疫原性
被引量
19
摘要： 目的:构建含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261(减毒鼠伤寒沙门氏菌)疫苗菌。方法:将质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入LB5000(鼠伤寒沙门氏菌)进行甲基化,利用修饰后重组质粒转化终宿主菌SL3261,抗生素筛选后挑取单个菌落扩增进行抽提质粒和PCR鉴定,SL3261疫苗菌与HepG2细胞体外共培养,荧光显微镜和RT-PCR分别检测GFP(绿荧光蛋白)的表达和4-1BBL基因的转录。结果:导入pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261经抽提质粒电泳后获得了同原转化质粒相同大小的目的条带,质粒PCR获得了约930bp的条带,200个HepG2细胞感染SL3261为201±46CFU、SL3261-pIRES2-EGFP为163±37,而SL3261-pIRES2-EGFP-4-1BBL为158±32,含质粒SL3261在体外感染HepG2细胞的能力同原细菌基本相同(P>0.05)。感染含质粒SL3261的HepG2细胞观察到GFP表达,感染含重组质粒SL3261的HepG2细胞经RT-PCR检测到约930bp的目的条带。结论:成功构建了能携带大鼠4-1BBL基因真核表达质粒的SL3261疫苗菌。
关键词: 4-1BBL基因 ；减毒沙门氏菌 ；DNA疫苗
被引量
4
摘要： 根据GenBank公开序列自行设计一对引物,通过RT-PCR扩增出小鼠肝炎病毒的全长S1基因,并将其插入真核表达质粒pVAX1中,构建出重组真核表达质粒pVAX1-S1。将重组质粒转染COS-7细胞,采用间接免疫荧光检测出S1蛋白的体外表达。将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,构建出运送DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1)。分别以5×108CFU、1×109CFU、2×109CFU剂量的重组菌口服接种6周龄BALB/c小鼠,试验结果表明,重组菌对小鼠具有良好的安全性。以1×109CFU剂量的重组菌口服免疫小鼠,抗体检测结果显示,在二免后两周和三免后两周,重组菌免疫组的血清抗体水平与SL7207(pVAX1)空载体免疫组间分别存在显著性差异(P<0.05)和极显著性差异(P<0.01)。在三免后两周重组菌免疫组出现了较高水平的肠黏膜抗体。
关键词: 小鼠肝炎病毒 ；S1基因 ；减毒沙门氏菌 ；安全性 ；免疫特性
被引量
3
摘要： 目的观察鼠伤寒沙门氏菌不同生长时相鞭毛的表达规律，并研究鞭毛蛋白表达水平与巨噬细胞免疫应答反应的相关性。方法RT-PCR检测沙门菌在对数期和稳定期鞭毛蛋白基因表达，半固体培养基穿刺接种实验检测沙门菌鞭毛动力水平，乳酸脱氢酶释放实验和荧光染料染色法测定沙门菌诱导的巨噬细胞的焦亡率，Westernblotting实验检测感染后巨噬细胞caspase-1、IL-1β的表达水平，从而评价炎性复合体的激活状态。结果对数期沙门菌鞭毛基因表达以及鞭毛动力均高于稳定期沙门菌，对数期沙门菌可促进感染后巨噬细胞caspase-1、IL-1β的表达并且诱导大量巨噬细胞焦亡，而稳定期沙门菌则无此现象发生。结论鼠伤寒沙门氏菌在对数期鞭毛蛋白高表达，激活炎性复合体免疫反应，且能诱导大量巨噬细胞发生焦亡。
关键词: 鼠伤寒沙门氏菌 ；鞭毛 ；固有免疫 ；炎性复合体 ；焦亡
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