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摘要： 皮下脂肪和肌内脂肪含量是决定猪肉品质优劣的关键因素。猪作为脂肪沉积能力较强的家畜,脂肪在体内的分布在一定程度上具有明显的特征:与肉品质及料肉比呈负相关的皮下脂肪与内脏脂肪沉积能力强。因此,降低猪皮下与内脏脂肪的沉积能力是畜牧研究中亟待解决的重要问题,而通过精准营养干预是调控猪脂肪沉积能力最高效和最安全的途径。研究表明石榴具有保健和药用价值,堪称超级天然产物。石榴中的鞣花酸通过肠道代谢为尿石素类代谢物(Urolithin)。由此推测这些代谢产物可能是鞣花单宁及鞣花酸发挥生物学活性的最终物质。Urolithin可显著降低人脂肪细胞中甘油三酯的积累,提示来源于天然产物的Urolithin可作为调控猪脂肪沉积的靶标,并且具有取材安全且降脂功效潜能高的特点,但是Urolithin调控脂肪沉积的机制还不清楚。因此,一方面,本实验利用Urolithin前体物质鞣花酸处理育肥猪,明确鞣花酸对脂肪沉积,肌肉发育和肉品质的影响;一方面,利用尿石素A(Urolithin A,UA)处理高脂饮食诱导的小鼠及原代培养的小鼠脂肪细胞,阐明UA调控小鼠脂肪沉积与能量代谢的分子机制。获得以下主要研究结果:1.UA的前体物质鞣花酸对脂肪沉积与肉品质的调控作用。(1)猪饲喂实验表明,鞣花酸对育肥猪生长性能无影响,但可以显著降低血清中葡萄糖水平(-13.5%);(2)通过检测屠宰后胴体性能和理化参数,结果发现鞣花酸处理可显著提高胴体的瘦肉含量(+3.9%),同时降低脂肪含量(-10.8%)。鞣花酸处理组背最长肌肉色,系水力及p H值均显著高于对照组;(3)进一步验证鞣花酸对肉品质的影响,利用气相色谱法测定肉样品的脂肪酸谱,结果发现鞣花酸组背最长肌中亚油酸(C18:2)和二十二碳六烯酸(C22:6)的含量均显著高于对照组。2.UA在小鼠脂肪细胞中的作用及其机制研究(1)UA通过抑制脂肪合成(Fas,ap2和Cebpβ)并促进脂肪分解(HSL和ATGL)进而抑制3T3-L1脂肪细胞的分化;(2)UA以依赖于UCP1的方式增强原代白色脂肪细胞的棕色化以及棕色脂肪细胞的活化;(3)UA通过甲状腺激素信号通路促进原代白色脂肪细胞的棕色化以及棕色脂肪细胞的活化。3.UA通过增强小鼠脂肪组织的产热作用发挥抗肥胖功效。(1)UA可预防由饮食引起的肥胖和代谢功能障碍;(2)UA通过增强棕色脂肪组织的产热作用以及诱导白色脂肪组织的棕色化来增加机体能量消耗;(3)UA介导机体能量消耗的机制是由棕色脂肪和腹股沟白色脂肪组织中的三碘甲状腺素(T3)水平升高引起的。4.UA对机体肌肉功能改善的作用及其机制研究(1)UA改善饮食诱导肥胖小鼠的运动性能,并且不影响肌管的分化;(2)在脂肪酸氧化的条件下,UA处理增强了小鼠肌管中线粒体复合物II的功能,进一步明确UA对小鼠骨骼肌的贡献取决于脂肪组织的脂解作用。综上所述,本研究阐明了鞣花酸及其代谢产物UA在脂肪沉积和肌肉发育中的作用,并揭示了UA通过甲状腺激素通路抑制脂肪沉积的分子机制,最终阐明UA在脂肪细胞生物学中的重要作用,为畜牧生产中的肉质改良工作提供思路和科学依据,同时为人类肥胖症的治疗提供理论基础。
关键词: 尿石素A ；棕色脂肪组织 ；甲状腺激素 ；鞣花酸 ；肉品质
被引量
9
摘要： 本研究旨在明确载脂蛋白A5(apolipoprotein A5,ApoA5)和乳脂球表皮生长因子8(milk fat globule-epidermal growth factor 8,Mfge8)在调控心肌脂质沉积中的作用并探究二者之间的关系。对比不同人群血清中ApoA5与Mfge8含量,建立高脂饮食(high-fat diet,HFD)诱导肥胖小鼠模型,另从乳鼠提取和鉴定原代心肌细胞,加入0.8 mmol/L棕榈酸钠建立脂质沉积心肌细胞模型。转染腺病毒以过表达ApoA5并观察其对HFD诱导肥胖小鼠心脏功能和脂质影响,以及相关基因或蛋白表达变化;免疫共沉淀验证相关蛋白间的相互作用,免疫荧光染色观察相关蛋白在细胞中的定位。向心肌细胞中添加重组rMfge8以探究ApoA5对Mfge8的调控机制。结果显示:单纯肥胖组人群与健康对照组相比,血清ApoA5水平显著降低(P<0.05),Mfge8水平显著升高(P<0.05)。ApoA5显著减轻HFD肥胖小鼠体重(P<0.05)、使左心室等容舒张时间(isovolumic relaxation time,IVRT)缩短,左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)增加,血浆中甘油三酯(triglycerides,TG)和胆固醇含量(P<0.05)均显著降低。ApoA5显著减少心肌组织和细胞中TG的沉积(P<0.05)、脂肪酸转位酶(fatty acid translocase,FAT/CD36)、脂肪酸结合蛋白(fatty acid-binding protein,FABP)、脂肪酸转运蛋白(fatty acid transport protein,FATP)的转录(P<0.05),以及Mfge8的蛋白表达(P<0.05),但对Mfge8的转录没有显著改变(P>0.05)。在体外以ApoA5为诱饵蛋白捕获到了Mfge8蛋白,说明二者之间存在直接相互作用。过表达ApoA5会导致Mfge8与ApoA5或溶酶体膜相关蛋白2(lysosomeassociated membrane protein 2,LAMP2)在脂质沉积状态下心肌细胞中的共定位增加,在此基础上外源添加重组rMfge8会抵消ApoA5对心肌细胞脂质沉积的改善作用。以上结果表明,ApoA5可通过调控Mfge8蛋白的含量和细胞定位,下调FAT/CD36等脂肪酸转运蛋白的表达,减少脂质沉积状态下心肌细胞对脂肪酸的摄取,从而显著减轻心肌脂质沉积并改善心脏舒张和收缩功能。
关键词: 载脂蛋白A5 ；心肌细胞脂质沉积 ；乳脂球表皮生长因子8
摘要： 【背景】脂肪组织分为皮肤下的皮下脂肪组织(subcutaneous adipose tissue,SAT)和腹部内器官周围的内脏脂肪组织(visceral adipose tissue,VAT),皮下脂肪作为影响肉类美味与否的重要因素,探究皮下脂肪沉积分子调控机制对于育种改良和畜牧业的发展至关重要。Krüppel-like factors 12 (KLF12)是一个进化保守的转录因子,可以在多种细胞类型中表达并控制着广泛的细胞过程。【目的】研究获得山羊KLF12的分子特征并进行生物信息学分析,同时明确KLF12在山羊组织和细胞中的表达模式以及干扰KLF12对山羊皮下脂肪细胞分化的调控作用,为进一步研究KLF12在脂肪沉积过程中的潜在作用提供理论依据。【方法】利用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法克隆山羊KLF12完整编码序列(coding sequence,CDS)区,使用在线生物信息学分析软件对山羊KLF12核苷酸序列和氨基酸序列进行分析。利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技术检测KLF12在山羊心脏、肝脏、腹部脂肪、皮下脂肪、臂三头肌、背最长肌等14个组织中的表达水平,以及诱导分化不同时间段KLF12在皮下前体脂肪细胞中的表达水平。随后,试验通过化学合成山羊KLF12小干扰RNA(si-KLF12),使用Lipofectamine RNAiMAX转染试剂将山羊si-KLF12序列转染到体外培养的山羊皮下前体脂肪细胞中。使用100μmol·L-1油酸导液诱导脂肪细胞分化。利用油红O以及Bodipy染色方法和qRT-PCR技术分别从形态学以及分子生物学的角度阐明干扰KLF12对皮下前体脂肪细胞脂滴积聚和脂肪分化标志基因mRNA表达水平的影响。【结果】试验成功获得包含开放阅读框(open reading frame,ORF)(1 209 bp)的山羊KLF12(1 315 bp,编码402个氨基酸)。亚细胞定位结果显示KLF12主要位于细胞核,此外,KLF12无跨膜结构域和信号肽,且在317—341、347—371及377—399氨基酸处存在3个典型的锌指结构域(ZnF;2H2)。组织表达谱结果显示KLF12在山羊心脏和脾脏的表达水平极显著高于其他组织(P<0.01)。此外,在山羊皮下前体脂肪细胞分化过程中KLF12表达水平在诱导分化60 h时达到峰值。于山羊皮下前体脂肪细胞中转染si-KLF12后利用油红O以及Bodipy染色法从形态学观察发现脂肪细胞脂滴聚积明显增加,同时qRT-PCR结果显示,脂肪分化标志基因脂蛋白脂肪酶(lipoprteinlipase,LPL)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的表达水平显著升高(P<0.05)而前脂肪细胞生长因子(preadipocyte factor 1,Pref-1)的表达水平极显著降低(P<0.01)。结合形态学观察结果以及脂肪分化标志基因表达水平变化情况,推测KLF12在皮下脂肪细胞分化过程中起到负调控作用。【结论】通过对山羊KLF12的分子生物学特征、组织细胞间的表达规律以及对山羊皮下脂肪细胞分化过程的潜在调控作用的研究表明,KLF12是山羊皮下脂肪细胞分化过程中的负调控因子,并且这种作用可能是通过调控LPL、PPARγ和Pref-1实现的,为进一步探究KLF12在调控脂肪细胞分化过程中的分子机制奠定了基础。
关键词: 山羊 ；KLF12 ；分子特征 ；干扰 ；皮下脂肪细胞
被引量
3
摘要： 目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型小鼠发病过程的作用及其作用机制。方法将60只小鼠按体质量分为野生小鼠空白对照组、NAFLD模型组、PPARδ基因敲除小鼠模型组和PPARδ激动剂组。采用实时定量PCR检测肝脏组织中PPARδmRNA水平,Western blot法检测肝脏组织中PPARδ蛋白水平。采用试剂盒检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)含量以及血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、球蛋白(G)水平和白蛋白(A)/球蛋白(A/G)比率;采用试剂盒检测血清中胰岛素和葡萄糖的含量;采用HE染色检测肝组织病变情况,油红O染色检测脂肪沉积情况,α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色结合天狼星红染色观察肝纤维化程度。结果NAFLD模型小鼠肝脏组织PPARδmRNA和蛋白高表达;当给予NAFLD模型小鼠PPARδ激动剂后,其PPARδmRNA和蛋白表达量显著升高。此外,PPARδ激动剂能够降低TC、TG、LDL、G和葡萄糖水平,升高HDL水平,降低ALT、AST水平,A/G比值增加;此外,还可减轻肝组织的病变;抑制α-SMA表达以及胶原纤维沉积。结论PPARδ激动剂可调节NAFLD小鼠的糖脂代谢,抑制肝细胞脂肪沉积和肝纤维化。
关键词: 非酒精性脂肪肝病(NAFLD) ；过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ) ；纤维化 ；糖代谢 ；小鼠
被引量
8
摘要： microRNA(miRNA)是一类广泛存在于真核生物中的内源性单链非编码小RNA分子,长度为21~22 nt,以特异的序列互补结合方式调控基因的表达。在经典的miRNA作用机制中,miRNA通常与靶基因3′UTR种子区序列完全或不完全互补配对,从而在转录后水平调控靶基因的表达。越来越多的报道证实,miRNA还可与靶基因5′UTR区、编码区及启动子区结合,进而参与复杂的基因调控过程。随着高通量测序技术和分子生物学实验技术的发展,大量miRNA被鉴定,其参与调控的生物学机制也被逐渐揭示。大量研究表明,miRNA能够参与动物生殖、生长发育、新陈代谢和疾病调控等生物学过程,对维持正常的生命活动具有重要意义。在猪的遗传改良工作中,对主要经济性状(繁殖、生长发育、胴体肉品质、抗病等)进行改良,选育优良品种,是未来养殖业发展的必然趋势。作者就miRNA生成和作用机制及近年来在猪生殖调控、肌肉发育、脂肪沉积和抵抗疾病感染等方面的研究进行综述,为系统了解miRNA在猪重要经济性状调控中的应用提供参考,并为深入开展相关遗传育种研究工作提供依据。
关键词: miRNA ；猪 ；生殖调控 ；肌肉发育 ；脂肪沉积 ；疾病抵抗
被引量
2
摘要： 胰岛素诱导基因1(INSIG1)是脂质合成与分解的重要调控基因,为了研究豫西脂尾羊INSIG1基因序列特征及其组织表达规律,试验采用Trizol法提取组织样RNA,RT-PCR扩增后克隆得到INSIG1基因序列并进行分析;采用实时荧光定量PCR法检测INSIG1 mRNA表达情况,并对结果进行比较分析。试验成功克隆了豫西脂尾羊INSIG1基因,其编码区长831 bp,编码276个氨基酸;基因的同源性分析表明,豫西脂尾羊INSIG1基因编码区与绵羊(XM_015095466.2)的亲缘关系相似性达99.64%,编码氨基酸序列的相似性达99.28%;蛋白理化性质分析表明,其分子质量为29.58 ku,理论等电点(pI)为9.07,属于稳定的碱性疏水性蛋白;跨膜结构、信号肽和亚细胞定位分析表明,该蛋白包含5个跨膜结构,没有信号肽,主要分布在细胞质;蛋白质三级结构预测发现,INSIG1蛋白结构含有6个α-螺旋和部分无规则卷曲;实时荧光定量PCR结果表明,INSIG1基因在肝脏中表达量最高,其次为肺脏、小肠和尾脂,肌肉中表达量最低。本研究完善了豫西脂尾羊的数据库,为INSIG1基因的功能及其在肉羊脂肪沉积过程中的作用机制提供了依据。
关键词: 豫西脂尾羊 ；INSIG1基因 ；克隆 ；组织表达
被引量
1
摘要： N^6-甲基腺嘌呤(N^6-methyladenosine,m6A)作为一种重要的表观遗传修饰方式,在干细胞命运决定、精子形成、肌肉发育、脂肪沉积及人类肿瘤发生中发挥重要作用。m^6A修饰最重要的作用是调控基因表达,它是细胞中基因表达调控的表观遗传学机制之一。文章综述了m^6A调控基因表达的分子机制及m^6A介导的生物学功能的研究进展,探讨了m^6A RNA甲基化的研究趋势和未来发展方向。
关键词: N6-甲基腺嘌呤(m^6A) ；RNA化学修饰 ；基因表达调控 ；生物学功能
被引量
8
摘要： 产肉量、产奶量和脂肪沉积等是衡量家畜生产性能和品质的重要指标,是与畜牧业的发展有着紧密联系的性状。CircRNAs是一种非编码RNA,参与调控家畜肌肉和脂肪的生成发育以及泌乳等过程。circRNAs作用机制不同、发挥作用的大小不同,其呈现在家畜上的表型也不尽相同。本文重点介绍了circRNAs在肌肉和脂肪发育过程以及泌乳这一生命活动中的功能和作用机制、不同circRNAs干扰和敲除技术的优缺点,并对circRNAs在畜牧产业发展及其敲除技术在动物中的应用做出展望,旨在为circRNAs在畜牧业中的研究和应用提供新的思路和理论基础。
关键词: circRNAs ；肌肉发育 ；脂肪沉积 ；circRNAs敲除
被引量
1
摘要： 目的研究圣草酚缓解非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用及可能机制。方法将16只C57BL/6J小鼠按体重随机分为对照组、NAFLD模型组和圣草酚低、高剂量组(50、100 mg/kg),每组4只。除对照组外,其余各组均使用高脂饲料诱导NAFLD模型。在预处理4周后,采取腹腔注射方式(0.01 mL/g)进行给药,每日1次,连续6周。测定小鼠体重、肝脏质量,观察小鼠肝组织病理损伤情况,测定小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和甘油三酯(TG)水平及肝组织中核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达。使用0.5 mmol/L油酸诱导HepG2细胞建立体外NAFLD模型,实验设置正常对照组、NAFLD模型组和圣草酚低、中、高浓度组(50、100、150μmol/L);给药组在诱导模型的同时加入圣草酚,培养24 h。观察细胞中脂质沉积情况,检测细胞中TG、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白[细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)]磷酸化水平和Nrf2、HO-1蛋白表达水平。结果体内实验中,与NAFLD模型组比较,圣草酚低、高剂量组小鼠体重、肝脏质量和血清中AST、ALT和TG的水平(圣草酚低剂量组小鼠血清AST水平除外)均显著降低(P<0.01),脂滴沉积形成的空泡数量显著减少,Nrf2、HO-1蛋白表达水平进一步升高(P<0.01)。体外实验中,与NAFLD模型组比较,圣草酚低、中、高浓度组细胞中脂质沉积减少(P<0.01),ROS、MDA、TG水平显著降低(P<0.05或P<0.01),ERK、JNK磷酸化水平均显著下调(P<0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。结论圣草酚可能通过抑制MAPK信号通路,进而激活Nrf2/HO-1信号通路来缓解NAFLD。
关键词: 圣草酚 ；非酒精性脂肪肝 ；丝裂原活化蛋白激酶 ；核转录因子红系2相关因子2 ；血红素加氧酶1
被引量
5
摘要： 研究地奥心血康(Di′ao Xinxuekang,DXXK)对小鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的治疗作用及作用机制。将65只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和造模组,采用高脂饲料造模16周,确认模型成功后,随机分为模型组、阿托伐他汀组(4 mg·kg^(-1)·d^(-1))以及DXXK高、中、低剂量组(200、60、20 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只,灌胃给药,连续8周。测定血脂、肝脏脂质以及血清中谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)水平;酶联免疫吸附测定法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;计算肝脏指数;HE染色和油红O染色分别观察肝脏病理和脂质蓄积情况;透射电镜观察肝脏超微结构;实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法分别检测核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因和蛋白的表达水平。结果显示,与正常组比较,模型组小鼠血脂和肝脏脂质代谢紊乱,血转氨酶升高,肝脏脂质沉积并出现明显的脂肪变性和炎症,提示成功复制小鼠NASH模型。与模型组比较,DXXK组血脂、肝脂质、ALT、AST、MDA和IL-1β、TNF-α水平降低,SOD、GSH-Px水平升高,肝细胞脂肪变性、气球样变和炎症有不同程度的减轻,Nrf2和HO-1基因和蛋白的表达水平显著上调。综上DXXK可显著改善小鼠NASH,与上调Nrf2/HO-1信号通路减轻氧化应激和炎症损伤有关。
关键词: 地奥心血康 ；非酒精性脂肪性肝炎 ；Nrf2/HO-1信号通路 ；氧化应激 ；炎症
被引量
17
摘要： 本试验旨在对巴马香猪CIDEa基因序列进行克隆,预测其蛋白结构和功能,并进行组织表达分析。根据NCBI已经公布猪的CIDEa基因序列(登录号:NM_001112696.2),利用Oligo 7.0软件设计引物,采用RT-PCR法扩增并克隆巴马香猪CIDEa基因序列,利用生物信息学软件分析其核苷酸序列及编码蛋白的疏水性、理化性质、跨膜结构域、二级结构、三级结构及互作蛋白,并采用实时荧光定量PCR方法检测CIDEa基因在巴马香猪皮下脂肪、肝脏、肾脏、肺脏、脾脏、背最长肌及心脏的表达规律。结果显示,试验成功获得巴马香猪CIDEa基因CDS区序列,全长660 bp,编码219个氨基酸,与GenBank中猪、牛、马、犬、人、猕猴和家鼠的核苷酸相似性分别为99.4%、84.7%、81.5%、80.9%、79.7%、78.9%和76.1%。与GenBank中野猪CIDEa基因核苷酸序列比对发现,发生4处碱基突变,其中A609G和T627C位点为同义突变,C173T(Pro→Leu)和C631T(Arg→Cys)位点为错义突变。巴马香猪CIDEa蛋白分子质量为24483.57 u,等电点为9.48,不稳定指数为52.86,属于不稳定蛋白;该蛋白中亮氨酸(Leu)含量最高(13.2%),色氨酸(Trp)含量最低(0.5%)。巴马香猪CIDEa蛋白为膜外亲水性蛋白,包含1个超家族结构域(CIDE-N)。二级结构预测发现,巴马香猪CIDEa蛋白包含α-螺旋(45.66%)、β-转角(5.94%)、延伸链(14.61%)和无规则卷曲(33.79%),三级结构预测结果与二级结构一致。蛋白互作分析结果表明,巴马香猪CIDEa蛋白与PPARG、PPARGC-1、COX8H、PRDM16、DIO2、TMEM26、ELOVL3、COX7A1、CIDEC、DFFB蛋白存在相互作用。实时荧光定量PCR结果显示,CIDEa基因在巴马香猪皮下脂肪中表达量最高,且显著高于其他组织(P<0.05),心脏中表达量最低。研究结果为进一步探讨CIDEa基因对巴马香猪脂肪沉积的调控机制提供理论依据。
关键词: 巴马香猪 ；CIDEa基因 ；克隆 ；表达
被引量
1
摘要： 目的:研究老鼠簕生物碱A(HBOA)对大鼠非酒精性脂肪肝的改善作用及其机制。方法:将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、水飞蓟宾胶囊组(阳性对照,26.25 mg/kg)和HBOA高、中、低剂量组(100、50、25 mg/kg),每组10只。除空白对照组喂养普通饲料外,其余各组大鼠连续喂养高脂饲料8周以复制非酒精性脂肪肝模型。于第9周起,空白对照组和模型组大鼠灌胃等体积0.6%羟甲基纤维素钠溶液,各给药组大鼠灌胃相应药物,每日1次,连续4周。观察各组大鼠一般情况并计算其体质量增量、脏器(肝、肾、脾)指数;检测肝组织中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(NEFA)含量,以及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;采用免疫组织化学法检测肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)蛋白的表达情况。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠体质量增量和肝指数均显著升高(P<0.01);肝内可见脂肪沉积现象,血清中SOD、GSH-Px活性均显著降低,MDA含量以及肝组织中AST、ALT、TC、TG、NEFA含量均显著升高,PPARα蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠体质量增加量和肝指数均显著降低(P<0.05或P<0.01),肝内脂肪沉积现象改善,血清中SOD、GSH-Px活性(除HBOA低剂量组外)均显著升高,MDA含量以及肝组织中AST、ALT、TC(除HBOA低剂量组外)、TG(除HBOA低剂量组外)、NEFA含量均显著降低,PPARα蛋白表达水平(除HBOA低剂量组外)均显著升高(P<0.05或P<0.01),且高剂量组上述部分指标显著优于中、低剂量组(P<0.05)。结论:老鼠簕生物碱A对高脂饮食致大鼠非酒精性脂肪肝有一定的改善作用,其机制可能与改善脂质代谢紊乱、抗氧化应激及上调PPARα表达有关。
关键词: 老鼠簕生物碱A ；大鼠 ；非酒精性脂肪肝 ；氧化应激 ；脂代谢紊乱
被引量
17
摘要： 试验旨在对广灵驴的激素敏感脂酶(hormone sensitive lipase,HSL)基因进行克隆和序列分析,并对HSL基因在广灵驴不同组织中的差异表达水平进行分析。使用RT-PCR法扩增并克隆广灵驴HSL基因CDS区部分序列,将序列拼接后得到HSL基因完整的CDS区全长序列,并对序列进行一系列生物信息学分析,通过实时荧光定量PCR检测HSL基因mRNA在广灵驴的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌和皮下脂肪7个组织中的表达情况。结果显示,广灵驴HSL基因完整的CDS区全长为2286 bp,共编码761个氨基酸,序列已提交到NCBI,登录号:MN231003。广灵驴HSL基因的核苷酸序列与马、羊驼、骆驼、猪、牛、山羊、小鼠、绵羊相应序列的同源性分别为99.6%、88.9%、88.6%、88.1%、86.9%、85.6%、80.8%、79.1%。系统进化树预测表明,广灵驴HSL基因与马的亲缘关系最近,与小鼠的亲缘关系最远。生物信息学分析发现,HSL蛋白的理论等电点为6.51,不稳定指数为56.83,亲水性的总平均值为-0.048,说明HSL是酸性不稳定的水溶性蛋白。蛋白保守域中存在N-末端结构域、α/β水解酶折叠结构域以及调节结构域。蛋白序列中共存在88个磷酸化修饰位点、25个糖基化修饰位点。蛋白中存在较强的疏水性区域,没有信号肽及跨膜区域。二级结构显示此蛋白是由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲构成的,分别占45.33%、11.70%、5.65%、37.32%。实时荧光定量PCR检测结果显示,HSL基因mRNA在广灵驴的7种组织中均有表达但存在差异,在皮下脂肪中表达量最高,在心脏中表达量最低,说明广灵驴HSL基因可能在体内脂肪沉积中发挥着非常重要的作用。该试验为进一步研究HSL蛋白功能及其在广灵驴脂肪沉积中代谢调控机制提供了理论基础。
关键词: 广灵驴 ；HSL基因 ；克隆 ；生物信息学分析 ；差异表达
被引量
1
摘要： 桑叶含粗蛋白质、维生素(维生素A、维生素C)、微量元素(铁、锰、铜、锌)等营养组分及黄酮类等多种活性成分,是理想的动物蛋白质资源。研究发现,在猪生产中,添加15%桑叶可能会影响育肥猪的生长,但添加适量的桑叶(6%左右)可延缓宰后肌肉pH降低,增强肌肉的抗氧化能力,同时,桑叶可提高肌肉脂肪沉积,对肌肉氨基酸和脂肪酸组成(增加不饱和脂肪酸的含量)均有影响,并改善肉的风味。在家禽生产中,添加桑叶能降低鸡肉的pH,且可通过改变肌肉脂肪酸组成改善肉品质。此外,桑叶的活性成分已被证实能提高细胞或小鼠的抗氧化能力,具有降血脂、血糖及动脉粥样硬化等作用。本文简述了桑叶的营养价值及其在猪、肉鸡、蛋鸡生产中的应用,旨在为其作为蛋白质资源进一步应用于畜禽生产提供一定参考。
关键词: 桑叶 ；猪 ；肉鸡 ；蛋鸡
被引量
34
摘要： 研究地锦草(Euphorbia humifusa Willd.)提取物对高脂饲料联合葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的改善作用及其干预的分子机制。将SPF级别C57BL/6小鼠雌雄对半随机分为正常对照组,NASH模型组,地锦草提取物低、高剂量组(n=10)。对照组给予正常饮水和食物。模型组和药物组在实验全程的14 d中均给予高脂饲料喂养,在此期间药物组进行灌胃给药,从第8 d开始给予持续饮用2%DSS水7 d。实验结束后杀小鼠,检测小鼠血清中甘油三酯(TG),谷丙转氨酶(ALT)含量;H&E染色法观察小鼠肝组织病理学变化;根据生物信息学及前期研究预测靶向调节TLR4的miRNA;采用RT-qPCR法检测小鼠肝组织中miR-106-5p、Toll样受体4(TLR4)、IL-6及TNF-α基因的相对表达情况;Western blot法分析小鼠肝脏中TLR4、IL-1β蛋白水平表达变化。与正常组相比,模型组小鼠TG、ALT均有升高。H&E染色结果显示肝脏出现明显脂肪变性和炎症反应。RT-qPCR结果显示TLR4和炎性因子(IL-6、TNF-α)表达明显升高,而靶向调节TLR4的miR-106-5p表达降低(P<0.05)。Western blot结果显示模型组肝脏中TLR4、IL-1β蛋白表达水平升高(P<0.05)。经药物干预后,小鼠TG、ALT均有所下降;肝组织中TLR4和炎性因子mRNA相对表达水平达降低,miR-106-5p表达上升;TLR4、IL-1β蛋白表达水平下降(P<0.05)。地锦草提取物可有效改善高脂饲料联合DSS诱导的NASH的炎症情况及脂肪沉积,其机制可能与调控miR-106-5p/TLR4信号通路有关。
关键词: 地锦草提取物 ；非酒精性脂肪性肝炎 ；Toll样受体4 ；miR-106-5p
被引量
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摘要： 视黄醇结合蛋白5(RBP5)是视黄醇结合蛋白家族新成员,在脂肪代谢中有重要作用。为探索RBP5基因在猪生长发育、脂肪代谢性状中的相关性,本实验选取180日龄藏猪和大约克夏猪,在mRNA水平上对藏猪、大约克夏猪的肝脏、肾脏和腹脂组织中的RBP5基因表达量进行了RT-qPCR检测,在DNA水平上对藏猪、大约克夏猪RBP5基因3'侧翼区、5'侧翼区和CDS区进行了单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位点筛选。2个品种猪肝脏、肾脏和腹脂中RBP5基因的mRNA相对表达量趋势基本一致,藏猪肝脏、肾脏中RBP5的表达量极显著低于大约克夏猪,腹脂中的表达量显著低于大约克夏猪,表明RBP5基因可能与脂肪沉积能力呈负相关;RBP5基因在3'侧翼区有'G^(274)A、'T^(278)C和'C^(346)T 3个突变位点,藏猪与大约克夏猪存在极显著差异。本研究中RBP5基因的'G^(274)A、'T^(278)C、'C^(346)T位点的多态性与mRNA表达差异性差异情况趋于一致,推测这3个位点可能是调控RBP5基因表达的功能位点,本研究结果为进一步研究RBP5基因在脂肪代谢中的调控机制提供参考价值。
关键词: 猪 ；RBP5基因 ；单核苷酸多态性 ；脂肪沉积
被引量
2
摘要： 目的研究黄芪总皂苷、当归挥发油对动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)ApoE^(-/-)小鼠脂质代谢的影响。方法将30只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、黄芪总皂苷组、当归挥发油组,每组10只,同时选用10只C57BL/6小鼠作为正常对照组。高脂饮食喂养建立动脉粥样硬化小鼠模型;采用试剂盒测定小鼠血清、肝脏总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-c)、高密度脂蛋白(HDL-c)、内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)、游离脂肪酸(FFA)、游离胆固醇(FC)含量;油红O染色检测肝脏、主动脉、主动脉窦脂质沉积;HE染色观察肝脏、主动脉病理改变;以ImageJ软件统计主动脉窦脂质沉积、主动脉厚度、肝脏脂滴空洞的面积及其占总面积的百分比;Western Blot法检测脂质代谢相关蛋白的表达变化。结果高脂喂养12周后,与正常对照组比较,模型组血清TC、TG、LDL-c、HDL-c含量升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪总皂苷、当归挥发油组血清TC、TG、LDL-c含量降低(P<0.05)。高脂喂养16周后,与正常对照组比较,模型组血清、肝脏TC、TG、LDL-c、HDL-c、ET-1、NO、FFA、FC含量升高(P<0.01);主动脉、主动脉窦脂质大量沉积;肝脏脂肪性变严重,脂滴空泡呈弥漫性分布,肝脏油红脂滴和脂滴空洞面积增多;主动脉管壁明显增厚(P<0.01),伴有大量炎症细胞浸润及胆固醇结晶沉积;肝脏ABCA1、SR-BI、APOAI、LXR-α(P<0.05)、SREBP2(P<0.01)蛋白表达降低。与模型组比较,黄芪总皂苷组、当归挥发油组血清TC、TG、LDL-c、ET-1、NO含量降低(P<0.05,P<0.01);肝脏TC、TG、FFA、FC含量降低(P<0.01);主动脉窦脂质沉积,肝脏油红脂滴及脂滴空洞面积减少(P<0.05,P<0.01),主动脉、肝脏病变相对减轻;当归挥发油组肝脏SR-BI、LXR-α(P<0.05)、ABCA1、SREBP2、APOAI(P<0.01)蛋白表达升高;黄芪总皂苷组肝脏ABCA1、SR-BI(P<0.05)、LXR-α、SREBP2、APOAI(P<0.01)蛋白表达升高。结论黄芪总皂苷、当归挥发油对动脉粥样硬化ApoE^(-/-)小鼠的脂质代谢都有一定的干预调节作用,其具体起效机制可能是通过调控ApoE^(-/-)小鼠脂质代谢相关蛋白的表达水平来实现的。
关键词: 黄芪总皂苷 ；当归挥发油 ；动脉粥样硬化 ；脂质代谢 ；小鼠
被引量
53
摘要： 前期通过高通量测序比较去势和非去势猪皮下脂肪长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的表达差异,筛选到一个表达差异极显著的novel lncRNA——PAANCR,本试验旨在研究PAANCR在猪育肥不同阶段不同组织中的表达规律及其与脂质生成的关系。选用10头健康长×大二元杂交仔猪,在90和210 d各随机选取3头屠宰取样,使用实时荧光定量PCR方法检测PAANCR的表达谱,同时在3T3-L1细胞中使用siRNA干扰PAANCR的同源体lncRNA B130024G19Rik,通过油红O染色和实时荧光定量PCR分析其对脂肪沉积的作用。结果发现,PAANCR具有明显的组织特异性和发育特异性,其在肺脏、子宫、脾脏、肾脏和脂肪组织中表达量较高,而在肝脏、小肠和脑中的表达量随着年龄增长而增加,在肌肉组织中几乎不表达。同时,通过siRNA介导的干扰能够显著抑制PAANCR同源体的表达量,PAANCR同源体表达量降低后,关键成脂分化和脂质沉积调控基因表达量也随之减少。提示PAANCR可以作为调控猪脂质生成的候选因子,对于深入研究lncRNA参与调控猪脂质生成的分子机制具有重要意义。
关键词: 猪 ；lncRNA ；组织表达谱 ；RNA干扰 ；脂质生成
被引量
2
摘要： 肥胖是指体内脂肪过多堆积或脂质异位沉积,与机体胰岛素抵抗等代谢紊乱密切相关。Calsyntenin 3β(CLSTN3β)是一种最近发现的哺乳动物脂肪细胞特异性表达蛋白,本文将从分子机制到临床关联展开介绍其在肥胖中的作用。机制研究发现小鼠CLSTN3β蛋白作为内质网膜蛋白,在产热型脂肪细胞中可促进脂滴的多腔特征并增加脂质利用,而在白色脂肪细胞中有利于脂滴成熟和脂质储存。临床关联研究揭示人类CLSTN3B基因在白色脂肪组织中的表达与肥胖及重要代谢指标呈显著相关性,同时其遗传变异可能发挥重要作用。这些发现将为改善肥胖相关代谢紊乱的干预策略提供新的思路和方向。
关键词: Calsyntenin 3β ；脂肪细胞 ；肥胖症 ；脂质代谢 ；遗传变异
摘要： 脂肪沉积能力是影响猪瘦肉率、屠宰率及肉品质的重要因素之一,而脂肪沉积的调控机制涉及复杂的生物学过程,其中非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)这类表观遗传调节因子扮演着关键角色。环状RNA(circular RNA,circRNA)是真核生物中存在的一种共价闭合的环状ncRNA,具有相对保守性和时空特异性,作用途径丰富多样,并广泛参与细胞增殖和凋亡、基因转录、癌症发生、神经系统疾病等各类生物学过程。近年来,越来越多的研究表明,circRNA对于猪皮下、肌内和内脏脂肪的沉积有着重要调控作用,但大部分研究还处于发现和鉴定的起步阶段,很多circRNA上、下游通路的具体机制尚不清晰。目前来看,circRNA主要通过miRNA的分子海绵机制来控制脂肪沉积相关基因的表达,影响脂质代谢,促进或抑制脂肪细胞的增殖分化,调控猪的脂肪沉积。作者在概述脂肪组织的分类与功能、调控脂肪沉积的关键基因、circRNA的生物发生及功能的基础上,系统回顾并总结了国内外circRNA调控猪脂肪沉积的研究进展,以期为进一步探究猪脂肪沉积的机制提供参考。
关键词: 猪 ；circRNA ；脂肪沉积
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