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摘要： 【目的】探讨小鼠脑实质注射视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)患者来源水通道蛋白4(AQP4)抗体(AQP4-IgG)造成的病理损伤,以及全身免疫状态对局部病灶的影响。【方法】于C57BL/6小鼠诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE),在发病高峰期脑实质局部注射AQP4-IgG阳性患者血清来源的IgG和健康人补体(hC)(EAE+AQP4-IgG+hC组,n=5),以单纯脑实质注射IgG和hC(AQP4-IgG+hC组,n=5)与EAE小鼠脑实质注射生理盐水(NS;EAE+NS组,n=5)为对照组。通过免疫荧光方法,比较3组病灶中AQP4、星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、少突胶质细胞髓鞘碱性蛋白(MBP),以及炎性细胞(T淋巴细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)浸润等指标的异常。【结果】AQP4-IgG联合hC注射可以造成小鼠局灶性脑实质病理损伤,包括星形胶质细胞损伤,脱髓鞘以及炎性细胞浸润。与单纯AQP4-IgG+hC组相比,EAE+AQP4-IgG+hC组脑实质AQP4缺失面积(P=0.008)及GFAP缺失面积(P=0.016)显著增大,MBP缺失面积呈增大趋势;CD3+T细胞浸润的血管套数量、中性粒细胞浸润的血管套数量以及巨噬细胞浸润面积改变未达统计学差异。EAE+NS组亦可见注射周边星形胶质细胞增生,但无AQP4、GFAP与MBP缺失,炎性细胞主要分布在注射针道周围。【结论】小鼠脑实质注射AQP4-IgG联合hC可致显著局灶性病理损伤,而诱导EAE造成的全身免疫激活状态可加重该损伤;EAE联合AQP4-IgG局部注射能更好模拟NMOSD临床发病机制。
关键词: 视神经脊髓炎谱系疾病 ；水通道蛋白4抗体 ；动物模型 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎
被引量
2
摘要： 目的探讨苦参素通过酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢小胶质细胞向M1型极化的抑制作用及影响机制。方法50只小鼠分为正常对照组、EAE组、EAE+苦参素200组、EAE+苦参素400组及EAE+醋酸泼尼松组,各10只。除正常对照组外均建立EAE模型,于发病日开始给药,EAE+苦参素200组、EAE+苦参素400组腹腔注射200、400 mg·kg^(-1)苦参素注射液,EAE组和正常对照组腹腔注射生理盐水,EAE+醋酸泼尼松组灌胃7 mg·kg^(-1)醋酸泼尼松溶液,1次·d^(-1),连续14 d。给药期间进行神经功能评分,采用苏木精-伊红染色及劳克坚牢蓝染色检测腰髓炎性细胞浸润、髓鞘脱失情况,流式细胞术分析M1型、M2型小胶质细胞占比,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、精氨酸酶1(Arg-1)、白细胞介素(IL)-4、IL-10 mRNA表达量,蛋白质印迹法测JAK2、p-STAT3蛋白表达量。结果与EAE组比较,EAE+苦参素200组给药5~14 d、EAE+苦参素400组及EAE+醋酸泼尼松组给药3~14 d神经功能评分均较低(P<0.05);与EAE+苦参素200组比较,EAE+苦参素400组及EAE+醋酸泼尼松组给药5~14 d神经功能评分均较低(P<0.05)。与EAE组比较,EAE+苦参素200组、400组,EAE+醋酸泼尼松组炎症浸润评分、髓鞘脱失评分、M1型小胶质细胞占比、iNOS、IFN-γ、TNF-αmRNA相对表达量及JAK2、p-STAT3蛋白相对表达量均降低,但仍高于正常对照组(P<0.05),且EAE+苦参素400组、EAE+醋酸泼尼松组低于EAE+苦参素200组(P<0.05);与正常对照组和EAE组比较,EAE+苦参素200组、400组,EAE+醋酸泼尼松组M2型小胶质细胞占比及Arg-1、IL-4、IL-10 mRNA相对表达量均升高(P<0.05),且EAE+苦参素400组和EAE+醋酸泼尼松组高于EAE+苦参素200组(P<0.05)。结论苦参素可有效改善EAE小鼠脊髓炎症及髓鞘脱失情况,抑制中枢小胶质细胞向M1型极化,且与给药剂量相关,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。
关键词: 实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；苦参素 ；小胶质细胞 ；酪氨酸激酶2 ；信号转导子和转录激活子3
被引量
11
摘要： 目的观察黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠轴突生长抑制因子A(Nogo-A)及其下游通路蛋白Rho相关卷曲螺旋激酶2(ROCK2)的影响,探究其对轴突修复和再生的促进作用机制。方法采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)皮下注射C57BL/6雌性小鼠制备EAE模型;将小鼠随机分为EAE组、AS-Ⅳ组,每组8只。于免疫后第3天开始,EAE组腹腔注射PBS;AS-Ⅳ组腹腔注射AS-Ⅳ30 mg/(kg.d),1次/d,0.2 ml/次,连续给药25 d。免疫后第28天,取小鼠脊髓,采用免疫荧光法检测脊髓中生长相关蛋白43(GAP-43)、神经元核心抗原(NeuN)、微管相关蛋白2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙结合衔接分子1(Iba1)的表达水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测GAP-43、Nogo-A、Nogo受体(NgR)基因mRNA表达水平;Western blotting检测GAP-43、Nogo-A、ROCK2、磷酸化肌球蛋白磷酸酶(p-MYPT1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达水平。结果与EAE组比较,AS-Ⅳ组小鼠脊髓中星形胶质细胞GFAP和小胶质细胞Iba1的阳性表达率均明显下降(P<0.01,P<0.001);NeuN和MAP-2阳性表达率均增高(P<0.001,P<0.05);抗凋亡因子Bcl-2表达水平增高(P<0.001),促凋亡因子Bax表达水平降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05);GAP-43蛋白表达水平增高(P<0.05);神经再生抑制因子NgR和ROCK2基因mRNA表达水平均下调(P<0.001,P<0.05);Nogo-A、ROCK2和p-MYPT1蛋白表达水平均降低(P<0.05或P<0.001)。结论AS-Ⅳ可通过抑制Nogo-A及其下游通路分子ROCK2,抑制EAE小鼠小胶质细胞和星形胶质细胞的激活及神经元凋亡,进而促进GAP-43、NeuN及MAP-2的表达,减轻神经元损伤,促进轴突修复和再生。
关键词: 自身免疫性脑脊髓炎 ；黄芪甲苷 ；轴突生长抑制因子 ；凋亡 ；轴突再生
被引量
3
摘要： 目的探讨黄芩素(BAI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的神经保护作用和其对中枢神经系统(CNS)脊髓组织中自噬水平和小胶质细胞(MG)激活、极化的影响。方法将50只SPF级雌性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为正常对照组、EAE模型组及BAI低、中、高剂量组,每组10只。EAE模型组及BAI各剂量组诱导建立EAE模型,正常对照组不做干预。自建模日起,BAI低、中、高剂量组每日分别给予BAI 75、150、300 mg/kg灌胃,其余两组给予等体积等渗盐水灌胃,连续14 d。观察小鼠的神经功能缺损和脊髓组织炎性浸润情况。采用免疫印迹法检测小鼠脊髓组织中自噬相关蛋白:哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及核孔糖蛋白62(p62)的表达情况。免疫荧光染色法检测小鼠脊髓组织离子钙接头蛋白1(Iba-1)阳性MG的活化情况和形态变化。结果正常对照组小鼠未见发病,其余各组小鼠均有发病,但未出现死亡。与EAE模型组比较,BAI各剂量组小鼠发病潜伏期延长,进展期缩短,神经功能缺损评分降低(P<0.05),脊髓组织炎症浸润程度减轻,mTOR蛋白表达增加,p-mTOR蛋白表达减少,自噬标志物LC3II/LC3I灰度比值增大,p62蛋白表达减少(P<0.05),随着BAI干预剂量增大,效果越明显。并且,显微镜下观察正常对照组荧光图中可见少许绿染的Iba-1阳性MG细胞散在分布,其胞体较小可见分枝状轴突,与正常对照组Iba-1的IOD值(332.99±64.07)及Iba-1阳性MG计数(4.33±0.58)相比,EAE模型组Iba-1的IOD值(8725.87±817.70)明显升高(P<0.05),Iba-1阳性MG计数(32.33±2.52)明显增多(P<0.05),细胞形态表现为胞体较大,轴突缩短。与EAE模型组相比,BAI低、中、高各剂量组Iba-1的IOD值(5773.02±830.07、2307.99±255.90、1304.43±229.51)逐渐降低,MG计数(25.33±3.51、14.33±1.53、8.67±1.10)逐渐减少(均P<0.05),细胞胞体变小,胞突伸长。结论BAI对EAE小鼠发病具有神经保护作用,且呈剂量依赖性,其可能的机制为BAI可通过抑制mTOR通道蛋白激活,诱导自噬增强,抑制MG过度活化,促进MG向M2型极化,从而抑制炎症反应,对EAE小鼠产生神经保护作用。
关键词: 黄芩素 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；自噬 ；小胶质细胞
被引量
3
摘要： 目的:观察补肾益髓胶囊对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠视神经促炎性小胶质细胞的影响,探讨补肾益髓胶囊治疗视神经炎性损伤的作用机制。方法:C57BL/6j小鼠随机分为正常组、模型对照组、激素组和补肾益髓胶囊组。EAE使用C57BL/6j小鼠皮下脊柱旁4点注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)_(35-55)抗原乳剂诱导产生。免疫当天,补肾益髓胶囊组予以3.02 g/kg灌胃,激素组于免疫第15天起予以醋酸泼尼松6 mg/kg灌胃。于免疫第17天及35天取小鼠视神经,免疫荧光观察EAE小鼠视神经少突胶质细胞凋亡及促炎性小胶质细胞情况;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测EAE小鼠视神经诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组具有显著的神经功能缺损,视神经部位可以发现大量的少突胶质细胞的凋亡(CC1^(+)Caspase3^(+)),并且存在大量的iNOS^(+)小胶质细胞(iNOS^(+)IBA1^(+))。与模型对照组比较,补肾益髓胶囊组显著缓解EAE小鼠临床神经功能残疾总负荷(P<0.05),减轻视神经少突胶质细胞的凋亡(P<0.05),减少促炎性iNOS^(+)小胶质细胞在视神经中的表达(P<0.01),显著减少视神经部位iNOS基因表达(P<0.05)。结论:补肾益髓胶囊能够显著缓解EAE小鼠视神经部位促炎性小胶质细胞的聚集,减轻少突胶质细胞的凋亡,对EAE小鼠视神经具有一定的保护作用。
关键词: 视神经炎 ；少突胶质细胞 ；补肾益髓胶囊 ；小胶质细胞 ；诱导性一氧化氮合酶
被引量
7
摘要： 目的:从P2Y1受体探讨益肾达络饮治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的机制。方法:60只C57BL/6J雌性小鼠随机分成6组:空白组、模型组、P2Y1受体拮抗剂(MRS2179)组、中药组、MRS2179+中药组、激素组。除空白组外均制作EAE模型,每日记录各组小鼠的体质量与神经功能评分。造模第4天,MRS2179组与MRS2179+中药组腹腔注射MRS2179,造模第8天开始给予相应药物连续干预14 d取材。HE染色观察各组小鼠脑与脊髓的病理改变;ELISA测定各组小鼠血清中白介素(IL)-6、IL-17、IL-23、γ干扰素(IFN-γ)的浓度;Western Blot检测各组小鼠脑及脊髓中P2Y1、细胞外信号调节激酶(ERK)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)蛋白的表达变化。结果:益肾达络饮可以减缓EAE小鼠体质量下降,降低神经功能评分,缓解脑与脊髓中的炎性浸润。与空白组比较,模型组血清中IL-6、IL-17、IL-23、IFN-γ浓度显著升高,脑与脊髓中P2Y1、ERK、GFAP、PKA表达显著升高,GDNF、CREB、PKC表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。中药组明显逆转上述变化,MRS2179+中药组进一步逆转上述变化。结论:益肾达络饮的作用机制可能是通过影响中枢神经系统中的P2Y1受体活性,抑制神经炎症反应,抑制GFAP分泌,影响PKA/PKC平衡,促进GDNF的生成,从而抑制星形胶质细胞过度活化、缓解炎症、促进神经修复,缓解EAE的疾病状态。
关键词: 多发性硬化 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；P2Y1 ；益肾达络饮 ；MRS2179 ；神经胶质细胞源性神经营养因子 ；胶质纤维酸性蛋白 ；蛋白激酶A ；蛋白激酶C
被引量
2
摘要： 目的探讨黄芩素(BAI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的防治作用及其对中枢神经系统小胶质细胞(MG)极化和炎性因子的影响。方法将50只雌性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为空白对照组,EAE模型组及BAI低、中、高剂量组,每组10只。空白对照组不做处理,其余各组建立EAE模型。BAI低、中、高剂量组每日分别给予BAI 75、150、300 mg/kg灌胃,空白对照组及EAE模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续14 d。观察小鼠的神经功能缺损和脊髓组织炎性脱髓鞘情况。采用免疫荧光双重染色法检测小鼠脊髓组织离子钙接头蛋白1(Iba-1)阳性MG中M1型MG标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、M2型MG标志物精氨酸酶1(Arg1)的表达情况及分歧指数(RI)变化,实时荧光定量PCR法检测小鼠脊髓组织中iNOS、Arg1及炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)mRNA的表达情况。结果空白对照组小鼠未见发病,其余各组均不同程度发病。与EAE模型组比较,BAI各剂量组小鼠发病潜伏期及达高峰期时间延长,神经功能障碍评分降低(均P<0.05),脊髓组织脱髓鞘程度减轻(均P<0.05),Iba-1阳性MG中iNOS表达降低,Arg1表达升高,RI值减小(均P<0.05),MG的形态倾向于M2型极化,脊髓组织中iNOS、TNF-αmRNA表达降低,Arg1、IL-10 mRNA表达升高(均P<0.05),且BAI剂量越大,变化越明显。结论BAI对EAE小鼠发病具有防治作用,且呈剂量依赖性,其机制可能与纠正M1/M2型MG失衡及调节炎性因子TNF-α、IL-10表达有关。
关键词: 黄芩 ；脑脊髓炎,自身免疫性,实验性 ；小神经胶质细胞 ；脱髓鞘疾病 ；一氧化氮合酶 ；精氨酸酶 ；黄芩素
被引量
7
摘要： 目的探讨鞘氨醇激酶-2(sphingosine kinases 2,SphK2)对活化的星形胶质细胞功能的调控及对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠疾病进程的影响。方法白细胞介素-17(interleukin 17,IL-17)体外诱导C57BL/6野生型(wild type,WT)小鼠及sphk2基因敲除(sphk2-/-)小鼠原代星形胶质细胞活化,real-time PCR测定炎性因子及趋化因子的mRNA转录水平变化,Western blot和免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达及信号转导与转录激活因子3的磷酸化(p-STAT3)水平。髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽体内诱导小鼠EAE模型,Western blot检测脊髓组织中GFAP和p-STAT3的蛋白质表达水平;real-time PCR检测脊髓组织中炎性因子的mRNA转录水平;苏木素-伊红(HE)和劳克坚牢蓝染色(Luxol fast blue,LFB)观察脊髓组织内炎症细胞浸润及髓鞘脱失变化。结果与WT组相比较,sphk2-/-组IL-17体外刺激小鼠原代星形胶质细胞后,p-STAT3水平显著下降;单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)及IL-6等趋化因子及炎性因子的mRNA转录水平明显降低。sphk2-/-EAE小鼠与WT EAE小鼠相比较,上述指标体内变化与体外结果相似,且sphk2-/-EAE小鼠脊髓组织炎性细胞浸润与髓鞘脱失显著减轻,但体内外GFAP的表达差异无统计学意义。结论SphK2可能通过STAT3分子信号调控反应性星形胶质细胞的功能,从而调节炎性因子及趋化因子的产生,参与EAE的病变进程。
关键词: 鞘氨醇激酶-2 ；星形胶质细胞 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；胶质纤维酸性蛋白 ；信号转导与转录激活因子3 ；炎性因子
被引量
3
摘要： 目的探讨甘露特钠对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠发病的治疗作用及对肠道菌群、小胶质细胞极化的影响。方法将50只雌性C57BL/6小鼠用随机数字表法分为对照组、EAE模型组及甘露特钠低、中、高剂量组,每组各10只。EAE模型组、甘露特钠各剂量组采用MOG35-55多肽皮下多点注射制备EAE模型。甘露特钠低、中、高剂量组从造模次日起分别用甘露特钠40、80、160 mg/kg,2次/d,灌胃进行干预,持续至小鼠处死。观察各组小鼠发病情况、脊髓组织炎症细胞浸润及脱髓鞘情况。收集小鼠粪便,通过16S rRNA测序进行肠道菌群检测,免疫荧光染色检测脊髓组织中小胶质细胞激活指标Iba-1蛋白表达情况,Western印迹法和免疫荧光染色法检测脊髓组织中小胶质细胞M1型标志物iNOS、CD16和M2型标志物Arg1、CD206的蛋白表达水平。结果对照组小鼠均未发病,其余各组小鼠均有不同程度发病,表现为尾部下垂、步态不稳、后肢无力等。与EAE模型组比较,甘露特钠各剂量组小鼠发病潜伏期延长、高峰期延迟、高峰期神经功能障碍评分降低[(3.6±0.6)分比(3.0±0.6)分、(2.8±0.5)分、(1.8±0.6)分,均P<0.05],且干预剂量越大症状越轻,组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组小鼠脊髓组织无炎性细胞浸润及脱髓鞘变化;EAE模型组发病高峰期脊髓组织炎性细胞浸润及脱髓鞘变化明显;与EAE模型组比较,甘露特钠各剂量组发病高峰期脊髓组织炎症细胞浸润及脱髓鞘变化减轻。与对照组比较,EAE模型组拟杆菌门相对丰度较低,厚壁菌门相对丰度较高;与EAE模型组比较,甘露特钠各剂量组拟杆菌门相对丰度较高,厚壁菌门相对丰度较低,拟杆菌门与厚壁菌门比值增加(0.20±0.05比0.37±0.02、0.61±0.03、0.91±0.08,均P<0.01),且干预剂量越大变化越明显,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,EAE模型组Iba-1、CD16、iNOS水平增加,Arg-1、CD206水平降低;与EAE模型组比较,甘露特钠各剂量组Iba-1、CD16、iNOS水平降低,Arg-1、CD206水平增加(均P<0.01),且剂量越大变化越明显,组间两两比较各指标差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论甘露特钠对EAE具有治疗作用,且呈剂量依赖性;其作用机制可能与改善肠道微生态、调控小胶质细胞极化有关。
关键词: 脑脊髓炎,自身免疫性,实验性 ；肠道菌群 ；甘露特钠 ；小胶质细胞
摘要： 背景:小胶质细胞M1/M2表型失衡在许多神经变性疾病及自身免疫性疾病进展中发挥着重要作用,调节小胶质细胞表型转化是免疫治疗的靶点。目的:探讨柚皮苷防治实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的疗效,以及其通过STAT1通路和自噬调控小胶质细胞极化的作用。方法:将50只C57BL/6雌性小鼠随机分成5组,即空白对照组、模型组和柚皮苷低、中、高剂量组,每组10只,后4组制备实验性自身免疫性脑脊髓炎模型。柚皮苷低、中、高剂量组分别给予10,20,40 mg/(kg·d)柚皮苷腹腔注射,空白对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水,连续10 d。观察小鼠发病情况,利用苏木精-伊红染色及劳克坚牢蓝染色行脊髓组织病理观察,免疫荧光法观察脊髓组织中小胶质细胞激活标志物Iba-1及自噬标志物LC3表达,Western blot法检测脊髓组织中STAT1、Beclin1、p62、LC3、CD16、CD206、诱导型一氧化氮合酶、Arg-1蛋白水平,实时荧光定量PCR法检测脊髓组织中STAT1 mRNA水平。结果与结论:①空白对照组小鼠均未发病,其余组小鼠均有不同程度发病,与模型组比较,柚皮苷各剂量组小鼠发病潜伏期延长(P<0.01)、高峰期推迟(P<0.01或P<0.05)、高峰期神经功能障碍评分降低(P<0.01或P<0.05),且柚皮苷剂量越大,小鼠症状越轻;②在发病高峰期,模型组脊髓组织炎症细胞浸润及脱髓鞘情况较空白对照组明显,脊髓组织炎症评分及脱髓鞘评分增加(P<0.01);而柚皮苷各剂量组脊髓组织炎症细胞浸润及脱髓鞘情况较模型组减轻,脊髓组织炎症评分及脱髓鞘评分下降(P<0.01),柚皮苷剂量越大,效果越明显(P<0.01或P<0.05);③模型组小鼠脊髓组织中Iba-1及LC3阳性表达区域平均吸光度值增加(P<0.01),而柚皮苷各剂量组中Iba-1及LC3阳性表达区域平均吸光度值减少(P<0.01或P<0.05),且柚皮苷剂量越大,减少越明显(P<0.01或P<0.05);④与空白对照组比较,模型组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,LC3、Beclin1、STAT1及mRNA、CD16、诱导型一氧化氮合酶水平增加(P<0.01或P<0.05),p62、Arg-1、CD206水平降低(P<0.01或P<0.05);与模型组比较,柚皮苷各剂量组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下降,LC3、Beclin1、STAT1及mRNA、CD16、诱导型一氧化氮合酶水平降低(P<0.01或P<0.05),p62、Arg-1、CD206水平增加(P<0.01或P<0.05),且剂量越大效果越明显(P<0.01或P<0.05);⑤提示柚皮苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠发病具有防治作用,且呈剂量依赖性;其作用可能是通过下调STAT1通路和抑制自噬调控实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠小胶质细胞极化、纠正M1/M2型小胶质细胞失衡有关。
关键词: 柚皮苷 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；小胶质细胞 ；STAT1 ；自噬 ；小鼠
被引量
3
摘要： 目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNA)Gm13568对A1型星形胶质细胞活化及实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠疾病进程的影响与分子机制。方法构建特异性靶向星形胶质细胞的lncRNA Gm13568沉默与对照的重组慢病毒载体,分别命名为LV-Inhibit-Gm13568和LV-ctrl,并包装病毒。1×107 TU病毒悬液静脉注射入C57BL/6小鼠体内7 d后,髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)多肽诱导EAE模型。实验分为PBS组、EAE组、LV-ctrl+EAE组和LV-Inhibit-Gm13568+EAE组,采用双盲法每日对小鼠进行神经功能评分。EAE小鼠诱导后23 d,取各组小鼠脊髓组织,利用real-time PCR测定A1型星形胶质细胞活化指标Serping 1、C3、Srgn和H2-T23的mRNA转录水平,同时测定IL-6、TNF-α、巨噬细胞趋化蛋白-1(macrophage chemotactic protein-1,MCP-1)和干扰素诱导蛋白-10(interferon-inducible protein-10,IP-10)的生成变化;Western blot检测脊髓组织胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和Notch1的表达及信号转导与转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的磷酸化水平(phosphorylated STAT3,p-STAT3);免疫荧光法检测各组脊髓组织中Notch1活化后的胞内段蛋白(Notch1 intracellular domain,NICD)与GFAP的共表达;HE和劳克坚牢蓝染色(Luxol fast blue,LFB)分别观察脊髓组织内炎症细胞浸润及髓鞘脱失变化。结果与PBS组比较,EAE组和LV-ctrl+EAE组小鼠A1型星形胶质细胞活化增生,Notch1的表达显著上调。沉默内源性lncRNA Gm13568后,与LV-ctrl+EAE组比较,小鼠的神经功能评分在抗原诱导后23 d从平均3.5分下降至1分以下,临床症状缓解,A1型星形胶质细胞活化降低,同时炎性因子及趋化因子生成减少;Notch1、GFAP、NICD的蛋白质表达水平和STAT3的磷酸化水平显著降低;小鼠脊髓组织炎性细胞浸润与髓鞘脱失显著减轻。结论LncRNA Gm13568可能通过调控Notch1/STAT3信号调控A1型星形胶质细胞的活化,从而调节炎性因子及趋化因子的产生,参与EAE的病变进程。
关键词: LncRNA Gm13568 ；A1型星形胶质细胞 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；Notch1 ；炎性因子
摘要： 目的:探究miR-138/OX40L分子轴对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)鼠的影响。方法:建立EAE小鼠模型并设为EAE组,未作处理的小鼠为对照组;流式细胞术分选小胶质细胞并检测T细胞凋亡情况;免疫荧光染色检测活化小胶质细胞内TLR3、TLR4和FIZZ-1表达;RT-qPCR检测miR-138和OX40L mRNA表达水平;Western blot检测OX40L蛋白水平;MTT法检测T细胞增殖能力;双荧光素酶报告基因实验用于验证miR-138和OX40L的靶向关系。结果:与对照组相比,EAE组小鼠出现四肢瘫痪、大小便失禁、体重减轻等症状,同时神经功能评分降低。EAE组小鼠活化小胶质细胞比例显著高于对照组小鼠,且TLR3、TLR4和FIZZ-1表达水平增加。miR-138在EAE小鼠脑组织和分离的小胶质细胞中表达下调(P<0.05),在小胶质细胞中过表达miR-138导致与其共培养的T细胞增殖能力下降(P<0.05),凋亡率增加(P<0.01)。miR-138能靶向结合OX40L mRNA从而调节OX40L蛋白表达。在小胶质细胞中过表达OX40L能促进T细胞的活性(P<0.05)并降低其凋亡(P<0.001);但同时过表达miR-138和OX40L部分消除了OX40L对T细胞活性的促进作用。结论:EAE小鼠的小胶质细胞中miR-138通过调节OX40L的表达影响T细胞活性,可能对EAE的治疗产生一定的效果。
关键词: 实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；小胶质细胞 ；T细胞 ；miR-138 ；OX40L
被引量
2
摘要： 目的:探讨丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶25(serine/threonine protein kinase 25,STK25)对星形胶质细胞活化及实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠疾病进程的影响。方法:髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)诱导小鼠EAE模型,Real-time PCR、Western blot和ELISA法分别检测脊髓组织中STK25、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)与干扰素诱导蛋白-10(interferon-inducible protein-10,IP-10)的转录水平与蛋白表达;免疫荧光双标法检测STK25在脊髓星形胶质细胞中的表达。干扰素(interferon,IFN)-γ体外刺激小鼠原代星形胶质细胞后不同时间,上述方法检测STK25的蛋白表达及细胞因子的转录水平变化。将特异性靶向星形胶质细胞的对照及STK25敲减的重组慢病毒悬液感染星形胶质细胞后,IFN-γ刺激,测定TNF-α与IP-10的转录水平;同时给予小鼠病毒悬液7 d后,诱导EAE模型,Western blot检测脊髓组织STK25的表达;Real-time PCR检测脊髓炎性因子与趋化因子转录水平。HE和劳克坚牢蓝染色(Luxol fast blue,LFB)观察脊髓炎症细胞浸润与髓鞘损伤。结果:与对照组相比,EAE组小鼠STK25的表达水平显著降低,炎性因子与趋化因子的转录与分泌水平明显升高;同时脊髓组织星形胶质细胞STK25的表达明显下降。IFN-γ体外刺激星形胶质细胞STK25表达降低时,炎性因子生成增加;进一步敲减星形胶质细胞内源性的STK25基因,体外星形胶质细胞及体内EAE小鼠脊髓中炎性因子与趋化因子的生成显著升高,同时加剧了EAE小鼠脊髓炎症细胞浸润与髓鞘脱失。结论:STK25可能通过影响星形胶质细胞的活化,调节炎性与趋化因子的产生,从而参与EAE小鼠的病变进程。
关键词: 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶25 ；星形胶质细胞 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；炎性因子
摘要： 目的:探讨雌激素受体β(ERβ)激动剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的保护作用及机制。方法:将90只小鼠随机分成对照组、模型组(建立实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型)和二磷酸吡啶核苷酸(DPN)组(建立实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型+DPN治疗),每组30只。三周后,对小鼠进行神经功能缺损评分,采用苏木素-伊红(HE)染色对腰髓进行组织学观察,采用免疫组织化学法测定小胶质细胞活化标志物脑组织离子钙接头分子(Iba-1)和一氧化氮合成酶(iNOS)蛋白表达水平,采用比色法测定脑组织丙二醛(MDA)含量。结果:对照组小鼠未出现神经功能缺损临床症状;模型组30只小鼠均出现临床症状;DPN组30只小鼠18只出现临床症状;DPN组小鼠临床症状评分明显低于模型组(P<0.05)。对照组小鼠腰髓HE染色未见炎症细胞浸润;模型组小鼠腰髓实质内见大量炎性细胞浸润;DPN组小鼠见少量炎性细胞浸润。DPN组小鼠腰髓炎症反应评分低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组和DPN组小鼠脑组织Iba-1阳性细胞数、iNOS阳性细胞数、MDA含量升高(P<0.05),与模型组比较,DPN组小鼠脑组织Iba-1阳性细胞数、iNOS阳性细胞数、MDA含量减少(P<0.05)。脑组织中Iba-1蛋白阳性细胞数与iNOS蛋白阳性细胞数呈正相关(r=0.623,P<0.001)。结论:ERβ激动剂可减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经功能损伤和脑组织炎症反应,其机制可能与抑制小胶质细胞活化和减轻氧化应激有关。
关键词: 雌激素受体β激动剂 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；小鼠 ；小胶质细胞 ；氧化应激
被引量
1
摘要： 目的:观察补肾益髓胶囊对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠视网膜大胶质细胞(Müller细胞及星形胶质细胞)活化的影响,探讨补肾益髓胶囊对视网膜视神经节细胞(RGC)的保护作用机制。方法:将80只C57BL/6j小鼠随机分为正常组、模型组、芬戈莫德组与补肾益髓胶囊组,每组20只,皮下注射MOG35-55抗原乳剂诱导产生EAE。免疫当天,补肾益髓胶囊组予以3.02 g/kg灌胃,芬戈莫德组于免疫第15天给予0.3 mg/kg灌胃。于免疫第17天及35天取小鼠视网膜及眼球,免疫荧光观察EAE小鼠视网膜大胶质细胞活化及RGC凋亡情况,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测EAE小鼠视网膜神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及波形蛋白(Vimentin)基因的表达水平。结果:与模型组比较,补肾益髓胶囊能够显著减少EAE小鼠神经功能缺损(P<0.01),减少视网膜RGC细胞的凋亡(P<0.05,P<0.01);补肾益髓胶囊还能够显著缓解EAE小鼠第17、35天视网膜GFAP与Vimentin蛋白与基因的表达(P<0.05,P<0.01),减轻大胶质细胞活化(P<0.01)。结论:补肾益髓胶囊能够显著缓解EAE小鼠视网膜部位大胶质细胞的活化,减少视网膜RGC的凋亡,对EAE小鼠视网膜具有神经保护作用。
关键词: 视神经炎 ；补肾益髓胶囊 ；星形胶质细胞 ；Müller细胞 ；视神经节细胞
被引量
2
摘要： 目的:探讨人参皂苷Rb1改善实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠神经炎症的作用及机制。方法:C57BL/6雌性小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、人参皂苷Rb1 20、40 mg/kg组、芬戈莫德1 mg/kg组。采用髓鞘少突胶质糖蛋白(MOG35-55)诱导小鼠建立EAE模型。人参皂苷Rb1 20、40 mg/kg组于造模前2 d每天灌胃Rb1,正常对照组和模型对照组每天灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续23 d。造模后每天记录小鼠的神经功能学评分;HE和劳克坚牢蓝(LFB)染色评估脊髓组织病理改变;免疫荧光染色观察GFAP、IBA1表达;实时定量逆转录聚合酶链反应法检测Il1b、Il6、Inos、Cox2、Tnfa mRNA表达;蛋白免疫印迹检测脊髓组织GFAP、IBA1、p-NF-κB、NF-κB、p-IκB、IκB、p-ERK、ERK、p-JNK、JNK蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组小鼠神经功能学评分显著升高(P<0.01),脊髓炎症细胞浸润显著,伴随大面积髓鞘脱失(P<0.01),GFAP、IBA1表达增多(P<0.01),Il1b、Il6、Inos、Cox2、Tnfa mRNA表达上调,p-NF-κB、p-IκB、p-ERK、p-JNK、GFAP、IBA1表达上调(P<0.01);人参皂苷Rb1给药可显著逆转上述改变(P<0.05或P<0.01)。结论:Rb1可降低中枢神经系统星形胶质细胞和小胶质细胞介导的神经炎症反应,减少炎症因子的表达,减轻髓鞘组织病理损伤,改善小鼠EAE的症状,这可能与抑制ERK/JNK/NF-κB信号通路的激活有关。
关键词: 人参皂苷Rb1 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；炎症因子 ；神经炎症 ；脱髓鞘
被引量
3
摘要： 目的:研究熊胆粉对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的抑制作用,并从减轻神经炎症反应,改善神经损伤和髓鞘缺失角度探讨其作用机制。方法:将C57BL/6雌性小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、熊胆粉0.05、0.1 g/kg组、甲泼尼龙0.02 g/kg组,建立多发性硬化症(Multiple sclerosis,MS)的经典动物模型——EAE模型,熊胆粉各组于造模前2 d开始连续给药23 d,甲泼尼龙0.02 g/kg组于造模第13 d开始连续腹腔注射给药3 d。造模后,每天对小鼠进行神经功能学评分,评价小鼠神经行为改变;HE和LFB染色法检测小鼠脊髓组织病理变化;免疫荧光染色法检测小鼠大脑皮质中星形胶质细胞和小胶质细胞的激活;RT-qPCR法检测炎症相关基因的表达;Western blot法检测炎症相关蛋白和NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠神经行为学评分显著升高(P<0.01),小鼠脊髓白质区域出现大量炎症浸润,脱髓鞘程度严重(P<0.01),小鼠大脑皮质组织GFAP和IBA-1荧光强度增强,星形胶质细胞激活数目显著增多(P<0.01),Inos、Cox2、Il1b、Il6、Tnfa mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01),iNOS、GFAP、IBA-1、p-NF-κB、p-IκBα、p-AKT蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,熊胆粉各给药组神经行为评分显著降低,小鼠神经功能损伤程度显著改善(P<0.01),小鼠脊髓组织炎症浸润区域较少,脱髓鞘程度显著改善(P<0.01),小鼠大脑皮质组织GFAP和IBA-1荧光强度减弱,星形胶质细胞数显著减少(P<0.01),脑皮质组织Inos、Cox2、Il1b、Il6、Tnfa mRNA表达明显下调,iNOS、GFAP、IBA-1、p-NF-κB、p-IκBα、p-AKT蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:熊胆粉可能通过抑制AKT/NF-κB信号通路激活,减少星型胶质细胞和小胶质细胞激活引起的神经炎症,发挥对EAE的治疗作用。
关键词: 熊胆粉 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；多发性硬化 ；神经炎症 ；胶质细胞 ；核因子κB
摘要： 目的SMU-X是治疗多发性硬化的潜在药物,但SMU-X的作用靶点较多,其治疗多发性硬化的具体机制还未明确。线粒体融合蛋白2(Mfn2)是一种线粒体外膜GTP酶,调节线粒体融合,影响内质网与线粒体的相互作用,并且被认为密切参与炎症小体的形成。本研究旨在确定SMU-X对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗作用是否与Mfn2有关。方法在BV2小胶质细胞系上构建脂多糖(LPS)刺激模型。采用Western印迹法观察炎症相关蛋白(iNOS和COX-2)变化,ELISA法检测炎症因子(IL-6和TNF-α)水平以及线粒体氧化应激的变化。Western印迹法观察Mfn2蛋白水平、炎症通路蛋白(p38 MAPK和JNK)磷酸化水平的变化。用C57小鼠构建EAE模型,进行临床评分,通过Western印迹法检测髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达,采用HE染色和Western印迹法观察脊髓组织炎症细胞浸润及小胶质细胞激活相关蛋白的表达。结果①LPS处理后,BV2细胞激活,炎症因子IL-6和TNF-α及炎症相关蛋白iNOS和COX2显著上调,而给予SMU-X可逆转LPS诱导的BV2细胞激活以及炎症因子和蛋白上调。②LPS处理BV2细胞后,线粒体膜电位降低,超氧阴离子活性氧的生成明显上调,线粒体氧化应激水平上升,而给予SMU-X后可以改善线粒体氧化应激水平。③LPS处理BV2细胞后,Mfn2表达下调,P38和JNK磷酸化水平明显增加,给予SMU-X后可以逆转Mfn2的下调及P38和JNK磷酸化水平的增高。④敲低Mfn2可对抗SMU-X对LPS诱导的BV2细胞的抗炎保护作用。⑤敲低Mfn2可对抗SMU-X对BV2线粒体氧化应激水平的降低作用。⑥敲低Mfn2可对抗SMU-X对LPS诱导的BV2细胞的JNK通路的抑制作用。⑦SMU-X可降低EAE小鼠的临床评分及脊髓白质区炎症细胞浸润,增加脊髓组织结构蛋白MBP的表达。⑧EAE小鼠发病后,小胶质细胞激活标志物Iba1和炎症相关蛋白COX-2的表达明显上调,而给予SMU-X后可以改善这一现象。⑨EAE小鼠发病后,小鼠脊髓白质区Mfn2的表达明显降低,CD11b的表达明显升高,给予SMU-X后可以明显逆转这些变化。结论SMU-X可通过Mfn2/JNK通路发挥抗炎作用,从而对抗EAE小鼠疾病进程的发展。
关键词: 多发性硬化 ；SMU-X ；炎症 ；线粒体融合蛋白2
被引量
1
摘要： 目的观察补肾益髓方(Bu Shen Yi Sui Formula,BSYS)促进实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠小胶质细胞向M2极化的作用。方法 80只C57BL/6小鼠采用数字表法随机分为正常对照组、模型、醋酸泼尼松及BSYS组。各造模组小鼠以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendroglia glycoprotein,MOG)35-55诱导EAE模型。给予BSYS方干预后,观察小鼠的神经功能评分。于造模第23天和第40天分别取材,HE染色观察小鼠脑和脊髓病理变化,免疫荧光法测定小胶质细胞M1、M2型标志物CD86、Arg-1表达,Western blotting法检测过氧化物酶体增生物激活受体-γ(peroxisome proliferator activated receptor-γ,PPAR-γ)的表达,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定抗炎因子干扰素-β(interferon-β,INF-β)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的含量。结果与模型组相比,BSYS组小鼠神经功能评分和炎性细胞浸润评分显著降低(P <0. 05);脑及脊髓组织中CD86表达下降(P <0. 05),Arg-1表达升高(P <0. 05),抗炎因子INF-β、TGF-β1的表达显著升高(P <0. 05),PPAR-γ蛋白表达显著升高(P <0. 001)。结论 BSYS对EAE小鼠有神经保护作用,其作用可能与上调PPAR-γ表达,促进小胶质细胞向M2极化有关。
关键词: 补肾益髓方 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；小胶质细胞 ；极化
被引量
10
摘要： 目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的小胶质细胞Iba1、IL-1β和IL-10表达的影响。方法以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55(MOG 35-55)免疫诱导C57BL/6雌性小鼠制备EAE小鼠模型。将30只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组:BMMSCs移植组、EAE组和正常组。采用免疫组化检测脑和脊髓的Iba1(离子钙结合衔接分子1)、IL-1β和IL-10的表达。结果 BMMSCs移植组神经功能缺损症状要轻于EAE组,BMMSCs移植组脑和脊髓的Iba1和IL-1β表达水平低于EAE组(P<0.05),而BMMSCs移植组脑和脊髓的IL-10表达水平高于EAE组(P<0.05)。结论 BMMSCs能改善EAE小鼠的症状,其作用机制之一可能是抑制了小胶质细胞的激活、抑制炎症因子IL-1β及促进抗炎因子IL-10的表达。
关键词: 骨髓间充质干细胞 ；实验性自身免疫性脑脊髓炎 ；多发性硬化 ；Iba1 ；IL-1β ；IL-10
被引量
7
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