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摘要： 对沱茶(Camelliasinensisvar.assamica)的水提取物、5 0 %甲醇提取物、甲醇提取物进行了DPPH自由基清除作用的研究,实验结果表明,水提取物和5 0 %甲醇提取物均具有较强的清除自由基作用,其半数抑制率(IC50 )分别为6 .0 7μg/mL和5 .0 1μg/mL ,而甲醇提取物清除自由基作用的活性则较弱,其半数抑制率(IC50 )为39.6 3μg/mL。利用层析等手段分别从抗自由基活性较强的水提取物的甲醇可溶部分分离获得了2 0种化合物,其中,10种化合物( 2、5、6、11、12、13、16、17、18、19)为首次从该植物中得到的化合物;DPPH自由基清除活性研究结果表明,其中化合物( 1、4、7、9、10、12、14、18)的活性强于阳性对照品抗坏血酸和咖啡酸。比较分析化合物的结构与其活性的关系,发现结构中苯环上有邻位羟基的化合物其清除自由基的活性较强。
关键词: 沱茶 ；自由基清除作用 ；化学成分 ；半数抑制率 ；苯环 ；邻位羟基
被引量
27
摘要： 目的建立祁白芷超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对共有峰进行成分鉴定,测定各批次祁白芷抗氧化活性,并探讨祁白芷的化学成分与抗氧化活性的谱效关系。方法采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立28批祁白芷的指纹图谱,确认共有峰并进行相似度评价,并对共有峰进行UPLC-Q-TOF-MS分析。以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为抗氧化指标,测定其抗氧化活性。采用灰色关联度和偏最小二乘回归分析祁白芷共有峰与抗氧化活性的谱效关系。结果建立了28批祁白芷药材的指纹图谱,其相似度为0.910~0.997。聚类分析可将不同加工方式的祁白芷分为熏硫和无硫两大类,当平方欧氏距离为10时,可将无硫祁白芷进一步分为两类,与商品规格等级分类相符。其共标定13个共有峰,利用对照品对比和UPLC-Q-TOF-MS解析指认出共有峰分别为奎宁酸、二氢山芹醇、水合氧化前胡素、白当归素、花椒毒素、佛手柑内酯、异茴芹内酯、氧化前胡素、欧前胡素、珊瑚菜素、8-氧甲基异欧前胡内酯、异欧前胡素、镰叶芹酮。通过清除DPPH自由基实验发现,28批祁白芷均有抗氧化能力,谱效分析结果显示,奎宁酸、佛手柑内酯、氧化前胡素、珊瑚菜素、异欧前胡素、镰叶芹酮等与抗氧化能力呈正相关。结论本研究建立了基于化学成分和抗氧化活性的祁白芷质量评价模式,为阐明祁白芷药材中抗氧化活性成分及质量控制提供参考。
关键词: 祁白芷 ；超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱 ；指纹图谱 ；抗氧化 ；谱效关系
被引量
7
摘要： 为明确药食两用山茱萸化学成分的抗氧化活性,本研究以山茱萸乙醇提取物为原料,对乙醇提取物大孔吸附树脂20%乙醇洗脱部位中抗氧化活性组分进行研究,采用大孔吸附树脂柱层析常压正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、Flash闪式正反相硅胶柱层析、高压液相色谱等色谱方法对山茱萸乙醇提取物抗氧化活性部位进行系统的分离纯化,并结合核磁共振波谱数据、质谱数据与文献对比,从山茱萸乙醇提取物中共分离鉴定了5个化合物,分别为7-β-O-乙基莫诺苷(1)、7-α-O-乙基莫诺苷(2)、3-O-咖啡酰奎宁酸甲酯(3)、(7R,9R,10R)-3,9-di-hidroxicalameneno(4)和吐叶醇(5);其中化合物3、4和5为首次从山茱萸中分离得到。同时采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)法和铁离子还原法(Ferric ion reducing antioxidant power,FRAP)对分离得到的单体化合物进行抗氧化活性筛选。在DPPH自由基清除试验和FRAP试验中,化合物1、2和3均显示一定的抗氧化能力,其中化合物3抗氧化活性最好。
关键词: 山茱萸 ；化学成分 ；抗氧化活性
被引量
62
摘要： 目的:评价草果醇提物4种不同极性部位的体外抗氧化活性,为该植物中抗氧化活性化学成分的开发研究奠定基础。方法:将草果的干燥果实粉碎后,用95%乙醇加热回流提取,经旋转蒸发浓缩、水浴蒸干后得到醇提取物浸膏;将该浸膏以水分散,再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,分别合并各溶剂萃取液,并收集下层水相,再经旋转蒸发浓缩、水浴蒸干后得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位。采用经典体外抗氧化活性试验,以2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)作为阳性对照,考察草果醇提物不同极性部位对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、超氧阴离子自由基的清除能力和对三价铁离子(Fe^3+)的还原能力。结果:草果醇提物4种极性部位对DPPH自由基的清除率均达到80%以上,其清除能力强弱排序为乙酸乙酯部位>BHT>正丁醇部位>石油醚部位>水部位;对超氧阴离子自由基的清除率大部分约为30%~40%,其清除能力强弱排序为正丁醇部位>石油醚部位>水部位>乙酸乙酯部位>BHT,但整体弱于其对DPPH自由基的清除能力;对Fe^3+也有一定的还原能力,其还原能力强弱排序总体上为正丁醇部位>BHT>乙酸乙酯部位>石油醚部位>水部位,但当水部位质量浓度为4.0μg/m L时其还原能力升至最强。结论:草果的不同极性部位均具有一定的体外抗氧化能力,但其在不同抗氧化活性试验中的抗氧化活性能力强弱排序并不一致;乙酸乙酯部位对DPPH自由基的清除能力最强,正丁醇部位对超氧阴离子自由基的清除能力和对Fe^3+的还原能力最强。
关键词: 草果 ；醇提物 ；极性部位 ；抗氧化活性 ；体外
被引量
21
摘要： 采用层析法富集北京洋槐蜜中抗氧化成分,利用高效液相测定其化学组成并研究其中已知化学成分对DPPH自由基的清除作用,旨在评价北京洋槐蜜的抗氧化功能。结果显示:北京洋槐蜜中含有绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、山奈酚、异鼠李素、松属素、白杨素和高良姜素8种已知成分,含量在9.5～257.8μg/100g之间,除松属素和白杨素外,其余各成分均有清除DPPH自由基的能力,且差异显著(P<0.01)。从有效成含量及抗氧化能力综合考虑,山奈酚可视为北京洋槐蜜中最有代表性的抗氧化成分。
关键词: 洋槐蜜 ；化学成分 ；抗氧化活性 ；DPPH自由基 ；山奈酚
被引量
21
摘要： 通过考察红花黄色素(SY)及其主要化学成分对羟基自由基介导2-脱氧核糖氧化降解的抑制作用,以及对1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH.)的清除能力,探究SY的体外抗氧化活性及其抗氧化的主要有效成分。通过Fenton反应产生羟基自由基,用紫外分光光度计检测了SY及其主要化学成分对2-脱氧核糖降解的抑制作用和对DPPH.的清除能力,同时对红花黄色素B(SYB)抑制2-脱氧核糖降解的作用机制做了初步研究。结果表明SY抑制Fenton反应对2-脱氧核糖的氧化降解的IC50为256.79μg/mL,对DPPH.清除的IC50值为27.15μg/mL。羟基红花黄色素A(HSYA)和SYB是SY中抗氧化的两个有效成分,抑制2-脱氧核糖的氧化降解的IC50分别为220.68μg/mL和207.01μg/mL;对DPPH.清除的IC50值分别为55.81μg/mL和41.25μg/mL。SYB对2-脱氧核糖氧化降解的抑制作用机理研究表明,SYB除了对Fenton反应产生的羟基自由基具有直接清除作用外,又可通过与Fe2+离子的络合作用而阻断Fenton反应产生羟基自由基。由此可知SY具有明显的体外抗氧化活性,SYB和HSYA为其主要抗氧化活性成分。
关键词: 红花黄色素 ；Fenton反应 ；DPPH· ；抗氧化
被引量
65
摘要： 本实验针对茜草科植物诺丽的发酵果汁中抗氧化物质进行了定性和定量研究。采用系统预实验法对其不同极性的洗脱部位可能含有的化学成分进行预实验,探索了各个部位的化学成分。采用DPPH·自由基清除、ABTS＋·自由基清除和FRAP三种实验方法对各部位洗脱物的抗氧化活性进行了测定,结果显示50%~90%乙醇洗脱部位抗氧化能力最强,此部位主要含有多酚类、黄酮类、香豆素内酯类和蒽醌类成分,并且研究表明抗氧化能力与多酚成分的含量成极显著相关。本研究结果表明多酚类物质是诺丽发酵果汁发挥抗氧化作用的主要功能成分。
关键词: 诺丽发酵果汁 ；定性定量 ；多酚成分 ；抗氧化
被引量
19
摘要： 目的:研究甘薯中抗氧化物质的含量,化学成分,分离提取及其生物活性。方法:采用乙醇提取,AB-8大孔树脂吸附纯化方法分离提取甘薯抗氧化物质;通过测定清除超氧阴离子自由基_?O2及·OH的能力及小鼠体内SOD活性等分析其抗氧化能力。结果:甘薯的块根、蔓和叶中均含有抗氧化物质,其含量在组织和品种间有明显差异,最高的品种含量可达0.324%,并且主要分布在甘薯块根中,占总含量的70%以上,提取率达85%以上;初步确定甘薯抗氧化物的主要成分是酚酸类物质,其中包括绿原酸、异绿原酸、新绿原酸和4-O-咖啡酰奎尼酸;当甘薯抗氧化物浓度为90mg/ml时,对_?O2和·OH的清除率分别为88.02%和82.21%;能抑制由·OH引发的脂质过氧化及由H2O2诱导的红细胞氧化溶血;能提高小鼠血清及皮肤细胞中SOD的活性。结论:甘薯中含有较多的酚酸类抗氧化物质,并具有体内外抗氧化活性。
关键词: 甘薯 ；抗氧化物 ；提取
被引量
22
会议时间： 2012-03-10
摘要： 本文采用层析法富集北京洋槐蜜中抗氧化成分,利用高效液相测定其化学组成并研究其中已知化学成分对DPPH自由基的清除作用,旨在为评价北京洋槐蜜的抗氧化功能提供理论依据。结果显示,北京洋槐蜜中含有绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、山奈酚、异鼠李素、松属素、白杨素和高良姜素等8种已知成分,含量在9.5-257.8μg/100g之间,各成分清除DPPH自由基的能力有显著差异。从含量及抗氧化能力综合考虑,山奈酚可视为北京洋槐蜜中最有代表性的抗氧化成分。
关键词: 洋槐蜜 ；化学成分 ；抗氧化活性 ；DPPH自由基 ；山奈酚
被引量
1
摘要： 近年来,酒精在世界各地的消费巨大,酒精相关的肝病对人们的生命造成了很大的威胁。目前治疗酒精性肝病最基本的途径是戒酒,然后再根据肝病发展的阶段对症给药。本研究选取药食同源的中药菊花作为研究对象,比较了 7种菊花的化学成分与抗氧化活性;研究亳菊水提物及其对酒精诱导的肝损伤小鼠及损伤HepG2肝细胞的保护作用,同时探讨亳菊水提物对酒精诱导的氧化应激的保护机制。主要研究内容和结果如下:1.菊花的含量测定及其抗氧化和细胞保护活性研究。应用回流提取法制备7种菊花的水提取物,采用福林酚法和NaOH比色法测定7种菊花的总酚和总黄酮含量,其范围分别在 169.58±0.02～447.14±0.09 mg/g 和 148.82±0.06～812.25±0.06 mg/g之间;HPLC对芹菜素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和木犀草苷的含量进行测定,发现2种酚酸类化合物绿原酸和3,5-O-二咖啡酰奎宁酸在亳菊中的含量最高,分别为57.8240和132.8316 mg/g。比较了 7种菊花在体外清除自由基的活性,结果表明它们在一定的浓度范围内具有浓度依赖效应。其中亳菊具有较好的抗氧化活性,它们的DPPH自由基清除能力依次为太阳菊<怀菊<贡菊<杭菊<祁菊<滁菊<亳菊,ABTS自由基清除能力及铁离子还原能力依次为太阳菊<怀菊<贡菊<杭菊<滁菊<祁菊<亳菊。以200 mM的乙醇作用于HepG2细胞,建立酒精诱导的肝细胞损伤模型,采用MTT法筛选菊花与酒精共同作用的有效浓度为0.2 mg/ml,然后比较不同菊花对酒精诱导的ALT、AST以及TG含量的影响,发现亳菊具有更强的生物活性,显著降低酒精诱导的损伤细胞ALT(p<0.001)、AST(p<0.01)和TG(p<0.001)水平。2.亳菊水提物对酒精性肝损伤小鼠的保护作用。建立酒精诱导的小鼠肝损伤模型,分别用低(150 mg/(kg.d))、中(350 mg/(kg·d))和高剂量组(550 mg/(kg.d))的亳菊水提物作用9周,同时以水飞蓟素(150 mg/(kg·d))作为阳性对照,研究其对肝功能、肝脂以及抗氧化水平的影响。结果表明,亳菊和水飞蓟素能显著降低小鼠血清中ALT和AST的水平,降低肝组织中TG和TC的含量,HE染色和油红O染色结果显示,亳菊和水飞蓟素能够改善酒精诱导的肝组织形态结构的损伤及脂质积累。此外,亳菊和水飞蓟素能增加小鼠肝脏中抗氧化剂CAT、GSH和SOD的含量,同时降低脂质过氧化最终产物(MDA)的水平,而且,亳菊水提物诱导抗氧化相关蛋白Nrf2和NQO1的表达,保护酒精诱导的肝组织氧化应激损伤。3.绿原酸、木犀草素、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸对酒精性肝损伤细胞的保护作用。建立酒精诱导的HepG2肝细胞损伤模型,比较亳菊中含量较高的3种活性成分对ALT、AST的影响,结果显示它们不同程度地降低了 ALT和AST的水平。进一步分析亳菊及其主要成分对ROS以及Nrf2蛋白的表达的影响,结果表明亳菊及其主要成分通过诱导抗氧化蛋白Nrf2的表达(p<0.01),降低ROS的生成,改善小鼠肝脏氧化应激,发挥对酒精性肝病的保护作用。综上,亳菊水提物通过诱导Nrf2通路发挥抗氧化作用,抑制肝脏的氧化应激,进而改善酒精诱导的小鼠肝损伤,可作为治疗酒精性肝病的天然药物进行开发研究。
关键词: 菊花 ；亳菊水提物 ；氧化应激 ；酒精性肝损伤
被引量
5
摘要： 茶,是世界上最受欢迎的饮料之一,自古以来人们就开始饮用,而茶叶起初是作为药用。茶含有大量对人类健康有利的化学物质,如多酚、咖啡因、茶氨酸、多糖和其他化合物。大量的细胞培养和动物实验证明,绿茶和多酚具有不同的抗癌和治疗作用,其机制包括抗氧化活性的刺激。根据美国农业部（USDA）的类黄酮数据库,冲泡的绿茶平均每100 mL中含有126.6 mg儿茶素和77.8 mg EGCG,这是在1 g茶叶/100 mL冲泡的基础上得出的结论。大量试验结果研究表明,有机肥对茶叶中化学成分含量具有重要作用。因此,本研究以日照绿茶为试材,采用追肥方式。探究施用豆粕发酵肥后对茶园土壤理化性质、茶叶品质的影响,同时分析施用豆粕发酵肥后茶园土壤理化性质与茶叶中内含成分的相关性以及不同采收期茶叶中抗氧化活性的动态变化。并通过创建细胞氧化损伤模型,测定TP、茶氨酸和茶碱对细胞氧化损伤的水平。通过本试验为TP、茶氨酸和茶碱预防和治疗氟致神经损伤和肝脏疾病提供一些有价值的参考依据,及为施用豆粕肥提高茶叶中化学成分含量与本身具有的功能活性相互联系方面增添一些研究数据,可以进一步开发成相应的天然有效抗氧化剂产品。同时,向广大消费者和饮茶爱好者提供具有高含量茶多酚的茶叶。主要研究结果如下:（1）豆粕发酵肥对茶园土壤、茶树生长和茶叶品质的影响茶树的百芽重和萌芽密度是茶树生长的重要指标,是决定茶叶产量的重要因子。试验得出施用豆粕发酵肥对茶树新梢萌发率和百芽重有显著的提高效果,与对照组相比,试验组茶树中的百芽重在三个周期内测定的含量分别增加9.96%、14.63%、21.97%。对茶树百芽重的提高最佳。与对照组相比,试验组茶树中萌芽密度在三个周期内测定的含量分别增加20.30%、27.18%、29.16%。同时施用豆粕发酵肥能够显著提高茶园土壤pH、有机质、全氮、全磷和全钾;从茶多酚、游离氨基酸、咖啡碱、水浸出物、维生素类、儿茶素类和可溶性糖类的含量来看,试验表明在氮的条件下,施用豆粕发酵肥茶叶中水浸出物、游离氨基酸、维生素类、儿茶素类和可溶性糖类含量均显著增加,减少茶汤苦涩味,提高茶叶品质。探索茶园土壤理化性质与茶叶中内含成分的相关性分析表明,施用豆粕发酵肥后土壤全氮含量对茶叶内含成分含量的作用呈极显著相关（P<0.01）,茶园土壤pH值对茶叶内含成分含量影响次之,其余过低,没有明显的作用。因此,施用豆粕发酵肥可改善茶园土壤理化性质,进而对提高茶叶品质具有重要的影响作用,为豆粕发酵肥在茶树上应用提供依据。（2）豆粕发酵肥对茶叶抗氧化活性的动态变化研究分别采用4种方法(Folin-ciocalteu试剂法、DPPH（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）自由基消除法、ABTS+(2,2'-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid）diammonium salt)自由基清除法和铁离子还原/抗氧化能力法（Ferric ion reducing antioxidant power,FRAP）用于测定施用豆粕发酵肥和未施用豆粕发酵肥的茶叶在不同采收期抗氧化活性。试验结果表明,与对照组相比,施用豆粕发酵茶叶的多酚含量显著增加,呈现先升高后降低的趋势。分别以6,7月份含量最高,抗氧化能力最强;并均以9月份含量最低,抗氧化能力最差。测得不同采收期茶叶的抗氧化能力与多酚含量变化相同,进一步证明了多酚含量与抗氧化能力的正相关性,且多酚类物质是茶叶发挥抗氧化作用的主要成分。（3）TP、茶氨酸和茶碱对NaF诱导Neuro-2A细胞和HepaRG细胞的保护作用。以TP、茶氨酸和茶碱为试验材料,Neuro-2A细胞和HepaRG细胞为试验对象。建立氟化钠（NaF）诱导的Neuro-2A细胞和HepaRG细胞氧化损伤模型,并以不同浓度TP、茶氨酸和茶碱进行干预24 h,检测细胞存活率。结果表明,与对照组相比,4 mM NaF模型损伤组细胞存活率显著降低,当加入TP（0.5～40μg/mL）对Neuro-2A细胞进行预保护后,细胞存活率在90%95%之间;6 mM茶氨酸和0.05 mM茶碱是显著提高NaF诱导Neuro-2A细胞存活率得重要浓度;0.5μg/mL TP、6～8 mM茶氨酸和0.1 mM1mM茶碱是显著提高NaF诱导HepaRG细胞存活率的重要浓度。因此,本研究为TP、茶氨酸和茶碱的抗氧化活性研究提供了一定参考,为开发茶叶抗氧化产品提供理论依据。同时为探究TP对NaF诱导Neuro-2A细胞和HepaRG细胞氧化损伤的保护作用提供重要的理论和实践基础。（4）TP对NaF诱导Neuro-2A细胞氧化损伤的保护作用为探讨TP对NaF诱导Neuro-2A氧化损伤的保护作用,建立了TP干预下的NaF诱导的Neuro-2A细胞氧化损伤模型。通过检测并比较不同试验组的Neuro-2A细胞存活率、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,我们发现,与对照组相比,NaF损伤组的细胞存活率显著下降,为44.10%（P<0.05）,当加入0.5～40μg/mL TP对细胞进行预干预后,NaF处理的细胞存活率恢复至90%95%。此外,与对照组相比,NaF损伤组MDA含量显著上升,达到2.37μmol/mg（P<0.05）,SOD和GSH-Px活性明显（P<0.05）下降,分别为45.25 U/mg和52.77 U/mg,而经TP预处理的Neuro-2A细胞在经NaF处理后MDA含量、SOD和GSH-Px活性与对照组相比无显著差异。研究结果表明,TP可通过减轻Neuro-2A细胞脂质氧化程度,降低胞内脂质过氧化物MDA含量来调节细胞的抗氧化/促氧化的动态平衡,发挥其对NaF诱导Neuro-2A细胞氧化损伤的保护作用。综上可知,TP预处理能减轻NaF对Neuro-2A细胞造成的氧化损伤,这为将其开发成天然高效的抗氧化剂产品及其合理利用提供了理论依据。综上所述,施用豆粕发酵肥可有效改善茶园土壤理化性质,能显著提高茶树百芽重和新梢萌发率,进而对提高茶叶品质具有重要的影响作用。并且对试验组绿茶抗氧化能力有显著的提高。进一步证明了多酚与抗氧化能力的相关性。通过细胞试验进一步探讨TP对NaF诱导Neuro-2A细胞和HepaRG细胞氧化损伤的保护作用,试验结果表明,TP可以通过减轻脂质氧化程度,降低脂质过氧化物MDA含量,发挥对NaF诱导Neuro-2A细胞氧化损伤的保护作用,使SOD与GSH-PX活性升高,发挥了对Neuro-2A细胞的保护作用;同时,TP对NaF诱导HepaRG细胞有较强的预保护作用。因此,豆粕发酵肥是可作为有机肥料被茶农施用,提高茶叶中化学成分,即增加茶叶中茶多酚含量。供消费者饮用,增加人类身体健康,此外,长时间饮用起到清除自由基、防癌治癌、抗疲劳、抗辐射等功能。
关键词: 豆粕发酵肥 ；茶树 ；茶园土壤 ；茶叶品质 ；生理活性
被引量
7
摘要： 人们生活水平的不断提高以及保健意识的不断增强，市场对天麻和红景天两味中药的需求与日俱增。面对肾病综合征患者人数的不断上升和目前使用药物副作用大等严峻问题，寻找高效低毒的药材，已成为临床治疗肾病综合征的当务之急。课题组前期研究发现天麻和红景天具有体外抗氧化活性，且粉末粒径越小，抗氧化作用越强。为了进一步研究天麻和红景天两味中药不同粒径粉末的功能，本论文对不同粒径粉末的制备，粉体性质以及肾病综合征的治疗效果进行了研究，主要内容如下： 1．根据实验前期对天麻和红景天的评价情况，西藏波密天麻和大花红景天质量最好。以波密天麻和大花红景天为原料，进行不同程度的粉碎，得到粒径D90分别为400~500μm的粗粉，60~120μm的细粉和20~50μm的超微粉;采用光学显微镜和扫描电子显微镜对粉末进行外观检测，粗粉中组织块清晰可见，形状不规则且分布不均匀，而超微粉粒径明显变小，且颗粒大小均匀;考察粉末流动性、堆密度及吸湿性等粉体学物理性质，为制剂研究做准备。结果显示，随着粒径的减小，流动性变差，堆密度变小，吸湿率变大，临界吸湿值变小。 2．研究不同粒径天麻和红景天的粉末主要有效成分体外溶出情况，探索粉末粒径对成分溶出的影响。结果表明。 （1）超微粉中结合天麻素含量显著提高，游离天麻素含量显著降低，其原因可能是柠檬酸类成分溶出增加，加快了天麻素与柠檬酸的缩合反应。 （2）体外溶出实验发现，超微粉与粗粉相比较，天麻和红景天中主要有效成分的体外溶出率均显著提高（P＜0.05）;（3）游离氨基酸测定分析，天麻中谷氨酸（Glu）含量最高，粗粉和超微粉含量分别为1.828和1.143 g·kg-1，红景天中精氨酸（Arg）含量最高，超微粉和粗粉含量分别为0.512和0.444 g·kg-1;（4）红外光谱图说明超微粉碎不会破坏中药的化学成分结构;（5）同一条件下，天麻和红景天对DPPH自由基清除效果的顺序为：超微粉＞细粉＞粗粉，且醇提物优于水提物;与维生素C相同浓度下，天麻素单体和红景天苷单体无明显清除作用;儿茶素和没食子酸对DPPH自由基的清除率与维生素C相当。 3. 采用单次静脉注射阿霉素（7.5 mg/kg）的方法诱导大鼠肾病模型。 （1）与模型组相比，天麻超微粉组的肾病大鼠体重显著升高（P<0.05）;甘油三酯 （TC）、总胆固醇（TG）和血肌酐（SCr）含量显著降低（P<0.05），肾组织中抗氧化酶SOD活力明显增强（P<0.05）。天麻超微粉仅在肾病大鼠体重恢复及脂质代谢方面有一定的作用，其他方面无显著治疗效果。 （2）与模型组比较，红景天超微粉中、高剂量组的肾病大鼠体重显著升高（P<0.05），尿蛋白含量显著降低（P<0.05），TC、TG、BUN和SCr含量显著降低（P<0.05），肾组织中SOD活力明显增强（P<0.05），MDA含量显著降低;红景天超微粉在一定程度缓解了肝脏与肾脏肥大，且脾脏指数显著提升（P<0.05），增强了大鼠机体免疫能力。红景天超微粉能改善阿霉素诱导的大鼠肾病综合征，抗氧化、免疫反应和脂质代谢可能是其发挥功能的主要机制。 （3）肾脏、肝脏切片显示，不同给药剂量的红景天超微粉一定程度上减轻了大鼠肾脏病变的严重程度。
关键词: 天麻 ；红景天 ；超微粉 ；粉体特性 ；肾病综合征
摘要： 马齿苋（PortulacaoleraceaL.）是马齿苋科马齿苋属一年生肉质草本植物，在40多个国家作为药食两用植物使用。《中国药典》记载马齿苋具有清热解毒、凉血止血和止痢功效，临床常用于肠炎和痢疾的治疗;伊朗传统医药记载马齿苋可用于治疗哮喘，具有抗菌、抗炎、降血糖、降血脂、骨骼肌舒张、气管舒张、免疫调节、抗氧化和神经保护等诸多活性，有机酸、生物碱、香豆素、黄酮和多糖是马齿苋的主要化学成分，但对应上述诸多药理活性的药效物质尚未阐明，仍有待深入研究。 马齿苋酰胺（oleraceins）是马齿苋中特征性生物碱，除马齿苋酰胺E（oleraceinE,OE）为异喹啉酰胺，其余均为吲哚啉酰胺。利用植化分离手段以及HPLC/MS2分析技术，从马齿苋中已发现50余个吲哚啉酰胺，马齿苋酰胺A（oleraceinA,OA）和马齿苋酰胺B（oleraceinB,OB）是两个代表性吲哚啉酰胺单糖苷类化合物，在马齿苋中含量较高。OA和OB是强自由基清除剂，但对其活性探索仍不充分。鉴于马齿苋治疗哮喘的传统用途、空气污染会加剧哮喘症状，本文探讨了OA和OB对空气污染物砷诱导人支气管上皮细胞损伤模型的影响。 另有研究报道，OE具有体外NO2-清除活性，也可显著抑制脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的RAW264.7细胞内一氧化氮（NO）的生成，具有潜在的抗炎活性;OE灌肠对2,4,6-三硝基苯磺酸（Trinitro-benzene-sulfonicacid,TNBS）诱导的大鼠炎症性肠病（Inflammatoryboweldisease,IBD）有效，可降低结肠组织丙二醛和髓过氧化物酶水平;OE还具有促进体外调节性T细胞（Regulatorycell,Treg）增殖的活性，但并未对其进行深入探索。鉴于马齿苋治疗肠炎的传统应用，本文采用LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型评价OE的体外抗炎作用，采用TNBS诱导的小鼠结肠损伤模型评价OE有效性。 一、马齿苋酰胺A/B对亚砷酸钠诱导的Beas-2B人支气管上皮细胞损伤的影响 实验目的:评价OA和OB对亚砷酸钠（As）诱导的Beas-2B人支气管上皮细胞损伤的影响及其机制。实验方法:比色法测定DPPH·和·OH含量、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和过氧化氢酶（CAT）活力、还原型谷胱甘肽（GSH）含量及乳酸脱氢酶（LDH）水平;MTT法检测细胞活力;通过DCFH-DA染色和流式细胞检测对反应活性氧（ROS）进行定性和定量分析;通过Hoechst33258染色评价细胞核受损程度;使用流式细胞仪对AnnexinV/PI标记的细胞进行凋亡率分析;免疫印迹法检测MAPK信号通路蛋白表达。实验结果:OA和OB具有体外DPPH·清除作用;强于阳性对照维生素C（VC）;100μMOA和OB可显著提高亚砷酸钠（20μM）损伤的Beas-2B细胞存活率;显著提高受损细胞中抗氧化物酶CAT和T-SOD活性，降低ROS水平;OA和OB（25-100μM）显著抑制MAPK信号通路中JNK和p38的磷酸化;OA和OB（100μM）可明显缓解亚砷酸钠对细胞核的损伤并显著降低细胞凋亡率，与阳性对照5mMN-乙酰半胱氨酸（NAC）作用一致。结论:本研究首次发现OA和OB对砷损伤Beas-2B人支气管上皮细胞具有保护作用，其机制与缓解氧化应激、抑制MAPK信号通路过度激活及抑制细胞凋亡有关。 二、马齿苋酰胺E的体外抗炎作用机制及其对炎症性肠病的有效性研究 实验目的:（1）研究OE对LPS诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞炎症模型的影响及作用机制;（2）研究OE对TNBS诱导的小鼠急性炎症性肠病（IBD）模型的有效性。实验方法:比色法测定RAW264.7细胞中炎性介质NO的水平;MTT法检测细胞活力;qRT-PCR测定细胞中白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、一氧化氮合酶（iNOS）和环氧合酶2（COX-2）的mRNA水平;通过结肠长度、DAI评分和HE染色评估小鼠肠道损伤程度;通过酶联免疫法测定小鼠结肠组织中细胞因子IL-6、IL-1β和白细胞介素10（IL-10）及RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平;免疫印迹法检测小鼠结肠组织中iNOS、COX-2、MAPK、叉头蛋白P3（FOXP3）、维甲酸受体相关孤儿受体γ（ROR-γt），以及RAW264.7细胞中iNOS、COX-2、核因子κB（NF-κB）和MAPK信号通路蛋白的表达;免疫荧光法对细胞中NF-κBp65进行定位分析;免疫组化（IHC）技术对小鼠结肠组织中FOXP3和ROR-γt进行半定量及定位分析。实验结果:（1）与LPS（1μg/mL）诱导的RAW264.7巨噬细胞模型组相比，OE剂量依赖性显著抑制NO的生成，EC50值为21.12μM;OE剂量依赖性显著降低炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放，以及iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平;在高剂量100μM时可显著抑制iNOS和COX-2蛋白表达;OE剂量依赖性显著降低NF-κB信号通路中IκBα和p65的磷酸化水平，在100μM时明显抑制NF-κBp65的转位入核;此外，OE对MAPK信号通路中JNK、ERK和p38蛋白的磷酸化呈剂量依赖性抑制趋势。（2）与TNBS（灌肠140mg/kg,1d）诱导的小鼠急性IBD模型相比，OE（12.5,25,50,100mg/kg，灌肠4d）可逆转结肠长度缩短、减轻结肠组织结构破坏;OE（12.5,50,100mg/kg）可显著降低结肠组织中COX-2蛋白水平，并对MAPK信号通路中ERK和p38的磷酸化呈抑制趋势;OE在100mg/kg时具有降低小鼠结肠组织中FOXP3表达、促进ROR-γt表达发挥免疫调节作用的趋势，其降低IBD模型组小鼠结肠组织中FOXP3/ROR-γt比例与阳性对照5-氨基水杨酸（5-ASA,30mg/kg）作用一致。结论:本研究首次发现OE可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中NF-κB信号通路激活并从转录和翻译水平显著抑制其下游iNOS、COX-2、以及TNF-α、IL-6炎性因子表达和释放，发挥体外抗炎作用。证实了OE对TNBS诱导的小鼠急性IBD模型的有效性，初步发现OE具有体内免疫调节作用，然而，OE是否能调节Treg/Th17细胞平衡进而影响这两类T细胞亚群中特异性转录因子FOXP3/ROR-γt比例仍有待研究。 综上所述，OA和OB可缓解氧化应激、抑制MAPK信号通路激活、抑制细胞凋亡，保护Beas-2B人支气管上皮细胞免受亚砷酸钠损伤，研究结果从气道上皮细胞保护的角度为马齿苋治疗哮喘的传统应用提供了科学依据。OE可抑制LPS诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞炎性因子表达和释放，在体外发挥抗炎作用;OE对TNBS诱导的小鼠炎症性肠病有效，其作用机制与抑制COX-2表达以及免疫调节作用有关，上述结果为深入开展马齿苋抗炎及免疫调节药效物质研究奠定了基础，为马齿苋临床治疗肠炎提供了科学依据。
关键词: 马齿苋酰胺 ；特征性生物碱 ；肺/肠损伤 ；药理活性 ；药效物质
摘要： 背景:大量研究表明中药多都具有抗氧化作用,天葵子为临床常用的一味中药,具有清热解毒,消肿散结,利尿通淋的功效,目前研究仅是对其化学成分分析的较多,但对天葵子抗氧化和其具体化学成分的具体功能还未有深入的研究,有人研究已表明天葵子的正丁醇提取物对人晶状体上皮细胞具有抗氧化应激的保护作用。目的:本研究以天葵子块根为实验材料,采用响应面优化超声波辅助提取天葵子的总生物碱的工艺,获得最佳提取天葵子总生物碱的条件,并探讨总生物碱的体外抗氧化活性。另外研究天葵子对D-半乳糖诱导的亚急性衰老模型小鼠的抗衰老作用,初步探讨天葵子抗衰老的机制。方法:利用Design Expert 8.0.6设计,以乙醇浓度、液料比、超声时间、超声功率为四因素三水平的响应面实验进行考察,采用DPPH法、ABTS法和总还原能力测定法进行体外抗氧化考察。随机将昆明小鼠分为6组,除正常组外其余各组颈背部皮下注射500 mg·kg-11 D-半乳糖,每日1次,连续4周诱导衰老样改变;与此同时,灌胃给予天葵子水煎剂600、300和150 mg·kg-1,或维生素E 100 mg·kg-1（阳性对照组）、等体积生理盐水（正常组）,每日1次,连续4周,每周测一次小鼠体重。连续灌胃3周后,检查小鼠行为学指标,水迷宫实验测小鼠记忆能力。第4周后处死测定血清、肝和肾组织中抗氧化酶活性如超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）衰老指标。结果:使用响应面分析法,获得最佳提取工艺条件为:乙醇浓度为86%,液料比为37:1 mL·g-1,超声时间为32 min,超声功率为140 W。天葵子总生物碱具有一定的还原力,清除DPPH自由基的IC50值为0.631 mg·L-1,清除ABTS自由基的IC50值为0.747 mg·L-1。模型组小鼠活动次数和后肢站立次数明显减少,潜伏期延长,穿越次数减少。衰老小鼠MDA的含量明显升高,血清、肝脏和肾脏中的SOD、CAT、和GSH-Px活性均不同程度降低,与正常小鼠比较有差异（P<0.05）;天葵子水煎剂600 mg·kg-1g和300 mg·kg-1均能提高衰老小鼠血清、肝脏和肾脏的SOD、CAT、和GSH-Px活性,可以使MDA的含量降低。天葵子水煎剂150 mg·kg-1能提高血清中SOD、CAT,肝组织SOD,肾组织CAT的活力,降低血清和肝组织MDA含量。结论:表明优化天葵子总生物碱的工艺条件简便可行,其抗氧化活性大小与总生物碱的质量浓度呈明显的量效关系。天葵子改善D-半乳糖致衰老模型小鼠的学习记忆能力,,可延缓D半乳糖诱导的模型小鼠的机体衰老。
关键词: 天葵子 ；响应面法 ；总生物碱 ；抗氧化 ；D-半乳糖
被引量
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摘要： 连翘为木犀科（Oleaceae）植物连翘(Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl)的果实,具有清热解毒、消肿散结的功效,主治温热、丹毒、斑疹、痈疡肿毒、瘰疬、以及小便淋闭等症。连翘叶作为连翘的非药用部位,资源丰富,且连翘叶中熊果酸等三萜酸类成分、连翘酯苷等苯乙醇苷类成分和连翘苷等木脂素类成分的含量明显高于果实,但连翘叶目前作为非药用部位大多被废弃,造成了严重的资源浪费。为了进一步开发连翘叶的药用和饲用价值,使其得到合理的开发利用,本文对连翘叶中的化学成分进行了提取分离,并对其进行了抗氧化、抗肿瘤的活性筛选与作用研究,以期为连翘叶在畜牧生产与兽医临床上的应用开发提供试验基础和理论依据。第一部分:连翘叶化学成分的提取分离采用D101大孔树脂、硅胶柱色谱和半制备高效液相色谱（HPLC）等多种方法对连翘叶中的化学成分进行提取、分离、纯化,得到10个化合物,通过质谱（MS）,核磁共振（NMR）等方法进行结构鉴定,10个化合物分别为:连翘酯苷I（FSI,1）、连翘酯苷H（FSH,2）、连翘酯苷A（FSA,3）、连翘酯苷B（FSB,4）、连翘苷（PHI,5）、松脂素-β-D-葡萄糖苷（PIN,6）、连翘脂素（PHG,7）、白桦脂酸（BA,8）、熊果酸（UA,9）、齐墩果酸（OA,10）。同时,本文采用水提取、大孔树脂分离得到连翘叶不同极性溶剂的洗脱部位,并对连翘叶提取物不同极性部位中的上述成分进行了含量测定,结果表明,30%乙醇洗脱部位中主要成分为连翘酯苷A等苯乙醇苷类成分,60%乙醇洗脱部位中主要成分为连翘苷等木脂素类成分,90%乙醇部位中主要成分为熊果酸等三萜类成分。第二部分:连翘叶化学成分的抗氧化作用研究采用化学法和过氧化氢（H2O2）诱导的RAW264.7细胞模型,对从连翘叶中提取分离得到的10种化学成分进行了抗氧化活性筛选,结果表明,连翘叶中FSA、FSB、FSH和FSI成分对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基有较好的清除能力,显著优于PHI、PHG、PIN、UA、OA、BA成分（P<0.05）。同时FSA、FSB、FSH和FSI可显著提高H2O2诱导的巨噬细胞RAW264.7中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活力（P<0.05）,提高细胞中还原性谷胱甘肽（GSH）的含量（P<0.05）,降低丙二醛（MDA）含量（P<0.05）,缓解H2O2诱导的细胞氧化损伤。经热图分析及主成分分析,发现FSA、FSB、FSH、FSI 4种苯乙醇苷类成分与其抗氧化能力呈正相关。表明连翘叶中苯乙醇苷类成分具有较好的抗氧化活性。第三部分:连翘叶苯乙醇苷对肉鸡生长性能与抗氧化能力的影响畜禽在养殖过程中极易受到多种应激因素影响,迫切需求开发出安全、有效、稳定的天然抗氧化剂。本文探讨了连翘叶苯乙醇苷（F30）对肉鸡抗氧化能力的作用效果,试验选取1日龄AA白羽肉仔鸡144只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复6只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础日粮中分别添加125、250、500 mg/kg的连翘叶苯乙醇苷提取物（F30）,试验期42 d。结果表明:与对照组相比,添加500 mg/kg F30可显著提高21～42、1～42日龄肉鸡的平均日增重（ADG）,显著降低料重比（F/G）;添加250、500 mg/kg F30可显著提高21日龄肉仔鸡胸腺指数及42日龄肉仔鸡胸腺、脾脏、法氏囊指数;添加500mg/kg F30可显著提高21日龄和42日龄肉鸡血清、肝脏中抗氧化酶（SOD、CAT、GSH-Px）活力、降低MDA水平。综上所述,肉鸡基础饲粮中添加连翘叶苯乙醇苷提取物F30可提高肉鸡生长性能、促进免疫器官发育、提高抗氧化能力,以添加500 mg/kg的效果最佳。第四部分:连翘叶化学成分的抗肿瘤作用研究采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法,对连翘叶中化学成分进行抗肿瘤活性的筛选,结果表明,UA、OA、BA与连翘叶三萜提取物（F90）均具有较好的抗肿瘤活性。为了进一步探讨连翘叶化学成分的抗肿瘤作用,本文进行了连翘叶三萜提取物（F90）对乳腺肿瘤细胞的作用效果研究,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,罗丹明123（Rh123）染色法检测细胞线粒体膜电位（MMP）变化,DCFH-DA染色法检测细胞内活性氧（ROS）的含量变化,荧光共聚焦显微镜检测F90在细胞中的摄取和定位,Western Bolt法检测F90对细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果表明,连翘叶三萜提取物（F90）能够显著抑制MCF-7和MDA-MB-231乳腺肿瘤细胞增殖;同时,Annexin V-FITC/PI双染试验、Rh123染色试验、DCFH-DA染色试验结果显示,F90能够诱导MCF-7和MDA-MB-231细胞凋亡,细胞MMP下降（P<0.01）,细胞内ROS含量升高（P<0.01）,并呈现一定的浓度依赖性。荧光共聚焦显微镜试验结果显示,F90进入细胞后主要作用于细胞的线粒体和溶酶体中,且呈现剂量和时间依赖性。Western Blot试验结果表明,F90能够激活Caspase-3蛋白活化,同时上调Cleaved caspase-3、促凋亡蛋白（BAK）、线粒体动力相关蛋白1（DRP1）、线粒体分裂蛋白1（FIS1）的表达。综上所述,F90能够抑制乳腺肿瘤细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖,促进肿瘤细胞凋亡。其作用机制可能与降低细胞MMP,提高细胞内ROS水平,靶向线粒体和溶酶体,激活caspase-3,上调Cleaved caspase-3、BAK、DRP1、FIS1的表达有关。近年来,兽医临床中尤其是宠物临床中肿瘤疾病的发病率呈逐年上升的趋势,肿瘤性疾病已成为威胁宠物生命的主要原因之一,因此本研究结果对连翘叶作为抗肿瘤药物的研发提供了一定的试验基础。综上所述,本研究采用D101大孔树脂、硅胶柱色谱和HPLC制备等多种方法对连翘叶中化学成分进行分离纯化,得到10个化合物;同时采用水提取大孔树脂富集的方法得到了连翘叶不同极性的提取物,并对其抗氧化、抗肿瘤作用进行了研究。结果发现FSA、FSB、FSH、FSI 4种苯乙醇苷类成分显示出较好的抗氧化活性,且在肉鸡饲粮中添加连翘叶苯乙醇苷可以提高肉鸡生长性能、促进免疫器官发育、提高机体抗氧化能力,以添加500 mg/kg连翘叶苯乙醇苷的效果最佳;UA、OA、BA 3种连翘叶三萜类成分显示出较好的抗肿瘤活性,且连翘叶三萜能够显著抑制乳腺肿瘤MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞增殖,诱导并促进细胞凋亡。其作用机制可能与降低MMP,提高细胞内ROS水平,靶向线粒体和溶酶体,激活caspase-3,上调Cleaved caspase-3、BAK、DRP1、FIS1的表达有关。
关键词: 连翘叶 ；抗氧化 ；抗肿瘤 ；苯乙醇苷类 ；三萜类 ；肉鸡
被引量
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摘要： 大戟科乌桕属植物,广泛分布在温带、亚热带及热带等地区。作为民间用药历史悠久,常用于治疗皮肤和消化系统疾病。乌桕属植物含有萜类、木脂素、鞣质、香豆素和黄酮等多种化学成分,并且很多化学成分具有很好的抗菌、抗炎、抗氧化、细胞毒等生物活性。 本研究选择了三种乌桕属植物浆果乌桕（Sapium baccatum Roxb.）、白木乌桕（Sapium japonicum Siebold&Zucc.）、圆叶乌桕（Sapium rotundifolium Hemsl.）的干燥茎和叶为研究对象,分析其化学成分以及抗炎和抗氧化活性。取植物的干燥茎叶,用95%乙醇水加热回流提取3次,减压浓缩合并,得到各植物的乙醇提取物总浸膏。随后分别将各植物的总浸膏悬浮于水中,S.baccatum和S.japonicum的乙醇提取物总浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,S.rotundifolium的乙醇提取物总浸膏用乙酸乙酯萃取。将萃取后得到的三个植物的乙酸乙酯部分的粗膏分别经过大孔树脂、MCI、硅胶、ODS、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱以及制备型HPLC等多种色谱手段进行处理,得到172个化合物;运用现代波谱学方法对分离得到的化合物进行了结构鉴定。 去除重复后得到146个化合物（包括57个新化合物和89个已知化合物）,其中从浆果乌桕中分离得到50个化合物（B-1-B-50）,从白木乌桕中分离得到54个化合物（J-1-J-7、J-8a-J-13d、J-14-J-36）,从圆叶乌桕中分离得到42个化合物（T-1-T-42）。这57个新化合物包括浆果乌桕中得到的16个（B-1-B-16）,白木乌桕中得到的31个（J-1-J-7、J-8a-J-13d）,圆叶乌桕中得到的10个（T-1-T-10）。这些新化合物中含木脂素类27个,糖苷类13个,萜类7个,诃子酸类9个和1个简单苯丙素。6组倍半木脂素混旋体,用Daicel Chiralpak手性柱进行分离得到24个化合物,并通过旋光值和实验ECD谱图确定了其绝对构型。化合物B-1、B-6、T-1、T-5-T-7通过铜靶单晶X-射线衍射实验确定了绝对构型。T-2-T-4通过Mo（OAc）4诱导ECD谱图,结合计算ECD数据确定它们的绝对构型。 对分离得到的91个化合物,包括31个糖苷类化合物（B-11-B-17、B-25-B-30、B-32、J-1-J-7、J-14-J-23）、17个诃子酸类化合物（B-1-B-10、B-18-B-24）、26个木脂素类化合物（J-8a-J-13d、T-9-T-10）、15个萜类化合物（T-1-T-7、T-11-T-18）、1个黄酮（B-31）和1个简单苯丙素（T-8）进行了抗炎活性测试。结果表明黄酮糖苷类化合物（J-1、J-14-J-17）对LPS激活的BV-2小胶质细胞释放NO具有较好的抑制作用,其IC50分别为2.7、17.0、5.5、4.1和24.3μM。木脂素类化合物T-9和T-10也能够在一定程度上抑制NO的释放,其IC50分别为15.7和5.8μM,部分萜类化合物（T-3、T-14、T-17）具有较弱的抗炎活性(IC50=17.0-35.9μM),化合物B-11、B-12、B-16、B-17和B-31也表现出一定的抗炎活性(IC50=15.5-25.7μM)。另外分析了诃子酸类化合物（B-1-B-10、B-18-B-24）,木脂素类化合物（J-7、J-23、T-9、T-10）和简单苯丙素（T-8）对DPPH自由基清除活性的影响,结果表明与阳性对照品Vc(EC50=14.3±0.3μM)相比,测试的17个诃子酸类化合物对DPPH自由基都有较好的抑制活性(EC50=4.0-14.2μM)。因此进一步分析了B-1对抗氧化酶（HO-1、GCLC、NQO1）在m RNA水平表达的影响。结果显示其可以显著促进细胞中抗氧化酶（HO-1、GCLC、NQO1）在m RNA水平表达的升高,且呈浓度依赖性。
关键词: 浆果乌桕 ；白木乌桕 ；圆叶乌桕 ；化学成分 ；抗炎 ；抗氧化
摘要： 大株红景天是景天科（Crassulaceae）红景天属（Rhodiola）植物,具有降血糖、抗氧化、抗疲劳、抗辐射等功效,临床上多用于治疗心脑血管等疾病。为进一步弄清大株红景天的药效物质基础,本文对大株红景天的化学成分及其生物活性进行了深入研究。首先,本文利用70%乙醇加热回流提取,再利用柱层析、制备型高效液相色谱等手段,从大株红景天根茎中分离得到9个单体化合物（1～9）,利用NMR和MS等波谱学手段并结合理化性质,鉴定了这9个化合物的化学结构,它们分别为二十七烷醇（1）、二十四烷醇（2）、β-谷甾醇（3）、山奈酚（4）、胡萝卜苷（5）、大花红景天素（6）、草质素-7-O-α-L-鼠李糖苷（7）、大花红天素（8）、红景天苷（9）,其中化合物1、2、4、6、8为首次从大株红景天中分得。在化学成分研究的基础上,本文首次建立了两种不同的HPLC分析方法,测定了大株红景天中大花红景天素、大花红天素以及红景天苷的含量。首先,利用XDB-C18色谱柱结合HPLC-UV法测定了大株红景天中大花红景天素的含量,并进行了方法学考察。实验结果表明,大花红景天素在0.193～19.280μg范围内峰面积（S_均）和进样量（m）呈线性关系,R2=0.9998,其检出限为2×10-4μg。精密度、重复性、稳定性和加样回收率的RSD值均小于2.0%（n=6）,说明所建立的含量测定方法具有精密度好、准确度高等优点。含量测定结果表明,不同产地的大株红景天中大花红景天素的含量在0.006～0.274 mg/g之间。其次,利用酰胺色谱柱结合HPLC-ELSD法同时测定了大株红景天中大花红天素和红景天苷的含量,并进行了方法学考察。实验结果表明,大花红天素在1.997～49.930μg范围内具有良好的线性关系,R2=0.9993,其检出限为0.3μg,红景天苷在1.998～49.950μg范围内具有良好的线性关系,R2=0.9991,其检出限为0.2μg;精密度、重复性、稳定性和加样回收率的RSD值均小于2.0%（n=6）,说明本实验所建立的含量测定方法具有精密度好、灵敏度高和准确度高等优点。含量测定结果表明,大花红天素和红景天苷在不同产地的大株红景天中的含量分别在0～24.769mg/g和14.057～40.507mg/g之间。二者均为大株红景天药材中含量高且具有特征性的化学成分,可以考虑将这两种化合物作为含量测定指标,用于完善该药材的质量标准。为了明确大株红景天中抗氧化活性物质,本文通过清除·DPPH自由基实验对大株红景天提取物、大株红景天多糖、大株红景天注射液以及部分单体化合物的活性进行了对比研究。实验结果显示,大株红景天多糖、大花红景天素、大株红景天水提物以及醇提物均具有较强清除·DPPH自由基的作用。而大株红景天注射液、大花红天素和红景天苷对·DPPH自由基清除能力较差。综上所述,本文从大株红景天中分得了9个化合物,其中5个为首次分得,同时建立了大株红景天中大花红景天素、大花红天素和红景天苷的HPLC含量测定方法。此外,还对大株红景天提取物、多糖以及单体化合物的抗氧化活性进行了对比研究。本文研究结果为大株红景天药效物质的深入研究及其开发利用提供了新的科学依据。
关键词: 大株红景天 ；化学成分 ；结构鉴定 ；含量测定 ；抗氧化活性
被引量
6
摘要： 目的:利用超高效液相色谱-四极杆/飞行时间-质谱（UPLC-Q/TOF-MS）技术分析芪玉三龙汤（Qi-Yu-San-Long Decoction,QYSLD）的化学物质基础;通过“谱-效”关系探究QYSLD中发挥抗氧化作用及抑制A549细胞作用的活性成分群。方法:首先,利用UPLC-Q/TOF-MS的全信息扫描技术（MSE模式）结合靶向筛查方法对QYSLD中的化学成分进行分析。然后,利用正交试验设计方法共煎煮10批QYSLD样品;通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和铁离子还原法（FRAP）实验评估10批QYSLD的抗氧化活性;通过CCK-8考察10批QYSLD抑制A549细胞增殖活性水平,采用细胞划痕实验和transwell小室法评估QYSLD抑制A549细胞横向迁移、纵向迁移和侵袭的能力;最后利用UPLC-Q/TOF-MS技术建立10批QYSLD的指纹图谱;通过三种数据处理方法,即灰色关联度分析（GRA）、偏最小二乘回归（PLSR）和反向传播神经网络（BP-ANN）模型结合平均影响值（MIV）算法将UPLC-Q/TOF-MS指纹图谱与药效相关联,进而分别筛选出QYSLD中发挥抗氧化及抑制A549细胞增殖的活性成分群;最后,对谱效关系筛选出的部分活性成分进行验证,同时对未能入选活性成分的部分化学成分也予以验证。结果:1 QYSLD中化学成分的快速辨识采用UPLC-Q/TOF-MS结合靶向筛查方法,从QYSLD中共识别出166种化学成分,包括皂苷类22种、生物碱类13种、黄酮类27种、萜类32种、氨基酸类20种、苯丙素类16种、有机酸类9种、甾醇类6种、蒽醌类6种、其他类15种,其中有16种化学成分经对照品予以确认。2 QYSLD抗氧化和抑制A549细胞增殖的活性评价（1）QYSLD（S1～S10）具有不同程度的抗氧化能力,其IC50值和FRAP值的范围分别为1.591～5.504 mg·m L-1和143.83～873.83μmol·L-1。（2）不同浓度(0～100 mg·m L-1)的QYSLD（S10）分别作用A549细胞12、24和48 h的IC50值分别为40.45,22.56和17.13 mg·m L-1。以20 mg·m L-1作用24h作为给药浓度和孵育时间来评价10批QYSLD（S1～S10）对A549细胞增殖的抑制作用,结果显示10批QYSLD均能不同程度的抑制A549细胞增殖（P<0.05）,细胞存活率的范围为21.73%～85.71%。与对照组相比,10批QYSLD给药组均具有明显抑制A549细胞横向迁移的能力（P<0.01）,相对划痕面积愈合率的范围为21.50%～44.46%。Transwell体外迁移和侵袭实验结果显示,与对照组相比,10批QYSLD给药组中穿过聚碳酸酯膜、覆盖着Matrigel胶的聚碳酸酯膜的A549细胞个数均明显减少（P<0.01）,提示10批QYSLD给药组能显著抑制A549细胞的纵向迁移和侵袭能力。3 QYSLD中抗氧化和抑制A549细胞增殖的活性成分群筛选（1）利用UPLC-Q/TOF-MS成功建立了QYSLD指纹图谱,精密度、重复性及稳定性实验的RSD均小于11.82%,表明方法稳定可行;相似度评价结果显示,10批QYSLD的UPLC-Q/TOF-MS指纹图谱与参照图谱的相似度均大于0.797。（2）综合运用GRA、PLSR和BP-ANN模型结合MIV算法评价活性成分群,结果显示:（1）去乙酰车叶草苷酸（P4）、泽漆新苷（P24）等8种成分与DPPH自由基清除能力密切相关;（2）去乙酰车叶草苷酸（P4）、水晶兰苷（P7）等9种成分与FRAP实验结果密切相关;（3）去乙酰车叶草苷酸（P4）、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷（P28）等6种成分与抑制A549细胞增殖能力有关;（4）对香豆酸（P23）、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷（P28）等22种成分与抑制A549细胞横向迁移能力有关;（5）泽漆新苷（P24）、澳洲茄边碱（P44）等5种成分与抑制A549细胞纵向迁移能力有关;（6）车叶草苷酸（P16）、对香豆酸（P23）等12种成分与抑制A549细胞侵袭能力有关;（3）验证性实验结果表明:与未能入选活性成分的贝母辛和黄芪皂苷II相比,谱效关系筛选出的活性成分如毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷和去乙酰车叶草苷酸均具有更好的DPPH自由基清除能力;同样,与贝母辛和黄芪皂苷II相比,水晶兰苷和去乙酰车叶草苷酸显示出较好的铁离子还原能力;另外,通过CCK8验证实验结果表明活性成分如毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、莪术醇和澳洲茄边碱均表现出更好的抑制A549细胞增殖的作用,而未能入选活性成分的绿原酸对A549细胞的抑制作用较弱。结论:本研究从QYSLD中辨识出166种化学成分;基于UPLC-Q/TOF-MS成功构建了QYSLD的指纹图谱,不同批次的QYSLD具有不同水平的抗氧化及抑制A549细胞的能力,通过GRA、PLSR和BP-ANN模型结合MIV算法将“谱”与“效”相关联,筛选出QYSLD中发挥抗氧化作用及抑制A549细胞增殖的活性成分群并进行验证。本研究揭示了QYSLD中抗氧化及抑制A549细胞增殖的效应物质基础。
关键词: 芪玉三龙汤 ；A549细胞 ；UPLC-Q/TOF-MS指纹图谱 ；谱效关系 ；活性成分群
被引量
2
摘要： 鱼汤营养丰富,色泽乳白、简单便捷,深受人们喜爱。鱼汤熬煮过程中,鱼中的脂质、蛋白质等成分的迁入,形成复杂的胶体体系。金枪鱼头富含蛋白质、矿质元素、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等多不饱和脂肪酸,具有极高的营养价值。金枪鱼头汤熬煮过程中有关营养物质的迁移并自组成微纳胶粒的变化过程及其生物活性鲜有报道。本文以金枪鱼头汤为研究对象,对比分析了不同熬煮方式下鱼水比对金枪鱼头汤品质的影响;分析了鱼头汤中脂质等营养物质的迁移规律、微纳胶粒立体结构的形成过程和化学成分组成;并研究了金枪鱼头汤中不同粒径大小的胶体体系的抗氧化活性,可为工业化、标准化生产鱼汤提供理论依据,推动食品加工过程中自组装成高生物活性组分在食品领域内的理论创新。(1)常压熬煮条件下,采用清汤和白汤两种不同的熬煮方式熬煮金枪鱼头汤,比较分析了不同鱼水比对两种金枪鱼头汤中各营养物质的迁移和鱼汤品质感官评分的影响。结果表明相同的熬煮时间下,鱼水比为1:8(g/g)时,清汤和白汤中脂质、水溶性蛋白、总糖、总矿物质、固形物含量以及汤品的感官评分都达到最高;且白汤中各营养物质的迁移总量及感官评分高于清汤,这可能是白汤比较受欢迎的原因之一。(2)基于鱼头汤的加工工艺,研究鱼头汤中脂质等物质的迁移规律。结果显示,随着熬煮时间的延长,鱼头组织中的营养物质不断迁移入汤中,使汤中各物质的浓度逐渐增大。当鱼水比1:8(g/g)、熬煮时间为150 min时,鱼头汤中脂质、水溶性蛋白、总糖、维生素E的浓度达到最大;总矿物质和固形物浓度随熬煮时间的延长持续增加;色度随熬煮时间的延长越来越亮;采用电子舌分析不同熬煮时间下两种鱼头汤的滋味轮廓,清汤的滋味轮廓有部分重叠,白汤滋味轮廓分布在各个象限,说明不同熬煮时间下清汤的滋味具有相似性,白汤的滋味有明显差异。利用光学显微镜及激光共聚焦显微镜观察金枪鱼头汤中胶粒的微观结构,发现金枪鱼头汤中存在许多大小不一的球形颗粒,颗粒的主体由甘油三酯形成,磷脂分布在球形颗粒的外围,并嵌有糖类物质;同时汤中还存在大量的蛋白颗粒。(3)采用粗滤、微滤和超滤三种不同的方式处理金枪鱼头汤。利用马尔文激光粒度分析仪测定金枪鱼头汤中胶粒的平均粒径的变化,发现经过不同方式处理后金枪鱼头汤平均粒径明显变小。鱼头汤经微滤和超滤处理后,鱼头汤中许多大颗粒被滤膜截留,小颗粒透过滤膜,颗粒的平均粒径显著变小(P<0.05)。采用化学测定法和细胞抗氧化活性法研究不同粒径大小胶粒的抗氧化活性。经四种化学法测定不同粒径大小的金枪鱼头汤胶粒的体外抗氧化能力,发现粗滤(OGS)、微滤(MFS)和超滤(UFS)处理后的鱼头汤,都具有一定的体外抗氧化能力,且三者体外抗氧化能力的强弱顺序为OGS>MFS>UFS。因分离过程中改变了金枪鱼头汤胶粒的化学成分组成和结构,导致MFS和UFS体外抗氧化能力低于OGS。同时采用细胞抗氧化活性法评价不同粒径大小的金枪鱼头汤胶粒的胞内抗氧化能力,发现不同粒径大小的金枪鱼头汤胶粒也都具有胞内自由基清除能力。经不同稀释倍数稀释后,OGS、MFS和UFS的胞内抗氧化活性具有明显差异,抗氧化活性的强弱顺序与化学测定法的结果不一致,低稀释倍数范围内,UFS的抗氧化能力强于OGS和MFS,当稀释倍数进一步增加时,UFS的抗氧化能力反而弱于OGS和MFS,推测可能与两种方法的作用机制以及样品浓度不同有关。化学测定法侧重于体系中抗氧化活性成分与自由基的作用,而细胞抗氧化活性法更侧重于细胞抗氧化酶系。
关键词: 金枪鱼头汤 ；微纳胶粒 ；营养物质迁移 ；微观结构 ；抗氧化活性
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