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摘要： 银柴胡是石竹科繁缕属植物银柴胡(Stellaria dichotoma L.var.lanceolata Bge.)的干燥根。主产于宁夏、陕西、甘肃、内蒙等地，具有清热凉血的功效，主治虚劳骨蒸、阴虚久疟、小儿疳热，是宁夏的地道药材。
对银柴胡根的95％乙醇提取物进行了研究，提取物依次经过乙酸乙酯-正丁醇-水的萃取，以及正-反相硅胶柱层析和HPLC分离，共得到32个化合物，经过理化常数的测定、光谱解析和化学方法，鉴定了其中的29个化合物。它们分别为：7-烯豆甾醇棕榈酸酯(stigmast-7-enol palmitate 1)；5-羟甲基糠醛(5-(hydroxymethyl)-2-furfrual 2)；5-羟甲基-2-醛基-吡咯(5-(hydroxymethyl)pyrrole-2-carboxaldehyde 3)；二氢阿魏酸(dihydroferulic acid 4)；3,4-二甲氧基二氢苯乙烯酸(3,4-dimethoxyhydrocinnamic acid 5)；香草醛(vanillin 6)；香草酸(vanillic acid 7)；1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)乙酮(1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)ethanone 8)；1-羟基-1-(3`-甲氧基-4`5`-甲叉基)苯丙醇(1-hydroxy-1-(3`-methoxy-4`5`-methylenedioxy)phenylpropane 9)：5,7-二羟基-二氢黄铜(pinocembrin 10)；软木酸(suberic acid 11)；8-羟基-辛酸(8-hydroxycaprylic acid 12)；单-α-亚麻酸(homo-a-linolenic acid 13)；亚油酸(linoleic acid 14)；棕榈油酸(palmitoleic acid 15)；油酸(oleic aicd 16)；棕榈酸(palmitic acid 17)；银柴胡氨Ⅰ(dichotomide Ⅰ 18)；银柴胡氨Ⅱ(dichotomide Ⅱ 19)；银柴胡胺D(dichotomine D 20)；银柴胡胺B(dichotomine B 21)；银柴胡胺A(dichotomine A 22)；银柴胡胺B-β-D葡萄糖苷(dichotomine B-β-D-glucoside 23)；银柴胡胺C(dichotomine C 24)；银柴胡新木质素-β-D葡萄糖苷B(Dichotomoside B 25)；银柴胡新木质素-β-D葡萄糖苷A(Dichotomoside A 26)；银柴胡新木质素-β-D葡萄糖苷C(Dichotomoside C 27)；银柴胡新木质素-β-D葡萄糖苷D(Dichotomoside D 28)；二氢阿魏酸丁酯-β-D葡萄糖苷(butyl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propanoate-β-D-glucoside 29)。其中化合物18～29为未见文献报导的新化合物。并采用改良的Mosher's法，结合化合物的结构改造，确定了化合物20～24中手性碳的绝对构型。
采用大鼠RBL-2H3细胞体外培养的方式，测试了银柴胡提取物和化合物1～4，6，7～12，20～23，25～27，29的体外抗过敏活性，并采用MTT法测试了化合物20，
关键词: 抗过敏 ；化学成分
被引量
18
摘要： 过敏煎是中国著名老中医祝湛予所创的方剂,组方为银柴胡、防风、乌梅、五味子各10 g,在临床上常用于过敏性皮肤病,如荨麻疹、特应性皮炎、湿疹等,药味虽简,但疗效显著,在临床上其治疗总有效率高达90%。过敏煎具有祛风解表,扶正祛邪之功,通过拮抗组胺,降低血清中免疫球蛋白(Ig) E,抑制肥大细胞脱颗粒及改变CD4+T细胞亚群的分化等,发挥止痒、降低毛细血管通透性、抗炎等作用,从多靶点、多路径、多层次体现其抗过敏功效。亦有国内外学者对过敏煎中的各单味药的化学成分进行活性筛选,均发现了抗过敏活性成分如α-cubebenoate,升麻苷,五味子醇甲,防风多糖等,且机制各异。然而中药复方功效的体现绝不是各单味药简单加合,更不能以单味药中某一活性成分衡量其功效优劣,应全面地探析过敏煎中的抗过敏化学成分群,从整体观的角度把握过敏煎的抗过敏功效。但目前对于过敏煎的探究仅局限于其药效学的研究,而对过敏煎中抗过敏活性成分群依旧缺乏系统性、全面性、整体性的认识,限制了过敏煎的二次开发及质量标准的建立。因此,笔者通过检索国内外文献,对过敏煎及其各单味药的抗过敏现代研究成果进行系统性的梳理和汇总,为深入阐明过敏煎的抗过敏化学成分群、作用机制的研究及新型抗过敏新药的开发提供参考依据。
关键词: 过敏煎 ；抗过敏 ；实验研究 ；中药复方 ；综述
被引量
94
摘要： 目的研究落地生根Bryophyllum pinnatum的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和制备薄层色谱等多种方法进行分离,并通过NMR等多种方法鉴定化合物的结构。采用RBL-2H3细胞脱颗粒法测定了化合物的抗过敏活性。结果从落地生根的60%乙醇提取部位分离得到1个木脂素类化合物:落地生根苷(1);4个黄酮类化合物:山柰酚(2)、芦丁(3)、槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基(1→2)-α-L-吡喃鼠李糖苷(4)、槲皮苷(5)以及β-谷甾醇(6)。结论化合物1为新化合物,且木脂素类化合物为首次从该植物中分离得到。山柰酚为落地生根抗过敏主要活性成分之一。
关键词: 景天科 ；落地生根 ；落地生根苷 ；山柰酚 ；木脂素类 ；抗过敏
被引量
10
会议时间： 2018-08-11
摘要： 灵芝是我们祖先在古代就认识并认为是滋补、强壮、扶正、培本的珍贵药品,被誉为"百病之药",其药用价值自古就有记载,《神农本草经》将灵芝列为上品。海南岛独特的热区生境蕴藏了丰富的野生灵芝资源,《中国灵芝图鉴》记录海南岛灵芝科真菌有78种(吴兴亮等,2005)。灵芝是一个天然功能分子生物加工厂,其在生命代谢过程中产生或合成的各种结构类型的天然产物是灵芝重要药效物质基础。然在民间使用的多种热带药用灵芝资源的化学成分和药理亟待诠释,开展其天然产物的结构和活性研究,发现新型药源分子,可为合理利用灵芝宝贵资源创制自主知识产权的新药奠定理论基础。研究团队在对海南药用灵芝资源调查收集的基础上,开展了海南多种灵芝资源药效分子研究。从10种海南药用灵芝资源(喜热灵芝Ganoderma calidophilum、热带灵芝G. tropicum、海南灵芝G. hainanense、黄边灵芝G. luteomarginatum、橡胶灵芝G. philippii、大青山灵芝G. daqingshanense、长柄鸡冠孢芝Haddowia longipes、皱盖假芝Amauroderma rude、二孢假芝A. subresinosum、厦门假芝A. amoiensis)中分离鉴定了400余个化合物,包括新化合物80余个(Huang SZ et al, 2016, 2017;Zhang SS et al, 2015;Ma QY et al, 2015),化合物结构类型包括灵芝三萜、氢醌、甾体、生物碱等,发现36个化合物具有抑制乙酰胆碱酯酶活性,22个具有抗肿瘤活性,5个成分具有抗过敏活性,初步诠释了灵芝神经保护、抗癌和护肤等药效的分子基础,为海南药用灵芝资源的创新利用和新药研发提供了化学分子基础和理论依据。
关键词: 灵芝科真菌 ；热带药用灵芝 ；天然产物 ；药理活性
摘要： 研究了黄皮叶的化学成分和抗过敏活性,用不同溶剂提取黄皮叶活性成分,并进行化学成分预实验和HPLC分析,通过透明质酸酶抑制实验法评价其抗过敏活性,并对水提物抗过敏活性的剂量-效应关系进行分析。结果显示,提取物中含有酚类、黄酮、生物碱、有机酸、香豆素等成分。水和乙醇提取物对透明质酸酶的抑制率分别为89.3%和75.3%,石油醚提取物没有抑制作用。纯化物A1和B1的抑制率分别为92.6%和95.9%,且B1在0.5～8.0mg/mL浓度范围内,随浓度增加,抗过敏作用加强,呈明显的剂量-效应关系。与广西甜茶相比,抗过敏活性明显高于甜茶。HPLC分析显示,抗过敏主要成分为酚类和黄酮。
关键词: 黄皮叶 ；化学成分 ；预实验 ；HPLC ；抗过敏
被引量
16
摘要： 目的研究小花鬼针草Bidens parviflora全株的化学成分，并通过组胺抑制实验寻找活性成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20和ODS柱色谱分离化合物，运用1D NMR、2D NMR波谱学方法鉴定了化合物的结构，通过组胺抑制实验测定化合物抗过敏活性。结果分离鉴定了4个苯丙苷类及1个苯甲醇苷成分：4-羟基-3-甲氧基苯丙三醇8-O-β-D-葡萄糖苷（guaiacyl glycerol 8-O—β—D—glucoside Ⅰ）、丁香酚苷（syringin，Ⅱ）、4-烯丙基-2-甲氧基苯酚-O-（6-O-β-D-芹糖基）-β-D-葡萄糖苷[4-allyl-2-methoxyphenol-O-（6-O—β—D—apiofuranosyl）-β-D-glucoside，Ⅲ]、5，7-二羟基色原酮-7-O—β—D-葡萄糖苷（5，7-dihydroxy chromone 7-O-β-D—glucoside，Ⅳ）、苄醇-O-β-D-葡萄糖苷（benzyl alcohol—O—β—D—glucoside，Ⅴ）。化合物Ⅰ～Ⅴ抑制组胺释放，IC50分别为70、61、〉100、52、〉100μg／mL。结论化合物Ⅰ～Ⅴ首次从本植物中分得，Ⅲ为未见文献报道的新化合物，命名为鬼针草酚葡萄糖苷（bidenphenol glucoside）。化合物Ⅰ～Ⅴ具有抑制组胺释放的活性。
关键词: 小花鬼针草 ；4-羟基-3-甲氧基苯丙三醇8-O-β-D-葡萄糖苷 ；4-烯丙基-2-甲氧基苯酚-O-(6-O-β-D-芹糖基)-β-D-葡萄糖苷(鬼针草酚葡萄糖苷) ；丁香酚苷 ；组胺抑制活性
被引量
15
【会议论文】 • 林厚文
会议时间： 2016-12-08
摘要： 本文对采自我国西沙群岛海域海绵Hippospongia sp.的95%乙醇提取物进行了系统的化学成分研究。综合运用减压柱色谱、中压柱色谱、凝胶柱色谱和高效液相等多种色谱分离方法,共分离得到了40个单体化合物,运用NMR和MS等波谱技术,结合X-ray单晶衍射和量子计算ECD法确定了它们的结构,包括聚酮类化合物24个(1-24),萜类化合物7个(25-31),甾体类化合物5个(32-36),长链脂肪酸类化合物4个(37-40),其中新化合物20个。其中,化合物1-22结构上都是由五元内酯环与脂肪链连接而成。化合物25和26为一对差向异构体,它们的绝对构型通过X-ray单晶衍射技术确定。化合物27和28为一对对映异构体,是通过手性拆分得到,它们的绝对构型采用量子计算ECD法结合CD激子手性法确定。同时,对上述分离得到的部分单体化合物进行了生物活性测试。结果显示,化合物1和3对新型隐球菌具有抑制作用,IC50值分别为4.12和14.23?g/mL。化合物1-6对两种人类肿瘤细胞HeLa和A549具有一定的活性,IC50值范围在9.85到26.34?g/mL。化合物31对PTP1B具有微弱的抑制作用,IC50值为29.56?M。化合物25和26具有较强的抗过敏活性,在DNP-IgE刺激的RBL-2H3细胞模型中,对?-己糖胺酶的释放具有显著的抑制作用,同时对IL-4的产生以及LTB4的释放起到了一定的抑制作用。化合物27和28对3种医院来源的致病菌Candida albicans SC5314、Candida glabrata 537和Trichophyton rubrum Cmccftla的最小抑菌浓度范围为0.125-0.25?g/mL。
关键词: 海绵 ；Hippospongia sp. ；化学成分 ；生物活性
【会议论文】 • 赵友兴
会议时间： 2017-08-11
摘要： 灵芝是我们祖先在古代就认识并认为是滋补、强壮、扶正、培本的珍贵药品,被誉为"百病之药",其药用价值自古就有记载,《神农本草经》将灵芝列为上品。海南岛独特的热区生境蕴藏了丰富的野生灵芝资源,《中国灵芝图鉴》记录海南岛灵芝科真菌有78种。灵芝是一个天然功能分子生物加工厂,其在生命代谢过程中产生或合成的各种结构类型的天然产物是灵芝重要药效物质基础。然在民间使用的多种热带药用灵芝资源的化学成分和药理亟待诠释,开展其天然产物的结构和活性研究,发现新型药源分子,可为合理利用灵芝宝贵资源创制自主知识产权的新药奠定理论基础。研究团队在对海南药用灵芝资源调查收集的基础上,开展了海南多种灵芝资源药效分子研究。从10种海南药用灵芝资源(喜热灵芝Ganoderma calidophilum、热带灵芝G. tropicum、海南灵芝G.hainanense、黄边灵芝G. luteomarginatum、橡胶灵芝G. philippii、大青山灵芝G. daqingshanense、长柄鸡冠孢芝Haddowia longipes、皱盖假芝Amauroderma rude、二孢假芝A. subresinosum、厦门假芝A.amoiensis)中分离鉴定了400余个化合物,包括新化合物80余个,化合物结构类型包括灵芝三萜、氢醌、甾体、生物碱等,发现36个化合物具有抑制乙酰胆碱酯酶活性,22个具有抗肿瘤活性,5个成分具有抗过敏活性,初步诠释了灵芝神经保护、抗癌和护肤等药效的分子基础,为海南药用灵芝资源的创新利用和新药研发提供了化学分子基础和理论依据。
关键词: 灵芝科真菌 ；海南药用灵芝 ；次生代谢产物 ；药理活性
被引量
2
摘要： 乳酸菌胞外多糖(LAB EPS)是乳酸菌在生长代谢过程中产生的一类糖类化合物的总称,其不仅具有优良的流变特性,还具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、降血脂等生物活性,引起研究者的广泛关注。本课题从实验室前期分离保藏的乳酸菌中筛选出高产胞外多糖且基础益生性能良好的菌株,研究菌株粗胞外多糖的生物活性,选择一种粗胞外多糖对其进行分离纯化,并对纯化后组分的化学成分、结构及生物活性进行进一步研究。(1)采用菌落拉丝法与苯酚-硫酸法从40株乳酸菌中筛选得到10株胞外多糖产量较高的菌株;通过酸耐受性(pH=2)、胆盐耐受性(3.0 g/L)试验、胃肠液耐受性试验,发现有6株乳酸菌的耐酸耐胆盐能力良好,且菌株在模拟胃肠液中的存活率均大于75%;乳酸菌赖氨酸脱羧酶活性、溶血性与抗生素敏感性实验结果表明10株菌株初步判定为安全。综合上述实验结果,选取4株菌进行下一阶段实验,通过16S r DNA测序鉴定为2株副干酪乳杆菌(LZ9089、LZ9Y10)、1株干酪乳杆菌(LZ9183)、1株短乳杆菌(LZ9285)。(2)提取所筛选菌株的粗胞外多糖,采用牛津杯法评价粗多糖的抑菌活性,通过透明质酸酶实验评价抗过敏活性,对粗多糖的体外抗氧化活性及对肿瘤细胞活性抑制率进行评价,使用RAW264.7巨噬细胞评价粗多糖的免疫调节活性。实验结果表明:四种胞外多糖对大肠杆菌具有一定的抑制能力,其中LZ9089 ESP的100μg/mL溶液的抑菌圈直径最大,达到17.54±2.53 mm;多糖高剂量组透明质酸活性抑制率较高,LZ9183 EPS在浓度为500μg/mL时,透明质酸酶抑制率达到62.16±6.5%;多糖的羟基自由基清除能力较强,浓度为1000μg/mL时羟基清除率顺序为:LZ9183 EPS>LZ9Y10 EPS>LZ9089 EPS>LZ9285 EPS,且能够与Vc的羟基自由基清除率相接近;仅有LZ9285 EPS对Caco-2细胞和Hep G2细胞的具有较弱的抑制作用,但其抑制能力远低于阳性对照5-FU组;四种胞外多糖对RAW264.7巨噬细胞的增殖都有一定的提升,LZ9183 EPS在500μg/mL时增殖率最高为115.64±1.43%,LZ9183 EPS与285 EPS在浓度为1000μg/mL时NO浓度明显高于阳性对照LPS组,LZ9Y10 EPS与LZ9183 EPS在浓度为1000μg/mL时吞噬率最高,分别达到空白对照的137.37±0.23%和131.86±0.84%。综合菌株基础益生特性、胞外多糖产量及生物活性研究结果,选择干酪乳杆菌LZ9183 EPS进行分离纯化,研究其化学组成、结构及抗过敏活性。(3)LZ9183 EPS通过离子交换层析柱与凝胶色谱柱得到两个单一组分LZEPS-1与LZEPS-2。化学组成分析与紫外光谱分析结果表明LZ9183 EPS与LZEPS-2中含有蛋白质,含量分别为4.94%与1.72%;采用HPGPC与离子色谱法测定多糖组分的分子量与单糖组成,结果显示LZEPS-1与LZEPS-2分子量分别为28.73 k Da与95.58 k Da,LZEPS-1由鼠李糖、半乳糖、葡萄糖与甘露糖组成,摩尔比为4.44:4.37:86.32:4.87,LZEPS-2由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖与葡萄糖醛酸组成,摩尔比为31.67:8.32:0.64:56.72:2.33:0.32;通过红外光谱分析发现LZEPS-1与LZEPS-2均具有典型的多糖特殊吸收峰,进一步证明了LZEPS-1中含有吡喃糖苷,LZEPS-2中含有蛋白质、甘露糖与糖醛酸。(4)通过RBL-2H3细胞脱颗粒模型研究LZ9183 EPS、LZEPS-1与LZEPS-2的抗过敏活性,结果表明:粗多糖与多糖组分均能有效抑制β-HEX的释放,组分LZEPS-1在500μg/mL时的抑制率最高,达到52.293±0.153%,各组别HIS释放水平接近于正常组,IL-4的释放量近于阳性对照组,TNF-α的释放量也明显低于模型组,其中组分LZEPS-1作用较为显著,能够有效缓解Ig E介导的过敏反应,具备潜在的抗过敏活性。
关键词: 乳酸菌 ；胞外多糖 ；干酪乳杆菌 ；生物活性 ；结构
被引量
1
摘要： 过敏是指人体免疫系统对外来物质发生过度反应,由此而引发的一系列疾病叫做过敏性疾病,常见的过敏性疾病有荨麻疹、过敏性哮喘、过敏性鼻炎和花粉症等。过敏性疾病的发病率极高,全球约有三分之一的人会患上这种疾病,而太平洋地区患病率甚至高达50%。目前临床上关于抗过敏的药物普遍具有不良反应较多且停药后复发率高的缺陷,因而新型药物的开发就显得迫切需要。文献资料表明中药在过敏性疾病中的应用越来越多,作用也越来越突出。中药广藿香为唇形科植物广藿香(Pogostemon cablin(Blanco)Benth.)的干燥地上部分,现代药理研究表明其具有抗炎、抗过敏、抗菌和保护胃肠道等作用,临床上常用于中暑、呕吐腹泻、鼻塞、流清涕或浊涕和前额头痛等疾病的治疗。相关文献报道广藿香对过敏性鼻炎及某些过敏性皮肤疾病疗效较好,如精制藿胆方可用于治疗过敏性鼻炎,而广藿香油能够有效缓解I型和IV型过敏反应。本文通过抗过敏相关的生物活性导向分离的方法,利用现代的分离技术和手段对广藿香的乙酸乙酯提取部位进行分离及结构鉴定,并通过活性测试阐明其抗过敏的药效物质基础。通过体外活性导向分离的方法,从广藿香的乙酸乙酯部位分离得到48个化合物,通过各种波谱技术分别鉴定为guaiane A(1),guaiane B(2),guaiane C(3),guaiane D(4),guaiane E(5),guaiane F(6),(2R,3S)-3-methyl-2-(5-oxo-2-isopropenylhexyl)-cyclopentanone(7),corymbolone(8),α-corymbolol(9),patchouli alcohol(10),guaia-1(10),11-dien-2-one(11),(-)-(1R,4S,5R,7R,10S)-guaia-1,5-epoxy11(12)-en-4-ol(12),(2S,3S,6R)-3-methyl-2-(3-oxobutyl)-6-(prop1-en-2-yl)cycloheptanon(13),7S,1(10)Z-4,5-seco-guaia-1(10),11-diene-4,5-dioxo(14),(-)-rotundone(15),9α-hydroxy-patchoulol(16),mandassidione(17),2-keto-4β-hydroxyguai-1,11-diene(18),pogostol(19),trans-2,4-dihydroxy-2,4-dimethyl-cis-1-acetic acid-γ-lactone(20),5-hydroxy-7,3',4'-trimethoxyflavanone(21),3,3',4',7-tetramethoxy-5-hydroxyflavone(22),7,3',4'-trimethylquercetin(23),5,4'-二羟基-7,3'-二甲氧基-二氢黄酮(24),5-羟基-7,4'-二甲氧基-二氢黄酮(25),3,5,3',4'-四羟基-7-甲氧基黄酮(26),5-羟基-3,7,4'-三甲氧基黄酮(27),3,5-dihydroxy-7,4'-dimethoxyflavone(28),木犀草素(29),3-O-甲基槲皮素(30),圣草酚(31),β-sitosterol(32),stigmasterol(33),stigmast-4-ene-3,6-dione(34),6-hydroxystigmast-4-en-3-one(35),6-hydroxystigmasta-4,22-dien-3-one(36),ganoderiol B(37),齐墩果酸(38),friedelin(39),10-二十碳烯酸(40),13-十八碳烯酸乙酯(41),behenic acid(42),dibutylphthalate(43),2,2'-氧代双(1,4-二叔丁苯)(44),邻苯二甲酸正丁异丁酯(45),邻苯二甲酸异二丁酯(46),cytosporone V(47),p-hydroxy phenethyltrans-ferulate(48),其中化合物1-20为单萜及倍半萜类化合物,21-31为黄酮类化合物,32-39为甾醇及三萜类化合物,40-48为其他类化合物。化合物1、2、3、4、5、6为新化合物,其中化合物1和2为两个具有过氧半缩醛结构的愈创木烷型倍半萜衍生物,化合物7,8,9,11,13,14,17,20,37,48为首次从广藿香中分离得到。对分离得到的化合物5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,19,21,22,23,24,25,27,28,42等21化合物进行抗过敏活性测试,结果显示这21个化合物均无显著抗过敏的药理活性。查阅相关文献发现在广藿香的乙酸乙酯部位分离得到的化合物29木犀草素(luteolin)和31圣草酚(eriodictyol)具有较好的抗过敏活性,木犀草素可抑制受刺激KU812细胞核溶解液中c-Jun的磷酸化和AP-1的DNA结合活性;而圣草酚主要通过抑制肥大细胞的神经酰胺代谢来抑制Ig E/Ag诱导的过敏反应,这些结果都提示这两个化合物可能与广藿香的抗过敏作用有关。因此,广藿香抗过敏的药效物质基础还需要后续药理筛选的开展。
关键词: 广藿香 ；化学成分 ；愈创木类化合物 ；黄酮类化合物 ；药理作用 ；抗过敏
被引量
2
摘要： 刺麒麟菜（Eucheuma spinosum）含有丰富的海藻多糖,而传统方式提取制备的多糖因溶解性差、粘度高、分子量大等问题导致生物利用度差、生物活性低。益生菌发酵法被报道能显著降低多糖的分子量并提高生物活性。因此本研究利用益生菌发酵法制备发酵刺麒麟菜多糖（Fermented Eucheuma spinosum polysaccharides,F-ESP）,以低温冻融法制备的冻融刺麒麟菜多糖（Low temperature freeze-thaw Eucheuma spinosum polysaccharides,L-ESP）为对照,探究发酵对多糖化学成分、物理性质、链环结构的影响,并探究F-ESP的抗食物过敏活性及作用机理。利用清酒乳杆菌亚种（BNCC185970）和鼠李糖乳杆菌（BNCC185356）分别发酵刺麒麟菜,得到两种发酵粗多糖。利用DEAE-52纤维素柱对两种发酵粗多糖进行纯化,收集2 mol/L Na Cl洗脱部分命名为F1-ESP-3和F2-ESP-3。与L-ESP的纯化组分L-ESP-3对比发现,F1-ESP-3和F2-ESP-3的溶解性增强、表观粘度降低、分子量降低至28.30 k Da和33.58 k Da;F1-ESP-3和F2-ESP-3链环结构相似,主要由（1→3）-β-D-半乳糖和（1→4）-3,6-内醚-α-D-半乳糖糖苷键连接,均为含3,6内醚半乳糖残基的α硫酸吡喃糖。体外肥大细胞模型结果显示,L-ESP-3、F1-ESP-3和F2-ESP-3均能抑制大鼠嗜碱性粒细胞（Rat basophilic leukemia-2H3,RBL-2H3）和小鼠骨髓来源肥大细胞的脱颗粒。相较于F2-ESP-3和L-ESP-3,F1-ESP-3在200μg/m L浓度下对RBL-2H3和小鼠骨髓来源肥大细胞的脱颗粒抑制率分别高达43.33%±2.72%和40.93%±3.01%。F1-ESP-3能显著抑制RBL-2H3细胞Ca2+内流和细胞膜蛋白F-actin的解聚和异构,并显著减轻由肥大细胞介导的小鼠被动皮肤过敏症状,提示F1-ESP-3具有更好的体内抗过敏活性。进一步构建小鼠卵清蛋白食物过敏模型,对F1-ESP-3的体内抗食物过敏活性进行评价。结果显示,F1-ESP-3能够缓解卵清蛋白引发的小鼠食物过敏症状;显著降低小鼠血清中卵清蛋白特异性免疫球蛋白E、肥大细胞蛋白酶和组胺的水平;减少小鼠脾脏树突状细胞和肥大细胞的比例。此外,F1-ESP-3能够保护小鼠肠道屏障调节小鼠肠道拟杆菌门和厚壁菌门的丰度,上调毛螺菌属的水平,并影响核苷酸寡聚化结构域样受体、丝裂原活化蛋白激酶通路、核转录因子-k B抑制因子和抗原处理及递呈等信号通路进一步改善食物过敏小鼠肠道微环境。综上所述,通过益生菌发酵制备的刺麒麟菜多糖具有溶解性好、粘度低、分子量小等特点。F1-ESP-3能够通过稳定肥大细胞、减少脾脏肥大细胞比例、改善肠道微环境等作用发挥抗食物过敏活性。本研究结果可为海藻多糖抗过敏功能性食品的开发提供理论依据。
关键词: 抗食物过敏 ；益生菌发酵 ；刺麒麟菜多糖 ；肥大细胞 ；肠道菌群
被引量
3
摘要： 目的:洋甘菊(Matricaria chamomilla L)精油是一组提取自洋甘菊花花朵的挥发性成分。洋甘菊自古以来就被世界各国应用入药,但对德国洋甘菊及罗马洋甘菊的对比研究较少,并且洋甘菊精油易挥发的不稳定性限制其部分应用。本文拟分析德国洋甘菊及罗马洋甘菊精油的化学成分,检测其体外抑菌、促细胞增殖迁徙及体外美白、抗过敏活性,并将其制备成微乳后混入水凝胶基质,制成洋甘菊精油微乳水凝胶,并对其进行质量评价。
方法:采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析并比较德国洋甘菊精油和罗马洋甘菊精油化学组成。采用抑菌圈法,测定并比较两种洋甘菊精油对金黄葡萄球菌、铜绿假单胞菌和表皮葡萄球菌的抑制活性。采用MTT实验,测定并比较两种洋甘菊精油对人脐静脉血管内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)和人皮肤成纤维细胞(Human Skin Fibroblast,HSF)增殖的影响。采用划痕实验,测定并比较两种洋甘菊精油对HUVEC和HSF细胞迁移的影响。检测两种洋甘菊精油对酪氨酸酶的抑制作用,评价并比较两种精油的体外美白活性。用相转变法制备洋甘菊精油微乳,表面活性剂选用吐温40,吐温60和吐温80,助表面活性剂选用无水乙醇,甘油和丙醇,油相选用花生油,肉豆蔻酸异丙酯(IPM)和橄榄油,用伪三相图法确定微乳最优处方组成。并对其形态、粒径、微乳类型及p H等进行质量评价。以泊洛沙姆为凝胶材料,甲基纤维素为黏度调节剂,制备水凝胶基质,并将洋甘菊精油微乳混入制备成洋甘菊精油微乳水凝胶,测定其成胶温度,肉眼观察其外观形态并在透射电镜下观察微观形态,测定其溶胀度和p H。
结果:德国洋甘菊精油中共检测到36种化合物,成分包含单萜类(23%)、倍半萜类(63%)及其衍生物。罗马洋甘菊精油中共检测到75种化学成分,主要化学成分是酯类,醛类和酮类。化学组成的不同决定了其药理活性有所不同。两种精油均能显著抑制透明质酸酶和酪氨酸酶的活性,具有较好的抗过敏活性和美白效果。这一作用使洋甘菊精油可用于美白舒敏化妆品的制备。其中,罗马洋甘菊精油的作用优于德国洋甘菊精油。同时,两种精油均能抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和绿脓杆菌,提高HUVEC和HSF的活力,促进HUVEC和HSF细胞的迁移,以上活性均有利于抑制伤口感染和促进伤口愈合,可用于开发成促进伤口愈合的制剂。其中,德国洋甘菊精油的作用优于罗马洋甘菊精油。为提高洋甘菊精油应用效果,将其制备成洋甘菊精油微乳,筛选出的洋甘菊微乳的最佳制备工艺条件为:油相选用肉豆蔻酸异丙酯(IPM),丙醇为助表面活性剂,吐温-80为表面活性剂,Km=3:1。制备的洋甘菊精油微乳在透射电镜下呈光滑的圆形,分布较均匀,粒径为239.77±3.31 nm,PDI为0.094±0.020。微乳为水包油(O/W)型,呈弱酸性。水凝胶基质以泊洛沙姆-407、泊洛沙姆-188和甲基纤维素的质量比为4:1:4制备而成,将洋甘菊微乳混入制备成洋甘菊精油微乳水凝胶。测定成胶温度为37℃,扫描电镜下呈致密的多孔网络结构,孔隙尺寸较小,符合水凝胶的微观结构特点。其溶胀度高,保湿性能好,p H值为6.30左右,且60h内其p H无明显变化,提示CEO微乳水凝胶稳定性良好。
结论:洋甘菊精油组成复杂,具有抗过敏、美白、抑菌活性和促进伤口愈合的作用,且德国洋甘菊精油和罗马洋甘菊精油在成分组成和活性上均有差异。将洋甘菊精油制备成微乳再制备成微乳水凝胶,质量合格,稳定性好,可为洋甘菊精油的体外应用提供重要参考,其体外递送研究有待一步开展。
关键词: 洋甘菊精油 ；化学成分 ；体外活性 ；微乳 ；水凝胶
摘要： 食物过敏（food allergy）是人类常见的一种过敏性疾病,其发病率逐年增加,严重影响着过敏人群的身体健康。而常见的抗食物过敏药物并不能从根本上消除食物过敏症状,为寻找新型抗食物过敏药物,本研究以27株深海来源的真菌为研究对象,经化学筛选和活性测试,选取构巢曲霉（Aspergillus nidulans）和灰黄青霉（Penicillium griseofulvum）生物活性强且化学成分丰富的两株深海真菌进行系统的活性成分研究。从构巢曲霉Aspergillus nidulans中一共分离鉴定了19个化合物,包括4个蒽醌类化合物（1–4）,13个甾体类化合物（5–17）,1个酚类化合物（18）和一个聚酮类化合物（19）。从灰黄青霉Penicillium griseofulvum中一共分离鉴定了49个化合物,包括9个萜类化合物（20–28）,19个生物碱类化合物（29–47）,3个多肽类化合物（48–50）,18个其他类化合物（51–68）,其中新化合物14个。所有分离得到的化合物都进行了抗过敏活性测试,发现5个化合物（1,25,28,33,42）具有很好的活性,提示这些化合物为这两株真菌抗过敏作用的主要活性成分。尤其是化合物1,其IC50值达到了1.8μM,活性强度为阳性对照药氯雷他定(loratadine,IC50=91.6μM)的50倍,因此具有很强的开发利用价值。
关键词: 深海真菌 ；代谢产物 ；抗过敏
被引量
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摘要： 背景与目的:苦橙(Citrus Aurantium L.)是芸香科(Rutaceae)柑橘属(Citrus)常绿小乔木植物,原产自阿尔及利亚、西班牙等国家。通过蒸馏法从苦橙花花瓣中提取的苦橙花精油,主要成分为柠檬烯、芳樟醇等,可以缓解恶心、消化不良、便秘等症状,还具有镇静和抑制食欲、抗菌、抗惊厥、镇静抗炎、激发细胞活性、消除异味、软化皮肤组织、消除色素沉积、维持皮肤组织湿润等应用效果。在芳香行业应用较广泛,但关于其药理活性的基础研究较少,并且苦橙花精油具有易挥发的不稳定性,因此有必要开发可保护苦橙花精油稳定性的新剂型。本文研究了苦橙花精油化学成分并测定其体外活性,探讨苦橙花精油对小鼠急性腹膜炎的治疗作用,并将苦橙花精油制备成微囊,优化其制备工艺条件。方法:采用气相色谱-质谱法(Gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析苦橙花精油的化学成分。对苦橙花精油的抗过敏活性测定主要采用Morgan-Elson法。通过酪氨酸酶抑制率测定苦橙花精油的美白活性。通过抑菌圈法检测苦橙花精油的体外抑菌活性。使用脂多糖(LPS)作为诱导剂,对小鼠RAW264.7细胞进行诱导,从而建立炎症模型,对细胞分泌的白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测。采用相应试剂盒测定小鼠肠组织匀浆中乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)的含量。用苏木精-伊红染色法(H&E)对小鼠肠组织进行染色处理并对其病理特征进行观察分析。采用蛋白电泳法检测肠组织中细胞核内NF-κB p65和IκBα的表达。对苦橙花精油微囊的包封工艺采用单因素试验法、响应面法进行优化。对苦橙花精油微囊采用扫描电子显微镜(SEM)、动态光散射(DLS)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)等方法进行表征,并对其体外释药特性进行分析评估。结果:从苦橙花精油中检识到36种化学成分,醇类化合物、萜烯类化合物和酯类化合物是其主要化学成分类别。同时,苦橙花精油可以显著抑制透明质酸酶和酪氨酸酶活性,具有美白和抗过敏活性。对于大肠杆菌、无乳链球菌等五种细菌,苦橙花精油对其具有不同程度地抑制作用,还可以对LPS诱导的RAW264.7细胞产生影响,抑制了IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,说明苦橙花精油具有体外抑菌和抗炎活性。通过苦橙花精油小鼠动物实验发现,苦橙花精油可改善急性腹膜炎小鼠的肠组织损伤,降低了炎症因子IL-6和TNF-α的水平,增强了LDH活性、降低了MDA含量,可以有效抑制NF-κB信号通路的活化。苦橙花精油微囊的最佳包封条件为:壳聚糖浓度为1%,OP-10乳化剂用量为1.6%,壳核比为2:1,乳化速度为2000rpm。完成优化后,苦橙花精油微囊表面光滑,外观呈球形,连续分散光滑球形,粒径分布在2.3μm-2.6μm之间。通过对苦橙花精油的体外释放实验数据分析发现,在p H7.4环境下苦橙花精油微囊可以稳定释放72 h。结论:苦橙花精油化学成分复杂,具有美白、抗过敏、体外抑菌和抗炎活性,通过抑制NF-κB信号通路的活化降低急性腹膜炎小鼠的炎症因子水平,对急性腹膜炎具有治疗作用。采用壳聚糖制备的苦橙花精油微囊质量优良,性质稳定。研究结果为苦橙花精油的开发利用和发现腹膜炎的治疗新药提供了重要的理论依据。
关键词: 苦橙花精油 ；体外活性 ；NF-κB信号通路 ；腹膜炎 ；微囊
被引量
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摘要： 建立符合现代科学认知的中药药性理论科学内涵阐释方法是中药药性理论研究的关键问题之一。中药药性理论对中药性质描述的模糊性、药性本身的多样性和复杂性等难题制约了中药在药性理论指导下的新药开发和国际认同度。中药药性理论作为描述中药系统性特征以及作用人体后体现的多种功能之理论,揭示其化学及生物学物质基础并明确与中药药性的相关性是阐释其科学内涵行之有效的研究思路与方法。中药功效是多种药性元素组合后的功能体现,目前基于单一因素的中药药性理论的化学及生物学基础研究往往忽略了中药药性本身的系统性和整体性,无法切实阐述中药药性的物质基础和科学内涵。本文立足中药“五味”理论,关注科学发展前沿,将“人苦味受体(即Ⅱ型味觉受体)在除口腔外组织中表达并介导生理功能活性”的最新发现与苦味药性理论相结合,在激活苦味受体中药有效成分评价基础上绘制不同苦味受体亚型的靶标活性谱,建立苦味受体亚型及整体与中药药性及药性组合之间的关联关系,实现以不同药性组合为分类标准对苦味药性科学内涵进行细致阐释的目的。此外,本文通过研究苦味受体与药理作用的相同物质基础,验证了该方法的科学性与适应性。
研究方法:
1.建立苦味受体的高通量筛选模型并评价其可靠性
建立苦味受体不同亚型的过表达细胞株,评价已知苦味激动剂激活苦味受体的量效关系。利用Spiking及Z因子评价方法,对所建立的苦味受体过表达细胞株进行高通量筛选模型评价,确保高通量筛选的可靠性。
2.利用高通量筛选模型对中药化学成分进行苦味受体激动效应评价
在苦味受体高通量筛选模型的基础上,评价中药化学成分对苦味受体的激动效应,绘制苦味受体靶标活性谱,分析不同苦味受体亚型所命中的化合物结构类型。模拟苦味受体的蛋白三级结构,评价蛋白结构合理性,利用分子对接方法研究苦味受体与中药有效成分的结合位点与结合模式。
3.利用关联指数构建苦味受体与药性及药性组合的关联关系
以高通量筛选中来源于《中国药典》(2015版)的中药指标性成分为研究对象,研究苦味受体与中药药性的关联关系。通过统计高通量筛选中来源于《中国药典》(2015版)的中药指标性成分总数(T),激活某种苦味受体亚型的中药成分个数(K),来源于具有某一药性特征中药的中药成分个数(G),以及同时作用于该苦味受体亚型与来源于该药性特征中药的中药成分个数(B),利用关联指数M公式计算苦味受体与药性及药性组合之间的关联度。利用药性组合所对应的药理作用与苦味受体现代生理功能进行文献对比验证,说明关联关系的可靠性。
4.评价具有抗凝血活性的中药有效成分以验证苦味“味效关系”的可靠性
为进一步验证不同苦味受体亚型与药性组合“味效关系”的可靠性,本文评价了具有抗凝血活性的中药有效成分,通过分析与激活苦味受体相同的化学物质基础,验证苦味受体与药性组合的关联关系。首先构建基于药效团和分子对接的凝血酶抑制剂虚拟筛选模型,对中药化学成分进行虚拟筛选,对潜在的活性成分进行体外凝血酶抑制作用评价,并建立化合物抑制凝血酶的量效关系曲线。利用表面等离子共振技术,进一步验证活性成分与凝血酶之间的直接相互作用,分析其结合解离的相互作用关系。在细胞层面上,评价中药有效成分在体外对血小板聚集的抑制作用。本部分将从结构-分子-蛋白-细胞等不同层面评价中药有效成分的抗凝血作用。
5.评价具有抗过敏活性中药有效成分以验证苦味“味效关系”的可靠性
本文评价了具有抗过敏活性的中药有效成分。构建基于药效团和分子对接的脾酪氨酸激酶抑制剂虚拟筛选模型,对中药化学成分进行虚拟筛选。对具有潜在抑制活性的中药化合物进行体外脾酪氨酸激酶抑制活性评价,建立量效关系曲线。在细胞层面上,评价中药化合物在体外对肥大细胞脱颗粒的抑制作用,研究化合物作用于肥大细胞后对脾酪氨酸激酶的磷酸化程度。本部分同样在结构-分子-蛋白-细胞等不同层面评价了中药化学成分的抗过敏作用。
研究结果:
1.本文成功构建了 13种不同苦味受体亚型的高通量筛选模型,分别是hT2R1、hT2R4、hT2R7、hT2R10、hT2R14、hT2R38、hT2R39、hT2R40、hT2R43、hT2R44、hT2R46、hT2R47 及 hT2R49。
2.本文通过高通量筛选,在排除非特异性激动剂及毒性成分后,建立了中药有效成分激活不同苦味受体的靶标活性谱,发现激活苦味受体家族的中药成分多为苷类,其次是黄酮类成分、生物碱类成分以及萜类成分,苯丙素类成分及其它类成分所占比例较少。
3.通过对高通量筛选中来源于《中国药典》(2015版)的中药指标性成分进行整理和分析,本文建立了苦味受体亚型与中药药性及药性组合之间的关联关系,发现苦味受体家族与药性四气中的寒性(M=1.40),与药性五味中的苦味(M=1.35)、涩味(M=1.06)具有较强的相关性,基本与中药苦味药性理论的传统认知相一致。苦味受体与归脾、胃经(M=1.39)具有较强相关性,与苦味受体在人体中的生理分布相一致。此外,本文建立了不同苦味受体亚型与药性组合之间的关联关系,发现“寒-苦-肝”药性组合与hT2R7(M=2.24)等亚型具有相关性,发现“寒-苦-心”药性组合与hT2R43(M=2.78)等亚型具有相关性,“寒-苦-肺”药性组合与hT2R46(M=3.66)等亚型具有相关性等等。
4.为验证与苦味受体相关的药性组合及其味效关系,本文评价了与“寒-苦-心”、“寒-苦-肝”等药性组合相关的中药有效成分抗凝血药理作用。研究结果发现小檗碱、没食子酸、焦性没食子酸和川芎嗪能直接抑制凝血酶活性,其IC50值分别为4.09 μM、9.07μM、17.65 μM和9.83 μM。利用表面等离子共振技术发现小檗碱可以与阿加曲班竞争性结合凝血酶的相同位点,且在体外表现出对血小板聚集的抑制作用。此外,本文评价了与“寒-苦-肺”、“温-苦-肺”等药性组合相关的中药有效成分抗过敏药理作用。研究结果发现二氢丹参酮、丹参酮、WD7、WD10、WD21、WD17对脾酪氨酸激酶具有抑制作用,其 IC50 值分别为 0.81 μM、2.00 μM、5.69 μM,7.85 μM,2.67 μM 和 1.74 μM。槲皮素、山奈酚、WD7、WD10和WD21对肥大细胞脱颗粒可以产生抑制作用,其IC50值分别为 9.03 μM、4.98μM、5.58 μM、1.62 μM 和 0.25 μM。本文同时发现 hT2R14 拮抗剂可以拮抗槲皮素对肥大细胞脱颗粒的抑制作用,在一定程度上说明了槲皮素激活hT2R14后可以干预肥大细胞脱颗粒过程,而WD10抑制肥大细胞脱颗粒活性则与抑制Syk蛋白磷酸化作用相关。
5.结合苦味受体激动剂的高通量筛选结果及药性组合相关的药理作用评价,本文总结得到以下验证结果:小檗碱对hT2R38、hT2R40、hT2R47、hT2R49,没食子酸对hT2R7、hT2R47,川芎嗪对hT2R39的激活作用最为明显,并表现出抗凝血药理作用活性,与这些苦味受体亚型关联“寒-苦-肝”等药性组合结果相一致;槲皮素、山奈酚对hT2R4、hT2R14、hT2R43、hT2R47、hT2R49等苦味受体有较强的激活作用,并表现出抗过敏药理作用活性,与hT2R4、hT2R14关联“温-苦-肺”、hT2R43、hT2R47、hT2R49关联“寒-苦-肺”等药性组合结果相一致。
综上所述,本文在明确苦味中药的化学及生物学物质基础上,研究了苦味受体及所命中中药成分的来源中药(口尝苦味的化学及生物学物质基础)与药性之间的关联关系,一方面为阐释苦味“味效关系”具有统一性提供了科学依据,一方面考察了该研究方法与思路的可靠性,为中药药性理论的研究提供了方法学支持。
创新点:
1.本文用客观量化指标建立了苦味受体的靶标活性谱,并发现了与不同苦味受体亚型相关的药性及药性组合,建立了以苦味受体为核心的中药药性及药性组合现代科学内涵研究模式。
2.本文发现了同时作用于与苦味“口尝味”相关的人苦味受体及具有苦味“功能味”活性的中药有效成分,在分子及细胞水平上评价了有效成分的生物活性及作用机制,为研究苦味“味效关系”科学内涵提供了化学及生物学物质基础。
关键词: Ⅱ型味觉受体 ；高通量筛选 ；苦味受体靶标活性谱 ；味效关系 ；中药药性理论
被引量
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摘要： 地黄(Rehmannia glutinosa Libosch)作为传统大宗药材之一,其根部用作传统中药之一。多糖作为地黄中主要的有效成分,因其具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等多重生物活性而广受关注。目前,对地黄多糖的研究主要集中在单一提取方法及生物活性方面,对于不同的选择性提取方法的地黄多糖研究未见报道。本论文对地黄多糖提取纯化、结构表征、体外生物活性(抗氧化、降血糖、抗过敏、免疫调节)进行系统的研究。旨在为开发地黄多糖体内生物活性及作用机制提供理论基础,为开发地黄多糖相关的功能性食品提供科学依据。主要内容和结果如下:1.基于不同提取方法地黄多糖的制备及化学成分分析本论文开展了六种选择性提取方法提取地黄多糖:室温冷水浸提法(RGP-1)、沸水浸提法提取室温冷提药渣(RGP-2)、室温50%乙醇超声提法(RGP-3)、室温25%乙醇超声提取50%乙醇超声提取的药渣(RGP-4)、室温超声水提取25%乙醇超声提取的药渣(RGP-5)、80℃热水浸提法(RGP-6)。分离纯化采用三氯乙酸法脱蛋白、醇沉、膜透析、双氧水脱色、醇沉,得到六种不同提取方法的地黄粗多糖。六种不同提取方法的地黄粗多糖得率为RGP-3>RGP-6>RGP-1>RGP-2>RGP-4>RGP-5。通过对地黄多糖组分1-6进行化学成分分析:多糖含量依次为90.19±1.86%、80.22±1.90%、89.33±0.72%、80.97±0.72%、75.43±2.70%、89.89±0.93%;六个地黄多糖组分蛋白质含量均在0.1%内;六个地黄多糖组分中RGP-5糖醛酸含量有最大值14.45±0.45%。2.不同地黄多糖组分的结构分析RGP-1、RGP-3、RGP-6单糖组成为葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸,单糖摩尔比分别为32.56:67.19:0.24、37.74:65.15:0.89、32.71:66.56:0.73;RGP-2、RGP-4单糖组成为葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸、鼠李糖,单糖摩尔比分别为34.39:64.16:11.29:0.314、32.23:63.28:1.08:0.34。RGP-5主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸、鼠李糖组成,其摩尔比为:31.77:58.99:3.96:4.70:0.34。红外光谱和核磁共振光谱表明六种不同选择性提取方法得到的地黄多糖是含有α-型和β-型的糖苷键的吡喃糖;扫描电镜结果表明六个组分地黄多糖为碎片层状结构。热重分析结果表明,不同地黄多糖组分的热重稳定性有差异,其中RGP-3的热稳定性最高。刚果红实验表明地黄多糖无三螺旋结构。3.不同地黄多糖组分的生物活性分析(1)不同地黄多糖组分的抗氧化活性分析。在六种地黄组分中RGP-4和RGP-6为抗氧化活性的优势组分。对于不同的提取方法,羟基自由基结果表明,RGP-6>RGP-1>RGP-5>RGP-4>RGP-2>RGP-3,RGP-6最高清除率为96.76±0.29%;超氧自由基结果分析,超氧自由基活性顺序:RGP-4>RGP-2>RGP-6>RGP-1>RGP-5>RGP-3,RGP-4最高清除率为94.52±0.57%;DPPH自由基结果分析,RGP-5作为活性最高组分其清除率为46.46±0.39%;ABTS自由基结果分析,RGP-4作为活性最高组分其清除率为19.32±0.91%。在六种地黄组分中RGP-4和RGP-6为抗氧化活性的优势组分。地黄多糖对活性氧自由基具有较好的清除作用。(2)不同地黄多糖组分的免疫调节活性分析。研究不同地黄多糖组分对RAW264.7细胞的增殖作用,结果表明RAW264.7细胞增殖的安全浓度范围分别是RGP-1、RGP-3、RGP-5为1-400μg/m L、RGP-2、RGP-4、RGP-6为1-200μg/m L。不同RGP在安全浓度范围内能显著促进RAW264.7吞噬中性红能力和分泌NO能力。其中不同地黄多糖组分间RGP-1的吞噬能力最强,RGP-5通过释放NO量增强免疫能力最好。(3)不同地黄多糖组分的抗过敏活性。研究不同地黄多糖组分抑制透明质酸酶能力,活性大小顺序为RGP-4>RGP-3>RGP-2>RGP-5>RGP-6>RGP-1,RGP-4最高清除率为88.90±0.18%。六个地黄多糖组分对透明质酸酶抑制率均大于70%,地黄多糖具有较好的抗过敏活性。(4)不同地黄多糖组分的降血糖活性。测定α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶两个血糖指标。其中α-淀粉酶抑制率最好为RGP-3最高清除率为30.01±0.88%;α-葡萄糖苷酶抑制率最好为RGP-6最高清除率为16.33±0.24%。地黄多糖的降血糖活性较差。
关键词: 地黄多糖 ；提取纯化 ；结构表征 ；生物活性
被引量
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摘要： 中药银柴胡是我国常用的清虚热根类药材,它的基原植物是石竹科繁缕属植物银柴胡(Stellaria dichotoma L.var.lanceolata Bge.),是宁夏的道地药材。近年来,随着野生资源的匮乏,栽培品逐渐成为药材市场的主流。银柴胡药材也由野生逐渐转为栽培生产,目前宁夏特别是同心县及周边地区已成为全国最大的供应产区。但是,从实际种植和资源调查情况来看,随着栽培银柴胡范围的扩大,产地生境发生了明显的改变,部分植株和种子、种苗出现退化现象,药材性状也出现了一定的差异。然而,宁夏银柴胡道地性的形成机制始终未得到有效的科学阐释,难以为指导道地生产提供可靠的科学依据。此外,宁夏作为银柴胡道地产区的证据不充分,在产地变迁过程中,银柴胡道地性是否发生流失,药材质量是否受到影响,哪些是主要的影响因子,目前均尚不清楚,影响了宁夏银柴胡的道地产区建设进程和药材道地生产。因此,本研究从本草考证、种质资源、无机元素、代谢产物、主导生境因子、清虚热功效物质基础等角度,利用DNA条形码、红外光谱、ICP-MS、代谢组学和网络药理学等技术和方法,开展宁夏银柴胡道地性形成相关因子的研究。得到了以下的主要结论:(1)银柴胡的发展历史经历了唐代至元代的银柴胡与柴胡混用期、明清的逐渐区分期和民国至近现代的独立成熟期。随历史发展“银柴胡”一名逐渐由“银州产柴胡”发展为独立的药材名,银柴胡药材、功效和基原植物也与柴胡逐渐区分。此外,陕西—内蒙古—宁夏毗邻区域,以及宁夏中部风沙干旱带及以北地区是银柴胡的历史道地产区,产地“多沙”是银柴胡道地产区的生境特征。(2)资源调查显示野生银柴胡主要分布于陕西—内蒙古—宁夏毗邻区域的荒漠草原生境中,进一步验证了银柴胡历史道地产区和生境特征的真实性。不同产地,特别是野生和栽培银柴胡产地间具有显著的生境差异,主要表现在土壤理化性质、年降水量、纬度和海拔等生境因子上。(3)17个不同来源银柴胡具有相近或一致的种源,遗传距离较短,亲缘关系相近,但与近缘植物的ITS2序列有显著差异。不同来源银柴胡药材具有相近的中红外和近红外官能团特征,但是官能团的特征峰强度存在差异,反应化学成分的含量亦可能有所不同。经图谱预处理和多元统计分析,银柴胡与伪品实现了有效鉴别,同时野生药材与栽培药材被聚类为不同的分支,说明野生与栽培银柴胡的红外光谱特征存在差异。此外,初步验证了红外光谱,尤其是近红外光谱技术,在银柴胡质量评价及伪品鉴别上的优异效果,具有良好的应用前景。(4)代谢组学技术鉴定到1586种银柴胡代谢物,除已报道的β-谷甾醇、槲皮素、哈尔满碱、香草酸等物质及衍生物外,还鉴定到了包括牛蒡苷、甜菜碱、葫芦巴碱、水飞蓟亭、黄颜木素、马钱苷酸等具有良好活性作用的代谢物质。在建立的银柴胡代谢物数据库基础上,筛选出了 14种同心县与其它不同栽培产地银柴胡显著高表达的差异代谢物,97种野生与栽培银柴胡显著差异代谢物,12种随种植年限增长不断积累的代谢物,20种随种植年限增长逐渐减少的代谢物,2种三年生银柴胡显著高表达的代谢物。这些代谢物中包含着多种具有抗炎、抗氧化、抗过敏等与银柴胡功效相近的物质,说明不同来源银柴胡药材的质量和功效存在差异。(5)具有相近生境特征的银柴胡,代谢物特征更为相近,反之生境差异越大,代谢物差异也越大。土壤的质地、全盐量、pH值和年均降水量、年均温度,海拔和纬度可能是影响银柴胡代谢物的主导生境因子;筛选出了与主导生境因子高度相关的3个代谢物群和104种代谢物,这些物质可能是受生境影响最为显著的物质。进一步验证陕西—内蒙古—宁夏毗邻区域,以及宁夏中部风沙干旱带及以北地区是银柴胡的道地产区,而荒漠草原生境(碱性砂质土壤、干旱少雨)可能是银柴胡道地性形成过程中主要的生境特征。同时筛选出了牛蒡苷、夏佛托苷、山奈酚3-O-桑布双糖苷等具有良好活性的显著差异代谢物,可能是荒漠草原生境下银柴胡的优势表达物质。(6)栽培与野生产地银柴胡药材具有不同的无机元素特征和结构比,其中铜、锌、锰、镉、钼、铬、铅、硼、硫可能是影响不同产地银柴胡特征的主要元素,但未发现具有显著道地性特征的无机元素;药材自身元素之间以及与土壤之间,有多种无机元素呈现不同程度的相互作用关系,且同一元素的吸收和积累可能受到了多种无机元素的共同作用或多重交互影响,并与总甾醇和总黄酮含量表现出一定的相关性。(7)从灌胃银柴胡小鼠的血浆中筛选出了 43种入血成分,利用网络药理学建立了入血成分和虚热证的联系,筛选得到482个交集靶点。这些靶点主要富集到Pathways in cancer、Prostate cancer、MicroRNAs in cancer、cAMP signaling pathway、Transcriptional misregulation in cancer、Bladder cancer等癌症相关通路中,说明银柴胡清虚热的功效可能在治疗癌症上有一定的作用。进一步筛选出了Degree值最高的AKT1、GAPDH、TP53、ALB、IL6、CTNNB1等关键靶点,并反向筛选出与这些关键靶点具有关联性的入血成分。通过分子对接验证,进一步筛选出9种关键入血成分。这些物质,特别是香草酸、二氢阿魏酸、柚皮素7-O-β-D-葡萄糖苷、酸藤子酚可能是银柴胡清虚热功效的潜在作用物质。综上,优异的清虚热、除疳热功效,悠久的药用历史,分布于陕西—内蒙古—宁夏毗邻的干旱和半干旱区域,以及“多沙”的生境,共同决定、逐渐形成了宁夏银柴胡的道地性,同时也为宁夏作为道地产区提供了依据。而土壤的理化性质和降水量等生境因子可能是影响银柴胡药材物质积累和银柴胡道地性形成的主导因子,并初步筛选出了道地产区生境下银柴胡的潜在特征性物质。但是,随着银柴胡由野生转为栽培生产,产地生境发生了显著变化,并导致其在红外光谱、代谢物、无机元素等方面发生了不同程度的改变,这可能导致银柴胡道地性的流失。此外,通过网络药理学和分子对接,筛选出的具有潜在清虚热作用的入血成分,可作为进一步研究银柴胡道地性和功效物质基础重点关注的物质。研究结果对于揭示宁夏银柴胡道地性形成机制,推动宁夏道地产区建设和道地药材优质生产,有积极的理论和实践意义。
关键词: 银柴胡 ；道地性 ；本草考证 ；产地生境 ；代谢组学
被引量
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摘要： 本论文采用1H-NMR、HPLC-UV和TLC等手段,确定三株化学多样性丰富的深海真菌为研究对象,对其开展系统的化学成分研究。从枝状枝孢菌（Cladosporium cladosporioides）中得到9个化合物,包括3个色满酮（1-3）,1个萘醌二聚体（4）和5个甾体（5-9）。化合物1是一个具有7-甲基异色满-3-酮的新骨架聚酮;从离生青霉（Penicillium solitum）中分离获得27个化合物,包括2个甾体（10-11）,2个他汀类（12-13）,14个生物碱（14-27）,8个酚类聚酮（28-35）和1个脂肪酸衍生物（36）,化合物10是一个具有独特6/6/6/6/5五环的新骨架甾体;从微孢根霉（Rhizopus microsporus）中分离得到63个化合物,包括19个甾体（37-55）,18个橘霉素类（56-70,86-88）,13个异香豆素（71-83）,2个蒽醌（84-85）,5个生物碱（89-93）,1个杂萜（94）和5个酚衍生物（95-99）,化合物56-58是一类呋喃骈合型橘霉素三聚体新骨架。对上述所分离得到的部分化合物进行了抗肿瘤、抗过敏或抗菌活性测试,发现化合物76,22与64具有显著的抗食物过敏作用(IC50值分别为6.5,13,20μM),而20,21,56与85有中等抗过敏活性(IC50值为50μM～58μM);化合物48,51,71,72和94在20μM的浓度下,对MB231、Hep G2、HCT116、PC3等肿瘤细胞显示出较好的抑制作用（抑制率为51.1%～73.9%）;此外,化合物61和85具有一定的抗副溶血性弧菌的作用,在100μM的浓度下抑制率约为60%。综上,本论文采用化学多样性导向的分离,从三株深海真菌中一共分离获得99个化合物,包括新化合物27个,其中5个为新骨架,这些新化合物尤其是新骨架的发现,极大丰富了天然产物的化学多样性。通过活性测试,发现一系列活性化合物,为下一步海洋药物的研发提供了先导和模式分子。
关键词: 化学多样性导向分离 ；深海真菌 ；次级代谢物 ；新骨架 ；生物活性
摘要： 辛夷来源于木兰科木兰属玉兰亚属植物望春玉兰Magnolia biondii Pamp、武当玉兰Magnolia sprengeri Pamp以及玉兰Magnolia denudate Desr的干燥花蕾,是我国民间常用的一味祛风类中药,在治疗皮肤瘙痒、鼻炎、哮喘等过敏性疾病中有着独特的疗效。本文通过对辛夷原产地河南省南阳市南召县的调研,了解了南召辛夷的种植规模、品种、栽培、采摘、市场流通、产地政策等多方面信息,并选取了南召产的辛夷品种——望春玉兰（Magnolia biondii Pamp）的干燥花蕾为研究对象,拟利用现代分离分析技术和药理活性筛选等手段对辛夷抗过敏的药效物质基础进行研究。通过生物活性导向分离的方法,从辛夷石油醚部位分离得到了7个化合物,从乙酸乙酯部位分离得到了74个化合物。运用各种波谱手段将分离得到的化合物分别鉴定为（1R,2S,5R,6S）-isoeudesmin（1）,（1R,2S,5R,6S）-isopinoresinol monomethylether（2）,（1R,2S,5R,6S）-isomagnolin-12'-O-β-D-glucoside（3）,（7R,8S,7′S）-3',4-O-dimethylcedrusin（4）,9'-O-acetyl-（7R,8S,7'R,8'R）-fargesol（5）,（7R,8S,7'R,8'R）-fargesol（6）,（+）-syringaresinol（7）,（+）-pinoresinol（8）,medioresinol B（9）,（+）-demethoxypinoresinol（10）,（+）-de-4'-O-methylmagnolin（11）,（+）-4''-de-Omethylmagnolin（12）,de-4'-O-methylyangabin（13）,（+）-eudesmin（14）,lirioresinol B dimethyl ether（15）,（+）-magnolin（16）,epimagnolin B（17）,（+）-piperitol（18）,（+）-kobusin（19）,（+）-aschantin（20）,fargesin（21）,icariside E7（22）,magnolin-12'-O-β-Dglucoside（23）,syringaresinol-12'-O-β-D-glucopyranoside（24）,eucommin A（25）,12,12'-dimethoxy-11-hydroxy-6,4:2,8-diepoxylignan-11'-O-β-D-glucopyranoside（26）,（±）-5'-methoxy-4'-O-methyllariciresinol（27）,（+）-lariciresinol（28）,lariciresinol-4-monome ether（29）,3-furanmethanol-tetrahydro-2-（4-hydroxy-3',5'-dimethoxyphenyl）-4-[（3'',4'',5''-trimethoxyphenyl）methyl]-（2R,3S,4S）-rel-（30）,lariciresinol dimethyl ether（31）,7R,8S,7'S,8'R-3,4,3',4'-tetramethoxy-9,7'-dihydroxy-8.8',7.O.9'-lignan（32）,7R,8S,7'S,8'R-3,4,5,3',4'-pentamethoxy-9,7'-dihydroxy-8.8',7.O.9'-lignan（33）,7S,8R,7'S,8'R-3,4,3',4'-tetramethoxy-9,7'-dihydroxy-8.8',7.O.9'-lignan（34）,rel-[7S,8S,8'S]-3,4,3',4'-tetra-methoxy-9,7'-dihydroxy-8.8',7.O.9'-lignan（35）,（7S,8R,7S,8S）-（-）-fargesol（36）,9'-O-acetyl-（7S,8R,7S,8S）-（-）-fargesol（37）,mgnostellin A（38）,biondinin E（39）,3',4-Odimethylcedrusin（40）,（7S,8R）-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol（41）,（7R,8S）-dihydrode-hydrodiconiferyl alcohol 9-O-β-D-glucopyranoside（42）,glochidioboside（43）,（+）-isolariciresinol（44）,（7R,8S）-1-（3,4-dimethoxyphenyl）-2-O-（2-methoxy-4-omegahydroxypropylphenyl）propane-1,3-diol（45）,erythro-guaiacylglycerol-8-O-4'-（coniferyl alcohol）ether（46）,veraguensin（47）,pressafonin A（48）,pressafonin B（49）,（-）-bornyl ferulate（50）,（-）-bornyl isoferulate（51）,geranyl caffeate（52）,geranyl trans-p-hydroxycinnamate（53）,p-menth-3-ene-1,2,8-triol（54）,dihydrotagetone methyl alcohol（55）,naphthalenetriol（56）,（-）-1β,4β,6α-trihydroxy-eudesmane（57）,t-cadinol（58）,t-muurolol（59）,α-cadinol（60）,（-）-parthenolide（61）,（+）-dehydroabietic acid（62）,7S,10S-epoxy-3E,5E-farnesadien-1,2,11-triol（63）,7R,10Sepoxy-3E,5E-farnesadien-1,2,11-triol（64）,farnesol（65）,3,4-dimethoxyphenyl-β-Dglucopyranoside（66）,Syringin（67）,coniferin（68）,benzeneformic acid（69）,phydroxybenzoic acid（70）,4-ethoxybenzyl alcohol（71）,ehyl-p-hydroxybenzoate（72）,lthymidine（73）,scopoletin（74）,biondnoid I（75）,N-trans-p-coumaroyltyramine（76）,1,7-dicarboxyheptane（77）,Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside（78）,linoleic acid（79）,β-sitosterol（80）,（6Z,9Z,12Z）-heptadecatriene（81）,化合物具体结构见图A1-1A1-5。其中,化合物1-6为新化合物;化合物10-13、22、23、25-31、42-46、50-55、57、63、64、66、71、73、76首次从木兰属中分离得到;包括属首分化合物在内的化合物以及化合物7、8、18、24、32-34、36、41、56、61、62、68-70、72、77、78首次从辛夷（Magnolia biondii Pamp）中分离得到。通过对分离得到的化合物进行抗过敏活性筛选,发现木脂素类化合物1、9、10、14～18、21、23、25、26、28、29、30、38、41,肉桂酸单萜酯类化合物50、51、52及其他类化合物62、63、73、74、77均对肥大细胞脱颗粒有一定的抑制作用;进一步结合这些活性成分在辛夷粗提物中的含量和分布,阐述了木脂素类成分在辛夷抗肥大细胞介导的过敏作用中的关键地位,诠释了辛夷抗过敏的药效物质基础。基于辛夷中肉桂酸龙脑酯类成分及其抗过敏活性的相关内容,本文通过化学合成的方法得到了一系列肉桂酸龙脑酯类成分的衍生物20个（图A2）,从中筛选出了比辛夷来源的天然产物活性更好的合成衍生物7个:3-羟基肉桂酸龙脑酯（S7）、4-氟肉桂酸龙脑酯（S8）、4-甲酰肉桂酸龙脑酯（S9）、4-二甲基氨基肉桂酸龙脑酯（S10）、3-甲氧基肉桂酸龙脑酯（S11）、4-溴基肉桂酸龙脑酯（S12）、3,4-二氟肉桂酸龙脑酯（S13）。同时,根据化合物结构特征以及药理活性强弱差异,分别总结了木脂素类成分和肉桂酸龙脑酯类成分肥大细胞脱颗粒抑制活性的构效关系,为开发治疗过敏性疾病药物提供了参考。另外,本文首次通过HPLC指纹图谱、测定指标成分木兰脂素含量和GCMS联用计算峰重叠率的方法对辛夷花皮子与辛夷的粗提物和挥发油化学成分进行分析,发现辛夷花皮子在化学成分上与其花蕾（辛夷）有较高的相似性,其指标成分木兰脂素的含量和挥发油含量都符合2015年版《中华人民共和国药典》的标准,初步从化学成分的层面验证了辛夷花皮子作为辛夷入药具有一定的合理性。
关键词: 辛夷 ；望春玉兰花蕾 ；木脂素 ；肉桂酸龙脑酯 ；肥大细胞脱颗粒 ；抗过敏活性 ；辛夷花皮子
被引量
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摘要： 洋甘菊(Matricarla chamomilla L)的药用历史悠久，在传统医学中也是一味重要的药材。新疆民族药中的许多处方含有洋甘菊，《中华人民共和国卫生部药品质量标准》（维吾尔药分册）中就收录了三个包含洋甘菊的制剂。具有抗菌、抗炎、解痉、抗溃疡、增强免疫力、降低血脂、血糖等作用，主要用于治疗感冒、咳嗽，中风等病症。但是有关洋甘菊对OVA致敏的哮喘动物模型抗哮喘的作用及机理研究迄今未见详细报道。本论文围绕洋甘菊抗哮喘活性部位提取纯化、主要化学成分研究，OVA致敏-大、小鼠动物模型的药效评价、以及多组学技术揭示洋甘菊抗哮喘的作用机理开展工作，主要研究内容如下: 1.洋甘菊抗哮喘活性成分的制备工艺及成分研究。 建立了洋甘菊材指纹图谱，聚类分析表明所采的12批次洋甘菊可根据产地分为2类;结合文献和初步筛选观察到的中等及偏大极性部位具有抗过敏活性，以二咖啡酰奎宁酸含量、浸膏得率、透明质酸酶活性为指标，采用正交实验对洋甘菊抗哮喘活性部位优化提取条件后，确定最优提取条件为:70％乙醇作为提取溶剂，料液比为1∶30，回流提取2次，每次提取时间2h;以3，5-二-O-咖啡酰基奎宁酸和4，5-二-O-咖啡酰基奎宁酸这两种特征成分为指标对其进行纯化，确定最佳纯化条件为:AB-8型大孔吸附树脂，树脂柱径高比为1∶6，药液质量浓度为0.20g/mL(相当于原生药)，以2BV/h的吸附速率上样7BV(树脂床体积)后用以5BV/h的流速，1BV水洗去杂质，收集50％乙醇3BV和70％乙醇1BV洗脱液、合并，浓缩，干燥即得洋甘菊抗哮喘活性部位(YGJ);最后，基于UHPLC-Q-Orbitrap-MS技术分析洋甘菊中活性部位的主要化学成分，共推断出64个化合物，其中绿原酸类10个，黄酮类38个，香豆素类8个，生物碱5个以及其它化合物3个。 2.洋甘菊抗哮喘活性部位对哮喘模型鼠的药效评价。 急性毒性实验表明洋甘菊抗哮喘活性部位LD50在4.80g/kg，95％置信区间为3.81-6.05g/kg，说明YGJ毒性较小，但临床用药时应注意给药剂量;采用OVA致敏的小鼠模型进行洋甘菊抗哮喘活性的药效观察，结果表明:活性部位能有效降低哮喘模型小鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞EOS、肺组织MDA水平;升高血清IL-2、IL-10、IL-12及肺组织SOD水平;还可以通过改善哮喘模型小鼠肺功能，降低Penh，改善哮喘模型小鼠气道高反应性发挥抗哮喘的作用。 在OVA致敏的大鼠模型中，洋甘菊活性部位有效提升哮喘大鼠肺功能、血清IgE以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)，降低支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸粒细胞计数(EOS)肺组织病理诊断等结果显示洋甘菊活性部位具有体内的抗哮喘活性。 3.通过蛋白质组学和代谢组学阐述洋甘菊活性部位发挥抗哮喘功效的作用机制。 通过对大鼠肺组织进行蛋白组学研究，观察到在经过洋甘菊活性部位干预后，给药组的蛋白表达情况与正常组接近而与模型组相差较远，主要在，caspase3(Casp3)、ras相关蛋白Rap-1b(Rap1b)、基质金属蛋白酶9(Mmp9)、核苷二磷酸激酶3(Nme3)、Ⅲ类b-微管蛋白(Tubb3)和激酶家族编号3A(Kif3a)这7个蛋白上有明显差异，KEGG富集分析发现JNK信号通路和Hedgehog信号通路是受到哮喘造模及药物治疗的影响较大;同时发现Kif3a是网络中节点度最高的蛋白，表明它极有可能是洋甘菊活性部位在治疗哮喘时潜在的靶蛋白，这一推断结果与通过Western Blot验证靶标蛋白结果一致;建立了洋甘菊活性部位干预OVA致敏的哮喘大鼠的代谢组学分析方法，采用UHPLC-Q-Orbitrap-MS技术对给予洋甘菊活性部位干预哮喘大鼠的血清、尿液进行分析比较，在血清样本总共筛选出了7个潜在的生物标志物，尿液样本总共筛选出了33个潜在的生物标志物。将血清、尿液中得到的差异代谢物进行相关通路分析，我们发现维生素B6代谢途径、苯丙氨酸代谢途径、精氨酸代谢途径、戊糖和葡萄糖醛酸酯代谢途径、鞘脂代谢途径花生四烯酸代谢途径途径，其中维生索B6代谢途径可能洋甘菊活性部位抗哮喘的主要代谢途径。 综上所述，本研究明确新疆地产药材洋甘菊的抗哮喘作用，形成了活性部位制备的最佳工艺，揭示其药效物质基础;评价了活性部位的安全性后，利用OVA诱发哮喘大、小鼠模型验证了其体内抗哮喘作用，并利用蛋白质组学和代谢组学揭示了洋甘菊活性部位抗哮喘机制，为洋甘菊的进一步开发利用奠定了基础。
关键词: 洋甘菊 ；活性成分 ；提取工艺 ；化学鉴定 ；抗哮喘活性
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