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【期刊论文】 • 姚逸萍 ^1,3赵德义 ²陈杉彬 ^1,3

曹建全 ² +6位作者 • 《食品与发酵工业》 • 2023年第4期 15 - 22，共8页

机构： [1] 中国食品发酵工业研究院有限公司[2] 山东景芝白酒有限公司[3] 酒类品质与安全国际联合研究中心

摘要：该研究采用一种短肽AKRA(Ala-Lys-Arg-Ala)分别处理人源肝细胞LO2和酒精性肝损伤小鼠,从体内和体外分别进行验证,研究AKRA是否能够缓解由偶氮二异丁脒盐酸盐(2,2′-azobis-2-methyl-propanimidamide,AAPH)在肝细胞内引起的氧化应激和食用酒精在实验动物体内造成的酒精性肝损伤。取处于对数生长期的LO2细胞,分为正常组和AKRA处理组,采用细胞增殖-毒性检测法(cell counting kit-8,CCK8)测定并计算细胞活力。采用AAPH诱导LO2细胞氧化损伤;然后以不同浓度AKRA处理细胞,检测LO2细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽还原型(glutathione,GSH)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;通过蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)评价氧化、自噬和炎症相关标志性蛋白表达情况;利用食用酒精灌胃小鼠制备酒精性肝损伤病理模型同时,通过腹腔注射高、中、低剂量AKRA注射液,连续30 d,处死小鼠并观察肝组织病理形态学改变;并进行小鼠生理生化和肝脏中氧化相关指标的检测。结果提示,AKRA在0~6.4 mg/mL对LO2细胞增殖无明显影响和毒性作用,细胞活力正常;AKRA能够不同程度改善由AAPH处理引起的CAT、GSH、SOD等抗氧化酶的活性改变,并降低MDA含量;进一步研究发现,AKRA可促进核因子E-2-相关因子(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)与Kelch样ECH关联蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)解离,并进入细胞核,调控下游抗氧化及抗炎蛋白的表达水平;AKRA促进P62蛋白(sequestosome 1)降解,LC3蛋白(light chain 3)生成,从而提高自噬活性。此外,AKRA腹腔注射后,酒精引起的小鼠肝组织细胞变性程度较轻;血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)下降,总胆固醇(total cholesterol,T-cho/TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)水平降低,而高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)水平升高,氧化相关指标CAT、GSH及SOD活性出现不同程度的改善和MDA含量降低。通过该研究可知,短肽AKRA可能通过调控肝细胞抗氧化水平,提高自噬活性及抗炎能力达到缓解肝损伤的目的。

摘要译文

关键词: 短肽AKRA(Ala-Lys-Arg-Ala) ；肝损伤；氧化应激；自噬；炎症

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【学位/硕士】 • 左光扬 • 广东海洋大学 • 导师：章超桦 • 2012年

摘要：随着酒精工业的发展,世界的酒精消费量日趋增加,酒精对个人及社会的危害则越来越大,寻找具有醒酒功能的物质成为目前人们迫切关注的课题之一。本课题组前期研究证明,马氏珠母贝和牡蛎等贝肉酶解产物具有很好的醒酒效果。企鹅珍珠贝同样作为我国南方海水珍珠养殖的主要经济贝类,其含有丰富的蛋白质、氨基酸、以及多种维生素、锌、硒等具有特殊生理作用的功能物质,是制备醒酒功能食品的优质原料。本实验以企鹅珍珠贝为原料,采用生物酶解手段制备酶解产物并通过动物试验对其醒酒活性进行探究;对具有高醒酒活性的酶解产物进一步分析,研究了其所包含的功能成分及其醒酒功效;以企鹅珍珠贝酶解产物和中药葛根为主料,以各功能因子为辅料,采用极端顶点进行配方优化设计,得到一个最佳醒酒配方并对该配方的功能效果做进一步评价;最后,采用超滤、离子交换层析、分子筛层析等手段对企鹅珍珠贝酶解多肽进行分离纯化,并对乙醇脱氢酶的激活率较高的组分进行了初步鉴定;其主要内容及结果如下:1、研究了不同酶作用下的企鹅珍珠贝酶解产物对于小鼠血液中酒精浓度的影响,并采用动物实验对高活性的酶解产物进行醒酒与防醉效果考察。结果表明:采用中性蛋白酶酶解企鹅珍珠贝肉,水解度达到19.8%时,其灌胃小鼠能使血液酒精浓度下降32.4%,优于木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶及动物复合蛋白酶;与乙醇对照组相比中性蛋白酶酶解产物对于小鼠的醒酒防醉作用均具有很好的效果,尤其高水解度的酶解产物能够显著延长小鼠对于酒精的耐受时间及缩短醉酒时间(P<0.01);可见中性蛋白酶是企鹅珍珠贝肉理想的酶解催化剂。2、对企鹅珍珠贝中性蛋白酶高水解度酶解产物的营养成分及醒酒相关功能因子进行分析,并研究各功能因子的醒酒效果。结果表明:该酶解产物脂肪含量仅占5.50%,而蛋白质含量占79.3%(干基)。此外,与醒酒相关的功能因子分别为:牛磺酸3.83%,丙氨酸3.50%,丙氨酸3.28%,糖原6.32%,甜菜碱4.56%。这些功能因子在酶解产物水平上所起的醒酒作用大小依次为:甜菜碱>Leu>Ala>牛磺酸>糖原。以上结果表明,企鹅珍珠贝酶解产物是一种高蛋白低脂肪且具有极高的营养价值和醒酒药用价值。3、在一定范围内向酶解产物中添加相关醒酒功能因子,探讨各因子的增效作用,并以酶解产物为基料进行配方设计,最后采用小鼠实验对该醒酒配方的醒酒活性进行评价。结果表明:牛磺酸,甜菜碱以及葛根提取物能引起酶解产物的醒酒功能增强(P<0.05);而糖原,丙氨酸及亮氨酸则对酶解产物的醒酒效果没有显著性影响(P>0.05)。通过混料设计得到最佳的醒酒配方为:企鹅珍珠贝酶解产物65.6%、牛磺酸2.5%、葛根提取物10.4%、甜菜碱21.6%,其能使小鼠血液中酒精浓度下降43.92%±0.03%。与乙醇模型组相比,配方高、中、低剂量组可显著延长小鼠耐受时间,且缩短醉酒维持时间(P<0.05),此外,小鼠血清中乙醇浓度显著降低。4、通过2周的连续灌胃,小鼠急性酒精性肝损伤模型造模成功,与正常组相比,乙醇模型组的血清转氨酶指标和血清脂质水平显著升高(P<0.05)。醒酒配方各剂量组及阳性药物对照组能够抑制由急性酒精中毒引起的血清AST/ALT、CHOL及TG水平的升高;同时肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活力得到上升,还原性谷胱甘肽(GSH)含量增加,而丙二醛(MDA)则显著下降。此外,从病理切片可以看出,阳性对照药物以及各剂量的醒酒配方均可在一定程度上改善由急性酒精中毒引起的肝组织损伤。5、企鹅珍珠贝肉纯蛋白经中性蛋白酶进行水解后,再经过超滤进行初级分离纯化得到企鹅珍珠贝多肽采用DEAE纤维素离子交换层析后得到三个峰,其中峰3含量较高且活性最强,能使ADH活力提高50%左右;将最大活性峰经Sephadex G-25凝胶层析后得到4个主要的峰,其中活性最强的峰,能使ADH活力提高72.1%,其分子量在3000-200之间;该峰经Sephadex G-15凝胶层析后亦得到4个峰,其中峰3活性最高,能使ADH活性提高77.1%,分子量在189-451之间;该峰经反相高效液相(RPLC)测得其包含三个峰且分布较远,可以进行质谱分析;经电喷雾电离质谱法(ESI-MS)分析推测其主要含有的肽为Lys-Glu以及Pro-Phe-Arg。

摘要译文

关键词: 企鹅珍珠贝；醒酒肽；配方优化设计；醒酒；防醉；酒精性肝损伤

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【学位/硕士】 • 王双玉 • 沈阳农业大学 • 导师：陈红漫 • 2007年

摘要：本论文对玉米功能肽(以下简称“玉米肽”)的最佳酶解制备条件，玉米肽的分离纯化、氨基酸组成及其体外抗氧化活性、相关的生物活性进行了系统研究。通过单因素试验和正交试验，分别对Alcalase2.4FG碱性蛋白酶和胰蛋白酶水解玉米醇溶蛋白制备玉米肽的最佳酶解工艺进行研究。试验结果表明，在酶解制备玉米肽上，Alcalase2.4FG碱性蛋白酶优于胰蛋白酶，Alcalase2.4FG碱性蛋白酶酶解玉米醇溶蛋白制备玉米肽的最佳酶解条件是：底物浓度为8％，[E]/[S]=2％，pH=9.0，时间3h，温度55℃。对正交试验的结果进行极差分析和方差分析，结果均表明各因素影响的主次关系为：pH>温度>底物浓度>时间>[E]/[S]。采用Sephadex G-25和DEAE-52柱层析系统对玉米肽进行分离纯化，硅胶G薄层层析和高效液相色谱确定其纯度，氨基酸自动分析仪对玉米肽的氨基酸组成进行测定。结果表明，经过Sephadex G-25和DEAE-52柱层析后，玉米肽得到很好的纯化;本次试验制备得到的玉米肽是由2种不同大小的肽段组成，含有16种氨基酸，其中以Leu和Ala这两种非极性氨基酸含量最为丰富，还含有7种人类必需氨基酸(Val、Met、Ile、Leu、Phe、Lys、Thr)，因此具有很好的营养和保健价值。研究表明，通过对玉米醇溶蛋白酶解获得的玉米肽具有较高的抗氧化活性。玉米肽对超氧阴离子自由基和羟基自由基有很强的清除作用，清除率分别为52.56％和87.89％。并且，其抗氧化活性与生物功能直接相关。具有抗氧化活性的玉米肽能显著抑制酒精引起的肝组织中MDA含量的升高，提高肝脏中GSH-PX的活力，对小鼠急性酒精性肝损伤具有明显的保护作用。另外预先给小鼠灌胃玉米肽溶液2周能显著抑制四氧嘧啶所致小鼠血糖升高，降低小鼠体内总胆固醇和甘油三酯水平，对四氧嘧啶诱发的小鼠高血糖也具有一定的预防和保护作用，因此玉米肽具有很高的生物学活性和营养价值，具有很好的开发前景。

摘要译文

关键词: 玉米功能肽；酶解工艺；分离纯化；乙醇代谢；降糖活性；生物活性

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