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摘要： 杂环胺是在高温加热肉制品中发现的杂环类化合物,有致突变、致癌性,危害人体健康。目前,发现PhIP(2-amino-1-methyl-6-phenyl-imidazole[4,5-b]pyridine)是日常家庭烹饪中含量最高的杂环胺化合物。紫苏叶中含有的黄酮类化合物可有效地清除自由基,影响PhIP生成量。采用超声波辅助法提取紫苏叶中黄酮类化合物,将提取物加入模型反应(苯丙氨酸-肌酐0.6mmol,1∶1)中,研究其对PhIP的抑制效果。结果表明,紫苏叶提取物对模型反应中PhIP的生成有明显的抑制效果,抑制率达到80.29%。
关键词: 紫苏叶 ；杂环胺 ；PhIP ；模型反应 ；黄酮类化合物
被引量
8
摘要： 目的探究紫苏叶提取物(Perilla frutescens leaf extract,PLE)对美拉德体系晚期糖基化终末产物(advanced glycation end-products,AGEs)的抑制作用。方法通过构建葡萄糖-赖氨酸模型体系,利用液相色谱-串联质谱法探究其在加热过程中PLE对Nε-羧甲基赖氨酸[Nε-(1-carboxymethyl)-L-lysine,CML]、Nε-羧乙基赖氨酸[Nε-(1-carboxyethyl)-L-lysine,CEL]和吡咯素(pyrraline,Pyr)3种AGEs的抑制作用,同时通过评价PLE的抗氧化性、测定PLE对α-二羰基化合物抑制率,以探讨PLE对AGEs的可能抑制途径。结果PLE对AGEs的生成具有显著的抑制作用,其抑制率与PLE的添加浓度成正比,当添加量为2.0 mg/mL时,对CML、CEL和Pyr的抑制率分别为47.23%、29.59%和37.77%。PLE中的主要活性物质为迷迭香酸、芹菜素-7-O-二葡萄糖苷和野黄芩苷等,推测其抑制途径可能是由于PLE的抗氧化性和清除二羰基化合物的共同作用。结论PLE对AGEs有抑制作用,对食品安全和人体健康具有重要意义。
关键词: 紫苏叶 ；抗氧化活性 ；晚期糖基化终末产物 ；α-二羰基化合物 ；美拉德反应
被引量
4
摘要： 目的探讨紫苏叶提取物(Perillae folium extract,PFE)对3T3-L1脂肪细胞的影响。方法将3T3-L1脂肪细胞培养在不同浓度的PFE(100,250和500μg/ml)中,通过MTS法测定PFE的无毒性细胞浓度,通过Western blot法测定过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)和CAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的蛋白表达水平变化,通过RT-PCR法测定PPAR-γ、C/EBPα、固醇调节元件结合蛋白1C(SREBP-1c),硬脂酰辅酶脱氢酶1(SCD1),脂肪酸合成酶(FAS),甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)和肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)等基因的mRNA表达水平变化。结果通过MTS法得出PFE的无毒性细胞浓度。在Western blot实验中,PPAR-γ和C/EBPα蛋白量的表达随着PFE浓度的升高而减少。在RT-PCR结果中,PPAR-γ、C/EBPα、SREBP-1c和GPAT等基因的表达随着PFE浓度的升高而减少,SCD1和FAS的基因表达水平也降低,CPT1基因的表达水平是随着PFE的浓度而逐渐增加的。此结果说明PPAR-γ和C/EBPα的基因和蛋白表达是受到抑制的。结论 PFE是通过抑制PPARγ、C/EBPα和SREBP1及其靶基因的表达影响脂肪细胞的生成及形成,调节脂肪组织脂质代谢,对以后研究肥胖症具有一定的参考意义。
关键词: 紫苏叶提取物 ；3T3-L1 ；PPAR-γ ；C/EBPα
被引量
11
摘要： 目的:研究紫苏叶提取物(PFE)对高脂饲料诱导肥胖模型小鼠脂肪组织中脂肪生成及脂质合成相关基因表达的影响,探讨PFE影响脂肪脂质代谢的可能机制。方法:5周龄的雄性ICR小鼠,适应性喂养1周后,随机分为正常饲料(RD)组和高脂饲料(HFD)组,HFD+PFE(150、300mg/kg)组,每天灌胃给药1次,RD组灌服等量蒸馏水,每周测2次体质量,连续4周。实验结束后,分别称量内脏脂肪和附睾脂肪重量;检测血浆血糖、胰岛素、HOMA-IR指数、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、非游离脂肪酸(NEFA)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)。用Western blot法和RT-PCR法检测过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)和CAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的表达。此外,检测脂肪合成转录因子SREBP1及其靶基因(FAS、SCD1、GPAT)的基因表达。结果:与HFD组比较,治疗4周后,PFE显著降低了小鼠体质量、内脏脂肪量及附睾脂肪量,血糖、胰岛素水平均显著下降,HOMA-IR也得到改善。血脂(TG、TC、NEFA)和肝功(s AST和s ALT)在给PFE后均显著降低。与RD组比较,脂肪生成转录因子PPAR-γ、C/EBPα和脂肪合成转录因子SREBP1及其靶基因在HFD组增强,而在PFE组上述基因表达均显著被抑制。结论:PFE通过抑制脂肪生成转录因子PPAR-γ、C/EBPα和脂肪合成转录因子SREBP1及其靶基因的表达来降低脂肪和体质量,调节脂肪组织脂质代谢。
关键词: 紫苏叶提取物 ；ICR小鼠 ；过氧化物酶体增殖物激活受体-γ ；CCAT/增强子结合蛋白α ；SREBP1
被引量
19
摘要： 目的:为了研究中药材夏枯草和紫苏叶提取物的降尿酸作用。方法:将中药材夏枯草和紫苏叶总提物及有效部位通过体外黄嘌呤氧化酶抑制实验和体内高尿酸血症模型小鼠的血清尿酸水平考察实验进行筛选和评价。结果:体外黄嘌呤氧化酶抑制实验结果显示,夏枯草水提物和紫苏叶醇提物及其乙酸乙酯部位体外抑制率均大于50%,其总提物IC\-50分别为36.96μg/mL和45.57μg/mL。体内高尿酸血症小鼠尿酸水平实验结果显示,夏枯草和紫苏叶总提物及其乙酸乙酯部位有显著的体内降尿酸活性。结论:夏枯草和紫苏叶总提物及其有效部位可以通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性进而发挥降尿酸作用。
关键词: 降尿酸 ；夏枯草 ；紫苏叶 ；提取物 ；黄嘌呤氧化酶抑制剂
被引量
3
摘要： 紫苏是在我国广泛分布的唇形科植物,其含有多种具有生理活性的化学成分。本文的主要目的:利用DNA保护模型,不同时期紫苏对羟自由基致DNA损伤保护作用的能力进行研究和探讨,同时对提取紫苏的最佳溶剂进行研究。实验方法:主要是通过脱氧核糖氧化损伤的实验检测模型,实验结果:尽管紫苏的生长时期不同,但作为紫苏的最佳提取溶剂都是乙酸乙酯;10月份紫苏叶提取物对羟自由基致DNA损伤保护能力最强,超过了众所周知的抗氧化活性非常好的芦丁。结论:紫苏是传统的药食两用植物,具有多种药用功效,本研究表明:不同时期的紫苏都可以抑制Fent on反应对2-脱氧核糖的氧化损伤,具有对羟自由基致DNA损伤有很好的保护作用,该法可用于评价食品中对羟基自由基致DNA损伤的保护作用。
关键词: 紫苏 ；羟自由基 ；DNA保护模型
被引量
1
摘要： 以我国药食兼用的紫苏叶提取物HA、HB、HC、HD作为研究对象,采用透明质酸酶体外试验、小鼠被动皮肤过敏试验、小鼠耳廓肿胀试验、大鼠皮肤毛细血管通透性试验对紫苏提取物的抗过敏作用进行评价。结果表明:紫苏提取物HD能显著抑制透明质酸酶活性,显著降低小鼠皮肤蓝斑的吸光值,明显抑制巴豆油所致小鼠耳廓肿胀,显著拮抗组织胺所致的大鼠皮肤毛细血管通透性增加,体现出较强的抗炎抗过敏作用。紫苏提取物HC次之,HA、HC抗炎抗过敏效果不如HC、HD明显。透明质酸酶体外抑制试验作为植物有效成分的初步筛选方法,具有简便、快捷的优点。
关键词: 紫苏 ；抗过敏 ；评价
被引量
36
摘要： 目的利用紫苏改进鲣鱼鱼柳制作工艺,研究紫苏叶提取物对鲣鱼鱼柳冷藏过程中的抑菌和抗脂质氧化作用。方法在4℃冷藏条件下对比4种预制鲣鱼鱼柳,即CK对照组(蒸煮液不添加抗氧化剂)、R(蒸煮液中添加100 mg/L迷迭香酸)、E(蒸煮液添加98.5 mg/L紫苏醇提物)和W(蒸煮液添加96.3 mg/L紫苏水提物)的p H、菌落总数、感官评定、硫代巴比妥酸(thibabituric acid,TBA)值、共轭二烯(conjugated diene,CD)值、过氧化值(peroxide value,POA)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量变化,研究紫苏叶提取物对鲣鱼鱼柳冷藏过程中的抑菌和抗脂质氧化作用。结果在12 d的冷藏过程中,各样品的p H值均显著降低(P<0.05),且E和W组样品的p H值无显著性差异(P>0.05);E和W样品组的菌落总数均显著性低于对照组样品;对照样品的TBA值和FFA含量显著增加(P<0.05),R、E和W样品组的TBA值均较低,这表明迷迭香酸对鲣鱼鱼柳的脂质氧化有一定的抑制作用,紫苏叶的醇提物、水提物更具脂质抗氧化作用。冷藏期间经紫苏提取物处理的样品CD值均低于对照组。在整个贮藏过程中,E和W组的POV值均不断增加,均未出现与对照组样品POV值先增加后降低的变化趋势,这表明紫苏叶的醇提物和水提物对氢过氧化物的降解具有抑制作用。结论紫苏叶水提取物能有效抑制鲣鱼鱼柳贮藏过程中的脂质氧化和腐败微生物的生长,并改善鲣鱼鱼柳感官品质。
关键词: 紫苏叶 ；抗氧化剂 ；脂质氧化 ；鲣鱼鱼柳
被引量
18
【专利/发明】 • CN202411482395.3 •
+2位作者
•
申请日：2024-10-23,
公开日：2025-02-28
申请人： 广东海洋大学
公开（公告）号： CN119524054A
摘要： 本发明涉及中药材领域，特别是涉及一种抗PRRSv和提高母猪繁殖性能的组合物及其应用。本发明配制了一种由10种植物提取物(当归提取物、白术提取物、甘草提取物、杜仲提取物、杜仲叶提取物、杨树花提取物、紫苏叶提取物、绞股蓝提取物、益母草提取物和黄芪提取物)组成的组合物，用于妊娠后期母猪，并在分娩时采集母猪血液及胎盘样本，研究该组合物对母猪繁殖的影响，并探究其发挥作用的机制。实验结果表明，该组合物能够通过增加产仔总数等指标来提高母猪的繁殖性能；同时该组合物还能有效抑制PRRSV的复制。
【专利/发明】 • CN202411256945.X • •
申请日：2024-09-09,
公开日：2024-11-29
申请人： 浙江中医药大学
公开（公告）号： CN119033768A
摘要： 本发明公开了七叶内酯在制备治疗系统性红斑狼疮药物中的应用。七叶内酯是一种从紫苏叶中提取的活性成分，通过调节Th17/Treg免疫失衡治疗系统性红斑狼疮(SLE)疾病。动物实验显示，紫苏叶提取物可显著改善狼疮样MRL/lpr模型小鼠病情，干预后肾小球炎性细胞浸润以及C3、IgG免疫复合物的沉积减少，尿蛋白水平降低，血清中自身抗体及炎症因子的表达降低，脾脏及外周血中Th17/Treg比值下调；细胞实验进一步证实，紫苏叶活性成分七叶内酯可明显抑制脾脏Naive CD4+T细胞向Th17分化并促进其向Treg分化，且呈现显著的量效关系；机制研究表明其能抑制Th17细胞中p‑STAT3的蛋白表达，促进Treg细胞中Foxp3的蛋白表达，说明七叶内酯恢复Th17/Treg细胞免疫平衡，从而改善SLE病情，为治疗SLE疾病提供了新的依据。
【专利/发明】 • CN202111103044.3 •
+4位作者
•
申请日：2021-09-18,
公开日：2021-12-24
申请人： 广西南亚热带农业科学研究所
公开（公告）号： CN113826690A
摘要： 本发明一种油梨采后贮藏保鲜剂及其制备和使用方法，在油梨采后贮藏保鲜剂中加入了油梨果核提取物、紫苏叶提取物、甘草提取物，可有效降低油梨果实的呼吸作用，进而减缓油梨果实成熟进度，延长油梨果实的保鲜时间；在油梨采后贮藏保鲜剂中加入了油梨果核提取物、紫苏叶提取物、甘草提取物及助溶剂、辅料等组分，可在油梨果实表面形成保护膜，减少其呼吸作用，可明显延长油梨果实的保鲜时间；在油梨采后贮藏保鲜剂中加入了油梨果核提取物、紫苏叶提取物、甘草提取物，抑菌效果明显，能显著抑制油梨果实表面细菌生长，防止油梨果实霉变，最大限度地延长油梨果实的贮藏保存期。
摘要： 目的从免疫失衡角度明确“发物”虾肉中加重SLE免疫失衡的成份及其作用机制;探讨紫苏改善虾肉加重SLE免疫失衡的疗效机制。
方法1.虾加重SLE免疫失衡的机制研究:MRL/lpr自发性狼疮样小鼠分为模型、虾肉、虾头和全虾组,另选MRL/MpJ小鼠作正常对照,干预7周。计算脾脏及淋巴结指数,肾脏病理切片观察病理性变化;ELISA检测血清中自身性抗体和炎症因子含量,流式细胞术检测脾脏中GCB、Th1、Th2、Th17、Treg表达情况;RNA转录组分析脾脏中各基因的转录表达情况。狼疮样鼠脾脏中分选出Naive CD4+T细胞,刺激其向Th17或Treg细胞分化,分别用虾肉、虾线、全虾、脂质以及虾肉中分离纯化出的蛋白进行干预,流式细胞术检测Th17、Treg细胞分化情况,Western Blot和RT-qPCR分别检测细胞中RORyt、Foxp3蛋白和mRNA表达水平；利用蛋白质组学技术检测纯化后有效虾肉蛋白进行结构鉴定。
2.紫苏叶改善虾肉异质蛋白加重SLE免疫失衡的机制研究:MRL/lpr小鼠分为模型、虾肉、虾肉+紫苏叶组,MRL/MpJ小鼠作为正常对照;用紫苏叶水提物、紫苏多糖、熊果酸及野黄芩素等有效活性成份进行体外细胞实验,流式细胞术检测Th17、Treg细胞分化情况,Western Blot分别检测细胞中STAT3、p-STAT3、Foxp3等蛋白表达情况,RT-qPCR检测细胞中RORyt、Foxp3 mRNA转录水平。
结果1.动物实验结果表明:与模型组相比,虾不同部位物质干预,尤其是虾肉,会加重小鼠脾脏淋巴结肿大;肾小球肿胀增大,炎症细胞浸润以及C3、IgG沉积增加;显著提高血清促炎因子水平;明显促进小鼠脾脏中GCB、Th1/Th2、Th17/Treg比值;上调脾脏中Th17细胞分化相关基因CXCL1、CEBPB、PTGS2及CTLA4的表达;从虾肉中分离纯化得到加重Th17/Treg细胞免疫失衡的均一性蛋白W-1,经蛋白质组学鉴定其为类肌钙蛋白,分子量大小～17 KDa。紫苏叶提取物干预能够明显改善上述病理变化,恢复免疫平衡。
2.体外细胞实验结果:与对照组相比,虾肉及其分离出的W-1蛋白干预均显著促进Th17分化,抑制Treg分化,且呈现显著量效关系;紫苏叶、熊果酸、齐墩果酸、木犀草素、油菜甾醇以及七叶内酯能够抑制虾肉诱导的Th17分化,促进虾肉抑制的Treg表达,且呈现显著的量效关系;Western Blot结果表明,虾肉干预会显著促进RORyt、p-STAT3的蛋白表达,抑制Foxp3的蛋白表达,紫苏叶及上述活性物质能够抑制虾肉诱导的Th17细胞中RORyt、p-STAT3的蛋白表达,促进虾肉抑制的Treg细胞中Foxp3的蛋白表达;RT-qPCR数据进一步验证上述结果。
结论1.“发物”虾肉的干预加剧狼疮样鼠疾病活动度;提高血清中促炎因子水平,改变Th17/Treg细胞比例,加重免疫失衡,这些作用与上调Th17细胞分化相关基因的水平有关。
2.虾肉中促进Th17分化,同时抑制Treg分化的蛋白W-1为类肌钙蛋白,其分子量约为17KDa。
3.紫苏叶中熊果酸、齐墩果酸、木犀草素、油菜甾醇以及七叶内酯等活性物质能够显著抑制RORyt及p-STAT3蛋白表达,提高Foxp3蛋白及RNA表达水平,恢复Th17/Treg细胞免疫平衡,从而改善SLE病情。
关键词: 发物致病 ；系统性红斑狼疮 ；免疫失衡 ；紫苏 ；虾蛋白
摘要： 药食同源植物富含酚酸、黄酮类化合物,是开发降尿酸功能健康食品的优质原料。不同药食同源植物经科学配伍,其化学成分能相互影响,不仅能提高生物可及度与生物利用度,还对活性的发挥有协同增效的作用。目前降尿酸功能植物提取物食品配料常见于单一植物提取物,复合植物提取物加工基础理论较薄弱。本论文首先探究2种高良姜黄酮对黄嘌呤氧化酶(XO)的抑制机制、交互作用,确立具有强XO抑制(XOI)活性高良姜单提物的质量控制标准;对不同批次的高良姜、荷叶、亳菊、薄荷、紫苏叶、香薷中化合物组成的异同进行分析,明确每种植物原料中的特征性化合物,评价特征性化合物对高良姜黄酮生物可及度的影响,筛选出适合与高良姜配伍的植物原料;通过对多种高良姜复方提取物化学组成、XOI活性以及高良姜黄酮生物可及度的评价,确定最佳提取方法、植物复方,实现XOI活性强、高良姜黄酮生物可及度高的复合植物提取物的定向制备。旨在为以高良姜作为主料开发具有降尿酸潜力的复合植物提取物食品配料提供理论与方法的指导,为药食同源植物来源的草本健康食品开发提供新思路。主要研究结果如下:(1)通过XOI活性分析、XO抑制类型判断、荧光猝灭实验及分子对接探究山柰素和高良姜素对XO的抑制机制,结果表明:山柰素和高良姜素均为XO的竞争性抑制剂,与XO的结合主要由疏水相互作用和氢键驱动。C4'位置上的甲氧基取代能增强高良姜素与XO的亲和力,增加氢键供受体数,使其与XO多形成3个氢键,并与XO催化黄嘌呤生成尿酸的关键氨基酸残基(Glu802,Arg880)发生相互作用,显著增强高良姜素的XOI活性。山柰素和高良姜素的交互作用会增强对XO的亲和力,对XO的抑制表现出协同作用,发挥强协同作用的最佳摩尔比为1:4。确立山柰素、高良姜素含量及其摩尔比1:4作为强XOI活性高良姜单提物的质量控制指标。(2)采用UPLC-MS/MS技术,从6-7个批次的高良姜、荷叶、亳菊、薄荷、紫苏叶和香薷样本中鉴定出34种小分子化合物,其中29种为多酚类化合物。高良姜、荷叶、亳菊、紫苏叶、香薷中多酚含量分别为1258-1429、1754-2400、2773-4410、252-2747、440-1414 mg/100g原料。薄荷多酚含量最低,仅为189-821 mg/100g原料。高良姜中特征性化合物为高良姜素、二苯基庚烷A、山柰素;荷叶中特征性化合物为槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、荷叶碱;亳菊中特征性化合物为3,5-二咖啡酰奎宁酸、绿原酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸;紫苏叶、香薷中特征性化合物均为迷迭香酸、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷,且在紫苏叶中的含量更高。亳菊中的香叶木素、金合欢素、木犀草素、芹菜素与高良姜中的山柰素及高良姜素具有最强的XOI活性。基于Caco-2单层细胞模型,当高良姜素与山柰素按照3:1的摩尔比共转运时,高良姜素和山柰素的转运量分别为其单独转运时的5.2倍,2.8倍。在高良姜素山柰素共转运的基础上,加入二苯基庚烷A、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、绿原酸、芹菜素和木犀草素,可使高良姜素和山柰素的转运量分别提高10.37-20.88%及18.72-40.18%。确定植物原料的最佳配伍为:第七批次高良姜、第七批次荷叶与第六批次亳菊。(3)采用超声辅助乙醇提取、乙醇回流提取两种方式制备得到18种高良姜复方提取物,基于UPLC-MS技术对比研究复合提取物中12种特征性化合物的含量及XOI活性。结果表明乙醇回流提取法相比超声辅助乙醇提取法,特征性化合物提取率更高,XOI活性化合物溶出率更高,是制备高良姜复方提取物的最佳方式。高良姜复方提取物的XOI值为43.31-62.96μmol AE/g提取物;高良姜素提取率为197.98-661.94 mg/100g复方原料,山柰素提取率为67.37-201.22 mg/100g复方原料。利用Caco-2细胞模型评价复合提取物中高良姜黄酮的生物可及度,荷叶单独与高良姜复配后,高良姜素转运率显著降低23.00%/21.38%,山柰素转运率显著降低10.83%/15.79%;亳菊单独与高良姜复配后,高良姜素转运率显著提高11.90%,山柰素转运率无显著性变化。高良姜、荷叶、亳菊按质量比5:1.5:3.5复配后,复合提取物XOI值为52.82μmol AE/g提取物,高良姜素和山柰素在Caco-2细胞中的转运率相较于高良姜单提物分别提升了21.17%、34.92%,是最佳植物复方。利用该植物复方,采用乙醇回流提取法,能实现XOI活性强、高良姜黄酮生物可及度高的复合提取物食品配料的定向制备。
关键词: 高良姜 ；植物复方 ；黄酮 ；复合提取物 ；黄嘌呤氧化酶 ；生物可及度
被引量
1
摘要： 紫苏为药食同源的一年生草本植物,在全国栽培广泛,具有镇静、解热、止咳祛痰平喘、抗过敏、抑菌消炎等效果;尤其是自新冠肺炎发生以来,紫苏叶作为一种具有预防作用的中药材,其有效成分提取和活性研究日益受到关注。国产紫苏叶化学型多样,性质多变,对于其化学型和提取物的研究,有利于精确定位各类化学型紫苏叶的应用,合理化紫苏资源的配制和应用。本课题采选国内不同产地紫苏叶,提取其精油,通过气相色谱-质谱仪(GC-MS)分析不同产地紫苏叶的化学成分,在已发现的紫苏叶化学型基础上新增三类:在国内未见有来源地报道的呋喃(Shisofuran,SF)型化学型、蒎烯及其同分异构体为主成分的双环单萜(Perilla Dicyclic monoterpene,Pdmt)型化学型以及环戊酮(Perilla Cyclopentanone,Pct)型化学型紫苏叶。通过天然深共晶溶液(Natural Deep Eutectice Solvents,NADESs)辅助超声水蒸气蒸馏法提取紫苏叶精油,探究不同NADESs组合和配比下所得精油的提取率,优化提取条件。探究得NADESs预处理的方法明显提高了紫苏叶精油的提取率,NADESs最佳配比为氯化胆碱:苹果酸(摩尔比2:1),其提取率为0.67%,而对照水蒸气蒸馏组的紫苏叶精油提取率为0.21%,且NADESs辅助提取所得精油化学成分种类更丰富,含有更多的脂肪族化合物和芳香族化合物。就性能而言,NADESs辅助所提取的紫苏叶精油对于白色念珠菌和黑曲霉具有更强抑制效果,含有更多的酚类物质,抗氧化性更佳。采用气相色谱-质谱联用嗅辨仪(GC-MS-O)、气相离子迁移-质谱联用仪(GC-IMS)、超快速气相色谱电子鼻(E-Nose)以及感官评价的方法联合分析了水蒸气蒸馏和NADESs辅助水蒸气蒸馏提取的两种紫苏叶精油中的芳香挥发性化合物(VOCs)。PA(Perillalehyde,紫苏醛)型化学型紫苏叶精油,其主要挥发性芳香物质为紫苏醛和石竹烯,主体香气为青香和辛香。而NADESs预处理后,提取得到更多的化合物,使精油具有更强的果香和花香。呋喃类化学型紫苏叶精油主要含有乙酰基呋喃,有偏甜的草木香气,而NADESs预处理后,精油强度和浓度较高,甜度降低,而偏青香、果香和花香。在PA型和SF型两种化学型的紫苏叶精油中,紫苏叶精油的主要化合物保持不变,而NADESs辅助提取出挥发性芳香物质,使得整体香气丰度和强度更高,带青香、果香和花香。同时结合紫苏叶香气特征与天然深共晶提取紫苏叶的特性,进行了紫苏叶提取物在新型材料、饮品、食用香料香精、面食领域的应用。
关键词: 紫苏叶精油 ；化学型 ；天然深共晶提取 ；生物活性 ；香气分析
被引量
2
摘要： 紫苏是我国传统药食两用植物,其常用部位为叶子。紫苏叶的风味独特、富含营养成分,含有丰富的生物活性成分如酚类、黄酮类、花青素、单宁和精油等,具有抗氧化、抗过敏、抗炎、抗肿瘤和抗菌等多种活性,在食品、医药、化工等领域均有广泛应用。已有许多文献报道紫苏叶中的各种活性成分具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,说明紫苏是降血糖药物的潜在来源。但目前关于其在糖尿病防治方面的研究较少,其降血糖作用的具体成分和作用机制尚不明确。因此,本论文以紫苏叶为原料,采用体外模拟消化模型和糖尿病大小鼠模型评估了紫苏叶的降血糖活性,分析其对糖尿病小鼠肠道微生物的影响和降血糖机制,并分离鉴定了其主要化合物,最后探讨了利用益生菌发酵对其功能活性增效的方法。主要研究内容如下:建立了体外模拟消化模型,评估了紫苏叶提取物（PFLE）经消化后的化学成分和功能活性。结果表明,经模拟胃肠消化后,紫苏叶提取物中的总酚含量降低了53%,总黄酮含量降低了40%,其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除能力和2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）自由基能力的IC50值分别上升了23%和56%,铁还原抗氧化能力则降低了53%。α-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶抑制能力和对MCF-7细胞增殖的抑制能力的IC50值分别提高了360%、197%和25%。采用高效液相色谱法从PFLE中鉴定并定量三种酚酸和一种黄酮,分别为（+）-儿茶素、丁香酸、迷迭香酸和绿原酸,经模拟消化后含量均明显降低。总的来说,紫苏叶提取物经过体外胃肠消化后活性成分和生物活性显著降低,但仍然具有一定的抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制能力、乙酰胆碱酯酶抑制能力和MCF-7细胞增殖抑制能力,显示出作为治疗和预防氧化应激、癌症、糖尿病和阿尔茨海默病的潜力,可对紫苏叶中的活性成分和功能进行进一步研究。采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等不同极性溶剂对PFLE进一步萃取,得到了不同极性的萃取组分,评估了所萃取组分的抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、酪氨酸酶抑制能力和抗癌能力,以评价其防治氧化应激相关疾病的能力;采用高效液相色谱法（HPLC）对生物活性最好的组分进行定量分析,并建立糖尿病大鼠模型进一步评价其抗糖尿病作用。结果表明,紫苏叶提取物乙酸乙酯相萃取组分（PFLEEA）的总酚含量和总黄酮含量较高,分别为440.48μg GAE/mg DE和455.22μg RE/mg DE,抗氧化活性最强,其DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子清除能力和铁还原能力分别是对照Vc的1.71、1.14、2.40和1.29倍。PFLEEA的α-葡糖苷酶抑制活性最强,比对照阿卡波糖高2倍。相比其它萃取相,PFLEEA具有最高的乙酰胆碱酯酶抑制能力和对MCF-7、Hep G2细胞增殖的抑制能力。从乙酸乙酯相萃取组分中检测到5种酚酸和9种黄酮,其中木犀草素、迷迭香酸、芦丁和儿茶素是主要成分。动物实验结果表明,PFLEEA可显著降低糖尿病大鼠的血糖水平、进食量和进水量,并增加其体重,调节其血清的总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平,改善糖尿病导致的肝肠组织病理生理状况,并增加肝和肠中糖原的积累。建立了C57BL/6糖尿病小鼠模型,研究了PFLEEA对小鼠肠道微生物群落的影响,并采用转录组（RNA-seq）技术对糖尿病小鼠在基因水平的变化进行了分析。发现经PFLEEA治疗后,糖尿病小鼠的血糖明显降低、血脂指标有显著改善。PFLEEA降低了糖尿病小鼠的微生物总丰度,改变了肠道微生物菌落的组成结构,如降低了芽孢杆菌（Bacillus）等细菌相对丰度,显著提高了梭菌（Clostridiales）、阿克曼菌（Akkermansia）、肠杆菌（Enterobacteriaceae）等有益菌的丰度,提高了拟杆菌（Bacteroidaceae）、乳酸细菌（lactobacillaceae）等与短链脂肪酸产生有关的细菌的丰度。转录组学分析表明,PFLEEA共性上调了2个与防治糖尿病有关的基因Zfp422和Ipmk,下调了6个基因,其中Saa2、Atf3与Gadd45α与胰岛素抵抗或糖尿病发病有关,GO富集结果表明,基因变化主要集中在生物过程方面,并通过KEGG富集了27个可能的信号通路,其中Fox O signaling pathway是最有可能的信号通路。通过柱层析、Sephadex LH-20等色谱分离手段,从PFLEEA中分离鉴定出18个化合物,其中有3个酚酸化合物,分别是没食子酸甲酯、迷迭香酸甲酯和对羟基肉桂酸（反式桂皮酸）;7个黄酮类化合物,分别是黄芩素-7-O-葡萄糖苷、木樨草素、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸甲酯、野黄芩苷（灯盏花乙素）、5,7-二甲氧基-6-甲基-4’-甲基-二氢黄酮等;三萜类化合物3个,分别是熊果酸、山楂酸、齐墩果酸;以及5个有机酸、脂肪酸等其他化合物。另外采用高分辨质谱对PFLEEA进行了鉴定,从中鉴定了32个化合物,其中酚酸类化合物13个、黄酮类化合物5个、萜类4个、有机酸2个。这些化合物可能是紫苏叶发挥降血糖作用的物质基础。为进一步改善紫苏叶中有效成分和功能活性,采用6种益生菌对紫苏叶进行发酵,发现短期发酵（1-3天）可以显著提高紫苏叶中的活性成分含量,提高其抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制能力等功能活性,但是长期发酵则显著降低了其化学成分含量和功能活性。其中,嗜热链球菌CICC 6038、干酪乳杆菌ATCC 334可显著提高紫苏叶的总酚含量,植物乳杆菌ATCC 8014、鼠李糖乳杆菌ATCC 53013、嗜热链球菌CICC 6038可以显著提高紫苏叶的总黄酮含量。鼠李糖乳杆菌ATCC53013和嗜热链球菌CICC 6038可大幅提高紫苏叶的DPPH、ABTS自由基清除能力,嗜热链球菌CICC 6038和植物乳杆菌ATCC 8014可提高其铁还原能力。鼠李糖乳杆菌ATCC 53013能明显的提高其α-葡萄糖苷酶抑制能力和乙酰胆碱酯酶抑制能力。进一步采用HPLC对其化合物含量的变化进行定量追踪,发现紫苏叶中的化合物在发酵过程中发生了降解和转化。因此,益生菌发酵是一种可改善紫苏叶中有效成分和功能活性的有效手段。以上结果可以为紫苏防治糖尿病和进一步利用开发提供理论依据。
关键词: 紫苏叶 ；分离纯化 ；降血糖 ；肠道微生物 ；转录组 ；发酵
被引量
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摘要： 紫苏(Perilla frutescens(L.)Britt.)是唇形科紫苏属的一年生直立草本植物,是药食两用的重要经济作物,在中国、日本等亚洲国家广泛种植,中国不仅是紫苏的原产地,也是紫苏多样性的研究中心。单萜类物质是紫苏最重要的药效成分之一,具有抗菌、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、抗抑郁等多种作用,虽然一些具有显著活性的单萜及其代谢物已经被广泛的开发应用,但是经常被作为牧草使用的野生紫苏因为含有较高的紫苏酮,反而会导致羊、牛等动物的非心源性肺水肿,甚至死亡。因此解析紫苏单萜类物质的生物合成途径,挖掘鉴定关键基因,从基因层面抑制有毒紫苏酮的生成具有重要的临床和实用意义。
细胞色素 P450 酶(Cytochrome P450 monooxygenase,CYP450)在紫苏单萜类物质生物合成路径的中间体和最终产物的合成中发挥着重要作用,目前已经在许多唇形科植物中鉴定到参与形成单萜的P450酶,但是在紫苏中单萜类物质的生物合成路径仍未完全解析。鉴定紫苏中关键的CYP基因,对于研究紫苏不同化学型存在的原因,完善单萜类成分的合成通路具有重要意义。传统的植化分离模式不利于天然产物的开发利用,因此利用分子生物学手段研究紫苏中单萜类成分的生物合成路径并扩大合成,显得尤为重要。
本研究将化学鉴定与药理活性和毒性评价相结合,从植物学、生物学和药理作用方面对紫苏做全面的考察,并通过生物信息学、分子生物学技术对紫苏单萜类物质生物合成路径中的关键基因进行挖掘和功能验证研究,推进紫苏单萜类物质合成途径的解析,为紫苏的品质提升、降低药食两用的用药风险奠定基础。研究的主要结果和结论如下:
1.采用HPLC-UV检测手段,对79个紫苏样品的单萜类化合物进行了定性定量检测,通过对79个紫苏样品的含量聚类分析和主成分分析,将其划分为四种不同的化学类型,分别为紫苏酮型、紫苏烯型、紫苏醛型和紫苏酸型。通过研究四种不同化学型紫苏叶提取物对HUVEC细胞的渗透性、对HEK293细胞NF-κB通路活性以及通过q-PCR技术检测不同化学型紫苏叶提取物对A549细胞纤维化标志物α-SMA、TGF-β1、E-cadherin、Fibronectin 和 SERPINE1 表达的影响,发现了紫苏的药理学特性与紫苏化学型和单萜成分之间的关系。研究发现紫苏醛型紫苏可以通过抑制细胞中NF-κB和间充质标志物(α-SMA、TGF-β1和纤维连接蛋白)的表达而具有较好的抗肿瘤、抗纤维化和抗炎等药理活性;紫苏酸型紫苏也可以降低细胞中纤维化标志物的表达;和其他化学型相比,紫苏烯型紫苏可以显著降低HUVEC细胞的通透性;虽然紫苏酮型紫苏能抑制NF-κB的表达,但高剂量紫苏酮能显著增加HUVEC细胞的血管通透性,上调α-SMA和TGF-β1的分泌,推测这可能与紫苏酮的肺毒性有关。
2.结合已报道的紫苏基因组和有活性的单萜合酶基因序列,从紫苏中挖掘并确定了 8个单萜生物合成路径中的关键CYP候选基因,并利用生信分析的手段对这些候选基因进行了分析,发现大部分候选基因表达的蛋白为不稳定、亲水性蛋白,定位在植物细胞的内质网上,但PLS1、CYP714E20-A、CYP714E20-B与CYP92A84-2这四个候选基因的不稳定系数小于40,归类为稳定蛋白。本研究参考报道的已知功能的单萜合成酶对候选基因进行了系统发育分析,发现这些候选基因主要分为三个进化支,与已报道的羟化酶基因聚为一簇,揭示了这些候选基因的功能趋向;根据保守结构域分析,这些候选基因都被注释为细胞色素P450酶,个别基因归类于CYP71亚家族;根据课题组前期测定的转录组数据分析了候选基因在不同组织中的表达水平,发现CYP714E20-B在紫苏叶子中表达量比较高;CYP92A84-2在花中表达量较高,推测这些在不同组织中具有差异表达量的候选基因可能更具有功能。
3.本研究将筛选到的8个关键候选基因进行了克隆,通过酿酒酵母异源表达,选用柠檬烯、柠檬醛、紫苏醇、紫苏醛、香叶醇、紫苏酮和紫苏烯为底物,结合体外酶促和体内饲喂两种方法,发现PLS1和CYP714E20-A这两个候选基因能氧化紫苏醛生成紫苏酸,还发现PLS1、CYP92A84-2和CYP714E20-A这三个基因可以将酿酒酵母酶促体系内还原的香叶醇再氧化为香叶醛,这也和直接加入香叶醇当底物时,三个基因可以催化底物香叶醇生成香叶醛相互佐证,证实了这三个基因的氧化功能。
关键词: 紫苏 ；单萜 ；药理作用 ；CYP ；功能鉴定
摘要： 黄嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase,XOD）是降低人体内尿酸含量的重要靶点。从天然产物中筛选出效果佳、毒副作用低的新型黄嘌呤氧化酶抑制物在治愈痛风及高尿酸血症方面具有重大意义。紫苏(Perilla frutescens（L.）Britt.),属一年生草本植物,被中国卫生部列为药食两用植物。其中,紫苏叶不仅可用于食品、化妆品等领域,还可用于治疗多种疾病。因此,本文以紫苏叶为原料,确定紫苏叶提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用,研究紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制物的提取和纯化工艺,并进一步探究其抗氧化活性和抑菌活性。主要研究结果如下:（1）建立紫外分光光度法测定紫苏叶提取物对黄嘌呤氧化酶活性抑制效果的检测体系。通过酶抑制作用及抑制动力学分析,确定紫苏叶提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用类型为竞争性可逆抑制,与别嘌呤醇相同,且其对黄嘌呤氧化酶的IC50为5.80mg/mL,抑制动力学常数Ki为2.19mg/mL。采用该检测体系,分别对24种紫苏及5个生长时期采集的紫苏叶进行筛选,结果表明,最佳叶片采集时期为苗期,最佳紫苏品种为ZY7。（2）采用响应面法优化紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制物提取工艺。通过超声辅助提取法,考察原料粒径、超声时间、乙醇浓度、提取温度、超声功率和料液比6个因素对紫苏叶提取物抑制率的影响。以单因素试验为基础,采用响应面法对提取工艺进行优化,得到最优提取工艺为:超声时间18min,乙醇浓度48%,提取温度40℃,料液比1:30。在此条件下,紫苏叶提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制率为68.71%。（3）有机溶剂萃取和大孔树脂纯化相结合,进一步分离纯化紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制成分。将紫苏叶50%乙醇提取物分别在石油醚、乙酸乙酯、氯仿和正丁醇中进行萃取,试验结果表明,正丁醇萃取物对黄嘌呤氧化酶的抑制效果最佳,其抑制率为69.14%。通过静态吸附-解析实验,筛选出NKA-9型大孔树脂为最佳纯化树脂类型,该树脂的静态吸附率为83.27%,解析率为83.41%,最佳吸附平衡时间为9.0h,解析平衡时间为3.5h,上样液pH为6.0。通过动态吸附-洗脱实验,确定其最佳纯化工艺为:上样液浓度15mg/mL,上样流速3BV/h,乙醇体积分数60%,洗脱流速2BV/h。经过纯化,紫苏叶黄嘌呤氧化酶抑制物对黄嘌呤氧化酶的抑制率从68.52%上升到80.86%。对纯化后的样品进行HPLC-MS分析,初步鉴定出4种主要化合物,分别为芹菜素-7-O-二葡萄糖苷酸,木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷,黄芩苷和7-羟基香豆素。（4）采用清除ABTS+自由基、清除DPPH自由基、清除羟基自由基、铁离子还原能力（FRAP）和清除超氧阴离子能力五种模型对Vc及紫苏叶黄嘌呤氧化酶抑制物纯品、粗品抗氧化性进行研究。结果显示,三种样品清除ABTS+自由基IC50值分别为0.220、0.558和0.771mg/mL,清除DPPH自由基IC50值分别为0.449、0.945和3.518mg/mL;清除超氧阴离子IC50值分别为0.473、0.703和0.890mg/mL,在以上三种模型中,清除能力均为:Vc>纯品>粗品;在铁离子还原能力（FRAP）模型中,纯品的FRAP值也明显高于粗品;而在清除羟基自由基模型中,清除能力Vc>粗品>纯品,其IC50值分别为1.559、2.231和1.896mg/mL。同时,紫苏叶黄嘌呤氧化酶抑制物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌能力测定结果表明,其对三种供试菌种的最小抑菌浓度分别为2.5、0.3125、1.25mg/mL。
关键词: 紫苏叶 ；黄嘌呤氧化酶抑制物 ；超声辅助提取 ；纯化 ；生物活性
被引量
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摘要： 富顺香辣酱是以辣椒、菜籽油、酿造酱油、食用盐、香辛料等为原辅料,将传统工艺与秘制配方同现代科技结合,研制开发出的半固态复合调味料产品。其风味独特、香醇味鲜、回味悠长,被誉为“富顺一绝”。随着香辣酱产值不断增加,产能不断上升,产业化、标准化、规模化的生产是香辣酱行业的发展方向。在改善产品风味之外,避免食源性致病细菌的污染成为了保障食品安全的技术关键。本课题主要以富顺某香辣酱企业的原辅料及生产环境为研究对象,对香辣酱原辅料中常见食源性致病细菌进行分离鉴定;对生产车间环境、人员的食源性致病细菌的分析,确定其种属并建立系统发育树,追溯其来源,确定生产过程中的食源性致病细菌CCP点;干辣椒贮藏条件的优化;运用天然防腐工艺控制产品中的肠杆菌科菌;建立食源性致病细菌的HACCP体系。试验结论如下:1、从富顺香辣酱原料辣椒和花椒中一共鉴定出19株常见食源性致病细菌,其中肠杆菌科菌13株。确定肠杆菌科菌为香辣酱主要原辅料中相对优势的致病细菌。2、原料库房、粉碎车间、调配车间均检出致病细菌。各生产车间中分离出14株菌种中致病细菌12株;各车间整体清洁度由低到高分别为:原料库房<粉碎车间<调配车间<罐装车间。各个车间加工过程中清洁度由生产前较低到生产过程中高再随着生产结束逐渐降低。肠杆菌科菌疑似菌数量均远小于菌落总数;原料库房空气中最多,数量随着生产开始逐渐增加,随着生产结束而减少;罐装车间空气中监测值为0。原料库房、粉碎车间、调配车间空气环境中存在交叉污染现象;罐装装车间和调配车间存在同源性较高致病菌。3、储存环境的温度、湿度及原料的水分含量对原料中的肠杆菌科菌和菌落总数均有影响,其影响作用由大到小均为:储存环境温度>储存环境湿度>干辣椒水分含量;根据正交实验结果可知:针对肠杆菌科菌抑制的最佳储存条件为A1B3C1,即干辣椒水分含量为11%,储存环境温度为25℃;储存环境湿度为45RH%。4、大蒜提取物、紫苏叶提取物、竹叶提取物、连翘叶提取物等天然防腐剂对肠杆菌科菌有抑制作用,针对其富顺香辣酱中肠杆菌科菌的防腐工艺研究,得到的最佳复配配方为:A2B2C3D3,即大蒜添加量为0.3%,紫苏叶提取物添加量为0.1%,竹叶提取物添加量为0.03%,连翘叶提取物有添加量为0.4%。5、通过朔源性分析,确定原辅料验收、原料储存、香辣酱粉碎、香辣酱调配和操作人员为香辣酱生产过程中肠杆菌科菌的关键控制点。
关键词: 香辣酱 ；食源性致病细菌 ；肠杆菌科菌 ；储存条件 ；防腐工艺
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